專利名稱：一種用于增強免疫的珠母貝糖胺聚糖軟膠囊及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種糖胺聚糖軟膠囊及其制備方法，具體涉及一種用于增強免疫的珠 母貝糖胺聚糖軟膠囊及其制備方法，屬于保健食品生產(chǎn)技術(shù)領(lǐng)域，是一種從馬氏珠母貝中 分離得到的活性物質(zhì)制備具有增強免疫功能的軟膠囊產(chǎn)品的方法。
背景技術(shù)：
馬氏珠母貝(Pinctada martensii (Dunder))是我國南海珠母貝的主要貝種, 在廣東、廣西部分地區(qū)養(yǎng)殖量極大。珠農(nóng)采珠后，所余珠母貝全臟器資源量約達3500 4000噸/年，珠母貝全臟器俗稱珍珠貝肉，價格低廉(約3 4元/kg)，在珍珠養(yǎng)殖地區(qū) 如廣東省的雷州市及徐聞縣、廣西壯族自治區(qū)的北海市及欽州市、海南省的部分地區(qū)，大 部分僅作為飼料和餌料，造成資源的巨大浪費，急待開發(fā)利用。據(jù)文獻報道，許多海洋貝 類多糖可刺激機體的各種免疫活性細胞的成熟、分化和繁殖，增加巨噬細胞非特異性細胞 毒，誘導白細胞介素-1、白細胞介素_2、腫瘤壞死因子、干擾素等細胞因子的產(chǎn)生和細胞 因子受體的表達，促進抗體形成，活化補體系統(tǒng)的經(jīng)典途徑及變更途徑等作用。糖胺聚糖 (glycosaminoglycan)就是其中多糖之一，其曾稱粘多糖(mucopolysaccharide),氨基多糖 和酸性多糖，為雜多糖的一種，主要存在于高等動物結(jié)締組織中，植物中也有發(fā)現(xiàn)；糖胺聚 糖是由重復的二糖單位構(gòu)成的長鏈多糖，其二糖單位之一是氨基己糖(氨基葡萄糖或氨基 半乳糖)，故稱糖胺聚糖；另一個是糖醛酸。珠母貝糖胺聚糖是一種天然來源的具有增強免 疫功能的生物活性多糖，毒副作用小、不損傷正常細胞、安全性高、療效顯著、不會引起藥源 性疾病等優(yōu)點，具有廣闊的市場前景。同時用珠母貝提取糖胺聚糖，可以解決資源浪費的問 題，充分利用沿海地區(qū)的資源，具有非常重要的意義。發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種用于增強免疫的珠母貝糖胺聚糖軟膠囊，解決馬氏珠母 貝資源浪費的環(huán)境問題，同時將其綜合利用，制成有益于人類的產(chǎn)品。
本發(fā)明的另一個目的是提供一種用于增強免疫的珠母貝糖胺聚糖軟膠囊的制備 方法。
為實現(xiàn)上述發(fā)明的目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案如下本發(fā)明是從馬氏珠母貝全臟器中分離得馬氏珠母貝糖胺聚糖，其糖胺聚糖含量為 30% 42%。以馬氏珠母貝糖胺聚糖為基料，制備成具有增強免疫功能的軟膠囊產(chǎn)品。
本發(fā)明提供了馬氏珠母貝糖胺聚糖免疫增強軟膠囊產(chǎn)品的制備方法，具體步驟如 下(I)將馬氏珠母貝全臟器(濕重)加水勻漿，貝肉與水的質(zhì)量比為1: O. 5或1:1，按質(zhì)量 比加入胰酶1% 2%(w/w)和枯草桿菌中性蛋白酶O. 5% l%(w/w)，于pH 7. O, 50°C恒溫水 浴3 h 5 h，高溫100°C滅酶并冷卻，4000rpm離心5min，取上清液按質(zhì)量比2%加入吸附 劑(活性碳娃藻土 =3 :2),65°C恒溫50min,紗布過濾后，4000rpm離心IOmin取上清液,加入95%食品級酒精進行醇沉，上清液與酒精體積比為1: (O. 5 1. 5)，4°C沉淀24h，取沉淀用無水乙醇與丙酮交替洗滌3遍，收集沉淀物加水溶解，調(diào)等電點pH2. O離心去蛋白，再經(jīng)超濾得到糖胺聚糖，將糖胺聚糖制成粉末備用；(2)馬氏珠母貝糖胺聚糖粉末加入藥用級PEG400稀釋劑按糖胺聚糖粉末質(zhì)量計算(以下相同)200% 400%，同時加入助懸劑PEG6000 8% 12%，丙二醇7% 10%，充分混合均勻后，制成軟I父囊；廣品中糖胺聚糖含量為19-32mg/粒。
本發(fā)明的馬氏珠母貝糖胺聚糖增強免疫軟膠囊有以下特點(I)采用該方法制備的珠母貝糖胺聚糖是一種天然來源的具有增強免疫功能的生物活性多糖，毒副作用小、安全性高、增強機體免疫功能的作用顯著等優(yōu)點，具有廣闊的市場前旦-5^ O
(2)該方法工藝簡單，操作方便，生產(chǎn)的產(chǎn)品質(zhì)量高。
下面通過實例對本發(fā)明做進一步詳細說明，這些實例僅用來說明本發(fā)明，并不限制本發(fā)明的范圍。
實施例1將馬氏珠母貝全臟器500g (濕重)加水250g勻漿，按質(zhì)量比加入胰酶1% (w/w)和枯草桿菌中性蛋白酶O. 5% (w/w)，于pH 7. O, 50°C恒溫水浴3 h，高溫100°C滅酶并冷卻， 4000rpm離心5min，取上清液按質(zhì)量比2%加入吸附劑(活性碳硅藻土 =3 :2)，65°C恒溫 50min,紗布過濾后，4000rpm離心IOmin取上清液，加入95%食品級酒精進行醇沉，上清液與酒精體積比為1: O. 5，4°C沉淀24h，取沉淀用無水乙醇與丙酮交替洗滌3遍，收集沉淀物加水溶解，調(diào)等電點PH2. O離心去蛋白，再經(jīng)超濾得到糖胺聚糖(即軟膠囊原料)。馬氏珠母貝糖胺聚糖粉末IOOmg加入稀釋劑200mg PEG400,同時加入8mg PEG6000, 7mg丙二醇，充分混合均勻后，上軟膠囊成型機，制成軟膠囊，平均裝量315mg/粒，產(chǎn)品中糖胺聚糖含量為31. 7 mg/粒。
實施例2將馬氏珠母貝全臟器500g(濕重)加水500g勻漿，按質(zhì)量比加入胰酶1% 2% (w/w)和枯草桿菌中性蛋白酶l%(w/w)，于pH 7. 0，50°C恒溫水浴5 h，高溫100°C滅酶并冷卻，4000rpm 離心5min，取上清液按質(zhì)量比2%加入吸附劑(活性碳硅藻土 =3 :2)，65°C恒溫50min，紗布過濾后，4000rpm離心IOmin取上清液，加入95%食品級酒精進行醇沉，上清液與酒精體積比為1:1. 5，4°C沉淀24h，取沉淀用無水乙醇與丙酮交替洗滌3遍，收集沉淀物加水溶解，調(diào)等電點PH2. O離心去蛋白，再經(jīng)超濾得到糖胺聚糖糖胺聚糖精制品(即軟膠囊原料)。馬氏珠母貝糖胺聚糖粉末IOOmg加入藥用級PEG400稀釋劑按質(zhì)量計算(以下相同)400mg,同時加入助懸劑PEG6000 12mg，丙二醇10mg，充分混合均勻后，制成軟膠囊。平均裝量522mg/ 粒，產(chǎn)品中糖胺聚糖含量為19.1mg/粒。
珠母貝糖胺聚糖已完成增強免疫功能的測試，測試結(jié)果見表I。根據(jù)中華人民共和國衛(wèi)生部《保健食品檢驗與評價技術(shù)規(guī)范》的規(guī)定，在單核-巨噬細胞功能、細胞免疫實驗、體液免疫實驗、NK細胞活性四個方面任兩個方面結(jié)果為陽性，可判定該受試物具有增強免疫力功能。其中，兩個單核-巨噬細胞實驗(碳廓清實驗、腹腔巨噬細胞吞噬實驗)均為陽性或其中一個實驗的兩個以上劑量組為陽性，兩個細胞免疫實驗(脾淋巴細胞增殖實驗、遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)實驗)均為陽性或者其中一個實驗的兩個以上劑量組為陽性，兩個體液免疫實驗(抗體生成細胞數(shù)實驗、血清溶血素含量測定實驗)均為陽性或者其中一個實驗的兩個以上劑量組為陽性，NK細胞實驗的一個以上劑量組為陽性，可判斷此實驗結(jié)果為陽性。依據(jù)該原則，對珠母貝糖胺聚糖的免疫功能測試結(jié)果可判斷為珠母貝糖胺聚糖具有顯著增強小鼠機體免疫功能的作用。
表I 珠母貝糖胺聚糖對小鼠機體免疫功能影響的實驗結(jié)果
權(quán)利要求
1.一種用于增強免疫的珠母貝糖胺聚糖軟膠囊制備方法，其特征在于包括如下步驟(1)將馬氏珠母貝全臟器加水勻漿，原料與水的質(zhì)量比為1:O.5或1: 1，按質(zhì)量比加入胰酶和枯草桿菌中性蛋白酶，于PH 7. O, 50°C恒溫水浴3 h 5 h，高溫100°C滅酶并冷卻， 4000rpm離心5min,取上清液按質(zhì)量比加入吸附劑，65°C恒溫50min,紗布過濾后，4000rpm 離心IOmin取上清液，加入95%食品級酒精進行醇沉，4°C沉淀24h，取沉淀用無水乙醇與丙酮交替洗滌3遍，收集沉淀物加水溶解，調(diào)等電點pH2. O離心去蛋白，再經(jīng)超濾得到糖胺聚糖，將糖胺聚糖制成粉末備用；(2)馬氏珠母貝糖胺聚糖粉末加入藥用級PEG400稀釋劑，同時加入助懸劑PEG6000和丙二醇，充分混合均勻后，制成軟膠囊；產(chǎn)品中糖胺聚糖含量為19-32mg/粒。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于增強免疫的珠母貝糖胺聚糖軟膠囊制備方法，其特征在于所述的胰酶的加入量為衆(zhòng)料重量的1% 2%(w/w)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于增強免疫的珠母貝糖胺聚糖軟膠囊制備方法，其特征在于所述的枯草桿菌中性蛋白酶的加入量為漿料重量的O. 5% l%(w/w)。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于增強免疫的珠母貝糖胺聚糖軟膠囊制備方法，其特征在于所述的吸附劑的加入量為漿料重量的2-3%。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或4所述的一種用于增強免疫的珠母貝糖胺聚糖軟膠囊制備方法， 其特征在于所述的吸附劑為活性炭和硅藻土混合物，其比例為活性碳硅藻土 =3 :2。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于增強免疫的珠母貝糖胺聚糖軟膠囊制備方法，其特征在于所述的食品級酒精的加入量為上清液與酒精體積比為1: (O. 5 1. 5)。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于增強免疫的珠母貝糖胺聚糖軟膠囊制備方法，其特征在于所述的PEG400稀釋劑的加入量為糖胺聚糖粉末質(zhì)量的200% 400%。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于增強免疫的珠母貝糖胺聚糖軟膠囊制備方法，其特征在于所述的助懸劑PEG6000的加入量為糖胺聚糖粉末質(zhì)量的8% 12%。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于增強免疫的珠母貝糖胺聚糖軟膠囊制備方法，其特征在于所述的丙二醇的加入量為糖胺聚糖粉末質(zhì)量的7% 10%。
10.一種采用權(quán)利要求1所述方法制備的用于增強免疫的珠母貝糖胺聚糖軟膠囊。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種用于增強免疫的珠母貝糖胺聚糖軟膠囊及其制備方法，屬于保健食品生產(chǎn)技術(shù)領(lǐng)域；該方法是將馬氏珠母貝全臟器加水勻漿，加入胰酶和枯草桿菌中性蛋白酶，于pH7.0，50℃恒溫水浴，高溫滅酶并冷卻，離心取上清液加入吸附劑，65℃恒溫，紗布過濾后，離心取上清液，加入95%食品級酒精進行醇沉，取沉淀用無水乙醇與丙酮交替洗滌，收集沉淀物加水溶解，調(diào)等電點離心去蛋白，再經(jīng)超濾得到糖胺聚糖，加入藥用級PEG400稀釋劑，同時加入助懸劑和丙二醇，充分混合均勻后，制成軟膠囊；該軟膠囊具有毒副作用小、安全性高、增強機體免疫功能的作用顯著等優(yōu)點；該方法工藝簡單，操作方便，生產(chǎn)的產(chǎn)品質(zhì)量高。
文檔編號A23P1/04GK103039792SQ20131001149
公開日2013年4月17日 申請日期2013年1月14日 優(yōu)先權(quán)日2013年1月14日
發(fā)明者吳紅棉, 范秀萍, 鐘敏, 胡雪瓊, 吳文龍 申請人:廣東海洋大學