專利名稱：包括萌芽物和抗菌劑的組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本申請(qǐng)涉及一種具有抗菌性質(zhì)的組合物，以及使用這種組合物消毒表面的方法。本申請(qǐng)尤其涉及一種對(duì)形成病原體的孢子具有有效抗菌活性的組合物。
背景技術(shù)：
形成病原體的孢子，例如梭狀芽孢桿菌，為重要的致病原。在英國(guó)，梭狀芽孢桿菌是院內(nèi)腹瀉的主要原因，并是英國(guó)醫(yī)院內(nèi)的相當(dāng)數(shù)量的死亡的致死原因。最近數(shù)據(jù)顯示梭狀芽孢桿菌感染的案例數(shù)量有所下降。然而，雖然有所下降，梭狀芽孢桿菌的案例仍然幾乎是抗甲氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA)案例的10倍。當(dāng)前，聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)核糖核酸型027是最普遍的從梭狀芽孢桿菌處分離的核糖核酸型，接下來(lái)是核糖核酸型 106和101。感染患者在環(huán)境中分泌出大量的作為感染儲(chǔ)主的梭狀芽孢桿菌孢子和細(xì)胞。因此，患者通常通過(guò)吸入來(lái)自污染環(huán)境的孢子而獲得這種有機(jī)體。一旦吸入，這種孢子可以在胃部的酸性環(huán)境下存活，并可以進(jìn)入腸胃道，在腸胃道中它們可以萌芽生成營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞以產(chǎn)生毒素A和B，這些毒素便在易感染病人中弓I起疾病。孢子萌芽是不可逆過(guò)程，其中高度穩(wěn)定，靜止的孢子轉(zhuǎn)變成新陳代謝的活性細(xì)胞。萌芽在幾個(gè)階段進(jìn)行，首先通過(guò)在細(xì)胞質(zhì)膜上與萌芽受體結(jié)合而被活化。隨后失去耐熱性和不同的陽(yáng)離子，包括鉀，氫和鈉，以及鈣和吡啶二羧酸(DPA)的絡(luò)合物。這樣導(dǎo)致核心的部分重新水合，然而，在皮層沒(méi)有分解之前該有機(jī)體不容易成為完全的水合物。隨著皮層的水解，小的酸性可溶性蛋白分解，細(xì)胞的代謝活性便啟動(dòng)。眾所周知，梭狀芽孢桿菌可以通過(guò)暴露于萌芽溶液而模擬生成孢子，該萌芽溶液包含甘氨酸和?；悄懰猁}的結(jié)合。這種從孢子狀態(tài)的轉(zhuǎn)變引起病原體容易受到抗菌劑的攻擊，該抗菌劑例如雙氯苯雙胍己烷。
背景技術(shù)：
的目的為設(shè)計(jì)萌芽/根除利用病原體萌芽后易感性的實(shí)驗(yàn)方案。這種實(shí)驗(yàn)方案如圖I所示。特別地，背景技術(shù)嘗試設(shè)計(jì)抗菌溶液，該抗菌溶液刺激萌芽，并具有抗菌劑來(lái)攻擊萌芽病原體。然而，以這種方式的抗菌劑對(duì)萌芽溶液具有抑制效果，使得萌芽/根除方式在臨床條件上的成就的受限。本發(fā)明的目的在于提供一種替代性的抗菌組合物，該組合物克服以上問(wèn)題并在臨床重要的病原體上具有效果。

發(fā)明內(nèi)容
與背景技術(shù)中的僅與?；悄懰猁}結(jié)合的甘氨酸組合物相比，本申請(qǐng)的發(fā)明人發(fā)現(xiàn)包含氨基酸和?；悄懰徕c結(jié)合的特定組合物能提高孢子生殖活性。此外，發(fā)明人還發(fā)現(xiàn)特定的抗菌劑在作為組合物中防腐劑的同時(shí)可以有有效地殺滅萌芽的孢子。這些試劑并沒(méi)有背景技術(shù)中所觀察到的用于萌芽/根除的抗菌劑對(duì)病原體的萌芽的抑制效果。此外，本申請(qǐng)的發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，同樣刺激營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞從梭狀芽孢桿菌孢子處生成的同時(shí)，本發(fā)明的組合物能預(yù)防梭狀芽孢桿菌營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞的孢子生殖。這在臨床條件上非常有利。在醫(yī)院治療的患者排泄出許多營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞(還有孢子)。該營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞會(huì)最終形成孢子，而孢子隨后作為疾病傳輸?shù)妮d體。保持細(xì)胞處于營(yíng)養(yǎng)形式則比較優(yōu)選，因?yàn)樗鼈儠?huì)自然地被空氣消滅，它們完全厭氧，或在醫(yī)院中用作普遍的硬表層消毒劑。本發(fā)明的組合物因此具有兩種方式進(jìn)攻，首先，將孢子轉(zhuǎn)化成營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞，其次，保持營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞處于營(yíng)養(yǎng)形式。本發(fā)明的一個(gè)方面提供了一種抗菌組合物，該抗菌組合物包括萌芽物和抗菌劑，其中所述萌芽物增加病原體對(duì)抗菌劑進(jìn)攻的易感性，且其中的抗菌劑并沒(méi)有抑制萌芽。本發(fā)明的第二個(gè)方面提供了一種抗菌抹布，所述抗菌抹布包括經(jīng)過(guò)本發(fā)明組合物浸潰的織物，網(wǎng)或紗布類材料。本發(fā)明的第三個(gè)方面提供了一種 抗菌洗手液或用于對(duì)非生物表面涂層的涂料，該洗手液或涂料包括本發(fā)明的組合物。本發(fā)明的第四個(gè)方面提供了一種消毒表面的方法，使得該表面擺脫病原體，該方法包括用本發(fā)明的組合物或含有本發(fā)明組合物的抗菌抹布或涂料以使病原體萌芽和被消滅的足夠長(zhǎng)的時(shí)間來(lái)接觸表面。本發(fā)明的抗菌組合物包括與抗菌劑結(jié)合的萌芽物。所述萌芽物選自至少兩種氨基酸。所述氨基酸優(yōu)選為組氨酸，精氨酸，天冬氨酸，甘氨酸的結(jié)合。更優(yōu)選為組氨酸，精氨酸，天冬氨酸，甘氨酸和纈氨酸的結(jié)合。發(fā)明人所展示的這種氨基酸的特定結(jié)合尤其利于增加了細(xì)菌萌芽效果。孢子所提供的量為適用于刺激有效的孢子繁殖。優(yōu)選地，孢子的量為最終組合物的I至ΙΟηΜ。萌芽溶液中的氨基酸成分的量為50mM (組氨酸)，50mM (甘氨酸)，50mM(精氨酸)，50mM 1:50 (纈氨酸)和50mM (天冬氨酸)?？咕鷦橐环N一旦接觸病原體微生物所在的表面，能有效殺滅病原體微生物的試齊U。優(yōu)選地，抗菌劑在孢子繁殖后的萌芽階段為有效的或可以消滅病原體。該抗菌劑同樣有效殺滅沒(méi)有形成孢子的病原體。優(yōu)選地，抗菌劑為苯扎氯銨和苯甲醇的結(jié)合?？咕M合物中，苯扎氯銨與苯甲醇的比例為1:50?？咕鷦┧峁┑牧?相對(duì)于抗菌組合物中抗菌劑的總量而言)為O. 01%至2%。抗菌組合物以臨床環(huán)境下用于消毒表面的形式來(lái)提供。優(yōu)選地，該表面為非生物的表面?？商娲兀摫砻婵梢詾榛颊?，醫(yī)生或護(hù)工的皮膚。優(yōu)選地，該組合物的形式為液體，凝膠，泡沫或噴霧，這些形式可以便利地用于所需要處理的表面。在另一個(gè)實(shí)施例中，抗菌抹布包括經(jīng)過(guò)抗菌組合物浸潰的織物，網(wǎng)或紗布類材料。該組合物同樣可以以藥片形式提供。這種藥片形式例如在清潔較大表面面積時(shí)，可溶于適量的水，然后醫(yī)院清潔人員再將所得溶液當(dāng)做消毒劑使用。在一個(gè)實(shí)施例中，該表面為人的皮膚，然后，該抗菌組合物的形式可以為洗手液或抹布。優(yōu)選地，該抗菌組合物的形式為涂料，該涂料涂在待處理的表面上。與背景技術(shù)的抗菌劑相比，這種涂料特別有利，一旦干燥后，便有效地在長(zhǎng)時(shí)間周期內(nèi)消滅病原體，背景技術(shù)的抗菌劑一旦干燥便有效，但在特定時(shí)間長(zhǎng)度內(nèi)，抗菌劑導(dǎo)致對(duì)萌芽劑的抑制。該抗菌劑更優(yōu)選地以涂漆的形式存在，該涂漆在應(yīng)用的表面上形成不會(huì)輕易擦掉的硬膜。本發(fā)明的抗菌組合物一般可以消毒廣譜病原體的表面。該組合物對(duì)形成細(xì)菌的孢子特別有效。這種孢子形成細(xì)菌的的一個(gè)實(shí)施例為梭狀芽孢桿菌。然而，該組合物可以對(duì)其它例如MRSA，綠膿桿菌，白念珠菌和黑曲霉菌株的病原體同樣有效。以下結(jié)合附圖和表格，通過(guò)實(shí)施例來(lái)對(duì)本發(fā)明的實(shí)施進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明其中，
圖I簡(jiǎn)要地展示了背景技術(shù)中使用的萌芽/根除實(shí)驗(yàn)方案。
圖2展示了梭狀芽孢桿菌NCTC I 1204孢子的CFU (菌落數(shù))/mL對(duì)數(shù)值減少所述梭狀芽孢桿菌NCTC I 1204孢子暴露在不同的萌芽溶液I小時(shí)，接著進(jìn)行10分鐘的熱沖擊。圖3展示了暴露于每種氨基酸萌芽溶液I小時(shí)后，梭狀芽孢桿菌NCTC I 1204孢子的CFU/mL的對(duì)數(shù)值減少，接著在70°C下，進(jìn)行10分鐘的熱沖擊。圖4展示了用核糖核酸型027，001，106和菌株NCTC I 1204的梭狀芽孢桿菌孢子培養(yǎng)一小時(shí)后，在同樣包含6. 9mM?；悄懰徕c的萌芽溶液中的氨基酸組合(精氨酸，天冬氨酸，甘氨酸和組氨酸)濃縮物的效果。圖5展示了暴露于不同萌芽溶液，并隨后進(jìn)行10分鐘的熱沖擊后，不同的梭狀芽孢桿菌菌株孢子的CFU/mL的對(duì)數(shù)值減少。
圖6展示了 pH值對(duì)Tris緩沖液中梭狀芽孢桿菌NCTC I 1204孢子萌芽的效果，所述Tris緩沖液包括IOmM的精氨酸，天冬氨酸，組氨酸和甘氨酸，以及6. 9mlVl的牛磺膽酸鈉。圖7展示了在I小時(shí)暴露于不同萌芽溶液，接著進(jìn)行熱沖擊或用冰冷卻的處理后，梭狀芽孢桿菌孢子的CFU/mL的對(duì)數(shù)值減少。(AA=氨基酸，ST=?；悄懰徕c，BZC=苯扎氯銨，BZA=苯甲醇)。圖8展示了在I小時(shí)暴露于不同萌芽溶液，接著進(jìn)行熱沖擊或用冰冷卻的處理后，梭狀芽孢桿菌孢子的CFU/mL的對(duì)數(shù)值減少(CHG=氯己定二葡糖酸鹽)。圖9展示了在PBS (對(duì)照)中培養(yǎng)的梭狀芽孢桿菌營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞的計(jì)數(shù)，24小時(shí)后的孢子計(jì)數(shù)為100%。


圖10展示了在本發(fā)明萌芽溶液中梭狀芽孢桿菌營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞的計(jì)數(shù)，72小時(shí)后100%的計(jì)數(shù)仍然為營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞。表I展示了在I小時(shí)暴露于不同萌芽溶液，接著進(jìn)行熱沖擊或用冰冷卻的處理后，梭狀芽孢桿菌孢子的CFU/mL的對(duì)數(shù)值減少。實(shí)施例I :用于萌芽溶液氨基酸的組合 梭狀芽孢桿菌菌株
將核糖核酸型106菌株(18587)，核糖核酸型001菌株(8565) (Health ProtectionAgency,英國(guó)東北)以及家典型菌種保藏中心(NCTC) 11204參照菌株,連同三種核糖核酸型O27 菌株，R2O29I (Anaerobic Reference Laboratory 加的夫)，I8O4O 和 I59OO (ΗΡΑ,英國(guó)東北)一起使用。梭狀芽孢桿菌孢子懸浮液的制備
梭狀芽孢桿菌孢子如之前所述來(lái)制備(Shetty等，1999)。用梭狀芽孢桿菌的相關(guān)菌株來(lái)接種血瓊脂平板，并在37°C下厭氧地培養(yǎng)(iniMACS anaerobic work station, DonWhitley, Shipley,英國(guó))72小時(shí)，隨后在收集所有的菌落并置于10mL50%生理鹽水(0. 9%w/v)和50%甲基化酒精之前，移開所述平板并在常溫下放置24小時(shí)。所述懸浮液在用玻璃棉過(guò)濾之前進(jìn)行完全地渦旋混合，并在4°C下保存直到使用。在每次實(shí)驗(yàn)之前，孢子懸浮液以13000rpm速度離心5分鐘，并在消毒的蒸餾水中重新懸浮。氨基酸
在實(shí)驗(yàn)中使用了以下氨基酸甘氨酸，L-異亮氨酸，L-脯氨酸，D-丙氨酸，L-谷氨酸，L-絲氨酸，L-蘇氨酸，L-天冬氨酸，L-精氨酸，L-纈氨酸，L-亮氨酸，L-谷氨酰胺，L-色氨酸和L -天冬酰胺(都來(lái)自英國(guó)Sigma-Aldrich公司)，L-賴氨酸，L-組氨酸和L-蛋氨酸(BDH), L-β -苯基丙氨酸(Fisons公司)L-半胱氨酸(Fluka公司)。酪氨酸由于不溶于蒸餾水，所以沒(méi)有進(jìn)行測(cè)試。作為共同萌芽物的不同氨基酸對(duì)梭狀芽孢桿菌孢子的效果
所有的萌芽溶液包含O. 4% (w/v)的氨基酸(之前研究使用的甘氨酸濃度(Wheeldon等.,2008))和13. 8mM(w/v)的?；悄懰徕c(Sigma-Aldrich公司,英國(guó))，(在十二指腸中加倍生理濃度(Leverrier等.，2003))，將該?；悄懰徕c溶于蒸餾水中，并在121°C下高壓滅菌15分鐘來(lái)消毒。同樣測(cè)試包含13. SmM牛磺膽酸鈉(ST)的加倍強(qiáng)度的硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基(Oxid，英國(guó))，用于與其它萌芽溶液作對(duì)比。如果梭狀芽孢桿菌長(zhǎng)孢子(包含IO6CFU/mL)，便隨后將一百微升的每種萌芽溶液加多100 μ L，并完全渦旋混合。I小時(shí)后，將整個(gè)200 μ L的體積加入9. 8mL的威爾金查而根培養(yǎng)基(Wilkins Chalgren broth) (Oxoid,英國(guó))，使其在70°C下平衡10分鐘，或用冰使其冷卻。經(jīng)過(guò)合適的稀釋，在加入15mL的，包 含0.1 % (w/v) ST和5% (v/v)脫纖維馬血的molton苛養(yǎng)厭氧菌瓊脂(FAA) (Lab M,英國(guó))之前，將ImL的樣品置于消毒的皮氏(Petri)培養(yǎng)皿中。平板在37°C下厭氧培養(yǎng)48小時(shí)之前，進(jìn)行完全混合。上述方法是來(lái)自Levinson和Hyatt (1966)的改進(jìn)。梭狀芽孢桿菌孢子萌芽所需要的氨基酸的最佳濃度的確定
精氨酸，天冬氨酸，甘氨酸和組氨酸以200，20，2，0. 2和0. 02mM的量制備，連同13. 8mM的ST (在實(shí)驗(yàn)中以1:2稀釋時(shí)為雙倍效果)，一起溶于蒸餾水中。加熱所有溶液直到溶解，并用高壓滅菌來(lái)消毒。用與以上相同的方法來(lái)測(cè)試不同濃度的萌芽溶液對(duì)梭狀芽孢桿菌NCTC I 1204，核糖核酸型 027 (R20291 )，001 和 106 的效果。針對(duì)六種不同的梭狀芽孢桿菌菌株的孢子，氨基酸和?；悄懰猁}的功效。分別單獨(dú)或混合加入精氨酸、天冬氨酸、甘氨酸和組氨酸(20mM w/v)至13. 8mM(w/v) ST，并加熱溶解于蒸餾水中，然后高壓滅菌消毒。用以上的相同方法來(lái)確定這些氨基酸溶液對(duì)梭狀芽孢桿菌核糖核酸型001、106、027 (R20291，15900和18040)和NCTC I1204的孢子的功效。緩沖萌芽溶液的pH值對(duì)梭狀芽孢桿菌孢子的萌芽效果
將精氨酸，天冬氨酸，甘氨酸和組氨酸(20mM w/v), 13. 8mM (w/v) ST和200mM (w/v)Tris溶于蒸餾水中，在用過(guò)濾或高壓滅菌消毒之前用鹽酸調(diào)節(jié)pH值至5，6，7，8和9。用與以上相同的方法來(lái)測(cè)試對(duì)梭狀芽孢桿菌NCTC I 1204孢子的每份緩沖溶液。實(shí)施例2-具有抗菌和防腐的萌芽溶液對(duì)梭狀芽孢桿菌的功效 萌芽溶液
一種溶液包含IOOmM (w/v)甘氨酸，組氨酸，纈氨酸，天冬氨酸和精氨酸，13. 8mM (w/v)牛磺膽酸鈉，IOOmM (w/v) Tris緩沖液，0.04% (w/v)苯扎氯銨以及2% (v/v)的苯甲醇，將該溶液用蒸餾水調(diào)整至所需體積，并用鹽酸調(diào)節(jié)PH值至7。加熱該溶液，并在過(guò)濾通過(guò)0. 2pm的孔尺寸之前，加熱并完全混合該溶液，以溶解所有的成分(該溶液在實(shí)驗(yàn)中以I :2來(lái)稀釋時(shí)，為加倍功效)。梭狀芽孢桿菌孢子懸浮液的制備 梭狀芽孢桿菌孢子的制備如上所述緩沖液
緩沖液的改進(jìn)來(lái)自Espigares等，(2003),并包含以下成分120mL (v/v)吐溫(Tween) -80, 25mL (v/v)的 40% 偏亞硫酸鈉，15. 69g (w/v)五水硫代硫酸鈉，IOg (w/v)L-半胱氨酸，4g (w/v)卵磷脂，用蒸餾水制成IOOOmL溶液，并將pH值調(diào)節(jié)至7，用高壓滅
菌消毒。萌芽效果測(cè)試
將100微升的萌芽溶液加入IOOyL的梭狀芽孢桿菌孢子中(包含106 CFU/mL)，并完全渦旋混合。對(duì)于對(duì)照樣，將100 μ L的消毒蒸餾水與100 μ L的梭狀芽孢桿菌孢子懸浮液混合。孢子懸浮液同樣用包含氯芐烷銨和Tris緩沖液(沒(méi)有氨基酸或?；悄懰猁})，具有Tris緩沖液的苯甲醇(沒(méi)有氨基酸或?；悄懰猁})，以及包含五種氨基酸和?；悄懰猁}的溶液(無(wú)抗菌劑)來(lái)培養(yǎng)。一小時(shí)后，將整個(gè)200 μ L體積的溶液加入9. 8mL緩沖液中 (如上所述)，在70°C下平衡10分鐘(熱沖擊來(lái)殺滅萌芽細(xì)胞)，或用冰塊冷卻(對(duì)照)。經(jīng)過(guò)合適的稀釋后，在加入包含O. I % (w/v)的ST和5% (v/v)脫纖維馬血的molten苛養(yǎng)厭氧菌瓊脂(molten Fastidious Anaerobe Agar FAA) (Lab M,英國(guó))之前，將 ImL 的樣品置于消毒的皮氏(Petri)培養(yǎng)皿中。該平板在37°C下厭氧培養(yǎng)48小時(shí)(mini ACSAnaerobic Workstation, Don Whitley Scientific 公司)前，進(jìn)行完全混合。上述方法從之前Levinson和Hyatt (1966)的研究中改進(jìn)。結(jié)果和討論
作為與甘氨酸共同萌芽物的其它氨基酸對(duì)梭狀芽孢桿菌NCTC 11204孢子的功效用精氨酸，天冬氨酸或組氨酸，甘氨酸和ST來(lái)培養(yǎng)梭狀芽孢桿菌NCTC I 1204,并在熱沖擊后，產(chǎn)生CFU/mL的較大對(duì)數(shù)值減少，分別為2. 78 (99. 8%)，3. 06 (9. 99%)和3. 12(99. 9%)。纈氨酸(具有甘氨酸和ST)和亮氨酸(具有甘氨酸和ST)分別產(chǎn)生CFU/mL的對(duì)數(shù)值減少分別為I .72 (98. I %)和I .62 (97. 6%)，這和只有甘氨酸和ST (I .85對(duì)數(shù)值減少(98.6%))較為相似。所有的其它氨基酸測(cè)試所產(chǎn)生的對(duì)數(shù)值減少小于只有甘氨酸和?；悄懰猁}所產(chǎn)生的對(duì)數(shù)值減少。 單獨(dú)的共同萌芽物和與甘氨酸以及?；悄懰徕c的結(jié)合對(duì)梭狀芽孢桿菌NCTC11204孢子的功效
與用精氨酸和天冬氨酸或具有ST的組氨酸來(lái)培養(yǎng)孢子相比，當(dāng)最初篩選的四種最有效氨基酸(精氨酸，天冬氨酸，組氨酸和甘氨酸)一起置于具有ST的溶液，并用梭狀芽孢桿菌孢子培養(yǎng)時(shí)，在熱沖擊之后產(chǎn)生了 CFU/mL為3. 71 (99. 9%)的更大對(duì)數(shù)值減少，但沒(méi)有甘氨酸時(shí)，每個(gè)溶液產(chǎn)生少于一個(gè)對(duì)數(shù)值的減少。梭狀芽孢桿菌孢子萌芽所需的氨基酸最佳濃度的確定
當(dāng)氨基酸的濃度處于10到IOOmM之間時(shí)，在所有的菌株測(cè)試中，梭狀芽孢桿菌孢子的萌芽為最理想。低于這個(gè)濃度時(shí)，在0. ImM及以下濃度處觀察，梭狀芽孢桿菌孢子的萌芽就會(huì)小于一個(gè)對(duì)數(shù)值減少而顯著下降。在所有的梭狀芽孢桿菌菌株中，當(dāng)孢子暴露于IOOmM的氨基酸，而沒(méi)有熱沖擊時(shí)，可以觀察到CFU/mL的顯著下降。氨基酸和?；悄懰猁}鈉對(duì)于梭狀芽孢桿菌PCR核糖核酸型027的不同菌株孢子的功效。暴露于與ST結(jié)合的四種氨基酸的梭狀芽孢桿菌PCR核糖核酸型027的所有菌株產(chǎn)生的對(duì)數(shù)值減少與當(dāng)孢子暴露于硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基和ST所產(chǎn)生的對(duì)數(shù)值減少相似。當(dāng)與甘氨酸和?；悄懰徕c結(jié)合時(shí)，在每個(gè)核糖核酸型027菌株處觀察，天冬氨酸與組氨酸都增加了 CFU/mL的對(duì)數(shù)值減少。然而，當(dāng)加入甘氨酸和ST時(shí)，精氨酸并沒(méi)有引起CFU/mL對(duì)數(shù)值下降的更進(jìn)一步提高。更有趣的是，與R20291菌株相比，對(duì)于硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基或四種氨基酸與ST結(jié)合，兩種臨床菌株(18040和15900)產(chǎn)生顯著的更大的對(duì)數(shù)值下降。對(duì)于六種不同的梭狀芽孢桿菌菌株的孢子，氨基酸和?；悄懰徕c的功效
在暴露于氨基酸和硫乙醇酸鹽溶液之后，觀察到梭狀芽孢桿菌的NCTC I 1204參照菌株產(chǎn)生了 CFU/mL的最大對(duì)數(shù)值減少。在每個(gè)不同的測(cè)試的萌芽溶液中，PGR核糖核酸型001所產(chǎn)生的對(duì)數(shù)值減少與PCR核糖核酸型207所產(chǎn)生的對(duì)數(shù)值減相似。例如，梭狀芽孢桿菌核糖核酸型001和027 R20291在用四種氨基酸和ST培養(yǎng)，并且進(jìn)行熱沖擊后所產(chǎn)生的CFU.Ml的對(duì)數(shù)值減少分別為2. 12 (99. 2%)和I .98 (99%)。
緩沖萌芽溶液的pH值對(duì)梭狀芽孢桿菌NCTC 11204孢子萌芽的效果
緩沖萌芽溶液的PH值大大地影響著用氨基溶液(和ST)培養(yǎng)后，接著進(jìn)行熱沖擊所產(chǎn)生的CFU/mL的對(duì)數(shù)值減少。在酸性的pH為5時(shí)，萌芽溶液沒(méi)有產(chǎn)生任何CFU/mL的對(duì)數(shù)值減少。在中性的ρΗ6· 98時(shí)，所觀察到CFU/mL (99. 9%)中3. 32的對(duì)數(shù)值下降，該pH值為理想的PH值。更大堿性的pH8. 81沒(méi)有增加所觀察到的CFU/mL的對(duì)數(shù)值減少，但程度比酸性pH程度要更小。具有抗菌劑和防腐劑的萌芽溶液對(duì)梭狀芽孢桿菌的效果
將梭狀芽孢桿菌孢子用氨基酸和Tris緩沖液中的?；悄懰猁}混合物培養(yǎng)一小時(shí)，并進(jìn)行熱沖擊后產(chǎn)生CFU/mL (99. 9%減少)的3個(gè)對(duì)數(shù)值減少。然而，如果沒(méi)有熱沖擊，在用氨基酸溶液培養(yǎng)后，剩余孢子的數(shù)量中只有很少的減少(O. 13對(duì)數(shù)值減少)。用包含Tris中的苯扎氯銨或Tris中的苯甲醇來(lái)培養(yǎng)梭狀芽孢桿菌孢子時(shí)，無(wú)論進(jìn)行或沒(méi)有進(jìn)行熱沖擊都產(chǎn)生CFU/mL小于O. 3的非常低的對(duì)數(shù)值減少。然而，當(dāng)梭狀芽孢桿菌孢子用包含氨基酸，?；悄懰猁}，苯扎氯銨和Tris的苯甲醇培養(yǎng)時(shí)，如果用冰處理孢子則有2. 77的CFU/mL對(duì)數(shù)值減少(99. 8%減少)，如果用熱沖擊處理孢子則有2. 99的CFU/mL對(duì)數(shù)值減少(99. 9%減少)。發(fā)明人同樣發(fā)現(xiàn)EDTA和雙氯苯雙胍己烷抑制萌芽溶液，其中苯扎氯銨和苯甲醇并沒(méi)有影響萌芽。苯扎氯銨和苯甲醇并不能殺滅孢子，且不能引發(fā)萌芽。用苯扎氯銨，苯甲醇，氨基酸和?；悄懰徕c培養(yǎng)I小時(shí)之后，沒(méi)有經(jīng)過(guò)熱處理的孢子被殺滅，而孢子似乎與包含苯扎氯銨和苯甲醇的萌芽溶液中發(fā)生萌芽時(shí)才能被殺滅。緩沖液被發(fā)現(xiàn)對(duì)梭狀芽孢桿菌細(xì)胞和其它細(xì)菌沒(méi)有毒性，并有效地使抗菌劑失去活性。因此，用苯扎氯銨，本甲醇，氨基酸和牛磺膽酸鈉培養(yǎng)I小時(shí)后，所產(chǎn)生的CFU/mL的下降不可能是瓊脂板“延續(xù)”效果的結(jié)果。本發(fā)明還發(fā)現(xiàn)苯扎氯銨和苯甲醇不會(huì)影響萌芽溶液的效果。苯扎氯銨和苯甲醇因此展示了防腐功效，并似乎可以殺滅梭狀芽孢桿菌的萌芽孢子。萌芽溶液對(duì)孢子形成的抑制效果
結(jié)果展示在圖9和10中，在萌芽溶液的存在下培養(yǎng)72小時(shí)后，計(jì)數(shù)為100%的仍為營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞，同時(shí)在對(duì)照物中(PBS中培養(yǎng)細(xì)胞)，24小時(shí)后計(jì)數(shù)100%的孢子。這樣的結(jié)果表明本發(fā)明的萌芽溶液阻止了梭狀芽孢桿菌營(yíng)養(yǎng)細(xì) 胞的孢子繁殖。
權(quán)利要求
1.一種抗菌組合物，其特征在于，所述抗菌組合物包括萌芽物和抗菌劑，其中所述萌芽物增加病原體對(duì)來(lái)自抗菌劑的攻擊的易感性，其中所述抗菌劑并不抑制所述萌芽物。
2.一種根據(jù)權(quán)利要求I所述的組合物，其特征自傲與在于，所述萌芽物包括?；悄懰猁}和至少兩種氨基酸。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的組合物，其特征在于，所述?；悄懰猁}為牛磺膽酸鈉，所述至少兩種氨基酸為組氨酸、精氨酸、天冬氨酸、甘氨酸和纈氨酸。
4.根據(jù)前面任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的組合物，其特征在于，細(xì)菌病原體選自梭狀芽孢 桿菌、抗甲氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA)、綠膿桿菌、白色念珠菌和黑曲菌。
5.根據(jù)前面任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的組合物，其特征在于，所述抗菌劑包括苯扎氯銨和苯甲醇。
6.根據(jù)前述任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的組合物，其特征在于，相對(duì)于最終組合物，所述萌芽物的量為I至10禮，而抗菌劑的量為0. 01 %至2%。
7.根據(jù)前述任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的組合物，其特征在于，所述組合物的形式為液體、凝膠、泡沫、噴霧或藥片。
8.一種抗菌抹布，其特征在于，所述抗菌抹布包括用前述任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的組合物浸潰的織物、網(wǎng)或紗布類材料。
9.抗菌洗手液、或者用于涂抹在非生物表面上的涂料或漆，其特征在于，包含根據(jù)權(quán)利要求1-7中任一項(xiàng)所述的組合物。
10.一種消毒表面、從而使得表面基本無(wú)病原體的方法，其特征在于，所述方法包括使所述表面與權(quán)利要求1-7中任一項(xiàng)所述的組合物、或者權(quán)利要求8所述的抗菌抹布、或者權(quán)利要求8所述的涂料接觸足夠長(zhǎng)的時(shí)間，以使病原體萌芽并被殺滅。
全文摘要
本申請(qǐng)涉及一種抗菌組合物，該抗菌組合物包括萌芽物和抗菌劑，其中的萌芽物增加了病原體對(duì)來(lái)自抗菌劑的攻擊的易感性，而其中的抗菌劑并不抑制萌芽物。本申請(qǐng)同樣提供了一種包含這種抗菌組合物的抗菌抹布、洗手液和涂料，以及使用這種組合物對(duì)表面進(jìn)行消毒的方法。
文檔編號(hào)A01N33/12GK102802413SQ201180009870
公開日2012年11月28日 申請(qǐng)日期2011年2月15日 優(yōu)先權(quán)日2010年2月16日
發(fā)明者托尼·沃辛頓, 勞拉·威爾頓 申請(qǐng)人:英賽特保健有限責(zé)任公司