專利名稱：一種中藥廢渣制備的微生物培養(yǎng)基及其應(yīng)用和制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種微生物培養(yǎng)基及其應(yīng)用和制備方法，具體涉及一種中藥廢渣制備的微生物培養(yǎng)基及其應(yīng)用和制備方法。
背景技術(shù)：
中草藥業(yè)是中國的傳統(tǒng)產(chǎn)業(yè)之一，近幾年隨著中醫(yī)藥事業(yè)的發(fā)展，中草藥和中成藥的應(yīng)用日益增多，而隨之帶來的則是大量中藥材經(jīng)提取后產(chǎn)生的中藥廢渣污染?，F(xiàn)有中藥材的提取工藝較為單一，從而造成中藥廢渣中含有大量的營養(yǎng)物質(zhì)如粗纖維、粗蛋白、粗脂肪、糖類和氨基酸等，而且中藥廢渣中還會(huì)含有許多藥用活性成分。但目前為止對(duì)中藥廢渣的利用一般僅限于將其粉碎后添加到動(dòng)物飼料中，從而對(duì)動(dòng)物的生長起到一定的促進(jìn)作用。該法應(yīng)用普遍，但具有一定的局限性，如:一、中藥廢渣原料來源不同，組方復(fù)雜，加工工藝有差異、有效成分差距較大，很難對(duì)中藥廢渣做出準(zhǔn)確的藥效評(píng)定和統(tǒng)一的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；二、中藥廢渣一般是通過干燥、粉碎后直接添加于飼料中，但由于中藥廢渣中含有大量動(dòng)物不易消化吸收的粗纖維，從而造成其營養(yǎng)成分的流失；三、由于中藥廢渣中的藥用活性成分含量較低，其在生產(chǎn)中的添加量偏高，常會(huì)影響到飼料的適口性；四、生產(chǎn)企業(yè)在進(jìn)行中草藥添加劑組方時(shí)，大多根據(jù)中醫(yī)資料吉澤或中草藥的用途和功能，而不是針對(duì)不同動(dòng)物的特性和生長階段的需要，片面的追求添加的作用和效果，缺乏科學(xué)系統(tǒng)的理論佐證；五、目前中藥廢渣的利用價(jià)值評(píng)估絕大多數(shù)僅停留在表觀的生產(chǎn)性能，而生產(chǎn)性能與藥渣活性成分之間的關(guān)系不明確，就限制了藥渣更深層次的加工與利用。綜上，現(xiàn)有對(duì)中藥廢 渣的利用還需得到進(jìn)一步的開發(fā)。

發(fā)明內(nèi)容
有鑒于此，本發(fā)明提供一種中藥廢渣制備的微生物培養(yǎng)基，其可以有效而充分地利用中藥廢渣所含有的營養(yǎng)成分以及有效成分，而且其生產(chǎn)成本較低，中藥廢渣得到有效充分利用的同時(shí)，其對(duì)環(huán)境的污染大幅減小。為解決以上技術(shù)問題，本發(fā)明的技術(shù)方案是采用一種中藥廢渣制備的微生物培養(yǎng)基，所述培養(yǎng)基由中藥五味予提取物廢渣和水組成，所述中藥五味子提取物廢渣和水的重量比例為1: 1-2。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，其詳細(xì)說明如下:本發(fā)明首先采用將中藥材廢渣制備成微生物培養(yǎng)基的方式；中藥廢渣中一般含有一定量的營養(yǎng)成分，包括粗纖維、粗蛋白、粗脂肪、糖類和氨基酸等；中藥廢渣制備成動(dòng)物飼料，而動(dòng)物在對(duì)其中包含的營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收上具有一定的局限性，因此，將中藥廢渣制備成微生物培養(yǎng)基的方式，可以利用微生物包括各種真菌以及細(xì)菌等對(duì)上述營養(yǎng)物質(zhì)的酶解作用從而達(dá)到對(duì)中藥廢渣中營養(yǎng)物質(zhì)的充分利用，同時(shí)，中藥廢渣制備的微生物培養(yǎng)基對(duì)于微生物的培養(yǎng)能夠起到一定的促進(jìn)作用?，F(xiàn)有已知的中藥材有近萬種，而且從這些近萬種的中藥材的廢渣中篩選出具有能夠不加入其他營養(yǎng)物質(zhì)而直接對(duì)微生物進(jìn)行培養(yǎng)的種類，需要進(jìn)行大量的研究工作。本發(fā)明人經(jīng)過充分的研究發(fā)現(xiàn)，在所有已知的近萬種中藥材中，中藥五味子提取物廢渣中含量大量的營養(yǎng)成分以及多種微量元素，因此，將中藥五味子提取物廢渣和水共同制備而成的培養(yǎng)基，其中不加任何的營養(yǎng)物質(zhì)，所得培養(yǎng)基仍然可以對(duì)微生物進(jìn)行培養(yǎng)。本發(fā)明人經(jīng)過篩選后經(jīng)中藥五味予提取物廢渣和水制備而成的培養(yǎng)基與現(xiàn)有其他利用中藥廢渣制備的培養(yǎng)基而言，本發(fā)明培養(yǎng)基中未加入任何的營養(yǎng)物質(zhì)，但仍然能夠?qū)ξ⑸镞M(jìn)行培養(yǎng)。另外，由于現(xiàn)有對(duì)中藥材的提取工藝較為單一，從而造成中藥五味子提取物廢渣中所含有的藥效成分相對(duì)較多，因此，利用中藥五味予提取物廢渣和水制備而成的培養(yǎng)基對(duì)于微生物的培養(yǎng)有一定的促進(jìn)作用。另外，本發(fā)明所述培養(yǎng)基僅采用中藥五味予提取物廢渣和水制成，其相對(duì)于現(xiàn)有其他利用中藥廢渣制備的培養(yǎng)基而言，同樣可以減少中藥廢渣當(dāng)做垃圾處理而造成的對(duì)環(huán)境的污染問題，同時(shí)本發(fā)明微生物培養(yǎng)基在制作上由于沒有使用外加的營養(yǎng)物質(zhì)，而是采用藥渣本身所含有的營養(yǎng)物質(zhì)來對(duì)微生物進(jìn)行培養(yǎng)，因此本發(fā)明微生物培養(yǎng)基的制作成本大幅降低。本發(fā)明所述微生物包括現(xiàn)有已知的各種微生物，包括有細(xì)菌、真菌、病毒、放線菌、支原體、衣原體等。本發(fā)明所述微生物培養(yǎng)基在對(duì)各種微生物的培養(yǎng)過程中，其中真菌中的蟲草菌在相同的培養(yǎng)過程中生長速度更快，因此，本發(fā)明所述微生物培養(yǎng)基的環(huán)境更適合于蟲草菌。本發(fā)明所述蟲草菌是現(xiàn)有已知的一類寄生于昆蟲、蜘蛛等節(jié)肢動(dòng)物以及某些真菌上的真菌類群，包括有蛹蟲草菌、冬蟲夏草菌、珊瑚蟲草菌、紅座蟲草菌、蟻窩線蟲草菌
坐寸O本發(fā)明的第二個(gè)目的是提供一種所述的中藥廢渣制備的培養(yǎng)基的制備方法，該方法為所述中藥五味子提取物廢渣經(jīng)粉碎成藥渣粉末后，將所得藥渣粉末與水按1:1-2的重量比例混合并滅菌得所述中藥廢渣制備的培養(yǎng)基。本發(fā)明制備方法中為采用加入其它任何的營養(yǎng)物質(zhì)的方式，而是直接將中藥五味子提取物廢渣粉碎成粉末后，將其與水進(jìn)行混合并滅菌的方法；本發(fā)明所述微生物培養(yǎng)基的制備方法還可采用直接將中藥五味子提取物廢渣與水混勻的方式，但本發(fā)明優(yōu)選采用將中藥五味子提取物廢渣先粉碎后與水混合的方式，該方式所得培養(yǎng)基對(duì)于微生物的培養(yǎng)有更好的促進(jìn)作用。本發(fā)明培養(yǎng)基的制備方法中優(yōu)選采用所述藥渣粉末過20目篩，過篩藥渣粉末與水按1:1-2的重量比例混合并滅菌得所述中藥廢渣制備的培養(yǎng)基。本發(fā)明優(yōu)選采用將藥渣粉碎后經(jīng)過篩的方式來除去一些雜質(zhì)成分，從而所得培養(yǎng)基對(duì)微生物的培養(yǎng)有進(jìn)一步的促進(jìn)作用。本發(fā)明培養(yǎng)基的制備方法中可以采用現(xiàn)有的任一種方式對(duì)其進(jìn)行滅菌處理，本發(fā)明優(yōu)選為采用所述滅菌方式為蒸汽滅菌和/或紫外滅菌；更進(jìn)一步的，本發(fā)明優(yōu)選為采用蒸汽滅菌和紫外滅菌相結(jié)合的方式，更進(jìn)一步的優(yōu)選為先采用蒸汽滅菌后采用紫外滅菌的方式。本發(fā)明培養(yǎng)基的制備方法的蒸汽滅菌的溫度可以采用現(xiàn)有常用的溫度，本發(fā)明優(yōu)選采用所述蒸汽滅菌時(shí)蒸汽的溫度為110-130°C。在上述溫度區(qū)間內(nèi)，培養(yǎng)基內(nèi)的營養(yǎng)物質(zhì)以及藥效成分不會(huì)得到較大 的損失，尤其是中藥五味子提取物廢渣中藥效成分。更進(jìn)一步優(yōu)選的，本發(fā)明優(yōu)選采用所述蒸汽滅菌時(shí)蒸汽的溫度為121°C ;經(jīng)過發(fā)明人的多次研究發(fā)現(xiàn)，由于本發(fā)明微生物培養(yǎng)基的主要成分為中藥五味子提取物廢渣和水，若蒸汽滅菌時(shí)的溫度為121°C，培養(yǎng)基中五味子的藥效成分能夠得到最大程度的保留。本發(fā)明的第三個(gè)目的在于提供一種所述的培養(yǎng)基在培養(yǎng)蟲草菌上的應(yīng)用。本發(fā)明所述微生物培養(yǎng)基更適合于對(duì)蟲草菌進(jìn)行培養(yǎng)。本發(fā)明優(yōu)選采用所述培養(yǎng)基在培養(yǎng)蛹蟲草菌上的應(yīng)用；本發(fā)明所述蛹蟲草菌又叫北冬蟲夏草菌，其為冬蟲夏草菌同屬的真菌；蛹蟲草菌是現(xiàn)已報(bào)道的蟲草菌種唯一能大量形成蟲草素的菌種；蟲草素是一種具有免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤、降低血糖和降血脂等作用的物質(zhì)。另外，蟲草多糖也是中在蛹蟲草中含量為4-10%的具有提高免疫力作用的物質(zhì)。本發(fā)明人經(jīng)過研究發(fā)現(xiàn)，利用本發(fā)明的微生物培養(yǎng)基培養(yǎng)蛹蟲草菌，相較于普通的真菌培養(yǎng)基而言，所得蟲草素的含量相近甚至更高。因此，本發(fā)明優(yōu)選提供所述培養(yǎng)基在培養(yǎng)蛹蟲草菌上的應(yīng)用，其可以促進(jìn)蟲草素大量產(chǎn)生。本發(fā)明的第四個(gè)目的在于提供一種所述培養(yǎng)基培養(yǎng)蟲草菌的方法，其為將蟲草菌種液散布于所述培養(yǎng)基表面進(jìn)行接種，將接種后的培養(yǎng)基于25-27 °C下恒溫避光培養(yǎng)10-15天即可。本發(fā)明所述培養(yǎng)方法可采用現(xiàn)有的任一種培養(yǎng)蟲草菌的方法，本發(fā)明優(yōu)選采用將菌種接種于培養(yǎng)基后，將培養(yǎng)基于25-27°C下恒溫避光培養(yǎng)10-15天即可。本發(fā)明所述培養(yǎng)方法優(yōu)選采用所述蟲草菌為蛹蟲草菌；當(dāng)菌種為蛹蟲草菌時(shí)，該培養(yǎng)方法所得蟲草素的含量較高。
具體實(shí)施例方式為了使本領(lǐng)域的技術(shù)人員更好地理解本發(fā)明的技術(shù)方案，下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說明。對(duì)照例I
現(xiàn)有PDA培養(yǎng)基，組成及制備如下:馬鈴薯200.0g(去皮煮后取汁)，葡萄糖20.0g,酵母膏5g,蛋白胨5g, KH2P042g, MgSO4Ig, VBl—片，蒸懼水1000ml,高壓蒸汽滅菌(121 °C,30min)后制成培養(yǎng)基。對(duì)照例2現(xiàn)有大米固態(tài)培養(yǎng)基，制備如下，稱取一定量大米，加水浸泡50min，115°C滅菌15min,制成培養(yǎng)基。對(duì)照例3現(xiàn)有人參提取物廢渣經(jīng)粉碎過20目篩，過篩粉末與水按照1:1.5(W/V)比例混合，高壓蒸汽滅菌(121°C，30min),制成培養(yǎng)基。對(duì)照例4將中藥五味子提取物廢渣和水按照1: 1-2的重量比例混合，滅菌后制成培養(yǎng)基。對(duì)照例5將中藥五味子提取物廢渣先進(jìn)行粉碎，所得粉末和水按照1:1-2的重量比例混合并紫外滅菌后制成培養(yǎng)基。對(duì)照例6將中藥五味子提取物廢渣先進(jìn)行粉碎，所得粉末經(jīng)20目篩過篩后，篩下藥渣粉末與水按照1:1-2的重量比例混合并采用110-130°C下蒸汽滅菌后制成培養(yǎng)基。
對(duì)照例7將中藥五味子提取物廢渣先進(jìn)行粉碎，所得粉末經(jīng)50目篩過篩后，篩下藥渣粉末與水按照1:1-2的重量比例混合并采用110-130°C下蒸汽滅菌后制成培養(yǎng)基。對(duì)照例8將中藥五味子提取物廢渣先進(jìn)行粉碎，所得粉末經(jīng)20目篩過篩后，篩下藥渣粉末與水按照1:1-2的重量比例混合并先采用在110-130°C下蒸汽滅菌，然后紫外滅菌的方式制成培養(yǎng)基對(duì)照例9將中藥五味子提取物廢渣先進(jìn)行粉碎，所得粉末經(jīng)20目篩過篩后，篩下藥渣粉末與水按照1:1-2的重量比例混合并先采用在121°C下蒸汽滅菌，然后紫外滅菌的方式制成
培養(yǎng)基。下面將分別以實(shí) 施例1和實(shí)施例2兩組實(shí)驗(yàn)來說明本發(fā)明微生物培養(yǎng)基對(duì)于微生物的培養(yǎng)促進(jìn)作用和對(duì)蟲草菌，尤其是蛹蟲草菌的蟲草素含量的促進(jìn)培養(yǎng)作用。實(shí)施例1——菌質(zhì)多糖含量測定將對(duì)照例1-9所得培養(yǎng)基分別用于培養(yǎng)蛹蟲草菌和冬蟲夏草菌，每個(gè)對(duì)照例所得培養(yǎng)基設(shè)置五個(gè)重復(fù)培養(yǎng)蛹蟲草菌和冬蟲夏草菌的實(shí)驗(yàn)，培養(yǎng)方法為采用將蛹蟲草菌種液和冬蟲夏草菌種液分別散布于對(duì)照例1-9所得培養(yǎng)基的表面,并將所得培養(yǎng)基于25-27°C下恒溫避光培養(yǎng)10-15天，從第五天開始對(duì)各培養(yǎng)基取樣后將所得樣品烘干并進(jìn)行藥性菌質(zhì)多糖含量測定，實(shí)驗(yàn)條件如下:采用濃硫酸-苯酚法檢測多糖含量，用分析純葡萄糖繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為Y = 0.0078X-0.061，R2=0.9992 ;每個(gè)對(duì)照例的五個(gè)重復(fù)試驗(yàn)通過上述實(shí)驗(yàn)條件檢測得多糖含量后取平均值，各培養(yǎng)基的檢測結(jié)果即多糖含量平均值如表一和表二所示。實(shí)施例2——菌質(zhì)蟲草素含量測定將對(duì)照例1-9所得培養(yǎng)基分別用于培養(yǎng)蛹蟲草菌，每個(gè)對(duì)照例所得培養(yǎng)基設(shè)置五個(gè)重復(fù)培養(yǎng)蛹蟲草菌的實(shí)驗(yàn)，培養(yǎng)方法為采用將蛹蟲草菌種液分別散布于對(duì)照例1-9所得培養(yǎng)基的表面，并將所得培養(yǎng)基于25-27°C下恒溫避光培養(yǎng)10-15天，從第五天開始對(duì)各培養(yǎng)基取樣后將所得樣品烘干并進(jìn)行藥性菌質(zhì)蟲草素含量測定實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)條件如下:采用高效液相色譜法檢測蟲草素含量，色譜條件為Diamonsil C18柱(4.6mm*150mm, 5 μ m),以磷酸鹽緩沖液(ρΗ6.5)(取0.01mol/L磷酸二氫鈉68.5mL與0.01mol/L磷酸氫二鈉31.5mL，混合)_甲醇(17:3，體積比)為流動(dòng)相，流速lmL/min，檢測波長260nm，進(jìn)樣量10μ L，溫度30°C。首先繪制蟲草素標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為Y = 34473X+34135，R2=0.9988 ;每個(gè)對(duì)照例的五個(gè)重復(fù)試驗(yàn)通過上述實(shí)驗(yàn)條件檢測得蟲草素含量后取平均值，各培養(yǎng)基的檢測結(jié)果即蟲草素含量平均值如表三所示。實(shí)施例3—本發(fā)明培養(yǎng)基對(duì)不同菌質(zhì)的培養(yǎng)程度利用實(shí)施例1的實(shí)驗(yàn)條件及實(shí)驗(yàn)方法將對(duì)照例4-9分別用于培養(yǎng)蛹蟲草菌、酵母菌、金黃色葡萄球菌并檢測各培養(yǎng)的微生物的第7天、第9天和第11天的多糖含量，計(jì)算平均值，所得結(jié)果如表四所示。上述所使用的菌種均可以在市場上購買得到，或者從中國微生物菌種保藏中心得到。
表一
權(quán)利要求
1.一種中藥廢渣制備的微生物培養(yǎng)基，其特征在于:所述微生物培養(yǎng)基由中藥五味子提取物廢渣和水組成，所述中藥五味子提取物廢渣和水的重量比例為1:1-2。
2.—種權(quán)利要求1所述的中藥廢渣制備的微生物培養(yǎng)基的制備方法，其特征在于:所述中藥五味予提取物廢渣經(jīng)粉碎成藥渣粉末后，將所得藥渣粉末與水按1:1-2的重量比例混合并滅菌得所述中藥廢渣制備的微生物培養(yǎng)基。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于:所述藥渣粉末經(jīng)粉碎過20目篩，過篩后的藥渣粉末與水按1:1-2的重量比例混合并滅菌得所述中藥廢渣制備的培養(yǎng)基。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于:所述滅菌方式為采用蒸汽滅菌和/或紫外滅菌。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于:所述蒸汽滅菌時(shí)蒸汽的溫度為110-130°C。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于:所述蒸汽滅菌時(shí)蒸汽的溫度為121。。。
7.權(quán)利要求1所述的微生物培養(yǎng)基在培養(yǎng)蟲草菌上的應(yīng)用。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其特征在于:所述蟲草菌為蛹蟲草菌。
9.一種利用權(quán)利要求1所述微生物培養(yǎng)基培養(yǎng)蟲草菌的方法，其特征在于:將蟲草菌種液散布于所述培養(yǎng)基表面進(jìn)行接種，將接種后的培養(yǎng)基于25-27 °C下恒溫避光培養(yǎng)10-15天即可。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述 的方法，其特征在于:所述蟲草菌為蛹蟲草菌。
全文摘要
本發(fā)明公開一種微生物培養(yǎng)基及其應(yīng)用和制備方法，具體涉及一種中藥廢渣制備的微生物培養(yǎng)基及其應(yīng)用和制備方法。所述中藥廢渣制備的微生物培養(yǎng)基由中藥五味子提取物廢渣和水組成，所述中藥五味子提取物廢渣和水的重量比例為1:1-2。本發(fā)明中藥廢渣制備的微生物培養(yǎng)基可以有效而充分地利用中藥廢渣所含有的營養(yǎng)成分以及有效成分，而且其生產(chǎn)成本較低，中藥廢渣得到有效充分利用的同時(shí)，其對(duì)環(huán)境的污染大幅減小。
文檔編號(hào)A01G1/04GK103114040SQ20131006443
公開日2013年5月22日 申請(qǐng)日期2013年2月28日 優(yōu)先權(quán)日2013年2月28日
發(fā)明者李英倫, 賀曉玉, 羅杰, 何曉利, 葉剛, 施飛, 房春林 申請(qǐng)人:成都乾坤動(dòng)物藥業(yè)有限公司, 四川農(nóng)業(yè)大學(xué)