專利名稱：一種高雄山蟲草子實體低產(chǎn)孢菌株及子實體人工培養(yǎng)方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種微生物及其子實體的人工培養(yǎng)方法，尤其是一種高雄山蟲草低產(chǎn)孢菌株及其子實體的人工培養(yǎng)方法，屬于真菌培養(yǎng)技術領域。
背景技術：
高雄山蟲草 Cordyceps takaomontana Yakush. &Kumaz. 1941 (=Isaria tenuipespeck (1879) =Isaria japonica Yasuda (1915) =Paecilomyces tenuipes (Peck) Samson(1974) =Paecilomyces japonica)是一種優(yōu)良的蟲草資源，它在抗癌、抗抑郁、抗蟲、抗菌、抗病毒及調節(jié)免疫力等方面有明顯作用。它的抗癌成分乙酰環(huán)氧單端 孢烯二醇(4 β -acetoxyscirpene-3 α，15-diol = AETD)的抗癌活性比目前用于臨床癌癥病患者治療用的順鉬強約4-6倍，且毒性低，安全范圍大。因此，高雄山蟲草無論作為藥物開發(fā)還是作為保健品應用都具有廣闊前景。在韓國，高雄山蟲草已經(jīng)應用于食品及保健品中。由于高雄山蟲草的野生資源稀少，利用人工培養(yǎng)生產(chǎn)其子實體，是對高雄山蟲草進行人工開發(fā)的必由之路。但目前在高雄山蟲草人工培養(yǎng)中存在的主要問題之一是在子實體生長過程中會產(chǎn)生大量的分生孢子，當這些分生孢子大量存在時，對提高蟲草子實體產(chǎn)量和生產(chǎn)人員的健康安全都造成了較大影響，因此，尋找低產(chǎn)孢的高雄山蟲草菌株和人工培養(yǎng)方法是當前高雄山蟲草子實體人工培養(yǎng)中重點需要解決的問題。

發(fā)明內容
本發(fā)明所要解決的技術問題在于，提供一種高雄山蟲草子實體低產(chǎn)孢菌株及子實體的人工培養(yǎng)方法。在該人工培養(yǎng)方法下該菌株可發(fā)育形成產(chǎn)孢極低的子實體，在高雄山蟲草的人工培養(yǎng)中具有良好的應用前景。為解決上述技術問題，本發(fā)明采用的技術方案如下
本發(fā)明提供的高雄山蟲草，屬于糞殼菌綱、肉座菌目、麥角菌科、蟲草屬，菌株為高雄山蟲草子實體低產(chǎn)抱菌株A1105 (Cordyceps takaomontana A1105),菌株保藏號為CCTCCM 2012307，于2012年8月9日在中國典型培養(yǎng)物保藏中心(地址中國.武漢.武漢大學)保藏。上述的高雄山蟲草子實體低產(chǎn)孢菌株Al 105分離自摧病昆蟲標本,在Czapek瓊脂培養(yǎng)基上，25°C下培養(yǎng)21天時，菌落平均直徑為32mm，正面白色到肉色，粉質，背面白色到褐色，菌落平展、薄，邊緣整齊，未見形成環(huán)帶或放射溝，未見角變現(xiàn)象，未見形成孢梗束。本發(fā)明的高雄山蟲草低產(chǎn)孢子實體人工培養(yǎng)方法，包含以下步驟(I)人工培養(yǎng)基制備取去皮的小麥粒100g，用清潔水浸泡12h，濾去多余水分后放入培養(yǎng)盒內，采用高壓間歇滅菌法滅菌2-3次備用，每次滅菌溫度控制在115°C，時間控制在40min ；
(2)將Al 105菌株搖瓶培養(yǎng)制成種子液，向培養(yǎng)基上接種種子液45ml，置于25V下暗培養(yǎng)10天左右，見有轉色跡象時，轉入16 1和22°C下，交替變溫培養(yǎng)各12h ;其中在22°C時，見光培養(yǎng)12h，光照強度為200x1，在16°C時，暗培養(yǎng)12h ;25天后即可收獲子實體。上述的高雄山蟲草低產(chǎn)孢子實體人工培養(yǎng)方法中，步驟(I)所述培養(yǎng)盒體積為13cmX 8cmX 11cm,步驟(2)所述培養(yǎng)基體積為 13cmX 8cmX 3. 5cm。前述的高雄山蟲草低產(chǎn)孢子實體人工培養(yǎng)方法中，步驟(2)所述A1105菌株搖瓶培養(yǎng)的溫度為25°C，轉速250r/min，培養(yǎng)4天，菌絲段達IO7Iiil'前述的高雄山蟲草低產(chǎn)孢子實體人工培養(yǎng)方法中，在步驟(2)所述子實體第一次收獲后補水，按照與第一次培養(yǎng)相同的方法，進行二次培養(yǎng)，共計可收獲近雙倍產(chǎn)量。有益效果與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明提供的是一種高雄山蟲草子實體低產(chǎn)孢菌株 及子實體的人工培養(yǎng)方法，在該人工培養(yǎng)方法下該菌株可發(fā)育形成產(chǎn)孢極低的子實體，有效解決了現(xiàn)有技術在高雄山蟲草人工培養(yǎng)中，子實體生長過程中會產(chǎn)生大量分生孢子的技術難題，保障了生產(chǎn)人員的健康安全，同時也提高了高雄山蟲草子實體的產(chǎn)量，在高雄山蟲草的人工培養(yǎng)中有良好的應用前景。


圖1是本發(fā)明的高雄山蟲草菌株A1105在Czapek瓊脂培養(yǎng)基上培養(yǎng)性狀(正面)；圖2是本發(fā)明的高雄山蟲草菌株A1105在Czapek瓊脂培養(yǎng)基上培養(yǎng)性狀(背面)；圖3是采用本發(fā)明的菌株及方法培養(yǎng)獲得的高雄山蟲草子實體。下面結合附圖和具體實施方式
對本發(fā)明作進一步的說明。
具體實施例方式實施例1。1、人工培養(yǎng)時種子液的制備1.1材料與方法1.1.1 材料I)菌株如圖1、圖2所示，高雄山蟲草Al 105，分離自野外采集的蟲生標本，在Czapek瓊脂培養(yǎng)基上，25°C下培養(yǎng)21天時，菌落平均直徑為32mm，正面白色到肉色，粉質，背面白色到褐色，菌落平展、薄，邊緣整齊，未見形成環(huán)帶或放射溝，未見角變現(xiàn)象，未見形成孢梗束。2)培養(yǎng)基①菌種活化培養(yǎng)基PDA培養(yǎng)基。②高雄山蟲草液體培養(yǎng)基馬鈴薯200g煮沸30min濾汁，加入葡萄糖20g，加水至1000ml, 121。。，滅菌 25min，備用。1.1. 2方法將活化好的菌株A1105，用打孔器沿菌落邊緣打孔后接入裝有高雄山蟲草液體培養(yǎng)基的250ml三角瓶中，裝液量為50ml，置于25°C，250r/min下培養(yǎng)4天。1. 2結果培養(yǎng)4天后備用。將培養(yǎng)液混勻后作為種子接種到滅好菌的人工培養(yǎng)基中。2、高雄山蟲草生產(chǎn)子實體的人工培養(yǎng)基制備
2.1實驗材料2.1.1 材料小麥。2.1.1其他材料及儀器較密閉的透光容器(培養(yǎng)盒或罐頭瓶)，人工氣候箱或人工氣候室等。2. 2 方法2. 2.1 預處理將一定量去皮的小麥(比如IOOg小麥)，放入體積為13X8Xllcm的培養(yǎng)盒中，根據(jù)小麥品種的不同經(jīng)水浸泡12h左右備用。2. 2. 2 滅菌·將浸泡好的小麥濾去多余的水分，然后采用高壓間歇滅菌法滅菌2-3次備用，每次滅菌溫度控制在115 °C，時間控制在40min ；3、高雄山蟲草子實體生產(chǎn)的人工培養(yǎng)及結果3.1接種將培養(yǎng)好的種子液用無菌處理的噴槍均勻噴施在培養(yǎng)基的表面(13X8X3. 5cm體積的培養(yǎng)基上可噴灑45ml的種子液)，然后放入培養(yǎng)箱。3. 2培養(yǎng)在25°C下進行暗培養(yǎng)10天左右，見菌絲密集布滿整個培養(yǎng)基，并有轉色跡象時，改變培養(yǎng)條件為22°C，12h見光培養(yǎng)，光照強度為200x1左右為宜，然后再改變培養(yǎng)條件為16°C，12h暗培養(yǎng)，兩者交替進行。3. 3結果在培養(yǎng)4周左右時即可收獲。可用剪刀等將子實體從培養(yǎng)基上切下來保鮮或烘干保存。在本例中，每個培養(yǎng)面積為13X8cm大的培養(yǎng)基上可生產(chǎn)出鮮重為35g左右，干重為8g左右的子實體，子實體的平均長度在5-6cm，直徑為l-2mm (見圖3);經(jīng)計數(shù)檢測，每克鮮重子實體所含有的分生孢子數(shù)目僅為3.6X107，相對很小。因此，該菌株和該條件下有利于低產(chǎn)孢子實體的產(chǎn)生。收獲后可根據(jù)實際情況適當補水后進行二次培養(yǎng)，培養(yǎng)方法同第一次，每盒進行二次培養(yǎng)后共計可以收獲蟲草子實體鮮重70g左右，干重16g左右。本發(fā)明中培養(yǎng)時可根據(jù)使用的小麥品種不同，適當增減浸泡時間；滅菌時采用間歇滅菌這樣滅菌更徹底，而且可以在相對較低溫度(115°C )下滅菌，以延長培養(yǎng)盒的使用壽命，節(jié)約成本；培養(yǎng)時光照度不宜過高，過高會促使子實體產(chǎn)分生孢子，且子實體形態(tài)易變形。另外，培養(yǎng)中菌株選擇也較為重要，有的菌株在子實體剛形成不久就開始在子實體表面形成較多的白色分生孢子，這種菌株不宜使用。本發(fā)明的實施方式不限于上述實施例，在不脫離本發(fā)明宗旨的前提下做出的各種變化均屬于本發(fā)明的保護范圍之內。
權利要求
1.一種高雄山蟲草子實體低產(chǎn)孢菌株A1105，保藏號為CCTCC M2012307。
2.根據(jù)權利要求1所述的高雄山蟲草子實體低產(chǎn)孢菌株，其特征在于分離自罹病昆蟲標本，在Czapek瓊脂培養(yǎng)基上，25°C下培養(yǎng)21天時，菌落平均直徑為32mm，正面白色到肉色，粉質，背面白色到褐色，菌落平展、薄，邊緣整齊，未見形成環(huán)帶或放射溝，未見角變現(xiàn)象，未見形成孢梗束。
3.—種如權利要求1或2所述的高雄山蟲草低產(chǎn)孢子實體人工培養(yǎng)方法，其特征在于 包含以下步驟(1)人工培養(yǎng)基制備取去皮的小麥粒100g，用清潔水浸泡12h，濾去多余水分后放入培養(yǎng)盒內，采用高壓間歇滅菌法滅菌2-3次備用，每次滅菌溫度控制在115 °C，時間控制在 40min ；(2)將Al105菌株搖瓶培養(yǎng)制成種子液，向培養(yǎng)基上接種種子液45ml，置于25°C下暗培養(yǎng)10天左右，見有轉色跡象時，轉入16°C和22°C下，交替變溫培養(yǎng)各12h ;其中在22°C 時，見光培養(yǎng)12h，光照強度為200x1，在16°C時，暗培養(yǎng)12h ；25天后即可收獲子實體。
4.根據(jù)權利要求3所述的高雄山蟲草低產(chǎn)孢子實體人工培養(yǎng)方法，其特征在于步驟(1)所述培養(yǎng)盒體積為13cmX8cmXIlcm,步驟(2)所述培養(yǎng)基體積為13cmX8cmX3. 5cm。
5.根據(jù)權利要求3所述的高雄山蟲草低產(chǎn)孢子實體人工培養(yǎng)方法，其特征在于步驟(2)所述Al105菌株搖瓶培養(yǎng)的溫度為25°C，轉速250r/min，培養(yǎng)4天，菌絲段達IO7Iiil'
6.根據(jù)權利要求3所述的高雄山蟲草低產(chǎn)孢子實體人工培養(yǎng)方法，其特征在于在步驟(2)所述子實體第一次收獲后補水，按照與第一次培養(yǎng)相同的方法，進行二次培養(yǎng)。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種高雄山蟲草子實體低產(chǎn)孢菌株及子實體人工培養(yǎng)方法。該菌株為高雄山蟲草子實體低產(chǎn)孢菌株A1105，其子實體的人工培養(yǎng)方法包括種子液制備、人工培養(yǎng)基制備、接種、培養(yǎng)、收獲等步驟。在本發(fā)明的人工培養(yǎng)方法下該菌株可發(fā)育形成產(chǎn)孢極低的子實體，有效解決了現(xiàn)有技術在高雄山蟲草人工培養(yǎng)中子實體生長過程會產(chǎn)生大量分生孢子的技術難題，保障了生產(chǎn)人員的健康安全，同時也提高了高雄山蟲草子實體的產(chǎn)量，在高雄山蟲草的人工培養(yǎng)中有良好的應用前景。
文檔編號A01G1/04GK103004463SQ20121036816
公開日2013年4月3日 申請日期2012年9月28日 優(yōu)先權日2012年9月28日
發(fā)明者梁建東, 田維毅, 王平, 韓潔, 何光志, 王文佳, 蔡琨 申請人:貴陽中醫(yī)學院