專利名稱：建立非人靈長類動物結(jié)核病模型的方法
技術(shù)領域：
本發(fā)明涉及一種建立非人靈長類動物結(jié)核病模型的技術(shù)方法，更具體地說，本發(fā) 明涉及一種建立獼猴結(jié)核病模型的技術(shù)方法。
背景技術(shù)：
自上世紀80年代以來，由于流動人口增加；艾滋病的迅速蔓延，卡介苗預防效果 的有限性以及結(jié)核菌多藥耐藥的出現(xiàn)、傳播等因素，使得一度得到較好控制的結(jié)核病又死 灰復燃，流行趨勢呈明顯上升，給結(jié)核病的預防和治療帶來新的嚴峻挑戰(zhàn)。尋找新的有效 抗結(jié)核病藥物及更為理想的預防性疫苗，成為當今結(jié)核研究領域共同關(guān)注的重大課題。新 型結(jié)核疫苗和治療藥物的效果必須通過結(jié)核動物模型進行評價。小鼠、豚鼠等小動物結(jié)核 病模型，用于藥物的初篩可起到一定的作用。但因這些小動物結(jié)核病模型難以模擬人類結(jié) 核的疾病過程。而非人靈長類動物與人類親緣性最近，結(jié)構(gòu)、生理、免疫應答等均與人類近 似，其結(jié)核病的發(fā)病經(jīng)過、發(fā)展規(guī)律及臨床表現(xiàn)與人類結(jié)核病基本相同。因而世界上條件 較好國家及地區(qū)，均相繼開展建立非人靈長類動物(獼猴)結(jié)核病模型的研究。國外多用 氣溶膠、纖維支氣管鏡法或手術(shù)曝露氣管將結(jié)核菌接種至獼猴肺部而感染動物。但上述方 法存在技術(shù)要求高，設備復雜，實施成本高的缺點，更重要的是制備的動物模型多為單肺 感染，動物感染發(fā)病途經(jīng)與人類自然感染途徑存在區(qū)別。(W. R. Barclay，1970年；Saverio V. Capuano III，2003年；GERALD P. WALSH，1996年)。國內(nèi)也有相似方法建立動物模型的 報道，但是也同樣存在方法復雜，需特殊儀器設備，成本高，難以大規(guī)模推廣，很難滿足大規(guī) 模疫苗和藥物篩選和穩(wěn)定動物模型的需要。發(fā)明技術(shù)內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種建立非人靈長類動物結(jié)核病模型的方法，該方法與國外 已有的方法相比，無需特殊儀器設備，方法簡便，使用成本低，根據(jù)動物實驗研究要求可制 作出用于藥物和疫苗評價的非人靈長類感染結(jié)核病模型。該方法重復性好，成功率高，動物 感染與人類自然感染極其相似。本發(fā)明的另一個目的是提供該方法在制備非人靈長類動物結(jié)核病模型中的應用本發(fā)明公開了一種新的建立非人靈長類動物結(jié)核病模型的方法，該方法包括下列 步驟1)選擇對非人靈長類動物敏感的結(jié)核桿菌；2)活化結(jié)核桿菌，并制備成10-250CFU/毫升濃度的菌懸液；3)沿非人靈長類動物主氣管向肺部方向刺入，以注射方式注入結(jié)核桿菌1-5毫 升；；4)在動物生物安全三級實驗室內(nèi)飼養(yǎng)與觀察16-48周；5)判定動物結(jié)核病陽性模型。在本發(fā)明中，本發(fā)明人有選擇性地選用人型結(jié)核分枝桿菌H37Rv株，作為對非人 靈長類動物敏感的結(jié)核桿菌使用，該菌株登錄在中國醫(yī)學微生物菌種目錄中，保藏號是CMCC 93009，任何符合研究條件的研究者可通過正常渠道從中國醫(yī)學微生物菌種保藏中心 索取。在本發(fā)明中，本發(fā)明人在活化人型結(jié)核分枝桿菌H37Rv株后，將菌株制備成 10-250CFU/毫升濃度的菌懸液1-5毫升注射入非人靈長類動物，本發(fā)明人將菌株制備成 50CFU/毫升濃度的菌懸液2毫升注射入非人靈長類動物。本發(fā)明還公開了一種優(yōu)化的建立非人靈長類動物結(jié)核病模型的方法，該方法包括 下列步驟1)選擇人型結(jié)核分枝桿菌H37Rv株；2)活化人型結(jié)核分枝桿菌H37Rv株，并制備成50CFU/毫升濃度的菌懸液；3)用一次性注射器或留置針經(jīng)皮穿刺氣管內(nèi)滴注法沿非人靈長類動物主氣管向 肺部方向刺入，注射方式注入結(jié)核桿菌2毫升；4)飼養(yǎng)與觀察16-48周；5)判定動物結(jié)核病陽性模型。在本發(fā)明中，本發(fā)明人采用經(jīng)皮氣管內(nèi)穿刺法在實驗猴上接種結(jié)核分枝桿菌后， 實驗猴表現(xiàn)食欲降低，咳嗽，甚至嗜睡，體重下降等癥狀?？蓹z測到抗結(jié)核分枝桿菌抗體IgM 和IgG，結(jié)核抗原刺激PBMC后IFN-Y產(chǎn)生水平明顯增加；結(jié)核菌素皮膚試驗(OT)反應呈 陽性，X光檢查可見肺部病變，剖檢可見雙肺結(jié)核樣病變，并可從肺和胸腔淋巴結(jié)中分離大 量結(jié)核分枝桿菌。動物感染的情況與已前報道的其它感染模型動物的癥狀類似。菌種準備時取能引起感染小鼠2周左右發(fā)生半數(shù)死亡的結(jié)核分枝桿菌H37Rv株菌 種保藏斜面一支，用無菌接種環(huán)刮取斜面上的菌苔少許，接種于新鮮改良羅氏培養(yǎng)基斜面 上，置37°C培養(yǎng)3周。使用無菌的培養(yǎng)環(huán)，刮取斜面上所有菌苔，準確稱量后置于無菌研缽 內(nèi)研磨，按10 20毫克/毫升加入無菌生理鹽水，邊加邊磨，直至完全分散地呈均勻混濁 的菌液。將該菌懸液用定量無菌吸管分裝到1. 5毫升容量的凍存管內(nèi)，每管1毫升，放入做 有標記的凍存盒內(nèi)，放入_80°C冰箱凍存，作為菌種保存管。將以上凍存菌液管的菌落進行平板培養(yǎng)計數(shù)，根據(jù)計數(shù)結(jié)果所得菌液濃度，按動 物感染的實際需要的細菌數(shù)個數(shù)(CFU)，用無菌生理鹽水進行定量稀釋至10-250CFU/毫升 濃度即可作感染用菌液。選擇2-3歲雌性和雄性中國恒河猴，排查分枝桿菌、志賀菌、沙門菌、猴逆轉(zhuǎn)錄D病 毒、猴免疫缺陷病毒、猴嗜τ淋巴細胞病毒I型、猴B病毒、糞類圓線蟲、肺螨等病原物生物 感染。接種細菌為結(jié)核分枝桿菌H37Rv株，接種途徑為經(jīng)皮氣管穿刺滴注法，每只動物接種 10-250CFU結(jié)核分枝桿菌H37Rv株1_5毫升。所有動物按照AAALAC認證要求飼養(yǎng)與ABSL-3 實驗室內(nèi)。接種后的動物臨床表現(xiàn)觀察，在第9周和10周開始陸續(xù)出現(xiàn)食欲下降，隨時間觀 察體重略有下降，到M周時，體重可下降8%至20%，在第6周開始，可觀察到咳嗽。在6 周檢測到血沉值顯著升高。CRP(C反應蛋白)值也顯著升高。從臨床癥狀和實驗室檢查分 析，實驗猴感染結(jié)核病，并且癥狀與人結(jié)核病相似。感染后的免疫學表現(xiàn)，在第6周OT試驗均為陽性，結(jié)核特異性抗體IgM和IgG水 平于感染后第8周開始均有明顯升高，經(jīng)ELISP0T法檢測結(jié)核抗原刺激PBMC的IFN- γ產(chǎn) 生水平，從感染后第6周開始顯著升高。
胸部X光檢查，從感染后第8周開始均可觀察到肺部病變多以雙肺病變?yōu)橹鳌嶒瀯游锸w解剖進行大體病理學及組織病理學檢查，尸體解剖觀察到病變以雙 肺病變?yōu)橹鳎?0%的感染動物可累及肝、脾、腎組織。顯微鏡下可見左右肺結(jié)核病變，以細胞 性、混合性、干酪樣壞死性的結(jié)節(jié)融合成大小不等的結(jié)核病灶；肺門淋巴結(jié)以干酪樣病灶為主。組織細菌載量檢測，感染動物的肺和胸腔淋巴結(jié)中均可分離出大量結(jié)核分枝桿 菌，每克組織的細菌載量可達104-108CFU。采用本發(fā)明的方法，無需特殊儀器設備，成本比常規(guī)方法降低60%，重復性好，并 且成功率達100%，可滿足疫苗和藥物篩選對大量和穩(wěn)定動物模型的需要。本發(fā)明與現(xiàn)在技術(shù)相比存在下列優(yōu)點1.與小型動物相比，我們采用非人靈長類動物建立動物模型具有的優(yōu)點目前已 公開的結(jié)核病動物模型中，小鼠和豚鼠模型使用較多，其中小鼠模型主要是通過尾靜脈方 式和氣溶膠經(jīng)呼吸道方式感染，但由于其對結(jié)核菌并不易感，感染菌量通常要達到IO5CFU 以上，并且病變結(jié)果與人類結(jié)核病表現(xiàn)有差異；豚鼠對結(jié)核菌易感染，但市場上缺少用于豚 鼠的免疫試劑，因此在抗結(jié)核疫苗評價方面存有缺陷。與小鼠和豚鼠模型相比，非人靈長類 動物在生理上更接近人類的特點，對結(jié)核菌更易感，用非人靈長類動物(恒河猴和食蟹猴) 應用于結(jié)核病致病機制的研究和藥物篩選和疫苗評價具有無可替代的優(yōu)越性。2.與傳統(tǒng)接種方法相比，本發(fā)明具有成本低和操作容易的優(yōu)點在已報道的結(jié)核 病非人靈長類動物模型當中，大多數(shù)為經(jīng)氣溶膠方式感染、經(jīng)纖維支氣管鏡方式感染和手 術(shù)曝露氣管法感染。這些方法在推廣使用方面具有一定缺陷，首先是使用成本高，需要特殊 儀器和設備，技術(shù)要求高，纖維支氣管鏡的購置成本需要幾十萬人民幣，氣溶膠感染方式， 設施要求高，一次性投資需要幾百萬甚至上千萬元人民幣，在近二十年國內(nèi)外已無相關(guān)報 道，而手術(shù)曝露氣管穿刺法需先切開氣管部位的皮膚，充分曝露氣管，再用注射器進行氣管 穿刺，不僅費時，對動物損傷較大，且術(shù)后難以管理，容易引起術(shù)后感染，從而影響疾病模型 的發(fā)展。3.本發(fā)明制備的動物模型感染過程與自然感染的相似最近幾年，國內(nèi)外報道經(jīng) 纖維支氣管鏡方式將細菌直接送至肺葉段的模型建立方法較多，忽略了上呼吸道黏膜的免 疫保護作用，無法模擬結(jié)核菌經(jīng)上呼吸道自然感染機體的過程。而我們將結(jié)核菌菌液直接 經(jīng)皮氣管穿刺注入氣管內(nèi)，此途徑與自然感染相似，特別是在疫苗評價方面，該模型可發(fā)揮 黏膜免疫對結(jié)核菌的作用。4.本發(fā)明制備的動物模型感染結(jié)果與人類疾病的相似從實驗結(jié)果來看，經(jīng)皮氣 管穿刺方式不僅操作簡便，而且在感染菌量相同情況下下，該方法同樣可以建立不同疾病 程度動物模型。與近期使用較廣泛的經(jīng)纖維支氣管鏡方式比較，纖維支氣管鏡方式以右肺 病變?yōu)橹?，而?jīng)皮氣管穿刺法感染的動物大多數(shù)出現(xiàn)雙肺感染，與人類肺結(jié)核雙肺感染較 多的疾病表現(xiàn)更相似。


圖1.結(jié)核菌素皮膚試驗陽性的中國恒河猴面部2.纖維支氣管鏡感染獼猴結(jié)核病模型的肺部圖
A.大體標本圖 B. X光圖片圖3.經(jīng)皮氣管穿刺法感染猴獼猴結(jié)核病模型的肺部圖A.大體標本圖 B. X光圖片
具體實施例方式下面結(jié)合具體的實施例來進一步闡述本發(fā)明。應當理解，這些實施例僅用于說明 本發(fā)明，而不能限制本發(fā)明的保護范圍。實施例實施例1 結(jié)核菌的制備感染動物所用的菌種為人型結(jié)核分枝桿菌H37Rv株，取IX IO7CFU能引起感染小 鼠2周左右發(fā)生半數(shù)死亡(經(jīng)預試確定)的結(jié)核分枝桿菌H37Rv株菌種保藏斜面一支，用無 菌接種環(huán)刮取斜面上的菌苔少許，接種于新鮮改良羅氏培養(yǎng)基斜面上，置37°C培養(yǎng)3周。使 用無菌的培養(yǎng)環(huán)，刮取斜面上菌苔，準確稱量后置于無菌研缽內(nèi)研磨，按10 20毫克/毫 升加入無菌生理鹽水，邊加邊磨，直至完全分散地呈均勻混濁的菌液。將該菌懸液用定量無 菌吸管分裝到1. 5毫升容量的凍存管內(nèi)，每管1毫升，放入做有標記的凍存盒內(nèi)，放入-80°C 冰箱凍存，作為菌種保存管。將以上凍存菌液管的菌落進行平板培養(yǎng)計數(shù)，根據(jù)計數(shù)結(jié)果所得菌液濃度，按動 物感染的實際需要的細菌數(shù)個數(shù)(CFU)，用無菌生理鹽水進行定量稀釋至50CFU/毫升即可 作感染用菌液。實施例2 動物感染所使用的動物為非人靈長類動物，包括恒河猴和食蟹猴。每只動物肌注鹽酸氯胺 酮(10毫克/公斤)麻醉后，將其仰臥于操作臺上，后頸部墊一個沙袋，使頸部氣管充分暴 露。用碘酒酒精消毒術(shù)部皮膚后，操作者用左手拇指和食指固定頸部的主氣管，右手持留置 針(22G)，穿刺點位于頸下2 3厘米，從兩氣管環(huán)之間刺入，將吸有2毫升生理鹽水的注 射器針插入留置針上，回抽注射器芯，如有氣體進入注射器表明刺入成功，如果無氣泡進入 注射器則應重新刺入。刺入成功后再將裝有2毫升菌液的注射器插入留置針，緩慢注入菌 液，再接上裝有1毫升無菌生理鹽水的注射器，注入1毫升無菌生理鹽水沖洗留置針內(nèi)部殘 留菌液。注射結(jié)束后，使動物保持坐姿直至麻醉蘇醒后放回隔離器內(nèi)繼續(xù)觀察。實施例3 飼養(yǎng)觀察感染后每日觀察動物的精神狀態(tài)、呼吸、飲食、咳嗽、排泄等表現(xiàn)，并進行記錄評 分，定期稱量體重和體溫，采集血液檢測血液學和生化指標。連續(xù)觀察16周，最長至48周。實施例4 判定動物結(jié)核病陽性模型的檢測和診斷。4. 1舊結(jié)核菌素(OT)皮膚試驗動物于感染后第6周進行一次OT皮試。動物經(jīng)肌注鹽酸氯胺酮麻醉后，仰臥于操 作臺上，用75%酒精小心消毒雙眼瞼皮膚(酒精不得入眼)后，一側(cè)用1毫升注射器G 4. 5號針頭)，在上眼瞼部皮內(nèi)注射0. 1獸用結(jié)核菌素(TuberculinMammalian，Synbiotics， US)，另一側(cè)注射同樣量無菌生理鹽水。注射后M、48、72小時觀察結(jié)果。結(jié)果觀察注射部位眼瞼無反應(_)；注射部位輕微擦傷或瘀傷(+)；
注射部位不同程度紅斑而無腫脹(++)；注射部位不同程度紅斑并有輕微腫脹，或輕微腫脹而無紅斑(+++)；注射部位明顯紅腫和眼瞼下垂，且有不同程度紅斑(++++)；注射部位有紅腫和破潰，甚至眼瞼閉合(+++++)。鹽水對照側(cè)無反應，結(jié)核菌素側(cè)出現(xiàn)++及以上者皮試判為陽性。4. 2結(jié)核特異性抗體(IgM、IgG)檢測于-1周、6周、12周各組動物取靜脈血分離血清用ELISA間接法檢測每只動物血 清中的結(jié)核特異性IgM及IgG抗體，作為動物結(jié)核感染的輔助診斷指標之一。4. 3特異性的細胞免疫功能檢測本研究選擇目前國際多數(shù)承認的ELISP0T法檢測動物外周血單個核細胞(PBMC) 經(jīng)結(jié)核抗原刺激后產(chǎn)生IFN-γ的水平，作為結(jié)核特異性細胞免疫功能指標。如動物感染了 結(jié)核，且細胞免疫功能正常，其外周血PBMC體外再次受結(jié)核抗原刺激，即能分泌IFN-Y。 如動物未受結(jié)核抗原感染，其外周血PBMC體外受結(jié)核抗原刺激，不能分泌IFN-γ。因此，該 試驗也可作為動物是否感染結(jié)核菌的重要參考指標。于-1、6、12周各組動物取靜脈血用淋巴細胞分層液立即分離每個動物的PBMC進 行ELISP0T試驗。-1表示在接種結(jié)核菌前一周。4. 4胸部X光檢查于_1、4、8、12、16、20、對周各時間點各組動物均進行胸部乂光拍片檢查。胸片用 數(shù)字式X光機拍攝，拍攝于動物麻醉后進行。拍攝由有經(jīng)驗的專業(yè)技術(shù)人員按數(shù)字式X光 機操作程序進行。每只動物拍攝前后位、右側(cè)位或左側(cè)位兩張胸片。拍攝結(jié)束由放射科醫(yī) 生閱片并報告結(jié)果。4. 5實驗動物尸體解剖進行大體病理學及組織病理學檢查感染后的實驗動物觀察M周，在安樂死( 周前已死亡或處于瀕死狀態(tài)的動物， 隨時進行安樂死，立即解剖，不能即使解剖者放_40°C冰箱冷凍保存)后進行尸體解剖。動 物體表消毒后置生物安全解剖柜內(nèi)進行尸體解剖。臟器組織均置10%中性福爾馬林液固定。按常規(guī)方法將組織進行脫水、透明、浸 蠟、包埋、切片、染色，最后在顯微鏡下觀察其組織病理改變，判斷病變特征及病變程度。4. 6.組織細菌載量檢測4. 6. 1.組織勻漿將肺組織及胸腔淋巴結(jié)準確稱重后，分別置于做有標記的50毫 升溶量離心管內(nèi)。每個肺組織樣本加入5毫升無菌PBS-tweenSO，用PR0250型組織勻漿器 取最大速度勻漿60秒；每個淋巴組織標本加入10毫升無菌PBS-tweenSO，以同樣速度勻漿 120 秒。4.6.2.稀釋勻漿液將勻漿后的組織(原液)取1毫升用無菌PBS作10倍系列 稀釋，直至稀釋到1X107。剩余原液儲存于-40°c冰箱，以備復檢用。4. 6. 3.接種培養(yǎng)將每個稀釋度的勻漿取100毫升，分別接種到7H11-0ADC培養(yǎng) 基平皿內(nèi)，做好標記，于每個平皿放入10 12粒3毫米直徑的無菌玻璃珠，將平皿置平面 上輕輕旋轉(zhuǎn)10次，使標本均勻地分布于平皿表面，將玻璃珠倒入玻璃缸，立即蓋上皿蓋。將 平皿底部朝上放入塑料培養(yǎng)袋內(nèi)扎緊袋口，置37°C培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)3 4周。4. 6. 4.菌落計數(shù)將平皿從培養(yǎng)袋取出，放于菌落計數(shù)器上計數(shù)每個平皿內(nèi)的菌落數(shù)。計數(shù)時，小于30個，大于300個菌落的平皿均不予計數(shù)，只計數(shù)30 300個菌落之 間的平皿菌落數(shù)(若所有稀釋度的菌落數(shù)均不在計數(shù)區(qū)間，如均大于300，則取最高稀釋度 的平均菌落數(shù)；如均小于30，則從最低稀釋度的平均菌落進行計算)。計數(shù)完畢后，將計數(shù) 兩個平皿的均數(shù)乘以稀釋倍數(shù)再乘以10，除以組織的重量(克)，即得出該組織每克的菌落 數(shù)(CFU/克).5.與纖維支氣管鏡感染方法的比較WZA07，WZA08，WZA09，WZAlO號猴經(jīng)纖維支氣管鏡感染100CFU結(jié)核菌，實驗操作人 員2人，耗時約160分鐘完成。WZAl 1，WZA12，WZA13，WZA14號猴經(jīng)皮氣管穿刺法感染100CFU 結(jié)核菌，實驗操作人員1人，耗時約40分鐘完成。所有動物均飼養(yǎng)與生物安全3級實驗室 內(nèi)。在感染后第6周，所有動物結(jié)核菌素皮膚試驗結(jié)果均為陽性，證明均感染成功。胸部X光和病理學檢查結(jié)果對比經(jīng)纖維支氣管鏡法感染動物以右肺病變?yōu)橹鳎?而經(jīng)皮氣管穿刺感染動物已雙肺感染為主，更接近自然感染，見下表
WZA07經(jīng)支氣管鏡 WZA08 WZA09WZAlOWZAll經(jīng)皮氣管穿刺 WZA12 WZA13WZA14X光改右肺雙肺右肺右肺雙肺雙肺右肺雙肺變肺結(jié)核右肺雙肺右肺右肺左肺雙肺雙肺雙肺性病理(右肺為間改變質(zhì)性肺炎)6.感染成功率我們在2010年的實驗中用100CFU結(jié)核桿菌經(jīng)皮氣管穿刺滴注法感染了 WZAl 1， WZA12，WZA13，WZA14號共4只恒河猴，經(jīng)結(jié)核菌素檢測所有實驗猴均為陽性，胸部X線診斷
均為肺結(jié)核)
WZAllWZA12WZA13WZA14TST(結(jié)核菌素皮膚試驗)++++++++++++++++++++X光改變雙肺結(jié)核雙肺結(jié)核右肺結(jié)核雙肺結(jié)核肺結(jié)核性病理改變左結(jié)核結(jié)節(jié)結(jié)核結(jié)節(jié)結(jié)核結(jié)節(jié)結(jié)核結(jié)節(jié)感染成功率100%
權(quán)利要求
1.一種建立非人靈長類動物結(jié)核病模型的方法，該方法包括下列步驟(1)選擇對非人靈長類動物敏感的結(jié)核桿菌；(2)活化結(jié)核桿菌，并制備成10-250CFU/毫升濃度的菌懸液；(3)沿非人靈長類動物主氣管向肺部方向刺入，以注射方式注入結(jié)核桿菌1-5毫升；；(4)在動物生物安全三級實驗室內(nèi)飼養(yǎng)與觀察16-48周；(5)判定動物結(jié)核病陽性模型。
2.根據(jù)權(quán)利要求1中建立非人靈長類動物結(jié)核病模型的方法，對非人靈長類動物敏感 的結(jié)核桿菌是人型結(jié)核分枝桿菌H37Rv株。
3.根據(jù)權(quán)利要求1中建立非人靈長類動物結(jié)核病模型的方法，菌懸液細胞濃度是 200CFU/ 毫升。
4.根據(jù)權(quán)利要求1中建立非人靈長類動物結(jié)核病模型的方法，該方法包括下列步驟(1)選擇人型結(jié)核分枝桿菌H37Rv株；(2)活化人型結(jié)核分枝桿菌H37Rv株，并制備成50CFU/毫升濃度的菌懸液；(3)用一次性注射器或留置針經(jīng)皮穿刺氣管內(nèi)滴注法沿非人靈長類動物主氣管向肺部 方向刺入，注射方式注入結(jié)核桿菌2毫升；(4)在動物生物安全三級實驗室內(nèi)飼養(yǎng)與觀察16-48周；(5)判定動物結(jié)核病陽性模型。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種新的建立非人靈長類動物結(jié)核病模型的方法，該方法無需特殊儀器設備，使用成本低，根據(jù)生物醫(yī)學評價新型疫苗和藥物效果的需要可制作出非人靈長類感染結(jié)核病模型。該模型動物感染與人類自然感染極其相似。本方法滿足大規(guī)模疫苗和藥物篩選和穩(wěn)定動物模型的需要。
文檔編號A61D7/00GK102138833SQ20111010628
公開日2011年8月3日 申請日期2011年4月26日 優(yōu)先權(quán)日2011年4月26日
發(fā)明者唐志佼, 孫理華, 張晶, 王勇, 郭銘, 霍文哲, 鮮巧陽 申請人:武漢大學