專利名稱：黃芪多糖在制備青貯飼料中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于動物飼料領(lǐng)域，具體涉及一種使用化學(xué)物青貯飼料的方法。
背景技術(shù)：
青貯飼料作為飼料體系中的重要組成部分，是畜牧業(yè)的物質(zhì)基礎(chǔ)，在畜牧養(yǎng)殖中發(fā)揮著重要作用。隨著我國人民生活水平的不斷提高，人們對高品質(zhì)肉類和奶類等食品的消費需求不斷增長，為了保持良好的畜肉和產(chǎn)奶品質(zhì)，必須全年均衡供給優(yōu)質(zhì)青貯飼料，尤其是高產(chǎn)奶牛的飼養(yǎng)中，青貯飼料已經(jīng)成為日糧中不可缺少的組成成分。青貯飼料中，豆科牧草蛋白質(zhì)含量高，是優(yōu)質(zhì)的飼草，但緩沖值高，可溶性碳水化合物含量低，自然狀態(tài)下青貯比較困難。由于生產(chǎn)實踐中不能嚴格控制青貯飼料在發(fā)酵貯藏過程中所需的厭氧環(huán)境以及在取用過程中未能妥善管理，往往造成青貯飼料的好氣性腐敗，即二次發(fā)酵。特別是當(dāng)青貯飼料開封接觸到空氣后，就會促進酵母菌、霉菌及一些好氧細菌的生長繁殖，貯料的溫度及PH值隨之升高，青貯飼料開始腐敗。同時，由于腐敗菌的生長繁殖也會造成貯料營養(yǎng)物質(zhì)的嚴重損失，降低青貯飼料的品質(zhì)，進而影響家畜的采食量及生產(chǎn)性能。因此，如何有效地控制牧草在青貯發(fā)酵、貯藏及取用過程中的厭氧環(huán)境及有氧穩(wěn)定性對于保證青貯飼料的品質(zhì)非常重要。添加劑的運用一定程度上改善了這種情況，青貯飼料添加劑從單一添加劑來看主要有銨類化合物、有機酸類、尿素和生物防腐劑等，這些添加劑都具有抑制微生物活動的作用，并且提高青貯飼料營養(yǎng)品質(zhì)。近幾年來，生物添加劑尤其是乳酸菌添加劑被人們廣泛認識，其可以增加乳酸菌數(shù)量，抑制不良微生物的生長，促進發(fā)酵進程，但其成本較高，許多仍處于研發(fā)階段，尚未形成產(chǎn)品還未被廣泛應(yīng)用。目前在畜禽疾病的預(yù)防與治療中向飼料中添加抗生素、激素、化學(xué)合成藥比較常見，雖然其效果明顯，但這些藥物易在畜產(chǎn)品中殘留，危害消費者健康，同時易產(chǎn)生抗藥性。為了得到高效、安全、無公害的畜產(chǎn)品，在畜禽飼料中添加中草藥成為一種新趨勢，添加中草藥的有效成分日趨增強，黃芪多糖是目前應(yīng)用廣泛的一種。黃芪多糖為黃芪的主要天然活性成分，具有免疫調(diào)節(jié)、提高巨噬細胞活性、抗腫瘤等作用。黃芪多糖常常以粉劑拌料，以提高畜禽的免疫能力，但將黃芪多糖作為豆科牧草青貯飼料添加劑及其在制備青貯飼料中的應(yīng)用在國內(nèi)外還未見報道，也未見有公開使用。

發(fā)明內(nèi)容
針對青貯飼料制備領(lǐng)域的不足之處，本發(fā)明目的是提供黃芪多糖在制備青貯飼料中的應(yīng)用。本發(fā)明的另一目的是提供應(yīng)用黃芪多糖制備青貯飼料的方法。實現(xiàn)本發(fā)明上述目的的具體技術(shù)方案為黃芪多糖在制備青貯飼料中的應(yīng)用。所述應(yīng)用中，黃芪多糖在青飼料中添加的比例為O. 001-0. 005%，添加有黃芪多糖的青飼料經(jīng)過發(fā)酵即為青貯飼料。青貯飼料發(fā)酵促進劑是一種在發(fā)酵前加入青貯原料中，與所述青貯原料一起進行厭氧發(fā)酵從而促進發(fā)酵的青貯飼料添加劑。黃芪多糖起到了發(fā)酵促進劑的作用。青忙原料為制作青忙飼料的原料，即青飼料(也叫青綠飼料、綠飼料)，是指可以用作飼料的植物新鮮莖葉，主要包括天然牧草、栽培牧草、田間雜草、菜葉類、水生植物、嫩枝樹葉等。所述青貯飼料是將青飼料在厭氧的條件下進行發(fā)酵得到的飼料。黃芪多糖，為中草藥黃芪的主要有效成分，該成分為水溶性物質(zhì)。應(yīng)用黃芪多糖制備青貯飼料的方法，包括步驟I)將青飼料切碎，然后噴灑黃芪多糖的水溶液；2)將步驟I)所得青飼料裝入青貯袋中，室溫發(fā)酵。其中，所述青飼料的含水量為60-75%。青飼料切碎成2-5cm長度。其中，所述青飼料是豆科的牧草。優(yōu)選地,所述青飼料是苜猜屬牧草,包括紫花苜猜(Medicago sativa L.)、黃花苜猜(Medicago falcate L.)和金花菜(Medicago hispida Gaertn.)中的一種或多種。其中，所述黃芪多糖添加到青飼料中的質(zhì)量比例為O. 001-0. 005%。其中，所述黃芪多糖的水溶液是黃芪多糖與水質(zhì)量比例為O. 1:50-200的水溶液。其中，所述青飼料發(fā)酵的時間為30-60天。所述發(fā)酵為室溫密閉發(fā)酵。所述的方法制備得到的青貯飼料。上述方法制備的青貯飼料，相對于不添加黃芪多糖、其他制備條件相同的青貯飼料(對照)，具有下述特性I)粗蛋白含量聞于對照；2)氨態(tài)氮與總氮的比值低于對照；3)中性洗滌纖維含量低于對照；4)酸性洗滌纖維含量低于對照；5) pH值低于對照；6)乳酸含量高于對照；7 )乳酸菌含量高于對照。本發(fā)明的有益效果在于本發(fā)明提出，將黃芪多糖作為豆科牧草青貯飼料添加劑與豆科牧草青貯原料共同發(fā)酵，能夠促進乳酸菌生長繁殖和提高青貯飼料的發(fā)酵品質(zhì)，所制備的青貯飼料，與不加黃芪多糖的對照相比，其粗蛋白含量升高，氨態(tài)氮與總氮的比值降低，中性洗滌纖維含量降低，酸性洗滌纖維含量降低，PH值降低，乳酸含量高于對照，乳酸菌含量高于對照。本發(fā)明不僅對豆科牧草青貯飼料品質(zhì)有所改善，還能使畜禽(如奶牛)通過采食加有黃芪多糖添加劑的青貯飼料，提高其生產(chǎn)性能，將黃芪多糖作為青貯飼料添加劑，按照青貯原料質(zhì)量的O. 001%-0. 005%的添加量，加入青貯原料中，制備的青貯飼料貯藏期可達90-180天。預(yù)防和防治畜禽常見疾病的發(fā)生，以減少抗生素的大量使用，生產(chǎn)相對綠色和有機的畜禽產(chǎn)品。
具體實施例方式以下實施例進一步說明本發(fā)明的內(nèi)容，但不應(yīng)理解為對本發(fā)明的限制。
黃芪多糖購自上海研拓生物科技有限公司。實施例1 :黃芪多糖添加O. 001-0. 004%制備紫花苜蓿青貯飼料一、豆科牧草青貯飼料添加劑的制備準確稱取黃芪多糖IOOmg (干重)，加入IOOg /K，使其充分溶解，即得到100%黃芪多糖原液(質(zhì)量濃度為lmg/mL)，放置4°C冰箱內(nèi)保存，該100%黃芪多糖原液即為青貯飼料添加劑。二、黃芪多糖作為豆科牧草青貯飼料添加劑制備紫花苜蓿青貯飼料及其效果檢測1、制備阿爾岡金紫花苜蓿青貯飼料將步驟一的青貯飼料添加劑按照以黃芪多糖是阿爾R金紫花苜蓿鮮草的O. 001%、
O.002%和O. 004%的比例添加到阿爾R金中進行青貯，制備阿爾R金紫花苜蓿青貯飼料，具體方法如下取在結(jié)莢前期刈割的阿爾網(wǎng)金紫花苜蓿(Algongum alfalfa)鮮草(含水量為70%)，然后在切碎機上把草切成2-5cm長度，得到青貯原料。將該青貯原料均分為四組，分別為黃芪多糖I (黃芪多糖O. 001%)、黃芪多糖II (黃芪多糖O. 002%)、黃芪多糖IIK黃芪多糖O. 004%)和對照組。上述四組的青貯飼料添加劑添加量如下黃芪多糖I按照IOkg鮮草(含水量70%)中添加O.1g干重計黃芪多糖標準添加步驟一的青貯飼料添加劑；黃芪多糖II按照IOkg鮮草(含水量70%)中添加O. 2g干重計黃芪多糖標準添加步驟一的青貯飼料添加劑；黃芪多糖III按照IOkg鮮草(含水量70%)中添加O. 4g干重計黃芪多糖標準添加步驟一的青貯飼料添加劑；對照不添加任何物質(zhì)。然后按照上面所述的添加量制得的水溶液噴灑到6. 6kg阿爾R金鮮草(含水量為70%)中，再將鮮草混勻放到130cmX22cm聚乙烯青貯袋中，用SINBO真空封口機封口，在室溫條件下(25-38°C )進行青貯發(fā)酵。實驗重復(fù)三次，每次實驗上述三組每組設(shè)21袋。放在室溫條件下，然后在青貯1、3、5、7、10、15、30、45天以及開封(青貯45天后開封)后1、3、5、7天取樣，進行實驗室分析，主要分析粗蛋白、氨態(tài)氮、中性洗滌纖維、酸性洗滌纖維、PH值、乳酸和乳酸菌數(shù)量。其中各種分析方法如下I)粗蛋白(CP)的測定采用凱式定氮法稱取O. 5000g干燥的樣品放入消煮管中，加入硫酸鉀和硫酸銅混合物作為催化齊U，硫酸鉀和硫酸銅的混合比例為9 :1，加入IOml濃硫酸于410°C下消煮I小時10分鐘。消化至顏色由綠色變?yōu)榍辶了{色。配制40%Na0H，1%的硼酸吸收液和O.1N鹽酸溶液，對O.1N鹽酸溶液進行滴定校正。用全自動定氮儀(F0SS公司全自動凱氏定氮儀)進行測定。實驗步驟如下1、樣品稱重稱取O. 5g左右干燥樣品，記下重量W，然后全部移入消化管；2、消化向消化管中加入IOml濃硫酸和5g左右的CuSO4. 5H20和K2SO4混合催化劑(其質(zhì)量比為CuSO4. 5H20 =K2SO4=1:9)，將其放入消化爐中410°C消化I個小時10分鐘直到樣品呈淡綠色透明狀，冷卻至清亮藍色；3、用全自動定氮儀進行測定。2) pH值的測定開啟青貯后稱取20g樣品，加入180ml蒸餾水，攪拌均勻后用組織搗碎機(JLL350-B型多功能攪拌機，順德市科順塑料電器實業(yè)有限公司)攪拌lmin。四層紗布和定性濾紙過濾，用PH測定儀(雷磁pHS-3C精密計，上海精密科學(xué)儀器有限公司)測定濾液的pH值。
3)氨態(tài)氮/總氮比值的測定采用苯酚-次氯酸鈉比色法苯酚試劑將O. 15g亞硝基鐵氰化鈉(Na2Fe(CN)5 · NO · 2Η20，297· 95，化學(xué)純)溶解在1. 5L蒸餾水中，再加入33ml (90%w/v)苯酚溶液或29. 7g結(jié)晶苯酚(C6H50 , 94. 11，PhenolA. R.，分析純)，定容到3L后貯存在棕色的玻璃試劑瓶中。次氯酸鈉試劑將15g NaOH溶解在2L蒸餾水中，再加入113. 6gNa2HP04 · 7H20(d1-Sodium hydrogen phosphate, anhydrous, 141. 96+126,分析純)，加熱并不斷攬拌至完全溶解。冷卻后加入150ml5. 25%的次氯酸鈉或44.1ml含8. 5%活性氯的次氯酸鈉溶液(NaClO, Sodium hypochlorite solution, 74. 44,分析純)并混勻，定容到3L,最后將經(jīng)濾紙過濾的濾液貯藏于棕色試劑瓶中待用。標準銨溶液稱取O. 6607g 經(jīng) 100°C 24h 烘干的(NH4) 2S04 (Ammonuim sulfate,132. 14，化學(xué)純)溶于蒸餾水中，并定容至100ml，配制成lOOmmol/L的銨貯備液。將上述貯備液稀釋配制成1. 0,2. 0,3. 0,4. 0,5. 0mmol/L五種不同濃度梯度的標準液。 操作步驟1:向每支試管中加入50 μ I稀釋適當(dāng)倍數(shù)的樣本液或標準液，空白為50 μ I蒸餾水；2 :向每支試管中加入2. 5ml的苯酹試劑,搖勻；3 :再向每支試管中加入2ml次氯酸鈉試劑，并混勻；4 :將混合液在95 °C水浴中加熱顯色反應(yīng)5分鐘；5 :冷卻后，630nm波長下701分光光度計比色,記錄吸光度值并計算。4)乳酸(LA)的測定采用島津GC-14型高效液相色譜測定乳酸。色譜柱Shodex Rspak KC-811S-DVBgel Column30X8mm ;檢測器 dFO-MlOAVp ;流動相3mmol/L 高氯酸；流速lml/min ;柱溫500C ;檢測波長210nm ;進樣量5μ I。6)中性洗滌纖維(NDF)和酸性洗滌纖維(ADF)的測定NDF藥品的配制稱取1.86g乙二胺四乙酸二鈉(EDTA，372. 24)，0. 68g硼酸鈉(Na2B4O7 · IOH2O,化學(xué)純 381. 37)，3g 十二烷基硫酸鈉(C12H25NaO4S,化學(xué)純 288. 38)，Iml 乙二醇乙醚(C4HltlO2,化學(xué)純90. 12)。溶入IOOmL蒸餾水中。ADF藥品的配制稱取20g十六烷三甲基溴化氨(CTAB，化學(xué)純364. 47)溶于1L1. 00N的硫酸溶液中(0. 5mol/L濃硫酸取27. 17ml濃硫酸加入蒸餾水定容至1L)。中性洗滌纖維(NDF):采用ANK0M2000i纖維儀(美國ANKOM公司)進行。具體步驟1.樣品在60°C烘箱中干燥48-72h直到恒重并粉碎，準確稱取粉碎樣品(通過40目標準銅篩)0.5g左右，裝入已烘干稱重的纖維袋中，封口并置于纖維儀。2.加入室溫的中性洗滌劑IOOml和數(shù)滴十氫化萘(消泡劑)以及0.5g無水亞硫酸鈉。3.纖維儀測定。酸性洗滌纖維(ADF):采用ANK0M2000i纖維儀進行。具體步驟1.樣品在60°C烘箱中干燥48-72h直到恒重并粉碎，準確稱取粉碎樣品(通過40目標準銅篩)0. 5g左右，裝入已烘干稱重的纖維袋中，封口并置于纖維儀。2.加入室溫的酸性洗滌劑IOOml和數(shù)滴十氫化萘(消泡劑)以及0.5g無水亞硫酸鈉。3.纖維儀測定。7)乳酸菌數(shù)量采用平皿計數(shù)方法測定。步驟1.采樣以無菌操作稱取樣品10g，放入含有90ml滅菌稀釋液的玻璃塞三角瓶中，置振蕩器上，振蕩30min，即為1:10的稀釋液。2.用滅菌吸管吸取稀釋液lml，注入含有9ml滅菌生理鹽水的帶塞試管中，置微型混合器上震蕩均勻，使微生物分散開，此液為1:100稀釋液。3.按上述操作順序作10倍遞增稀釋液，每稀釋一次，換用一支Iml滅菌吸管，根據(jù)對樣品情況的估計，選擇三個合適稀釋度，分別在作10倍稀釋的同時，吸取Iml稀釋液于滅菌平皿中，每個稀釋度作兩個平皿，然后將涼至45°C左右的MRS培養(yǎng)基注入平皿中，充分混合，放入37°C的培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)3天后開始觀察計數(shù)。4.計算通常選擇菌落數(shù)的30-100個之間的平皿計數(shù)，同稀釋度的2個平皿的菌落平均數(shù)乘以稀釋倍數(shù)，即為每克樣品中所含乳酸菌數(shù)。數(shù)據(jù)用SPSS20. O軟件及綜合評判法進行分析，綜合評價青貯飼料添加劑對青貯發(fā)酵過程中的粗蛋白 、氨態(tài)氮、中性洗滌纖維、酸性洗滌纖維、PH值、乳酸含量和乳酸菌數(shù)量的影響以及有氧穩(wěn)定性。實驗結(jié)果如表1、表2和表3所示表I青貯飼料添加劑對阿爾R金青貯發(fā)酵過程的影響
權(quán)利要求
1.黃芪多糖在制備青貯飼料中的應(yīng)用。
2.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述黃芪多糖在青飼料中添加的比例為O.001-0. 005%,添加有黃芪多糖的青飼料經(jīng)過發(fā)酵即為青貯飼料。
3.應(yīng)用黃芪多糖制備青貯飼料的方法，其特征在于，包括步驟1)將青飼料切碎，然后噴灑黃芪多糖的水溶液；2)將步驟I)所得青飼料裝入青貯袋中，室溫發(fā)酵。
4.如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，所述青飼料的含水量為60-75%。
5.如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，所述青飼料是豆科的牧草。
6.如權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，所述青飼料為紫花苜蓿、黃花苜蓿和金花菜中的一種或多種。
7.如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，所述黃芪多糖添加到青飼料中的質(zhì)量比例為 O.001-0. 005%。
8.如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，所述黃芪多糖的水溶液是黃芪多糖與水質(zhì)量比例為O. 1:50-200的水溶液。
9.如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，所述青飼料發(fā)酵的時間為30-60天；所述發(fā)酵為室溫密閉發(fā)酵。
10.權(quán)利要求3-9任一所述的方法制備得到的青貯飼料。
全文摘要
本發(fā)明提供黃芪多糖在制備青貯飼料中的應(yīng)用。所述黃芪多糖在青飼料中添加的比例為0.001-0.005%,添加有黃芪多糖的青飼料經(jīng)過發(fā)酵即為青貯飼料。本發(fā)明還提出應(yīng)用黃芪多糖制備青貯飼料的方法，包括步驟1)將青飼料切碎，然后噴灑黃芪多糖的水溶液；2)將步驟1)所得青飼料裝入青貯袋中，室溫發(fā)酵。本發(fā)明提出將黃芪多糖作為豆科牧草青貯飼料添加劑與豆科牧草青貯原料共同發(fā)酵，能夠促進乳酸菌生長繁殖和提高青貯飼料的發(fā)酵品質(zhì)，所制備的青貯飼料，與不加黃芪多糖的對照相比，其粗蛋白含量升高，氨態(tài)氮與總氮的比值降低，中性洗滌纖維含量降低，酸性洗滌纖維含量降低，乳酸含量高于對照，乳酸菌含量高于對照。
文檔編號A23K1/16GK103005161SQ20121057688
公開日2013年4月3日 申請日期2012年12月26日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月26日
發(fā)明者楊富裕, 鄧海軍, 張?zhí)N薇, 玉柱, 陸銀, 徐然, 周靜, 梁超 申請人:中國農(nóng)業(yè)大學(xué)