專利名稱：一種用生物組織培養(yǎng)法制備苤藍的方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種植物組培方法，屬于生物技術領域，具體地說是一種用生物組織培養(yǎng)法制備苤藍的方法。
背景技術：
苯藍{Brassica oleraces var.carlorapa),又名球莖甘藍、擘藍等。據(jù)營養(yǎng)學家分析，每500g苯藍中含蛋白質(zhì)5.9g、糖llg、粗纖維4.lg、灰分3.3g、.丐81mg、磷122mg、鐵1.lmg、胡蘿卜素微量、硫胺素0.19mg、核黃素0.07mg、尼克酸1.5mg、維生素C 152mg。苤藍維生素含量十分豐富，尤其是鮮品絞汁服用，對胃病有治療作；其所含的維生素C等招牌營養(yǎng)素，有止痛生肌的作用，能促進胃與十二指腸潰瘍的愈合；其所含大量水分和膳食纖維，可寬腸通便，防治便秘，排除毒素；苤藍還含有豐富的維生素E，有增強人體免疫功能的作用；所含微量元素鑰，能抑制亞硝酸胺的合成，因而具有一定的防癌抗癌作用。最近有報道苤藍提取物具有抗菌和抗氧化的作用，目前，苤藍的種苗繁育有播種育苗和扦插育苗兩種方法。但是，苤藍未熟抽薹問題嚴重，往往造成重大損失或嚴重影響商品質(zhì)量，所以目前并未實現(xiàn)大規(guī)模的人工栽培。組織培養(yǎng)是植物細胞組織培養(yǎng)是指在離體條件下利用人工培養(yǎng)基對植物器官、組織、細胞、原生質(zhì)體等進行培養(yǎng)，使其長成完整的植株。由于組織培養(yǎng)法繁殖作物的突出特點是快速，因此，對一些繁殖系數(shù)低、不能用種子繁殖的“名、優(yōu)、特、新、奇”作物品種的繁殖意義更大。組織培養(yǎng)技術在藥用植物上已經(jīng)得到了大量應用，它具有外植體來源廣泛、繁殖系數(shù)高等優(yōu)點，在短時間內(nèi)便可獲得大量優(yōu)質(zhì)種苗。所以組織培養(yǎng)及再生體系的建立對于緩解苤藍資源開發(fā)利用與保護之間的矛盾有著重要意義。到目前為止，國內(nèi)外關于苤藍組織培養(yǎng)方面的研究鮮見報道，本技術通過對培養(yǎng)基組分、激素配比及環(huán)境因子的確定，建立了苤藍完整的再生體系，為苤藍的大規(guī)?？旆奔捌溥z傳轉(zhuǎn)化研究奠定了基礎。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種用生物組織培養(yǎng)法制備苤藍的方法，是以苤藍葉片為外植體，經(jīng)過消毒處理后，接種于誘導愈傷培養(yǎng)基上，待愈傷形成后，再接入分化培養(yǎng)基，誘導芽的形成，之后接入生根培養(yǎng)基，幼苗的根生長到一定程度時，進行煉苗與移栽即可；由于苤藍未熟抽薹問題嚴重，往往造成重大損失或嚴重影響商品質(zhì)量，采用本發(fā)明植物組織培養(yǎng)法外植體來源廣泛、繁殖系數(shù)高短時間內(nèi)便可獲得大量優(yōu)質(zhì)種苗，解決傳統(tǒng)種植方法出現(xiàn)的早抽薹現(xiàn)象。為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明所述一種用生物組織培養(yǎng)法制備苤藍的方法，其特征在于:
一、將新鮮苤藍葉片用洗潔精仔細擦洗表 面，流動水沖洗10min，75%乙醇消毒30s，0.1 0.2%升汞消毒5 12min并加2 4滴吐溫80，再用含有0.2%的Na2S2O3無菌水清洗3 5遍；
二、將消毒后的苤藍葉片切成小塊作為外植體，接種于基礎培養(yǎng)基MS+3%蔗糖+NAA
0.05 3.0mg/L+6-BA0.01 2.0mg/L+2.4-D 0.01 2.0mg/L 進行愈傷誘導，同時添加水解酪蛋白100mg/L+0.2%聚丙三醇棕櫚酸酯作為抗褐化劑；
三、愈傷形成后，轉(zhuǎn)入增殖培養(yǎng)基，增殖培養(yǎng)基為基礎培養(yǎng)基MS+NAA0.05 3.0mg/L+IBA 0.05 3.0mg/L+6-BA 0.01 2.0mg/L,或基礎培養(yǎng)基 B5+TDZ 0.005 2.0mg/L+GA3 0.05 1.0mg/L誘導芽形成及叢芽的增殖；
四、生根培養(yǎng)基選用基礎培養(yǎng)基B5+0.05 3.0mg/L ΝΑΑ+0.05 3.0mg/L IBA ；
五、當幼苗的根長到2 3cm，幼苗形體已顯健壯時，將幼苗取出，在清水中洗凈附著在根上的培養(yǎng)基，將洗凈的幼苗排好，用清水噴濕，然后分別以石英砂:草炭土:腐殖質(zhì)為基質(zhì)，在溫度20 25°C，濕度60 80%的條件下煉苗5 30天，煉苗后，將幼苗移栽入大田即可。所述苤藍的葉片切塊大小為0.8 1.2cm2 ；
所述苤藍葉片在9 20°C，1500 2500Lux，20 60天愈傷誘導率40 60%，可利用愈傷為20 30% ；
所述愈傷出芽在9 20°C，1500 3000Lux，20 60天，出芽率20 40% ；
所述叢芽增殖繁殖比1: 15 25 ;
所述單苗高23cm，47片葉在19 24°C，2000 3000Lux，830天生長出58條根長I 2cm白根，生根率90 100% ；
所述基質(zhì)石英砂:草炭土:腐殖質(zhì)為1:1:1。
本發(fā)明所述的一種用生物組織培養(yǎng)法制備苤藍的方法，其有益效果在于:在本發(fā)明中，分別選用聚丙三醇棕櫚酸酯和Na2S2O3作抗褐化劑，有效的解決了苤藍在生長過程中易未熟抽薹，造成重大損失或嚴重影響商品質(zhì)量的問題，以及愈傷誘導過程中的褐化現(xiàn)象，在出芽培養(yǎng)時使用NAA+IBA+6-BA或TDZ+GA3的組合使出芽和擴繁率有所提高，并且煉苗采用石英砂+腐殖植+草炭土為基質(zhì)，不僅通氣、保水性好，又有充足的營養(yǎng)，充分滿足苤藍幼苗生長需求，使成活率達到95%。
具體實施例方式以下實施例為本發(fā)明作進一步出闡述。實施例1
一、將苤藍新鮮葉片用洗潔精仔細擦洗表面，流動水沖洗10min，75%乙醇消毒30s，
0.2%升汞消毒5min并加2滴吐溫80，再用含有0.2%的Na2S2O3無菌水清洗3遍；
二、將消毒后的苤藍其葉片切成0.Scm2的小塊作為外植體，接種于培養(yǎng)基上進行愈傷誘導，培養(yǎng)基成分為 MS+3% 蔗糖 +NAA1.0mg/L+6-BAl.0mg/L+2.4-D 0.01mg/L 的組合，同時添加水解酪蛋白100mg/L+0.2%聚丙三醇棕櫚酸酯作為抗褐化劑；苤藍葉片在9°C，1500Lux,60天愈傷誘導率40%，可利用愈傷為20% ；
三、愈傷形成后，轉(zhuǎn)入增殖培養(yǎng)基，增殖培養(yǎng)基成分為MS+NAA1.0mg/L+IBA 1.0mg/L+6-BA 0.05mg/L，誘導芽形成及叢芽的增殖，叢芽增殖繁殖比1:25，愈傷出芽在9°C，1500Lux，60 天， 出芽率 20% ；四、待芽形成苗后，轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中，生根培養(yǎng)基選用1/2MS培養(yǎng)基+0.005mg/11^六，單苗高2011，4片葉在19°C，2000Lux，8天生長出5條根長I 2cm白根，生根率90%;
五、當幼苗的根長到Icm時，幼苗長出4片葉形體己顯健壯時，將幼苗取出，在清水中洗凈附著在根上的培養(yǎng)基(嚴格洗凈，防止爛根)，將洗凈的幼苗排好，用清水噴濕，然后分別石英砂:草炭土:腐殖質(zhì)為1:1:1基質(zhì)，在溫度20°C，濕度60%的條件下煉苗10天，煉苗后，將幼苗移栽入大田即可。實施例2
一、將苤藍新鮮葉片用洗衣粉仔細擦洗表面，流動水沖洗10min，75%乙醇消毒30s，
0.1%升汞消毒7min并加3滴吐溫80，再用含有0.2%的Na2S2O3無菌水清洗4遍；
二、將消毒后的苤藍其葉片切成1.0m2的小塊作為外植體，接種于培養(yǎng)基上進行愈傷誘導，培養(yǎng)基成分為 MS+3% 蔗糖 +NAA 0.05mg / L+6-BA 1.0mg/L+2.4-D 0.05mg/L 的組合，同時添加水解酪蛋白100mg/L+0.2%聚丙三醇棕櫚酸酯作為抗褐化劑，苤藍葉片在12°C，1800Lux,40天愈傷誘導率45%，利用愈傷23% ；
三、愈傷形成后，轉(zhuǎn)入增殖培養(yǎng)基，增殖培養(yǎng)基成分為B5+NAA0.05mg/L+IBA 1.0mg/L+6-BA 0.05mg/L，誘導芽形成及叢芽的增殖，叢芽增殖繁殖比1:18，愈傷出芽在12°C，1800Lux，40 天，出芽率 22% ；
四、待芽形成苗后，轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中，生根培養(yǎng)基選用1/2MS培養(yǎng)基+1.0mg/LIBA,單苗高3cm，5片葉在19°C，2000Lux，15天生長出6條根長I 2cm白根，生根率92% ；
五、當幼苗的根長到2cm，幼苗長出5片葉形體己顯健壯時，將幼苗取出，在清水中洗凈附著在根上的培養(yǎng)基(嚴格洗凈，防止爛根)，將洗凈的幼苗排好，用清水噴濕，然后分別以石英砂:草炭土:腐殖質(zhì)為1:1:1為基質(zhì)，在溫度22°C，濕度70%的條件下煉苗8天，煉苗后，將幼苗移栽入大田即可。實施例3
一、將苤藍新鮮葉片用洗潔精仔細擦洗表面，流動水沖洗10min，75%乙醇消毒30s，
0.15%升汞消毒5min并加2滴吐溫80，再用含有0.2%的Na2S2O3無菌水清洗4遍；
二、將消毒后的苤藍其葉片切成1.2m2的小塊作為外植體，接種于培養(yǎng)基上進行愈傷誘導，培養(yǎng)基成分為 B5+3% 蔗糖 +NAA 2.0mg/L+6-BA 0.05mg/L+2.4-D 0.08mg/L 的組合，同時添加水解酪蛋白100mg/L+0.2%聚丙三醇棕櫚酸酯作為抗褐化劑，苤藍葉片在15°C，2000Lux，30天愈傷誘導率50%，可利用愈傷為25% ；
三、愈傷形成后，轉(zhuǎn)入增殖培養(yǎng)基，增殖培養(yǎng)基成分為B5+NAA2.0mg/L+IBA 2.0mg/L+6-BA 1.0mg/L，誘導芽形成及叢芽的增殖，叢芽增殖繁殖比1:20，愈傷出芽在15°C，2000Lux，40 天，出芽率 30% ；
四、待芽形成苗后，轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中，生根培養(yǎng) 基選用B5培養(yǎng)基+2.0mg/L IBA，單苗高2.5cm，6片葉在19°C，2000Lux，18天生長出7條根長I 2cm白根，生根率95% ；
五、當幼苗的根長到2cm，幼苗長出5片葉形體己顯健壯時，將幼苗取出，在清水中洗凈附著在根上的培養(yǎng)基(嚴格洗凈，防止爛根)，將洗凈的幼苗排好，用清水噴濕，然后分別以石英砂:草炭土:腐殖質(zhì)為1:1:1為基質(zhì)，在溫度25°C，濕度75%的條件下煉苗20天，煉苗后，將幼苗移栽入大田即可。
權利要求
1.一種用生物組織培養(yǎng)法制備苤藍的方法，其特征在于: ①將新鮮苤藍葉片用洗潔精仔細擦洗表面，流動水沖洗10min，75%乙醇消毒30s，0.1 0.2%升汞消毒5 12min并加2 4滴吐溫80，再用含有0.2%的Na2S2O3無菌水清洗3 5遍； ②將消毒后的苤藍葉片切成小塊作為外植體，接種于基礎培養(yǎng)基MS+3%蔗糖+NAA0.05 3.0mg/L+6-BA0.01 2.0mg/L+2.4-D 0.01 2.0mg/L 進行愈傷誘導，同時添加水解酪蛋白100mg/L+0.2%聚丙三醇棕櫚酸酯作為抗褐化劑； ③愈傷形成后，轉(zhuǎn)入增殖培養(yǎng)基，增殖培養(yǎng)基為基礎培養(yǎng)基MS+NAA0.05 3.0mg/L+IBA 0.05 3.0mg/L+6-BA 0.01 2.0mg/L,或基礎培養(yǎng)基 B5+TDZ 0.005 2.0mg/L+GA3 0.05 1.0mg/L誘導芽形成及叢芽的增殖； ④生根培養(yǎng)基選用基礎培養(yǎng)基B5+0.05 3.0mg/L ΝΑΑ+0.05 3.0mg/L IBA ； ⑤當幼苗的根長到2 3cm，幼苗形體已顯健壯時，將幼苗取出，在清水中洗凈附著在根上的培養(yǎng)基，將洗凈的幼苗排好，用清水噴濕，然后分別以石英砂:草炭土:腐殖質(zhì)為基質(zhì)，在溫度20 25°C，濕度60 80%的條件下煉苗5 30天，煉苗后，將幼苗移栽入營養(yǎng)土，視幼苗長勢移入大田即可。
2.如權利要求1所述一種用生物組織培養(yǎng)法制備苤藍的方法，其特征在于:所述苤藍的葉片切塊大小為0.8 1.2cm2。
3.如權利要求1所述一種用生物組織培養(yǎng)法制備苤藍的方法，其特征在于:所述苤藍葉片生長環(huán)境為9 20°C，1500 2500Lux。
4.如權利要求1所述一種用生物組織培養(yǎng)法制備苤藍的方法，其特征在于:所述基質(zhì)石英砂:草炭土:腐殖質(zhì)為1 :1:1。
全文摘要
本發(fā)明公開一種用生物組織培養(yǎng)法制備苤藍的方法，涉及一種植物組培方法，屬于生物技術領域。其特征在于是以苤藍葉片為外植體，經(jīng)過消毒處理后，接種于誘導愈傷培養(yǎng)基上，待愈傷形成后，再接入分化培養(yǎng)基，誘導芽的形成，之后接入生根培養(yǎng)基，幼苗的根生長到一定程度時，進行煉苗與移栽。其有益效果在于在本發(fā)明中，分別選用聚丙三醇棕櫚酸酯和Na2S203作抗褐化劑，有效的解決了苤藍在生長過程中易未熟抽薹，造成重大損失或嚴重影響商品質(zhì)量的問題。
文檔編號A01H4/00GK103141386SQ20131006416
公開日2013年6月12日 申請日期2013年3月1日 優(yōu)先權日2013年3月1日
發(fā)明者康建國 申請人:康建國