專利名稱：獼猴屬靈長類動物電刺激精液采集方法
技術領域：
本發(fā)明屬于動物生殖方法，特別是采集獼猴屬靈長類動物精子的方法。
背景技術：
獼猴屬靈長類動物，如獼猴、食蟹猴、熊猴、藏酋猴等是人類的近親，其組織結 構， 生理生化、免疫和代謝等方面與人類高度相似，是建立病毒等傳染性疾病模型、精神神經性 疾病模型、心血管疾病模型、腫瘤模型和生殖生理等研究的最佳實驗動物。但由于野外生存 環(huán)境的持續(xù)惡化和破壞，野生靈長類動物繁殖能力及必要條件逐漸下降和喪失，獼猴屬中 各靈長類物種已成為珍稀瀕危動物，并被列為國家一、二級保護動物。隨著人口的增加和環(huán) 境的惡化，一方面人類面臨一些重大功能性疑難疾病的不斷困擾，需要大量獼猴動物用于 自然科學研究和解決人口與健康問題，另一方面，這些動物的飼養(yǎng)和繁殖以及相應的設施 等卻非常昂貴。因此，保護和保存實驗動物資源被提升為國家戰(zhàn)略性研究資源需求。運用 生殖輔助技術，例如體外受精，人工授精等技術可以有效地提高雄猴的利用率和利用價值， 并且可以縮短繁殖周期并有效地提高繁殖和生產動物的效率，減少疾病傳播。電刺激采集精液是靈長類動物人工授精，體外受精和精子生物學研究的基本手 段。靈長類動物目前的精液采集常用的方法有直腸電刺激采精法和陰莖電刺激采精法。直 腸刺激法在采精前需要沖洗排除動物直腸內糞便，采集時需要將電極準確放置于前列腺部 位，該部位容易刺激膀胱等器官而造成精液被尿液污染，該方法步驟繁瑣且不衛(wèi)生健康。常 規(guī)的靈長類動物陰莖電刺激法多用鋁箔、銅網等直接纏繞動物的陰莖，金屬電極與皮膚直 接接觸，由于該類動物陰莖結構不同，陰莖和電極之間的接觸狀況及陰莖表皮阻抗不同，藏 酋猴和熊猴陰莖近龜頭端和龜頭后緣背側分布有密集的刺狀角質乳頭，要使金屬電極與陰 莖表面均勻接觸幾乎不可能，容易產生局部電流過大使陰莖表皮燒傷甚至上皮損傷。因此， 提高獼猴屬靈長類動物精液采集的成功率并避免操作過程對動物造成損傷是本領域亟待 解決的問題。

發(fā)明內容
為了克服現有技術步驟繁瑣且污染采集或易灼傷動物陰莖表皮等弊端，本發(fā)明的 目的是提供一種可廣泛應用于獼猴屬各靈長類物種的陰莖電刺激精液采集方法，提高精液 采集成功率和采集質量。本發(fā)明目的通過以下步驟實現(1)將性成熟的靈長類動物用鹽酸氯胺酮以3_4mg/kg體重肌肉注射輕度麻醉，動 物保定仰式，清理、消毒陰莖區(qū)域；(2)取兩塊經生理鹽水充分浸潤2cm寬、4-5cm長的脫脂棉，分別包裹兩條3_5mm 寬、6-7cm長的鋁箔紙條制成兩個陰莖刺激電極條；(3)將電極條分別環(huán)繞在動物陰莖基部和近龜頭端，電極條環(huán)繞連接點用導線與 脈沖電源連接；
(4)接通脈沖電源，脈沖頻率設置為甚低頻；電壓從OV開始，以5-lOVs速度遞增， 每遞增一次持續(xù)刺激10-15s，直至60V ；(5)射精即停止刺激，收集精液于37°C孵育30分鐘，分離出液體部分的精液。 所述的脈沖電壓的遞增速度為lOV/s。所述的脈沖電壓為對稱方波，其頻率為17Hz，脈寬為17ms。所述動物陰莖基部電極連脈沖電源正極，近龜頭端電極連脈沖電源負極。所述方法可以按步驟⑷進行6-7次刺激，每兩次刺激之間間隔20-30s。本發(fā)明具有的進步是本發(fā)明利用生理鹽水浸潤脫脂棉包裹鋁箔制成與陰莖有良好接觸的電極條，使得 電極的導電性能不受影響，并避免了局部電流過大灼傷陰莖的現象，對于動物陰莖表皮具 有良好的保護效果。本發(fā)明還確定了獼猴屬靈長類動物陰莖電刺激精液采集所需的電壓范圍，間隔時 間、脈沖頻率、脈寬、占空比等基本參數，能夠提高精液采集的成功率和質量。本發(fā)明與環(huán)境友好、保護動物、且取材容易，操作簡便，節(jié)省材料。以下通過具體實施例對本發(fā)明的技術方案做進一步描述，實施例應被理解為對本 發(fā)明的詮釋而非對本發(fā)明保護范圍的限制。
具體實施例方式實施例1用鹽酸氯胺酮以4mg/kg體重肌肉注射輕度麻醉熊猴，將動物保定為仰式。用生理 鹽水清理猴子陰莖區(qū)域，并用75%的醫(yī)用酒精對陰莖表面消毒處理。準備兩條5mm寬、7cm 長的鋁箔紙條，分別用脫脂棉包裹，并用生理鹽水分別充分浸潤制成兩個電極條。將這兩個 電極條分別環(huán)繞在動物的陰莖基部和近龜頭端，使電極條與猴子陰莖表面皮膚充分接觸。 將電極條通過導線分別連接脈沖輸出電流的正極和負極。將脈沖電流的頻率設置為17Hz， 脈寬為17ms，占空比1，接通電源，電壓從OV開始，以5V/s速度升高電壓，每增加IOV持續(xù) 刺激15s，然后再以相同速度增加5V直至60V。如有必要可進行6-7次刺激，每兩次刺激之 間間隔30s的休息時間。猴子射精則立即停止刺激。采集的熊猴精液，未發(fā)生熊猴陰莖表皮灼傷現象。精液體積為3. 2mL，其中液體部 分為1. 2mL，精子濃度為11. 5 X108/mL，精子運動度為81%，形態(tài)正常的精子占74%。實施例2用鹽酸氯胺酮以3mg/kg體重肌肉注射輕度麻醉獼猴，將動物保定為仰式。用生理 鹽水清理猴子陰莖區(qū)域，并用75%的醫(yī)用酒精對陰莖表面消毒處理。準備兩條3mm寬、5cm 長的鋁箔紙條，分別用脫脂棉包裹，并用生理鹽水分別充分浸潤制成兩個電極條。將這兩個 電極條分別環(huán)繞在動物的陰莖基部和近龜頭端，使電極條與猴子陰莖表面皮膚充分接觸。 將電極條通過導線與脈沖電流輸出口相連接。陰莖基部電極連正極，近龜頭端電極連負極。 將輸出方波的頻率設置為15Hz，脈寬為17ms，占空比1，接通電源，電壓從OV開始，以IOV/ s速度升高電壓，每增加IOV持續(xù)刺激10s，再以IOV遞增直至60V。重復6_7次刺激，每兩 次刺激之間間隔30s的休息時間。猴子射精時立即停止刺激。采集的獼猴精液，未發(fā)生獼猴陰莖表皮灼傷現象。精液體積為2mL，其中液體部分為0. 7mL，精子濃度為12. 6X108/mL，精子運動度為85%，形態(tài)正常的精子占78%。實施例3.
用鹽酸氯胺酮以3mg/kg體重肌肉注射輕度麻醉食蟹猴，將動物保定為仰式。用生 理鹽水清理猴子陰莖區(qū)域，并用75%的醫(yī)用酒精對陰莖表面消毒處理。準備兩條3mm寬、 5cm長的鋁箔紙條，分別用脫脂棉包裹，并用生理鹽水分別充分浸潤制成兩個電極條。將這 兩個電極條分別環(huán)繞在動物的陰莖基部和近龜頭端，使電極條與猴子陰莖表面皮膚充分接 觸。將電極條通過導線與脈沖電流輸出口相連接。陰莖基部電極連正極，近龜頭端電極連 負極。將脈沖輸出方波的頻率設置為18Hz，脈寬為17ms，占空比1，起始電壓為0V，接通電 源，以lOV/s的速度升高電壓，每增加IOV持續(xù)刺激10s，然后再以相同速度增加IOV直至 60V。重復6-7次刺激，每兩次刺激之間間隔30s的休息時間。猴子射精時立即停止刺激。采集的獼猴精液，未發(fā)生食蟹猴陰莖表皮灼傷現象。精液體積為1. 8mL，其中液體 部分為0. 5mL，精子濃度為10. 5 X108/mL，精子運動度為79%，形態(tài)正常的精子占74%。實施例4 用鹽酸氯胺酮以3mg/kg體重肌肉注射輕度麻醉藏酋猴，將動物保定為仰式。用生 理鹽水清理猴子陰莖區(qū)域，并用75%的醫(yī)用酒精對陰莖表面消毒處理。準備兩條3mm寬、 5cm長的鋁箔紙條，分別用脫脂棉包裹，并用生理鹽水分別充分浸潤制成兩個電極條。將這 兩個電極條分別環(huán)繞在動物的陰莖基部和近龜頭端，使電極條與猴子陰莖表面皮膚充分接 觸。將電極條通過導線分別連接脈沖電流輸出口正極和負極。將脈沖輸出設置為方波、頻 率17Hz，脈寬為17ms，占空比1。接通電源，電壓從OV開始，以lOV/s的速度升高電壓，每增 加IOV持續(xù)刺激10s，再以相同速度增加IOV直至60V。重復6-7次刺激，每兩次刺激之間 間隔30s的休息時間。猴子射精時立即停止刺激。采集的藏酋猴精液，未發(fā)生藏酋猴陰莖表皮灼傷現象。精液體積為6. 3mL，其中液 體部分為2. lmL，精子濃度為45. 6 X 108/mL，精子運動度為82%，形態(tài)正常的精子占78%。
權利要求
獼猴屬靈長類動物電刺激精液采集方法，包括如下步驟(1)將性成熟的靈長類動物用鹽酸氯胺酮以3-4mg/kg體重肌肉注射輕度麻醉，動物保定仰式，清理、消毒陰莖區(qū)域；(2)取兩塊經生理鹽水充分浸潤2cm寬、4-5cm長的脫脂棉，分別包裹兩條3-5mm寬、6-7cm長的鋁箔紙條制成兩個陰莖刺激電極條；(3)將電極條分別環(huán)繞在動物陰莖基部和近龜頭端，電極條環(huán)繞連接點用導線與脈沖電源連接；(4)接通脈沖電源，脈沖頻率為甚低頻，電壓從0V開始，以5-10V/s速度遞增，每遞增一次持續(xù)刺激10-15s，直至60V；(5)射精即停止刺激，收集精液于37℃孵育30分鐘，分離出液體部分的精液。
2.根據權利要求1所述的采集方法，其特征在于脈沖電壓的遞增速度為lOV/s。
3.根據權利要求1、2所述的采集方法，其特征在于脈沖電壓為對稱方波，其頻率為 17Hz，脈寬為 17ms。
4.根據權利要求1、2所述的采集方法，其特征在于動物陰莖基部電極連脈沖電源正 極，近龜頭端電極連脈沖電源負極。
5.根據權利要求3所述的采集方法，其特征在于動物陰莖基部電極連脈沖電源正極， 近龜頭端電極連脈沖電源負極。
6.根據權利要求1、2所述的采集方法，其特征在于按步驟(4)進行6-7次刺激，每兩次 刺激之間間隔20-30s。
7.根據權利要求3所述的采集方法，其特征在于按步驟(4)進行6-7次刺激，每兩次刺 激之間間隔20-30S。
8.根據權利要求4所述的采集方法，其特征在于按步驟(4)進行6-7次刺激，每兩次刺 激之間間隔20-30S。
9.根據權利要求5所述的采集方法，其特征在于按步驟(4)進行6-7次刺激，每兩次刺 激之間間隔20-30S。
全文摘要
獼猴屬靈長類動物電刺激精液采集方法，屬于動物生殖方法，特別是采集獼猴屬靈長類動物精子的方法。本發(fā)明用生理鹽水浸潤脫脂棉包裹的鋁箔電極環(huán)繞在被麻醉動物陰莖部位，并與脈沖電源連接；電壓從0V開始，每增加10V持續(xù)刺激10-15s，直至60V；必要時循環(huán)6-7次，每兩次間隔20-30s；收集的精液經孵育、分離，可用于受精。本發(fā)明能提高動物精液采集成功率，且無污染，與自然交配精液指標相似，可用于體外受精和人工授精。
文檔編號A61D19/02GK101869512SQ201010198699
公開日2010年10月27日 申請日期2010年6月12日 優(yōu)先權日2010年6月12日
發(fā)明者司維, 季維智, 牛昱宇, 王宏, 紀少琿 申請人:昆明亞靈生物科技有限公司