專利名稱：一種蕓薹屬植物對(duì)根腫病抗性的鑒定方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬蕓薹屬作物抗病性鑒定技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及對(duì)根腫病抗性的鑒定方法。
背景技術(shù)：
根月中病(club root)是由蕓蔓根月中 HPlasmodiophora brassicae)侵染植物引起的一種世界性病害。蕓薹根腫菌屬真菌界鞭毛菌亞門(mén)根腫菌綱根腫菌屬 G^aswoi/ioMora)，是專一侵染蕓薹屬植物的致病性病原菌，該病原菌侵入植物根毛、皮層、形成層，產(chǎn)生含有植物生長(zhǎng)激素的病菌分泌物，刺激薄壁細(xì)胞的異常分裂增大，在增生部位膨大形成瘤狀的腫根。腫根的出現(xiàn)一方面降低了根系吸收和供給水份及養(yǎng)份的能力， 造成地上部分失水、枯黃和死亡；另一方面使植物根系失去了外層的保護(hù)作用，易被其它雜菌入侵而引起腐爛。蕓薹屬植物Mra^ica)是根腫菌的專一性寄主，在高溫、高濕和酸性的環(huán)境條件下，有利于病害發(fā)生，可導(dǎo)致作物產(chǎn)量嚴(yán)重下降，甚至絕收。云南是典型的高原紅壤，酸性較重，夏天的時(shí)候氣溫高、濕度大，根腫病發(fā)生嚴(yán)重。雖然經(jīng)過(guò)了諸多年藥劑防治的研究，但根腫病有“植物的癌癥”之稱，藥劑防治效果不突出。應(yīng)用抗病品種預(yù)防根腫病的發(fā)生是最安全而又十分經(jīng)濟(jì)的一種方法。但應(yīng)用抗病品種，首先需要建立品種抗病能力的檢測(cè)方法。蕓薹根腫菌是寄生性真菌，目前尚不能人工培養(yǎng)，所以無(wú)法進(jìn)行人工接種鑒定。傳統(tǒng)的方法是將品種種植在根腫病嚴(yán)重的地塊進(jìn)行檢測(cè)，或?qū)⒏[病病根、菌土帶回單位，搭建小拱棚種植品種，進(jìn)行鑒定。這兩種方法都難以保證鑒定條件的一致性，而且費(fèi)工、費(fèi)時(shí)，難以完成規(guī)?；钠贩N鑒定需求。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是克服現(xiàn)有技術(shù)對(duì)根腫病的抗性鑒定存在難以保證鑒定條件的一致性，費(fèi)工、費(fèi)時(shí)，難以完成規(guī)?；钠贩N鑒定的缺陷和不足，其目的是提供一種蕓薹屬植物對(duì)根腫病抗性的鑒定方法。為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明是通過(guò)以下技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)的 一種蕓薹屬植物對(duì)根腫病抗性的鑒定方法，其步驟如下
(1)培養(yǎng)基質(zhì)的制備
用珍珠巖和打碎的蕓薹根腫菌菌根混合而成的混合物作為培養(yǎng)基質(zhì)，珍珠巖在使用前用PH為5. 0 5. 5的酸性水浸泡72 96小時(shí)以上，珍珠巖與打碎的蕓薹根腫菌菌根混合的比例為1升10 15克；
(2)培養(yǎng)基質(zhì)的填充
用冷凍盒作為培養(yǎng)器皿，將冷凍盒的每一格底部打一個(gè)孔，將培養(yǎng)基質(zhì)填充在冷凍盒的格內(nèi)，培養(yǎng)基質(zhì)的高度低于格子高度2mm 3mm ；
(3)播種
將待鑒定品種的種子播于冷凍盒的格內(nèi)，每一格播1粒種子，播種后再覆蓋一層培養(yǎng)基質(zhì)，使培養(yǎng)基質(zhì)的高度與冷凍盒的格子高度一致，蓋上盒蓋，將冷凍盒置于瓷盤(pán)內(nèi)或不銹鋼盤(pán)內(nèi)；
(4)接種菌液的制備
用1/2MS培養(yǎng)基作為培養(yǎng)液，將打碎的蕓薹根腫菌菌根和所述的培養(yǎng)液混合，制成病 菌孢子含量為IX IO8個(gè)/毫升以上的溶液，用lmol/L的鹽酸溶液調(diào)節(jié)溶液的pH為5. 5即 制成接種菌液；
(5)將接種菌液注入所述的瓷盤(pán)內(nèi)或不銹鋼盤(pán)內(nèi)，使接種液的高度為0.5^1. Ocm ；
(6)每ー鑒定批次用感根腫病的感病品種作為對(duì)照；
(7)將注入了接種菌液的瓷盤(pán)或不銹鋼盤(pán)及其盤(pán)內(nèi)的冷凍盒一起置入人工氣候箱內(nèi)， 30°C暗培養(yǎng)3天，保持空氣濕度在48 52%，3天后，打開(kāi)盒蓋和氣候箱光源，轉(zhuǎn)入光照生 長(zhǎng)，光照時(shí)間12 h/d，光照強(qiáng)度5300 55001x，調(diào)節(jié)空氣濕度在75% 80%，調(diào)節(jié)人工氣候 箱的溫度為 洸で；
(8)病情指數(shù)的調(diào)查統(tǒng)計(jì)
對(duì)照材料在培養(yǎng)基質(zhì)以上的葉片萎蔫和根部腫大時(shí)，按單株病癥分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行調(diào)查統(tǒng) 計(jì)，計(jì)算病情指數(shù)，根據(jù)調(diào)查的病情指數(shù)，按群體抗性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)鑒定出待鑒定品種對(duì)根腫病 的抗性；
所述的單株病癥分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)是 病級(jí)病癥 0級(jí)根不膨大，
1級(jí)根膨大，根直徑< 0. 3厘米， 2級(jí)根膨大，0. 3厘米<根直徑< 0. 6厘米， 3級(jí)根膨大，根直徑> 0. 6厘米； 病情指數(shù)的計(jì)算公式是
權(quán)利要求
1. 一種蕓薹屬植物對(duì)根腫病抗性的鑒定方法，其特征在于步驟如下(1)培養(yǎng)基質(zhì)的制備用珍珠巖和打碎的蕓薹根腫菌菌根混合而成的混合物作為培養(yǎng)基質(zhì)，珍珠巖在使用前用PH為5. 0 5. 5的酸性水浸泡72 96小時(shí)，珍珠巖與打碎的蕓薹根腫菌菌根混合的比例為1升10 15克;(2)培養(yǎng)基質(zhì)的填充用冷凍盒作為培養(yǎng)器皿，將冷凍盒的每一格底部打一個(gè)孔，將培養(yǎng)基質(zhì)填充在冷凍盒的格內(nèi)，培養(yǎng)基質(zhì)的高度低于格子高度2mm 3mm ；(3)播種將待鑒定品種的種子播于冷凍盒的格內(nèi)，每一格播1粒種子，播種后再覆蓋一層培養(yǎng)基質(zhì)，使培養(yǎng)基質(zhì)的高度與冷凍盒的格子高度一致，蓋上盒蓋，將冷凍盒置于瓷盤(pán)內(nèi)或不銹鋼盤(pán)內(nèi)；(4)接種菌液的制備用1/2MS培養(yǎng)基作為培養(yǎng)液，將打碎的蕓薹根腫菌菌根和所述的培養(yǎng)液混合，制成病菌孢子含量為IX IO8個(gè)/毫升以上的溶液，用lmol/L的鹽酸溶液調(diào)節(jié)溶液的pH為5. 5即制成接種菌液；(5)將接種菌液注入所述的瓷盤(pán)內(nèi)或不銹鋼盤(pán)內(nèi)，使接種液的高度為0.5^1. Ocm ；(6)每一鑒定批次用感根腫病的感病品種作為對(duì)照；(7)將注入了接種菌液的瓷盤(pán)或不銹鋼盤(pán)及其盤(pán)內(nèi)的冷凍盒一起置入人工氣候箱內(nèi)， 30°C暗培養(yǎng)3天，保持空氣濕度在48 52%，3天后，打開(kāi)盒蓋和氣候箱光源，轉(zhuǎn)入光照生長(zhǎng)，光照時(shí)間12 h/d，光照強(qiáng)度5300 55001x，調(diào)節(jié)空氣濕度在75% 80%，調(diào)節(jié)人工氣候箱的溫度為 ；(8)病情指數(shù)的調(diào)查統(tǒng)計(jì)對(duì)照材料在培養(yǎng)基質(zhì)以上的葉片萎蔫和根部腫大時(shí)，按單株病癥分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行調(diào)查統(tǒng)計(jì)，計(jì)算病情指數(shù)，根據(jù)調(diào)查的病情指數(shù)，按群體抗性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)鑒定出待鑒定品種對(duì)根腫病的抗性；所述的單株病癥分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)是 病級(jí)病癥 0級(jí)根不膨大，1級(jí)根膨大，根直徑< 0. 3厘米， 2級(jí)根膨大，0. 3厘米<根直徑< 0. 6厘米， 3級(jí)根膨大，根直徑> 0. 6厘米； 病情指數(shù)的計(jì)算公式是
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種蕓薹屬植物對(duì)根腫病抗性的鑒定方法，屬于蕓薹屬作物抗病性鑒定技術(shù)領(lǐng)域。該方法用酸性水浸泡后的珍珠巖與打碎的蕓薹根腫菌菌根按1升10～15克比例混合成培養(yǎng)基質(zhì)，培養(yǎng)基質(zhì)填充在冷凍盒格內(nèi)，待鑒定品種的種子和感根腫病的感病品種種子播于冷凍盒的格內(nèi)，每一格播1粒種子，冷凍盒置于瓷盤(pán)內(nèi)，用1/2MS培養(yǎng)基作和打碎的蕓薹根腫菌菌根制成pH為5.5，病菌孢子含量為1×108個(gè)/毫升以上的接種菌液；接種菌液注入瓷盤(pán)內(nèi)，置入人工氣候箱內(nèi)培養(yǎng)，根據(jù)調(diào)查的病情指數(shù)鑒定待鑒定品種對(duì)根腫病的抗性。該方法可規(guī)?；b定根腫病的抗性，節(jié)省大量土地，保證鑒定條件一致，省時(shí)省工，鑒定結(jié)果準(zhǔn)確可靠，操作簡(jiǎn)便。
文檔編號(hào)A01G7/06GK102511368SQ20111045872
公開(kāi)日2012年6月27日 申請(qǐng)日期2011年12月31日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月31日
發(fā)明者和江明, 楊紅麗, 汪騫, 田志梅, 胡靖鋒, 鐘利 申請(qǐng)人:云南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院園藝作物研究所