專利名稱：一種九州蟲草子實體的人工培養(yǎng)方法及其培養(yǎng)基的制作方法
技術領域：
本發(fā)明屬于生藥學技術領域，涉及一種誘導九州蟲草子實體形成的方法及 培養(yǎng)基，并涉及在人工培養(yǎng)條件下誘導九州蟲草子實體分化的誘導物。
背景技術：
九州蟲草(0 ro^ce/^ ^F〃s/ 〃e/ w's Kobayasi)是一種藥用真菌，因為在山 東省蒙山多有發(fā)現，又叫蒙山蟲草，是隸屬于真菌門(Eumyc叩hyta)、子囊菌綱 (Ascomycetes)、 麥角菌目(Clavicipitales)、 麥角菌禾斗(Clavicipitaceae)真 菌。九州蟲草的寄主為豆天蛾(Clanisbilineata Walker)幼蟲，其無性型為九 州輪枝菌(SkyushuensisVerficillium Kyushue),是目前國內發(fā)現的唯一以豆 天蛾幼蟲為寄主的蟲草。
經研究發(fā)現，九州蟲草具有止咳化痰、滋補強壯、抗氧化、抗衰老、抗腫 瘤等功能，民間用于治療氣管、支氣管炎，肺部腫瘤等疾患。此外，在中國專 利號為00110494. 2的《九州蟲草菌的人工培養(yǎng)方法及其子實體的應用》專利文 獻中記載，九州蟲草具有對荷瘤動物的扶正(促進調節(jié)免疫功能)、驅邪(抑制 腫瘤生長提高生命延長率)、減毒(減輕化療副損傷促進造血機能)等藥理作用， 能明顯抑制癌細胞生長，恢復疲勞，進一步提高人體免疫功能。因人工培養(yǎng)的 九州蟲草子實體的有效營養(yǎng)成分含量高，故用量少，可在確保療效的情況下， 降低制藥成本。正因為如此，人工培養(yǎng)的九州蟲草可用于新藥的開發(fā)，也可以 作為藥膳和保健品，所以其開發(fā)應用前景廣闊。
2003年第38巻第9期《藥學學報》發(fā)表的"九州蟲草的核苷類成分及不同 部位兩種活性成分含量的分布"報道了蒙山九州蟲草中含有至少8種核苷或堿 基，其中抗腫瘤活性成分蟲草素的含量遠高于冬蟲夏草和蛹蟲草，且人工栽培 九州蟲草中蟲草素的含量又顯著高于野生九州蟲草。2004年第25巻第4期《中 國生化藥物雜志》發(fā)表的"3種蟲草抗氧化活性的研究"通過對九州蟲草與冬蟲 夏草的化學成分監(jiān)測、生物藥效、體外抑瘤試驗研究及抗氧化性能研究表明， 九州蟲草具有較高的藥用價值，有望替代價格昂貴的冬蟲夏草應用于臨床，有 著良好的應用前景。
目前國內外關于九州蟲草子實體培養(yǎng)方法報道較少。此外，由于野生九州 蟲草資源很少，實現人工規(guī)?；囵B(yǎng)子實體是開發(fā)該資源首先要解決的問題。
4在中國專利號為00110494. 2的《九州蟲草菌的人工培養(yǎng)方法及其子實體的應用》 專利文獻中，公開了九州蟲草的人工栽培方法，是利用無菌回接活體豆天蛾幼 蟲的培養(yǎng)方法來得到子實體。盡管該方法得到的蟲草具有很高的營養(yǎng)價值和藥 用成分，但由于其原料豆天蛾培養(yǎng)周期較長，操作過程繁瑣、導致其價格較高， 而且從在農作物安全因素方面考慮，豆天蛾幼蟲俗名豆丹，是大豆的主要害蟲 之一，大量培養(yǎng)會有潛在農業(yè)危險性。所以現有九州蟲草的培養(yǎng)方法限制了九 州蟲草的規(guī)?；a。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的在于克服上述已有技術的不足而提供一種操作簡單，培養(yǎng)周 期短，轉化率高，成本低，無污染無廢棄物，可以連續(xù)、批量生產的九州蟲草 子實體的人工培養(yǎng)方法及其培養(yǎng)基。本發(fā)明的目的可以通過如下措施來達到 一種用于培養(yǎng)九州蟲草子實體的 培養(yǎng)基，其特征在于其配方重量比組分為甘油或甘露醇O. 5 20%，蛋白胨1. 5 2.5%,磷酸二氫鉀0. 05 0. 1%，硫酸鎂0. 03 0. 05%，瓊脂1. 5 2%,水余量， pH自然。為了進一步實現本發(fā)明的目的，其配方重量比組分為甘油或甘露醇2 8%， 蛋白胨1.5 2.5%，磷酸二氫鉀0. 05 0.1%，硫酸鎂0. 03 0. 05%,瓊脂1. 5 2%，水余量，pH自然。為了進一步實現本發(fā)明的目的，其配方重量比組分為甘油或甘露醇2.5 3.5%，蛋白胨1.5 2.5%,磷酸二氫鉀0. 05 0. 1%，硫酸鎂0. 03 0. 05%，瓊脂 1.5 2%，水余量，pH自然。一種用于培養(yǎng)九州蟲草子實體的培養(yǎng)基，其特征在于其配方重量比組分為 大米30 40%，甘油或甘露醇0. 5 10%，磷酸二氫鉀0. 3 0. 4%，硫酸鎂0. 15 0.25%，水余量，pH自然。為了進一步實現本發(fā)明的目的，其配方重量比組分為大米30 40%，甘油 或甘露醇1.3 7%，磷酸二氫鉀0. 3 0. 4%，硫酸鎂O. 15 0.25%，水余量，pH 自然。為了進一步實現本發(fā)明的目的，其配方重量比組分為大米30 40%，甘油 或甘露醇2.7 4%，磷酸二氫鉀0. 3 0. 4%，硫酸鎂O. 15 0.25%，水余量，pH 自然。一種九州蟲草子實體的人工培養(yǎng)方法，其特征在于其包括如下步驟 (1)菌種九州蟲草菌種來源于中國林業(yè)微生物菌種保藏管理中心，保存 在試管PDA培養(yǎng)基斜面上。5(2) 菌種活化將瓶裝活化培養(yǎng)基滅菌冷卻后，接種保存在PDA培養(yǎng)基斜面上的九州蟲草 菌種20-30。C培養(yǎng)7-20天；(3) 接種將誘導培養(yǎng)基滅菌冷卻至室溫，在無菌條件下，接種培養(yǎng)好的九州蟲草菌種；(4) 培養(yǎng)采收將接好種的九州蟲草放入恒溫箱、散射光照培養(yǎng)；采收子實體后，于40 6(TC條件下通風干燥。為了進一步實現本發(fā)明的目的， 一種九州蟲草子實體的人工培養(yǎng)方法，其 特征在于其包括如下步驟(1) 菌種九州蟲草菌種來源于中國林業(yè)微生物菌種保藏管理中心，保存 在試管PDA培養(yǎng)基斜面上。(2) 菌種活化500ml錐形瓶裝培養(yǎng)基200ml，培養(yǎng)基配方(g/L)如下蔗糖20 40，蛋 白胨5 10,酵母膏5 10，硫酸鎂0.5 1.0，磷酸二氫鉀0.5 1.0，瓊脂粉 15 20，水余量，pH自然；12rC滅菌30min，冷卻至45。C 55。C,倒入已滅菌 的平板中，帶平板冷卻至室溫后接種保存在PDA培養(yǎng)基斜面上的九州蟲草菌種 一塊(0.2-0.5cm大小)于平板中央，包上封口膜，20-3(TC培養(yǎng)7-20天；(3) 接種誘導培養(yǎng)基，其配方重量比組分為甘油0. 5 20%或甘露醇0. 5 20%，蛋 白胨1. 5 2. 5%，磷酸二氫鉀0. 05 0. 1%，硫酸鎂0. 03 0. 05%，瓊脂1. 5 2%， 水余量，PH自然；將誘導培養(yǎng)基12rC滅菌30min，冷卻至45-55'C，倒入己滅菌的平板中， 冷卻至室溫，取直徑0. 7cm的無菌打孔器，從活化的九州蟲草平板菌落邊緣上 打孔取塊，接種在誘導培養(yǎng)基的平板中央，包上封口膜；(4) 培養(yǎng)采收-將平板放入恒溫箱、散射光照培養(yǎng)，11天后即開始出現子實體原基；采收 子實體后，于40 60。C條件下通風干燥。為了進一步實現本發(fā)明的目的， 一種九州蟲草子實體的人工培養(yǎng)方法，其 特征在于其包括如下步驟-(1)菌種九州蟲草菌種來源于中國林業(yè)微生物菌種保藏管理中心，保存 在試管PDA培養(yǎng)基斜面上。(2) 菌種活化500ml錐形瓶裝液體種子培養(yǎng)基200ml，液體種子培養(yǎng)基配方(g/L)如下: 蔗糖20 40g，蛋白胨5 10g，酵母浸粉5 10g，水余量，pH自然；121。C滅 菌30min，冷卻至室溫后接種保存在PDA培養(yǎng)基斜面上的九州蟲草菌種一塊 (0.2-0.5cm大小)，旋轉式搖床上轉速150rpm、 20-30。C培養(yǎng)7-20天，成為九州蟲草液體菌種；(3) 接種誘導培養(yǎng)基，其配方重量比組分為大米30 40%，甘油或甘露醇0. 5 10%， 磷酸二氫鉀0. 3 0. 4%，硫酸鎂0. 15 0. 25%，水余量，pH自然；將配制好的誘導培養(yǎng)基分裝于500ml錐形瓶中，棉塞封口，外包兩層報紙， 在12rC條件下滅菌30分鐘；滅菌完成后取出培養(yǎng)基，自然冷卻至室溫，在無 菌條件下，每瓶接入5 10ml培養(yǎng)好的九州蟲草液體菌種；(4) 培養(yǎng)采收將接好種的九州蟲草置于恒溫培養(yǎng)箱里，20 3(TC培養(yǎng)8 12天，菌絲充 分生長后，轉移到16 18'C、相對濕度85 95%、每天11 13小時散射光條件 下培養(yǎng)45 80天；采收子實體后，于40 60。C條件下通風干燥。本發(fā)明同已有技術相比可產生如下積極效果本發(fā)明是經過深入細致的研 究，發(fā)現幾種小分子碳源可以高效誘導九州蟲草原基和子實體的形成，通過對 培養(yǎng)基配方的反復篩選，添加甘油或者甘露醇為誘導物，誘發(fā)子實體大量生成， 獲得了用于九州蟲草子實體形成的新方法。在此基礎上對子實體培養(yǎng)工藝進行 了改進，克服了九州蟲草需要天然昆蟲作為培養(yǎng)基質才能誘發(fā)子實體形成的困 難，而且生長周期大大縮短，節(jié)約能源消耗，提高經濟效益，本發(fā)明可以在人 工控制的條件下，穩(wěn)定的培養(yǎng)產生九州蟲草子實體其具有如下優(yōu)點1、 培養(yǎng)所需要的原料便宜易得，來源廣泛，成本低。解決了原技術用昆蟲 成本高、來源少的難題。2、 九州蟲草子實體原基的分化時間短，ll天即可進行分化；3、 子實體培養(yǎng)周期短，萌發(fā)早，轉化率高，兩個月內即可采收；4、 此生產工藝簡單成本低；5、 下腳料菌坯可以全部綜合利用，無污染無廢棄物，具有較好的綜合效益 及生態(tài)效益。
具體實施例方式
實施例1 :l.菌種九州蟲草菌種來源于中國林業(yè)微生物菌種保藏管理中心，保存在試管PDA培養(yǎng)基斜面上。2. 菌種活化取蔗糖20g，蛋白胨5g，酵母膏5g，硫酸鎂0.5g，磷酸二氫鉀0.5g，瓊脂 粉15g,水余量配制培養(yǎng)基1L ， pH自然，500ml錐形瓶裝培養(yǎng)基200ml。 121 "C滅菌30min，冷卻至45'C，倒入己滅菌的平板中，帶平板冷卻至室溫后接種 保存在PDA培養(yǎng)基斜面上的九州蟲草菌種一塊(黃豆粒大小)于平板中央，包 上封口膜，2(TC培養(yǎng)20天；3. 接種配置誘導培養(yǎng)基甘油5g，蛋白胨25g，磷酸二氫鉀O. 5 g，硫酸鎂O. 5 g，瓊脂20g,水949g， pH自然；12rC滅菌30min，冷卻至45。C，倒入已滅菌 的平板中，冷卻至室溫，取直徑0. 7cm的無菌打孔器，從活化的九州蟲草平板 菌落邊緣上打孔取塊，接種在誘導培養(yǎng)基的平板中央，包上封口膜； (4)培養(yǎng)采收-將平板放入25'C恒溫箱、散射光照培養(yǎng)，11天時即開始出現子子實體原基; 采收子實體后，于40 6(TC條件下通風干燥。 實施例2 :1. 菌種九州蟲草菌種來源于中國林業(yè)微生物菌種保藏管理中心，保存在試管PDA培養(yǎng)基斜面上。2. 菌種活化取蔗糖40g，蛋白胨10g,酵母膏10g，硫酸鎂lg,磷酸二氫鉀lg，瓊脂粉 20g，水余量配制培養(yǎng)基1L， pH自然，500ml錐形瓶裝培養(yǎng)基200ml。 121。C滅 菌30min，冷卻至55'C，倒入已滅菌的平板中，帶平板冷卻至室溫后接種保存 在PDA培養(yǎng)基斜面上的九州蟲草菌種一塊(黃豆粒大小)于平板中央，包上封 口膜，30。C培養(yǎng)7天；3. 接種配置誘導培養(yǎng)基甘油200g，蛋白胨15g,磷酸二氫鉀lg，硫酸鎂O. 3g, 瓊脂15g，水768.7g, pH自然；12rC滅菌30min,冷卻至45。C,倒入已滅菌 的平板中，冷卻至室溫，取直徑0.7cm的無菌打孔器，從活化的九州蟲草平板 菌落邊緣上打孔取塊，接種在誘導培養(yǎng)基的平板中央，包上封口膜； (4)培養(yǎng)采收將平板放入25'C恒溫箱、散射光照培養(yǎng),11天時即開始出現子子實體原基； 采收子實體后，于40 60'C條件下通風干燥。 實施例3 :l.菌種九州蟲草菌種來源于中國林業(yè)微生物菌種保藏管理中心，保存在 試管PDA培養(yǎng)基斜面上。82. 菌種活化-取蔗糖30g，蛋白胨7g，酵母膏8g，硫酸鎂0.5g，磷酸二氫鉀0.8g,瓊脂 粉17g，水余量配制培養(yǎng)基1L ， pH自然，500ml錐形瓶裝培養(yǎng)基200ml。 121 。C滅菌30min，冷卻至5(TC,倒入己滅菌的平板中，帶平板冷卻至室溫后接種 保存在PDA培養(yǎng)基斜面上的九州蟲草菌種一塊(黃豆粒大小)于平板中央，包 上封口膜，25。C培養(yǎng)14天；3. 接種配置誘導培養(yǎng)基甘露醇80g，蛋白胨20g,磷酸二氫鉀0.6g，硫酸鎂0.4 g，瓊脂18g，水881g， pH自然；12rC滅菌30min，冷卻至5(TC,倒入己滅菌 的平板中，冷卻至室溫，取直徑0.7cm的無菌打孔器，從活化的九州蟲草平板 菌落邊緣上打孔取塊，接種在誘導培養(yǎng)基的平板中央，包上封口膜； (4)培養(yǎng)采收將平板放入25'C恒溫箱、散射光照培養(yǎng)，11天時即開始出現子子實體原基; 采收子實體后，于40 60。C條件下通風干燥。 實施例4:1. 菌種九州蟲草菌種來源于中國林業(yè)微生物菌種保藏管理中心，保存在 試管PDA培養(yǎng)基斜面上。；2. 菌種活化取蔗糖40g，蛋白胨10g，酵母浸粉5g，水余量，配制培養(yǎng)基1L， pH自然， 500ml錐形瓶裝培養(yǎng)基200ml ， 12rC滅菌30min,冷卻至室溫后接種保存在PDA 培養(yǎng)基斜面上的九州蟲草菌種一塊(黃豆粒大小)，旋轉式搖床上轉速150rpm、 2(TC培養(yǎng)20天，成為九州蟲草液體菌種；3. 接種配制誘導培養(yǎng)基，大米60g，甘露醇15g，磷酸二氫鉀0. 6g，硫酸鎂0. 375g， 水74.025 g， pH自然；將配制好的誘導培養(yǎng)基分裝于500ml錐形瓶中，棉塞封 口，外包兩層報紙，在12rC條件下滅菌30分鐘；滅菌完成后取出培養(yǎng)基，自 然冷卻至室溫，在無菌條件下，每瓶接入5 10ml培養(yǎng)好的九州蟲草液體菌種；4. 培養(yǎng)采收將接好種的九州蟲草置于恒溫培養(yǎng)箱里，20 3(TC培養(yǎng)8 12天，菌絲充 分生長后，轉移到16 18T:、相對濕度85 95%、每天11 13小時散射光條件 下培養(yǎng)45 80天；采收子實體后，于40 6(TC條件下通風干燥。實施例5:1. 菌種九州蟲草菌種來源于中國林業(yè)微生物菌種保藏管理中心，保存在 試管PDA培養(yǎng)基斜面上。；2. 菌種活化取蔗糖20g，蛋白胨5g，酵母浸粉10g,水余量，配制培養(yǎng)基1L， pH自然， 500ml錐形瓶裝培養(yǎng)基200ml ， 12rC滅菌30min，冷卻至室溫后接種保存在PDA 培養(yǎng)基斜面上的九州蟲草菌種一塊(黃豆粒大小)，旋轉式搖床上轉速150rpm、 30'C培養(yǎng)7天，成為九州蟲草液體菌種；
3. 接種
配制誘導培養(yǎng)基，大米75g，甘露醇1.25g，磷酸二氫鉀0.75g，硫酸鎂 0. 375g，水172. 625g， pH自然；將配制好的誘導培養(yǎng)基分裝于500ml錐形瓶中， 棉塞封口，外包兩層報紙，在12rC條件下滅菌30分鐘；滅菌完成后取出培養(yǎng) 基，自然冷卻至室溫，在無菌條件下，每瓶接入5 10ml培養(yǎng)好的九州蟲草液 體菌種；
4. 培養(yǎng)采收
將接好種的九州蟲草置于恒溫培養(yǎng)箱里，20 3(TC培養(yǎng)8 12天，菌絲充 分生長后，轉移到16 18。C、相對濕度85 95%、每天11 13小時散射光條件 下培養(yǎng)45 80天；采收子實體后，于40 6(TC條件下通風干燥。
實施例6:
1. 菌種九州蟲草菌種來源于中國林業(yè)微生物菌種保藏管理中心，保存在 試管PDA培養(yǎng)基斜面上。；
2. 菌種活化
取蔗糖30g，蛋白胨7g，酵母浸粉8g，水余量，配制培養(yǎng)基1L， pH自然， 500ml錐形瓶裝培養(yǎng)基200ml ， 12rC滅菌30min，冷卻至室溫后接種保存在PDA 培養(yǎng)基斜面上的九州蟲草菌種一塊(黃豆粒大小)，旋轉式搖床上轉速150rpm、 25'C培養(yǎng)15天，成為九州蟲草液體菌種；
3. 接種-
配制誘導培養(yǎng)基，大米70g，甘油10g，磷酸二氫鉀0.7g，硫酸鎂0.4g， 水118.9g， pH自然；將配制好的誘導培養(yǎng)基分裝于500ml錐形瓶中，棉塞封 口，外包兩層報紙，在12rC條件下滅菌30分鐘；滅菌完成后取出培養(yǎng)基，自 然冷卻至室溫，在無菌條件下，每瓶接入5 10ml培養(yǎng)好的九州蟲草液體菌種；
4. 培養(yǎng)采收
將接好種的九州蟲草置于恒溫培養(yǎng)箱里，20 3(TC培養(yǎng)8 12天，菌絲充 分生長后，轉移到16 18。C、相對濕度85 95%、每天11 13小時散射光條件 下培養(yǎng)45 80天；采收子實體后，于40 60'C條件下通風干燥。
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權利要求
1、一種用于培養(yǎng)九州蟲草子實體的培養(yǎng)基，其特征在于其配方重量比組分為甘油或甘露醇0.5～20％，蛋白胨1.5～2.5％，磷酸二氫鉀0.05～0.1％，硫酸鎂0.03～0.05％，瓊脂1.5～2％，水余量。
2、 根據權利要求1所述的一種用于培養(yǎng)九州蟲草子實體的培養(yǎng)基，其 特征在于其配方重量比組分為甘油或甘露醇2 8%，蛋白胨1.5 2.5%，磷酸 二氫鉀0. 05 0. 1%，硫酸鎂0. 03 0. 05%，瓊脂1.5 2%，水余量。
3、 根據權利要求1所述的一種用于培養(yǎng)九州蟲草子實體的培養(yǎng)基，其特 征在于其配方重量比組分為甘油或甘露醇2. 5 3. 5%，蛋白胨1.5 2.5%，磷 酸二氫鉀0. 05 0. 1%，硫酸鎂0. 03 0. 05%,瓊脂1.5 2%,水余量。
4、 一種用于培養(yǎng)九州蟲草子實體的培養(yǎng)基，其特征在于其配方重量比組 分為大米30 40%，甘油或甘露醇0.5 10%，磷酸二氫鉀0. 3 0. 4%,硫酸鎂 0. 15 0. 25%,水余量。
5、 根據權利要求4所述的一種用于培養(yǎng)九州蟲草子實體的培養(yǎng)基，其特 征在于其配方重量比組分為大米30 40%，甘油或甘露醇1. 3 7%，磷酸二氫 鉀0.3 0.4%，硫酸鎂0.15 0. 25%,水余量。
6、 根據權利要求4所述的一種用于培養(yǎng)九州蟲草子實體的培養(yǎng)基，其特 征在于其配方重量比組分為大米30 40%，甘油或甘露醇2. 7 4%，磷酸二氫 鉀O. 3 0. 4%，硫酸鎂0. 15 0. 25%,水余量。
7、 一種九州蟲草子實體的人工培養(yǎng)方法，其特征在于其包括如下步驟(1) 菌種將九州蟲草菌種保存在試管PDA培養(yǎng)基斜面上；(2) 菌種活化將瓶裝活化培養(yǎng)基滅菌冷卻后，接種保存在PDA培養(yǎng)基斜面上的九州蟲草 菌種20-30 。C培養(yǎng)7-20天；(3) 接種將誘導培養(yǎng)基滅菌冷卻至室溫，在無菌條件下，接種培養(yǎng)好的九州蟲草菌種；(4) 培養(yǎng)采收將接好種的九州蟲草放入恒溫箱、散射光照培養(yǎng)；采收子實體后，于40 6(TC條件下通風干燥。
8、根據權利要求7所述的一種九州蟲草子實體的人工培養(yǎng)方法，其特征在 于其包括如下步驟(1) 菌種將九州蟲草菌種保存在試管PDA培養(yǎng)基斜面上；(2) 菌種活化·500ml錐形瓶裝培養(yǎng)基200ml，培養(yǎng)基配方(g/L)如下蔗糖20 40，蛋 白胨5 10，酵母膏5 10，硫酸鎂0.5 1.0,磷酸二氫鉀0.5 1.0，瓊脂粉 ···15 20，水余量，pH自然；12rC滅菌30min，冷卻至45。C 55。C，倒入已滅菌 的平板中，帶平板冷卻至室溫后接種保存在PDA培養(yǎng)基斜面上的九州蟲草菌種 于平板中央，包上封口膜，20-3(TC培養(yǎng)7-20天；(3) 接種誘導培養(yǎng)基，其配方重量比組分為甘油0. 5 20%或甘露醇0. 5 20%，蛋 白胨1. 5 2. 5%,磷酸二氫鉀0. 05 0. 1%，硫酸鎂0. 03 0. 05%，瓊脂1. 5 2%， 水余量，pH自然；將誘導培養(yǎng)基12rC滅菌30min，冷卻至45-55t:,倒入已滅菌的平板中， 冷卻至室溫，取直徑0.7cm的無菌打孔器，從活化的九州蟲草平板菌落邊緣上 打孔取塊，接種在誘導培養(yǎng)基的平板中央，包上封口膜；(4) 培養(yǎng)采收將平板放入恒溫箱、散射光照培養(yǎng)，ll天后即開始出現子實體原基；采收 子實體后，于40 6(TC條件下通風干燥。
9、根據權利要求7所述的一種九州蟲草子實體的人工培養(yǎng)方法，其特征在 于其包括如下步驟(1) 菌種將九州蟲草菌種保存在試管PDA培養(yǎng)基斜面上；(2) 菌種活化500ml錐形瓶裝液體種子培養(yǎng)基200ml，液體種子培養(yǎng)基配方(g/L)如下 蔗糖20 40g,蛋白胨5 10g，酵母浸粉5 10g，水余量，pH自然；121。C滅 菌30min，冷卻至室溫后接種保存在PDA培養(yǎng)基斜面上的九州蟲草菌種，旋轉式 搖床上轉速150rpm、 20-30。C培養(yǎng)7-20天，成為九州蟲草液體菌種；(3) 接種-誘導培養(yǎng)基，其配方重量比組分為大米30 40%，甘油或甘露醇0. 5 10%， 磷酸二氫鉀0. 3 0. 4%,硫酸鎂0. 15 0. 25%，水余量，pH自然;將配制好的誘導培養(yǎng)基分裝于500ml錐形瓶中，棉塞封口，外包兩層報紙， 在12rC條件下滅菌30分鐘；滅菌完成后取出培養(yǎng)基，自然冷卻至室溫，在無 菌條件下，每瓶接入5 10ml培養(yǎng)好的九州蟲草液體菌種；(4) 培養(yǎng)采收將接好種的九州蟲草置于恒溫培養(yǎng)箱里，20 3(TC培養(yǎng)8 12天，菌絲充 分生長后，轉移到16 18匸、相對濕度85 95%、每天11 13小時散射光條件 下培養(yǎng)45 80天；采收子實體后，于40 6(TC條件下通風干燥。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種九州蟲草子實體的人工培養(yǎng)方法及其培養(yǎng)基，它是將九州蟲草菌種保存在試管PDA培養(yǎng)基斜面上；將瓶裝活化培養(yǎng)基滅菌冷卻后，接種保存在PDA培養(yǎng)基斜面上的九州蟲草菌種20-30℃培養(yǎng)7-20天；將誘導培養(yǎng)基滅菌冷卻至室溫，在無菌條件下，接種培養(yǎng)好的九州蟲草菌種；將接好種的九州蟲草放入恒溫箱、散射光照培養(yǎng)；采收子實體后，于40～60℃條件下通風干燥制得。本發(fā)明操作簡單，培養(yǎng)周期短，轉化率高，成本低，無污染無廢棄物，可以連續(xù)、批量生產，選材正確，配方具有科學性和創(chuàng)新性，價格便宜，適于利于推廣。
文檔編號C05G3/00GK101659578SQ200910018379
公開日2010年3月3日 申請日期2009年9月18日 優(yōu)先權日2009年9月18日
發(fā)明者劉林德, 圖力古爾, 杜華東, 程顯好, 鑫 金 申請人:魯東大學