色桿菌的配方、成分、代謝物和使用方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了具有穩(wěn)定性的生物殺蟲劑，其含有色桿菌的濾液、上清液、提取物或殺蟲活性成份，可通過日光曝曬后，提供其抗降解的能力而維持物理均勻性來改善產(chǎn)品的保質(zhì)期。
【專利說明】色桿菌的配方、成分、代謝物和使用方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明所述為色桿菌(Chromobacterium)濾液、上清液和提取物的用途、成份或配方，原本作為殺螨劑和殺蟲劑使用，具有殺蟲活性的化合物或其代謝物，特別是用于防治下列一種或一種以上的害蟲，如蜱螨目、金龜子科、果蠅科、叉木虱科、蜜蜂科、蠅科、花蠅科和擬步甲科等。本發(fā)明所述再包括有生物性殺蟲劑(也簡稱為生物殺蟲劑)的配方，尤其是含色桿菌濾液、上清液、提取物、代謝物或其衍生物中，具有殺蟲活性的化合物和其制造方法和防治害生物入侵的方法。更具體來說，本發(fā)明提供具有高穩(wěn)定性的生物殺蟲劑特性，因為其均勻的物理特性具有更長的保存期限，因為對日光曝曬的高抗降解特性，具有更耐久的使用后殺蟲活性。
【背景技術(shù)】
[0002]使用微生物、植物和其它生物體所制成的天然產(chǎn)品，此微生物天然產(chǎn)物具有豐富多樣性的化學(xué)成份來源，并此天然產(chǎn)品在醫(yī)藥用途已有長久的歷史。雖然天然產(chǎn)品主要用于人體治療，其中超過50%的產(chǎn)品來自天然產(chǎn)品，只有11%的殺蟲劑是使用天然原料。然而，天然原料制成的殺蟲劑，在傳統(tǒng)和有機農(nóng)場的蟲害控制上舉足輕重。微生物(細菌、放線菌和真菌)的次級代謝物提供新的化學(xué)成份，可將已知的成份進行單方或復(fù)方使用，以有效控制蟲害并降低耐藥性增強的可能風(fēng)險。關(guān)于微生物天然產(chǎn)品在農(nóng)業(yè)殺蟲劑上的成功應(yīng)用，有幾個著名的例子(湯普森(Thompson)等人,2000 ;阿瑞娜(Arena)等人，1995 ;克力克(Krieg)等人，1983)。
[0003]微生物殺蟲劑 的開發(fā)始于尾隨純培養(yǎng)物的析離，然后通過體外、體內(nèi)、溫室或農(nóng)地的實驗，進行其療效和應(yīng)用范圍的篩選，同時進行微生物制造成份的析離和鑒定，關(guān)于微生物殺蟲劑的商品化，可通過工業(yè)發(fā)酵的方法大量而經(jīng)濟地制造微生物，進行生物相容性的配方處理，添加經(jīng)核可的添加物來增加藥效，將應(yīng)用便利性和農(nóng)地條件下的儲存穩(wěn)定性最大化。
[0004]色桿菌
[0005]在2000年，馬丁(Martin)博士和其同事在USDA從馬里蘭州的農(nóng)地上壤中，析離出某種紫色的細菌(馬丁等人，2007a)，在最初的篩選中，他們發(fā)現(xiàn)這種細菌對科羅拉多州的馬鈴薯甲蟲等害蟲具有毒性(馬丁等人，2007b)，此種運動型細菌屬革蘭氏染色陰性，被界定為新種的色桿菌，即色桿菌蘇比絲加(Chromobacterium substsugae sp.nov)(馬丁等人,2007c),它兼有嗜氧和運動性,屬革蘭陰性的β_變形菌(beta-proteobacterium)而具有極生鞭毛，使用L-瓊脂與5°C下持續(xù)培養(yǎng)2-3天的菌落最初呈現(xiàn)奶油色，在接下來的24小時逐漸被稱為暗紫色。PRAA4-1的菌落在蛋白胨培養(yǎng)基中，于25°C、pH值6.5~8.0和0-1.5% (w/v)氯化鈉的條件下生長情況良好(馬丁等人，2007a)。
[0006]因為馬丁和其同事所發(fā)現(xiàn)的色桿菌蘇比絲加中，至少析離出3個色桿菌新種，楊(Young)等人(2008)也從臺灣的泉水樣本析離出新的色桿菌種水生色桿菌(C.aquaticum),肯普法(Kampfer)等人(2009)也從馬來西亞的環(huán)境中析離出兩個新菌種，即色桿菌皮絲西納(C.piscinae)和假紫色色桿菌(C.pseudovioIaceum)。
[0007]在所有來自土壤和水源的已知色桿菌種中，紫色色桿菌(C.violaceum)屬革蘭氏陰性。關(guān)于色桿菌生成次級代謝物已發(fā)布的研究論文中，僅限于紫色色桿菌的菌種(參見實例如度倫(Durdn)和門克(Menck) (2001)關(guān)于紫色色桿菌菌種在藥理和工業(yè)應(yīng)用上的全面性探討)。此菌種通常被認為對人類不具有致病性，但屬可能致病的病原體，在人體和動物體中，偶爾變成為敗血癥的病原體，而導(dǎo)致敗血癥和致命的感染。紫色色桿菌已知可生成某種紫色成份即紫色桿菌素，出現(xiàn)氧氣的情況下，可融合兩個L-色氨酸分子而形成I個雙11引哚分子(星野(Hoshino)等人，1987 ;瑞安(Ryan)和德雷南(Drennan) ;2009)。紫色桿菌素生物合成可通過群體感應(yīng)來調(diào)節(jié)，為革蘭氏陽性菌中I個調(diào)節(jié)各種次生代謝物途徑的共同機制(麥克林(McClean)等人，1997)。
[0008]度倫和門克(2001)所摘要列舉的紫色色桿菌代謝物包括氰化氫、鐵草氨菌素E (FERRIOXAMINE E)、B-內(nèi)酰胺糖肽SQ28504和SQ28546、抗生素如氣花青素、阿羅卡因(aerocavin)、3，6_ 二羥基-苯并異惡唑、單酰胺菌素(monobactam) SB-26.180和抗腫瘤的縮酚酸肽FR901228。根據(jù)度倫和門克(2001)的研究，紫色色桿菌也制造不尋常的糖化合物如胞外多醣和脂多醣的成份。
[0009]美國專利申請案US20120100236也揭露可得白色桿菌種的化合物成份，更具體來說為色桿菌蘇比絲加的色桿菌種。
[0010]螨蟲和殺螨劑 [0011]二斑葉螨屬葉螨科，紅蜘蛛也許是觀賞植物中最重要的害蟲，在溫室和農(nóng)地作物中，有180余個品種造成相當(dāng)大的損害，這些螨蟲也就是最難以防治的節(jié)肢動物害蟲，可快速養(yǎng)成抗藥性(斯塔普斯(Stamps)和奧士邦(Osborne) 2009 ;奧士邦、愛樂(Ehler)和尼科爾斯(NechOls)，1999)。
[0012]殺螨劑屬具有殺滅螨蟲(殺螨劑)和蜱蟲(殺蜱劑)的毒性，此類的殺蟲劑種類繁多，包括有抗生素、氨基甲酸酯類、甲脒殺螨劑、擬除蟲菊酯類、螨蟲生長調(diào)節(jié)劑和有機磷殺螨劑。除了化學(xué)殺蟲劑外，硅藻土和脂肪酸也可用于防治螨蟲，通?？善茐尿x的角質(zhì)層讓其干死。此外，某些精油如薄荷油也可用于防治螨蟲，盡管已有種類繁多的殺螨劑化合物，因為對作物造成的損害，在農(nóng)業(yè)上，螨蟲危害仍屬嚴重的問題。在-個季節(jié)中螨蟲可繁衍數(shù)代，快速養(yǎng)成對殺螨劑產(chǎn)品的抗藥性，因此，急需具有新用途和新方法的殺蟲劑產(chǎn)品。
[0013]家蠅
[0014]舍蠅(家蠅)是蠅科成員，此科被視為國內(nèi)和國外在全球各地經(jīng)濟上的問題，其它蠅科的成員包括面蠅，廄螫蠅和角蠅，被認為害蟲是人類和動物的病媒蟲。此蟲習(xí)慣以垃圾、糞便和人類的食物為食，成為致病微生物的最佳傳染病媒蟲，此病媒蟲通過開放性的傷口成為動物傳染性疾病的害蟲。
[0015]以植物為食的果蠅一斑翼果蠅
[0016]斑翼果蠅是美國地區(qū)果蔬種植區(qū)的新入侵者，其破壞性較眾所周知的黑腹果蠅和其它的果蠅危害更甚，因為櫻桃果蠅(D.suzukii)以破壞完整的果蔬為食，而其它的果蠅只以腐爛的植物為食。
[0017]根蛆
[0018]根蛆屬花蠅科，以不同植物的根為食，大白菜的根蛆危害卷心菜、菜花、西蘭花和抱子甘藍等(此類的蔬菜也稱為“油菜作物”)，不同種類的根蛆也危害胡蘿卜、洋蔥、蔬菜和其它作物，因為油菜作物屬冷季型蔬菜，白菜根蛆在美國北方危害更甚，而難以防治，因為其孵化和喂食行為都發(fā)生在土壤下，所以當(dāng)你發(fā)現(xiàn)到葉子發(fā)育不良或枯萎時，才知道他們的存在。
[0019]桃蚜
[0020]煙蚜(桃蚜)屬常蚜科(見US20110054022)，由其俗名得知，桃蚜是各種果蔬和觀賞植物的害蟲并遍布全球，這些害蟲危害更甚，因為不只通過取食韌皮部而造成直接的損害，也是李痘病毒的潛在宿主，這是李樹痘病的病媒而導(dǎo)致果實變形和變色。因此，感染株需連根拔起，目前正通過各種殺蟲劑來防治這些害蟲，但這些害蟲常養(yǎng)成抗藥性。
[0021]馬鈴薯木虱
[0022]馬鈴薯/番茄木虱(馬鈴薯木虱)屬叉木虱科，是斑馬紋病的病原體，通過革蘭氏陰性菌來感染。雖然原產(chǎn)于北美洲，已在紐西蘭發(fā)現(xiàn)到此物種(WWW.biosecurity, govt, nz/files/pests/potato-tomato-psyllid/psyillid-factsheet.pdf),馬鈴薯木風(fēng)通常生長于茄科宿主(如番茄和馬鈴薯)中，但也可在其它植物如辣椒、茄子、紅薯、波羅蜜、樹番茄和曼陀羅中發(fā)現(xiàn)到。
[0023]枯葉甲蟲
[0024]大黃粉蟲是危害家禽業(yè)極為嚴重的害蟲屬擬步甲科，據(jù)報Bt菌株P(guān)S8681對擬步行蟲具有防治活性(海客里(Hickle)的美國專利5，100，665等)，擬步行蟲亞種(Bttenebrionis)對此甲蟲的幼蟲可能也有防治活性(美國專利5，244，660),枯葉甲蟲和其它某些鞘翅目為原生動物、細菌和病毒性傳染病的宿主，對雞和火雞飼養(yǎng)業(yè)造成重大的經(jīng)濟損失?？萑~甲蟲屬致病性沙門氏菌的重要病貓，包括許多的病媒種如腸道沙門菌(S.enterica)血清型腸炎。此問題就是感染有病原微生物如沙門氏菌的家禽，危害人體健康，這些甲蟲棲息于垃圾、木材、發(fā)泡塑料、玻璃纖維和雞舍的聚苯乙烯保溫板中，其幼蟲和成蟲也會在鳥糞和雞飼料的谷物中滋生，這些大甲蟲的群組和其不同的棲息地均在雞舍內(nèi)，而難以根除其身上攜帶的沙門氏菌。在落葉甲蟲為患甚劇時，或在新雞群建立前，不頻繁翻動垃圾也不沾染化學(xué)殺蟲劑，即可提供完全有效的蟲害防治。
[0025]蠐螬和甲蟲
[0026]蠐螬如白色蠐螬(圓頭犀金龜屬)、南方隱金龜子(歐洲切根鰓金龜)、日本甲蟲的幼蟲(日本麗金龜(Popillia japonica))、黑色蛀象鼻蟲的幼蟲(黑蛀象鼻蟲(Otiorhynchussulcatus))、東方甲蟲的幼蟲(東方異麗金龜)、金龜科成員，已發(fā)現(xiàn)到會侵擾草地和牧場。也已發(fā)現(xiàn)圣甲蟲的成蟲會侵擾世界各地的觀賞植物和眾多的作物，目前已嘗試使用過各種的殺蟲劑，包括化學(xué)殺蟲劑、殺線蟲劑(如參加美國專利7641573)、蘇云金芽孢桿菌(參見美國專利5185158)、費洛蒙和天然驅(qū)蟲劑如薄荷和韭菜等。
[0027]聚羥基脂肪酸酯(PHA)
[0028]生物塑料即定義為從再生資源所合成的塑料，如植物淀粉和微生物等。生物塑料由一種叫做聚羥基脂肪酸酯(PHA)的成份所制成，PHA家族包括幾種聚合酯，如聚羥基丁酸鹽、聚羥基丁酸酯、聚羥基丁酸鹽、共羥基戊酸乙酯(PHBV)、聚羥基丁酸酯共羥基己酸酯(PHBHx)和聚羥基丁酸酯-共-羥基辛酸酯(PHBO)等，聚3-羥基丁酸(PHB)是最常見的天然微生物PHA成份，聚羥基脂肪酸酯是100%可生物降解的聚合物，含各種羥基烷酸酯(HAS)，由無數(shù)微生物所合成，作為基質(zhì)失恒條件下的能量儲備物質(zhì)，各種合成的熱塑性塑料具有類似的特性，如聚丙烯等，也可在有氧條件下，全部降解為水和二氧化碳，并在厭氧條件下，通過土壤、湖水、污水和海水中的微生物降解為甲烷。目前開發(fā)中的可生物降解塑料，包括有聚羥基鏈烷酸酯(PHA)、聚乳酸、脂肪族聚酯、多醣和這些物質(zhì)的共聚物和/或共混物。
[0029]根據(jù)鏈中的碳原子數(shù)，PHA可分為兩類:短鏈(SCL)含3_5個碳原子以及中鏈(MCL)含 6-14 個碳原子(康納 S (Khanna S),絲_他瓦(Srivastava)，AK.2005),這些差異主要是因為PHA合成酶的基質(zhì)特性，一定范圍內(nèi)可容納3HAS的碳鏈長度。其它眾所周知的PHASCL屬共聚物和聚(3-羥基丁酸酯-共-3-羥基戊酸酯)聚(3HB-共-3HV)的物質(zhì)，含4和5個活性碳原子的單體單元。這些單體單元的比例各有變化，而影響到聚合物的物理特性，如增加3HV的單位可降低脆度。
[0030]在某些微生物的物種中，在碳存量過多而氮來源有限的情況下，即會導(dǎo)致PHA的累積。PHA的成份用于因應(yīng)壓力下的環(huán)境，作為儲存能量的分子以備不時之需(蘇萊曼(Solaiman)和阿什比(Ashby)，2005)。塑料聚合物塑料在這些生物體的細胞內(nèi)聚積成為光折射的非晶體儲存物(姆克赫帕德楊(Mukhopadhyay)等人,2005), PHB通過3個酶促步驟從乙酰-CoA進行合成步(克浪斯(Krans)等人，1997),從生物技術(shù)的角度來看,可生物降解的生物塑料特征可讓其成為污染環(huán)境石化塑料的替代品(李(Lee)，1996)，大量增加生物塑料的生產(chǎn)可大幅降低二氧化碳的排放量，削減塑料廢物的產(chǎn)生，并減低化石燃料的消耗量。
[0031]PHA可通過下列3種方法取得:微生物的生物合成、轉(zhuǎn)基因植物的光合作用和使用適當(dāng)?shù)拿高M行體外的生物合成(如參見美國專利7455999、W09914313)。在大多數(shù)的細菌中，細胞可在伸展有限的基質(zhì)，如氮、磷或氧中來合成PHA。
[0032]累積的PHA在生物饑餓時，可作為碳源和能源使用，PHA也作為降低功耗的裝置，因此而被視為細胞內(nèi)的氧化還原調(diào)節(jié)器。PHA也可作為立體調(diào)節(jié)的化合物，可作為光活性合成化合物的前驅(qū)物，此類的化合物特別作為可長期使用的藥劑、激素、殺蟲劑和除草劑(雷迪(Reddy) 2003)的可生物降解載劑成份，也可在骨板、手術(shù)縫合線和更換血管中，因為具有壓電特性而作為刺激骨骼生長的骨質(zhì)合成物(舍費爾(Schaefer)等人，2000)，此外，已有許多公開的共聚物生成方法指出，可使用不同的菌種如堿桿菌NCIMB40124(EP.0431883A2)和美國專利7455999成份物，進行生物成份的制造。EP第2236089A1號中揭露這些聚合物用于植入物的整形和軟組織固定的裝置，W09I/00917A1揭露的方法，可在特別是植物的原核和真核細胞中，通過聚羥基丁酸酯(PHB)和聚羥基鏈烷酸酯(PHA)的遺傳學(xué)和酶學(xué)原理，來控制和修改新的聚酯生物聚合物。W02005/030482A1揭露的方法和用途，可用于堆肥的包裝材料上，W02008/110541揭露的聚羥丁酸具有抗熱降解的穩(wěn)定特性。
[0033]木質(zhì)素
[0034]木質(zhì)素是高等植物木質(zhì)結(jié)構(gòu)的主要成份，加工取得的木質(zhì)素為木材制漿的副產(chǎn)物，例如，木 質(zhì)素的產(chǎn)品包括有木質(zhì)素磺酸鹽、堿質(zhì)素和氧木質(zhì)素，這些成份可從亞硫酸鹽、硫酸鹽和堿廢液中取得(斯努克(Snook), 1982,制衆(zhòng)造紙技術(shù)手冊(Handbook forPulp&Paper Technologists), TAPPI,亞特蘭大(Atlanta))。[0035]目前已發(fā)現(xiàn)到木質(zhì)素有多種商業(yè)用途，如堿可溶性的木質(zhì)素可作為分散劑來使用。美國專利3726850中揭露堿溶性臭氧處理過的木質(zhì)素產(chǎn)品，其相關(guān)的用途，此物質(zhì)基本上不含有機結(jié)合鍵結(jié)的硫，作為粘土、染料、殺蟲劑、石墨和其它材料的分散劑來使用。美國專利4666522中揭露木質(zhì)素磺酸產(chǎn)品可用于制備蠟、油、脂肪、浙青和其混合物的乳液產(chǎn)品。據(jù)報導(dǎo)木質(zhì)素乙酸的相關(guān)應(yīng)用，如作為水基油墨組合物的粘合劑(如參見美國專利4612051)，美國專利5668183中揭露木質(zhì)素磺酸鹽產(chǎn)品可分散脂溶性物質(zhì)，此外，已揭露有含木質(zhì)素的殺蟲劑復(fù)合物(如參見美國專利3813236、美國專利3929453重新發(fā)布為美國專利29，238、美國專利4381194、美國專利20110015237、美國專利申請案2010136132、美國專利申請案20100278890、美國專利申請案20080113920、美國專利申請案2006247130、美國專利申請案 7867507、W02003/005816、美國專利 5994266)。
[0036]苯甲酸鈉苯甲酸鈉可用于不同的配方中，作為食物制品的抗菌成份，例如，美國專利6，599，514中揭露抗真菌的成份含有抗菌劑和食品添加物，對抗菌成份的活性具有協(xié)同效應(yīng)。在美國專利6599514中揭露的食品添加劑包括山梨酸、山梨酸鹽、苯甲酸、苯甲酸鹽、羥基苯甲酸鹽、二氧化硫和亞硫酸鹽、聯(lián)苯基和其衍生物、亞硝酸鹽、硝酸鹽、乳酸、乳酸鹽、檸檬酸和檸檬酸鹽、酒石酸和酒石酸鹽、正磷酸和正磷酸鹽、蘋果酸鹽、己二酸、琥珀酸、1，4-庚糖內(nèi)酯、煙酸、檸檬酸三銨、檸檬酸鐵銨、乙二胺四乙酸二鈉鈣、甘油、2-、3_和多磷酸鹽、脂肪酸(E470)、單-和二甘油酯脂肪酸(E471)酯、單-和二甘油酯脂肪酸、碳酸鹽、葡糖酸鹽、氯(E92S)、六偏磷酸鈉、叔丁基、羥基苯甲醚(BHA)、丁基化羥基甲苯(BHT) (E321)、叔丁基對苯二酚(THBQ)、丙基沒食子兒茶素沒食子酸酯、葡庚糖酸鈣、植酸鈣、乙醚、乙二胺四乙酸二氫二鈉EDTA、乙酸乙酯、甘油單_、二-和三乙酸、甘氨酸、羥基硬脂精、丙-1，2- 二醇和丙烷-2-01和葡庚糖酸鈉。
[0037]苯甲酸鈉也用于殺蟲劑配方中，例如，SC約翰遜(SC Johnson)的美國專利4668507中，將含有苯甲酸鈉 的殺蟲劑放于鋼質(zhì)加壓系統(tǒng)中，此系統(tǒng)主要用于抑制腐蝕。美國專利5620678中揭露某種的殺蟲劑配方，其中的苯甲酸鈉作為緩蝕劑使用。美國專利4731379中揭露的殺蟲劑成份中，含有苯甲酸鈉作為動物殺蚤洗發(fā)精。在所述專利中，苯甲酸鈉的使用不是用于促進殺蟲劑的效果或穩(wěn)定產(chǎn)品的化學(xué)性質(zhì)，而是用于動物傷口的愈合治療。美國專利5017620中的殺蟲劑成份含苯甲酸鈉和其它已知的防腐劑成份，作為抗菌劑用于穩(wěn)定儲存產(chǎn)品的化學(xué)性質(zhì)。美國專利6841572中揭露某種水溶液，用于治療活的植物、作物、樹木和收獲前的水果、蔬菜、葉、莖、根和花，其PH值為4.0到6.5之間，基本上含有效濃度以上的殺真菌和/或殺菌，其一種或一種以上的防腐劑成份，而選自山梨酸、苯甲酸、乳酸、含苯甲酸的鈉、鉀、鈣和銨鹽成份，山梨酸、羥甲基氨基乙酸、乳酸和丙酸、甲基、乙基、丙基和丁基化合物，至少一種的陰離子表面活性劑和任選的酸化劑。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0038]本發(fā)明提供的成份和方法，即用于控制和/或防治一種或一種以上的蜱螨科(節(jié)肢動物)、蜆科、果蜆科、花蜆科、姆科、叉木風(fēng)科和擬步行蟲科(Tenebrionidae)的害蟲,含有或使用某種上清液、濾液和/或提取物，和/或一種或一種以上來自上述色桿菌種的上清液、濾液和/或提取物的成份，特別是含紫色桿菌素的菌株，包括但不限于色桿菌種中的色桿菌皮絲西納、假紫色色桿菌和色桿菌蘇比絲加，而更具體來說，為色桿菌蘇比絲加新種，而更具體來說，此新種的色桿菌蘇比絲加跟美國專利7，244，607中的NRRLB-30655具有相同的特性。
[0039]具體來說，本發(fā)明提供的成份和方法，即用于控制和/或防治一種或一種以上的蝶螨科(節(jié)肢動物)、蜆科、果蜆科、花蜆科、姆科、叉木風(fēng)科和擬步行蟲科(Tenebrionidae)的害蟲，于特定部位(a)含有特定數(shù)量的上清液、濾液和/或提取物，和/或一種或一種以上來自上述色桿菌種的上清液、濾液和/或提取物的成份，和(b)另一種殺蟲劑物質(zhì)，特別是殺螨劑和/或殺蟲劑，可在特定位置中，有效防治螨蟲和/或一種或一種以上屬于蠅科、果蠅科、花蠅科、蚜科、叉木虱科、擬步行蟲科或金龜子科的害蟲。
[0040]在具體實例中，此種蜱螨為葉螨科的螨蟲，在更為具體的實例中，此種蜱螨為二斑葉螨(Tetranychus urticae)。
[0041]在另一個具體實施例中，此害蟲是家蠅屬.、蚜屬.、洋蔥線角個木虱、鞘翅類或面包蟲屬、果蠅屬、地種蠅屬、圖棕色金龜子、豆金龜屬、金龜子屬或蛀象鼻蟲。在更具體的實例中，此侵擾到蟲害為舍蠅(家蠅)、櫻桃果蠅(斑翼果蠅)、甘藍地種蠅(大白菜根蛆)、桃蚜、馬鈴薯/番茄木虱(馬鈴薯木虱)、大黃粉蟲(甲蟲)、圓頭犀金龜屬(白色蠐螬)、歐洲切根鰓金龜(南方淫金龜子)、日本麗金龜(日本甲蟲)、蛀象鼻蟲(黑色蛀象鼻蟲)、東方異麗金龜(東方甲蟲)。
[0042]本發(fā)明提供的殺蟲劑活性成份，可防治至少一種的節(jié)肢動物和/或一種或一種以上屬于蜱螨科、花蠅科、果蠅科、蠅科、蚜科、叉木虱科、擬步行蟲科或金龜子科的害蟲:(a)一種色桿菌種的上清液、 濾液和/或提取物，和/或來自上述色桿菌種代謝物的上清液、濾液或提取物，和(b)另一種殺蟲物質(zhì)，特別是殺螨劑和/或殺蟲劑，可有效防治一種或一種以上屬于蜱螨科、花蠅科、果蠅科、蠅科、蚜科、叉木虱科、擬步行蟲科或金龜子科的害蟲，其中(a)和(b)可任選用于復(fù)合劑方中。此殺蟲物質(zhì)可(a)取自微生物，(b)天然產(chǎn)物和/或
(C)化學(xué)殺蟲劑和特定的化學(xué)殺蟲劑中。
[0043]在具體實例中，此代謝產(chǎn)物的化合物:(a)具有殺蟲活性；(b)液相色譜/質(zhì)譜(LC/MS)測定的分子量約840-900，和(c)在反相C-18HPLC色譜儀，使用水:乙腈(CH3CN)梯度溶劑系統(tǒng)(O到20分鐘90%到0% CH3CN水溶液、20至24分鐘100% CH3CN'24到27分鐘O到90% CH3CN水溶液、27到30分鐘CH3CN水溶液)在0.5毫升/分鐘流速和UV檢測器波長210nm下，高壓液相色譜儀(HPLC)的保留時間約7_12分鐘，和⑷任選的色桿菌種，此具體實例中的成份可以是肽。
[0044]在特定的具體實例中，此化合物通過13C NMR質(zhì)譜測定下，含43個碳原子、7個甲基、10個亞甲基碳、12個甲烯、6個烯烴類甲烯和8個季碳。在更具體的實例中，此化合物分別為 A、B、C 和 D,分別說明如圖 ##STR001##、##STR001a##, ##STR001b## 和 ##STR001c##o
[0045]在具體實例中，成份A: (a)取白色桿菌種色桿菌(Chromobacterium), (b)對害蟲具有毒性，(c)液相色譜/質(zhì)譜(LC/MS)測定的分子量約840-890，更具體來說是860，
(d)IH NMR δ 值為為 8.89,8.44,8.24,8.23,7.96,7.63,6.66,5.42,5.36,5.31,5.10,4.13、
4.07,4.05,3.96,3.95,3.88,3.77,3.73,3.51,3.44,3.17,2.40,2.27,2.11,2.08,2.03、
2.01、1.97、1.95、1.90、1.81、1.68、1.63、1.57、1.53、1.48、1.43、1.35、1.24、1.07、1.02、0.96,0.89,0.88,0.87,0.80 且 13C NMR 值為 6173.62,172.92,172.25,172.17,171.66、171.28,170.45,132.13,130.04,129.98,129.69,129.69,125.48,98.05,70.11,69.75、68.30,68.25,64.34,60.94,54.54,52.82,49.72,48.57,45.68,40.38,39.90,38.18、36.60,31.98,31.62,31.58,29.53,28.83,27.78,24.41,23.06,22.09,20.56,19.31、18.78、17.66 和 15.80，(e)在反相 C-18HPLC 色譜儀(菲羅門(Phenomenex)，魯那(Luna)，5yC18(2)100A,100X4.60mm)，使用水:乙腈(CH3CN)梯度溶劑系統(tǒng)(O到20分鐘90%至Ij0% CH3CN水溶液、20至24分鐘100% CH3CN'24到27分鐘O到90% CH3CN水溶液、27到30分鐘90 % CH3CN水溶液)，在0.5毫升/分鐘流速和UV檢測器波長210nm下，高壓液相色譜儀(HPLC)的保留時間約7-12分鐘，更具體來說約9分鐘，更明確則是9.08分鐘。
[0046]在具體實例中，成份B具有下列特性:(a)取白色桿菌種色桿菌(Chromobacterium), (b)對害蟲具有毒性，(c)液相色譜/質(zhì)譜(LC/MS)測定的分子量約850-900，更明確的是874，(d)在反相C-18HPLC色譜儀(菲羅門，魯那，5 μ C18 (2) 100A，100 X 4.60mm)，使用水:乙腈(CH3CN)梯度溶劑系統(tǒng)(O到20分鐘90 %到O % CH3CN水溶液、20 至 24 分鐘 100% CH3CN,24 到 27 分鐘 O 到 90% CH3CN 水溶液、27 到 30 分鐘 90% CH3CN水溶液)，在0.5毫升/分鐘流速和UV檢測器波長2IOnm下，高壓液相色譜儀(HPLC)的保留時間約7-12分鐘，更具體來說約9分鐘，更明確則是9.54分鐘。
[0047]代謝物的成份包括但不限于:
[0048](A)含 ##STR001## 結(jié)構(gòu)的成份
[0049]
【權(quán)利要求】
1.一種用于調(diào)節(jié)至少一種蜱螨害蟲和/或至少一種蠅科、果蠅科、花蠅科、常蚜科、木虱科、擬步行蟲科和圣甲蟲科的害蟲于單一區(qū)域進行防治的方法，包括:(a)可采用一個數(shù)量的上清液、濾液和/或提取物和/或一種或一種以上來自上述色桿菌種的上清液、濾液和/或提取物，和(b)另一種殺蟲物質(zhì)，其中的此殺蟲物質(zhì)為某種殺螨劑和/或殺蟲劑，可有效防治一種或一種以上的蠅科、果蠅科、花蠅科、常蚜科、木虱科、擬步行蟲科和圣甲蟲科的害蟲，而在某個區(qū)域中，用于防治蛛形綱動物和/或一種或一種以上的蠅科、果蠅科、花蠅科、常蚜科、木虱科、擬步行蟲科和圣甲蟲科的害蟲。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中的所述區(qū)域為植株、植株種子或土壤中的一個區(qū)域。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中的蜱螨害蟲為螨蟲。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述螨蟲為葉螨種的害蟲。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述害蟲為家蠅屬、蚜屬、洋蔥線角個木虱、鞘翅類或面包蟲屬、果蠅屬、地種蠅屬、圖棕色金龜子、豆金龜屬、金龜子屬或蛀象鼻蟲種的害蟲。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述色桿菌菌種為色桿菌蘇比絲加新菌種。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述害蟲為舍蠅、櫻桃果蠅、甘藍地種蠅、煙蚜、馬鈴薯/番茄木虱、大黃粉蟲、圓頭犀金龜屬、歐洲切根鰓金龜、日本麗金龜、黑蛀象鼻蟲和東方異麗金龜?shù)暮οx。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述代謝物選自具有下列特征的群組: (a)為一化合物，液相色譜/質(zhì)譜LC/MS測定的分子量約840到890； (ii) 1H NMR δ值約為 8.89,8.44,8.24,8.23,7.96,7.63,6.66,5.42,5.36,5.31,5.10,4.13,4.07,4.05,3.96、.3.95,3.88,3.77,3.73,3.51,3.44,3.17,2.40,2.27,2.11,2.08,2.03,2.01,1.97,1.95、.1.90、1.81、1.68、1.63、1.57、1.53、1.48、1.43、1.35、1.24、1.07、1.02,0.96,0.89,0.88、.0.87,0.80，且(iii)13C NMR δ 值約為 173.62,172.92,172.25,172.17,171.66,171.28、.170.45,132.13,130.04,129.98,129.69,129.69,125.48,98.05,70.11,69.75,68.30、.68.25,64.34,60.94,54.54,52.82,49.72,48.57,45.68,40.38,39.90,38.18,36.60、.31.98,31.62,31.58,29.53,28.83,27.78,24.41,23.06,22.09,20.56,19.31,18.78、.17.66,15.80 ； (b)一化合物而具有下列特征:(i)可取自色桿菌的菌種；(ii)對害蟲具有毒性；(iii)液相色譜/質(zhì)譜LC/MS測定的分子量約850到900 ； (iv)在反相C-18HPLC色譜儀(菲羅門，魯那，5“(:18(2)10(^，100\4.60mm)，使用水:乙腈(CH3CN)梯度溶劑系統(tǒng)(O到.20 分鐘 90%到 0% CH3CN 水溶液、20 到 24 分鐘 100% CH3CN'24 到 27 分鐘 O 到 90% CH3CN水溶液、27到30分鐘90% CH3CN水溶液)，在0.5毫升/分鐘流速和UV檢測器波長210nm下，高壓液相色譜儀HPLC的保留時間約7到12分鐘； (c)一具有##STR001##結(jié)構(gòu)的化合物
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其中所述代謝物是紫色桿菌素的衍生物，具有下列的結(jié)構(gòu):
10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其中所述代謝物選自含有紫色桿菌素、脫氧紫色桿菌素和克羅瑪?shù)翧的官能團。
11.一種殺蟲組合物，其活性成份包括:(a)某種上清液、濾液和/或提取物和/或一種或一種以上取自色桿菌菌種其代謝物的上清液、濾液和/或提取物成份，和(b)另一種殺蟲物質(zhì)，另一種殺蟲物質(zhì)，其中的此殺蟲物質(zhì)為某種殺螨劑和/或殺蟲劑，可有效防治一種或一種以上的蠅科、果蠅科、花蠅科、常蚜科、木虱科、擬步行蟲科和圣甲蟲科的害蟲，而在某個區(qū)域中，用于防治蛛形綱動物和/或一種或一種以上的蠅科、果蠅科、花蠅科、常蚜科、木虱科、擬步行蟲科和圣甲蟲科的害蟲。
12.—種應(yīng)用于植株、植株種子和/或植株生長物的害蟲防治方法，所述方法包括: (I)一化合物，所述化合物具有下列特性 (a)具有殺蟲毒性； (b)LTQ軌道阱XL混合型傅立葉變換質(zhì)譜儀測得的分子量約950到1450；
(c)1H NMR δ 值為 5.22 (sext, 1H)、2.62 (dd, 1H)、2.53 (dd, 1H)和 1.31 (d, 3H)；
(d)13C NMR δ 值為 169.2,67.6,40.9 和 19.8 ； (e)具有-(-O-CHCH3-CH2-CO-)n-的結(jié)構(gòu)，其中η = 6 到 50 ； (f)可取自色桿菌的菌種；和(II)也可另選其它的殺蟲物質(zhì)，其用量足以防治本文所述的蟲害。
13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的方法，其中所述化合物(I)具有下列的結(jié)構(gòu):
14.根據(jù)權(quán)利要求12所述的方法，其中所述化合物(I)具有下列的結(jié)構(gòu):
15.根據(jù)權(quán)利要求12所述的方法，其中的害蟲為線蟲或生長于土壤中的細菌。
16.一種組合物，包括: (I)一化合物，所述化合物具有下列特性: (a)具有殺蟲活性； (b)LTQ軌道阱XL混合型傅立葉變換質(zhì)譜儀測得的分子量約950到1450；
(c)1H NMR δ 值為 5.22 (sext, 1H)、2.62 (dd, 1H)、2.53 (dd, 1H)和 1.31 (d, 3H)；
(d)13C NMR δ 值為 169.2,67.6,40.9 和 19.8 ； (e)具有-(-O-CHCH3-CH2-CO-)n-的結(jié)構(gòu)，其中η = 6 到 50 ； (f)可取自色桿菌的菌種；和 (II)也可另選其它的殺菌和殺蟲物質(zhì)。
17.一種方法，所述方法所含的化合物⑴具有殺蟲毒性；(ii)LTQ軌道阱XL混合型傅立葉變換質(zhì)譜儀測得的分子量約950到1450NMR δ值為5.22(sext，lH)、2.62 (dd, 1H)、2.53 (dd, 1H)和 1.31 (d, 3H) (iv) 13C NMR δ 值為 169.2,67.6,40.9 和 19.8 ；(iv)具有-(-O-CHCH3-CH2-CO-)n-的結(jié)構(gòu)，其中η = 6到50，和(V)可取自色桿菌的菌種，而含有: (A)將色桿菌的菌株于全細胞培養(yǎng)液中，在足以生成下列化合物的條件下加以培養(yǎng)； (B)于(A)中從上述的全細胞培養(yǎng)液析離出此化合物。
18.一種具有穩(wěn)定性的生物殺蟲劑成份，包括有: (a)色桿菌菌種的濾液、上清液、提取物或來自前述物具有殺蟲活性的物質(zhì)；和 (b)日曬保護劑，其中所述日曬保護劑為木質(zhì)素和/或苯甲酸的鹽類物質(zhì)。
19.根據(jù)權(quán)利要求1所述的成份，其中苯甲酸的鹽類物質(zhì)是選自含有下列成份的物質(zhì)群組，即鈉、鉀、鈣、鎂和其組合物和/或本文提及選自含鈉、鉀、鈣、鎂和其組合物中和離子等木質(zhì)素磺酸鹽的木質(zhì)素鹽類物質(zhì)。
20.根據(jù)權(quán)利要求18所述的成份，其中所述色桿菌為色桿菌蘇比絲加。
21.根據(jù)權(quán)利要求18所述的成份，其中所述色桿菌含量至少約5%，和/或日曬保護劑的含量至少約5%。
22.—種具有成份穩(wěn)定功能的方法，是含有生物殺蟲劑可避免物理解離和活性損失，其中所述生物殺蟲劑為色桿菌，此生物殺蟲劑成份具有穩(wěn)定功能的劑量，可用于避免因為日曬引發(fā)的物理解離和活性損失。
23.一種選自含有苯甲酸鹽類和木質(zhì)素磺酸鹽的穩(wěn)定劑成份，是用于生物殺蟲劑成份的制造，其中所述成份具有穩(wěn)定性可避免因為日曬而引發(fā)物理解離和活性損失。
【文檔編號】A01N33/02GK103997895SQ201280049902
【公開日】2014年8月20日 申請日期:2012年10月23日 優(yōu)先權(quán)日:2011年10月25日
【發(fā)明者】瑞那卡·阿索卡, 詹姆斯·納木納斯, 帕梅拉·麥倫 申請人:魅潤生物創(chuàng)新公司