專利名稱：同期發(fā)情制劑和有效的無cidr方案的制作方法
技術領域：
A.技術領域
本發(fā)明總體上涉及發(fā)情動物的人工授精及胚胎轉移領域，更具體而言，本發(fā)明涉及用于促進、管理和控制這種動物的同期發(fā)情的方案和藥物。
背景技術：
B.同期發(fā)情
在動物繁殖中，“同期發(fā)情”通常指使用激素處理和輔助方案人工地使整個雌性動物群的發(fā)情周期同步化。所述動物可包括諸如反芻動物或不行經的有胎盤雌性的哺乳動物，例如母牛。由于同期發(fā)情的很多經濟利益，養(yǎng)牛者尋求他們的牛群的同期發(fā)情。首先，同期發(fā)情可以減少母牛生小牛之后能夠開始再懷孕的天數(shù)。這種縮短了的間隔增加了母牛在她一生中能夠產下的后代的數(shù)量。第二，并且可能是最重要的，由于任何特定的繁殖周期是有限的持續(xù)時間(例如45到90天)，并且還可能需要在授精之后花18-21天來確認懷孕，所以，盡可能多地，盡可能快地，優(yōu)選，在繁殖周期開始時的第一次嘗試，確認獸群中的懷孕是非常有價值的。如果整個獸群在繁殖周期的第一周可以同期發(fā)情，那么在繁殖周期的剩余時間里通常有充足的機會來第二和第三次受孕，而沒有實現(xiàn)早期發(fā)情的那些獸群的機會較少。 在規(guī)則的繁殖周期期間沒有懷孕的母牛需要飼養(yǎng)者花錢進行額外的干預。第三，在繁殖期早期懷孕的母牛將產下的小牛在離乳時更重，這是因為這些小牛年紀更大。第四，早生小牛的母牛在下一個繁殖期開始之前將有更多產后日子，這用于改善母牛的總體健康。第五，同期發(fā)情也允許飼養(yǎng)者對獸群中的所有母牛進行同步的喂養(yǎng)、補充、免疫和治療，這允許有更有效的管理和更多的機會獲得利潤。此外，同期發(fā)情允許飼養(yǎng)者在對整個主獸群授精之前三周使未交配過的(virgin)小母牛交配，這在下個繁殖期開始之前給了小母牛在他們第一次生小牛之后額外的恢復時間。由于這些和其它好處，飼養(yǎng)者試圖調整他們的動物的發(fā)情的發(fā)作，如果沒有干預， 在一群動物中發(fā)情的發(fā)作通常是不同步的。為了實現(xiàn)同步的發(fā)情發(fā)作，飼養(yǎng)者使用激素和輔助方案干預他們的動物的發(fā)情周期。C.發(fā)情周期
發(fā)情周期包括由哺乳動物生殖激素引起的復現(xiàn)的生理變化。哺乳動物生殖系統(tǒng)包括釋放促性腺激素釋放激素(&iRH)的下丘腦系統(tǒng)，以及分泌卵泡刺激激素(FSH)和促黃體生成激素(LH)的垂體系統(tǒng)。哺乳動物卵巢釋放包括雌激素和孕酮的激素。以不行經的有胎盤雌性為特征的具有發(fā)情周期的種如果在那個特定的周期沒有發(fā)生受精和懷孕就會重新吸收子宮內膜。在這些種中，雌性在她們的周期(通常稱為處于“發(fā)情(in heat)”的狀態(tài))的發(fā)情階段期間通常僅僅性活躍。因此，動物在其處于“發(fā)情周期”的那個特定部分時可以被描述為“處于發(fā)情期”。在哺乳動物中發(fā)情周期有四個基本階段，因此，在所有雌性牛(包括牛和瘤(zebu) 牛種的Bos屬)、母羊、母鹿、母牛、乳母(nannies)、母馬和雌性反芻動物中發(fā)情周期也有四個基本階段。在最初階段——發(fā)情前期階段，卵巢的一個或多個卵泡開始生長。通常，這個階段可以一天那么短，或者三周那么長，這取決于哺乳動物的種。在雌激素的自然影響下， 子宮的內層(子宮內膜)生長。第二階段是完全發(fā)情，指的是動物處于“發(fā)情”的日子。在這一階段，在促性腺激素的調節(jié)下，卵泡成熟并且雌激素分泌開始影響生殖系統(tǒng)。在雌性牛中，在這一階段中可自然地發(fā)生排卵。發(fā)情期可以持續(xù)數(shù)天，之后是發(fā)情間期。在第三階段即發(fā)情后期(metestrus)期間，雌激素刺激的跡象減少并且黃體開始形成。黃體對于建立和維持懷孕是必不可少的。黃體產生孕酮，孕酮(a)使子宮內膜變厚和生長以使子宮為懷孕作準備，(b)在發(fā)生受精的情況下維持懷孕，以及(c)抑制牛表現(xiàn)出處于發(fā)情期和排卵的跡象。通常，黃體越大，其產生的孕酮就越多，在存在孕酮的情況下，優(yōu)勢卵泡不會破裂，意味著不發(fā)生排卵。此外，黃體分泌物抑制LH和FSH。子宮內層也開始分泌孕酮。此第三階段通常短并且可能持續(xù)1-5天。發(fā)情周期的最后階段是發(fā)情間期(diestrus)，特征在于黃體產生孕酮。在沒有懷孕的情況下，發(fā)情后期階段以黃體的退化終止。子宮中的內層不脫落(有月經的哺乳動物種中，脫落)但為了下一個周期而重新成形。D.當前的同期發(fā)情技術
現(xiàn)今，在獸群中超越真實的發(fā)情同步化，同期發(fā)情也包括各種激素處理技術，這些激素處理技術試圖控制特定雌性可以被成功授精或以其他方式懷孕的(一個或多個)日期。最可靠的同步化技術之一使用受控的陰道內藥物釋放(CIDIf)裝置，該裝置插入陰道內并且留在適當?shù)牡胤揭詫⒓に匾雱游铩IDRe裝置由新西蘭的hterAg of Hamilton以CIDRe商標銷售，當然，我們在本說明書中使用該名詞是泛指這種陰道插入物。


圖1和2示出了使用CIDR 產品的兩種典型方案。有很多需要CIDR 產品的不同方案；
圖1和2中示出的兩個例子并不是窮舉。
圖1 (現(xiàn)有技術)描述了在人工授精(Al)前需要發(fā)情檢測的CIDIf方案。圖2 (現(xiàn)有技術)描述了不依賴發(fā)情檢測的使用定時人工授精 (TAI)的 CIDR 方案。CIDR 牛插入物通常包含在尼龍脊骨上模制的彈性橡膠中的1. 38克孕酮。所述裝置通常封裝在塑料袋中并且使用特殊的施藥器裝置插入。CIDR 牛插入物在肉用母牛和小母牛的陰道內施用，一個動物一個。CIDR 牛插入物在7天的治療周期期間中釋放孕酮。 CIDRe通常允許持續(xù)釋放激素以將發(fā)情期延遲5-14天，而母牛的黃體有希望保持完整以允許母牛的卵泡適當生長直到允許進行完全發(fā)情(通常在前列腺素注射的影響下)。為了確保滿意的同步化，建議的施用包括注射Lutalyse 無菌溶液(地諾前列素氨丁三醇(dinoprost tromethamine))，通常在除去CIDR 時或在除去CIDR 前一天內將 Lutalyse 無菌溶液給所有同步化的牛施用。在第6或7個治療日除去所述插入物使得血漿孕酮下降，理想地在三天內觸發(fā)發(fā)情。
再次參考
圖1(現(xiàn)有技術)，其示出了 CIDR 插入物的使用從方案的第0天延伸到第 7天。與所述插入物在第0天的放置相關聯(lián)的是可注射促性腺激素釋放激素(&iRH)的施用。 在第6或7天，在去除CIDR 插入物的同時，通常通過注射施用前列腺素(例如Lutalyse )。 在
圖1所示的方案中，使用者必須調查和檢測動物發(fā)情的征兆，之后執(zhí)行人工授精(Al)過程。這種發(fā)情檢測和AI過程通常發(fā)生在從第0日開始計算的第7日到第13日之間，第0 日即放置CIDR 裝置的日子。圖2(現(xiàn)有技術)描述了另一 CIDR 方案，該方案在大多數(shù)方面與
圖1中所描述的方案相似。但是，不是依賴于動物發(fā)情的檢測，該第二種方案需要在第7日(并且除去了 CIDR 插入物)之后60-66小時的時間段來進一步施用一定劑量的&iRH并且隨后進行Al。如圖 2所示，這通常導致動物在第10天人工授精。除了基于CIDR 的同步化方案，也有“無CIDR ”的同步化方案——意味著這些方案不需要使用CIDR 或者任何陰道內裝置來施用激素。E.現(xiàn)有方案的問題
迄今為止，本領域普通技術人員熟知很多不同的激素制劑和相關方案。然而，與現(xiàn)有技術(用CIDIf或不用CIDIf)相關的成功率仍然并不令人滿意，通常允許不到一半的嘗試中的成功植入或授精。此外，已知CIDR 插入物的使用存在各種問題。盡管CIDR 提倡者斷言了很多更好的結果，但是很多CIDR 方案經歷低至20%的受孕率并不少見，對于未交配過的小母牛受孕率甚至更低。此外，高的感染和陰道炎率，以及伴隨CIDR 相當常見的動物的不適和壓力，減損了結果。CIDR 插入物的使用需要仔細清潔外陰以避免感染，并且很多方案仍然需要檢測發(fā)情以便有效的Al。因此，期望確立一種不需要使用CIDR 插入物的可靠同期發(fā)情方案。

發(fā)明內容
本發(fā)明包括獨特的制劑和方案，該制劑和方案除了其它益處之外還(1)大幅提高健康、成熟的處于發(fā)情周期中的雌性牛的以及未交配過的小母牛的同期發(fā)情率，(2)幫助保持黃體，(3)提高胚胎轉移(移植)的成功率，以及(4)使得能夠不使用CIDR 實現(xiàn)同期發(fā)情， 由此避免了伴隨CIDR裝置發(fā)生的感染、陰道炎以及動物不適。本發(fā)明表現(xiàn)為用于促進不行經的有胎盤雌性的無CIDR 同期發(fā)情的可注射制劑， 該制劑包括(a)數(shù)量對于引起健康的成熟的處于發(fā)情周期中的雌性牛的發(fā)情有效的甾體雌激素化合物，例如雌二醇17-β (Ε2)、苯甲酸雌二醇等，以及(b)留體孕激素，用于在注射該甾體孕激素之后保持黃體完整至少5天的時間段，該留體孕激素例如是孕酮、羥孕酮、甲羥孕酮、烯丙孕素、諾孕美特、左炔諾孕酮或其它孕激素類(progestogenic)化合物或者其任何衍生物、類似物或促效藥(agonists)，以及它們的任何組合；以及(c)與雌激素化合物和孕激素復合以產生可注射化合物的賦形劑。制備了該制劑的一個實施例，其中雌激素化合物、孕激素和賦形劑以如下的量組合雌激素化合物相對于總的可注射制劑的濃度為0.05% -1.0% (以體積計)，優(yōu)選地， 0. 06-0. 125%，并且該組合的形式適于肌肉輸送。本發(fā)明的另一實施例包括當復合時獲得至少30 mg/mL的濃度的孕激素類的制劑。本發(fā)明也體現(xiàn)為不使用陰道內激素分配裝置來提高不行經的雌性動物的同期發(fā)情和受精率的方案。所述方案基于四個順序的步驟(1)向一個或多個健康的處于發(fā)情周期的雌性肌肉內注射第一留體激素制劑以準備這些雌性來誘發(fā)發(fā)情；(2)施用主要是前列腺素或其生物學功能的第二制劑，以實際啟動發(fā)情；(3)施用雌激素化合物的第三制劑以迫使排卵；以及(4)通過人工授精或者其它方式使每個雌性動物懷孕。第一制劑在第0天的前12個小時內通過肌肉內注射施用。第二制劑在不早于第 5天的開始但不晚于第8天的結束通過肌肉內注射施用。第三制劑在第二制劑之后大約1 天施用，在第三制劑的使用后大約一天對所述動物進行人工授精或自然交配。第一步是要對每個雌性動物通過肌肉內注射施用大約2cm3的第一留體激素制劑，該第一留體激素制劑組合了雌激素化合物和孕激素。接下來，5-8天后，優(yōu)選6或7天后，理想地，6天后，每個雌性接受肌肉內注射第二制劑，即前列腺素或其生物功能等效物， 劑量為啟動發(fā)情和排卵的劑量。在通常過程中最后一步是進一步使雌性動物懷孕，優(yōu)選地， 通過人工授精。這兩次適當施用的注射，結合隨后雌二醇注射，提高了同期發(fā)情率，增加了未交配過的小母牛的受孕率，并且實現(xiàn)了不需要CIDR 的同步化，不使用CIDR 減少了陰道炎和陰道感染的風險并且減少了動物不適。在用于同步化移植體母牛的可選實施例中，涉及相關制劑和方案。這種實施例包括基礎方案DonorSync 方案，施用前述實施例的制劑來準備移植體母牛供胚胎轉移(ET )。 在ET實踐中，通常使用激素方案處理移植體母牛以促進胚胎形成。移植體母牛在適當?shù)臅r候被授精，并且在大約交配后6-8天收集胚胎。在收集移植體母牛的胚胎時，它們需要立即移植到受體母牛中。為了胚胎存活并且變成活的妊娠，每個受體母牛的發(fā)情周期必須與移植體母牛的周期處于相同的狀態(tài)，以便受體母牛的子宮準備好接收所述胚胎。本發(fā)明方案使用孕激素濃度比SuperSync 制劑高的DonorSync 制劑，已經顯示出在重設卵泡波方面非常有效。在之后采用FSH和PG方案時，DonorSync 在形成可轉移的胚胎方面產生了極佳的結果。此外，本發(fā)明的方案和制劑也用于使用冷凍胚胎的ET。也應當理解，本發(fā)明的很多無價的方面也可以從其它有利點理解或表達。就試劑盒而言，例如，可以理解，本發(fā)明的各方面允許包含用以實現(xiàn)同期發(fā)情的制劑和要遵循的方案的試劑盒。本發(fā)明的另外的實施例涉及由所述方案制成的產品以及用于執(zhí)行所述方案的全部或一部分的設備和系統(tǒng)?？紤]到對本領域所面臨的大量困難和挑戰(zhàn)的更徹底的理解，本發(fā)明的很多其它目的、特征和優(yōu)點將從本申請的剩余部分中顯而易見，然后，本領域所面臨的大量困難和挑戰(zhàn)對于本領域技術人員而言又將顯而易見。最后，雖然在本發(fā)明范圍內存在很多可選變型、 修改和替代，但是本領域普通技術人員應當根據(jù)在現(xiàn)有技術以及本申請的各種描述的背景下所考慮的對所附權利要求(包括在此及相關申請的審查過程中對這些權利要求的任何修改)的閱讀來考慮本發(fā)明的范圍。
具體實施例方式本發(fā)明的教導優(yōu)選地體現(xiàn)為可注射激素制劑和使用這種激素制劑以改善同期發(fā)情和實現(xiàn)更高的同期發(fā)情率以及期望的更大的黃體尺寸的保持的方案。本領域技術人員將理解已知優(yōu)化同期發(fā)情的益處的其它技術進一步促進以下結合本發(fā)明所述的方案和施用的制劑。所述其它技術包括對于母牛和小母牛保持充足營養(yǎng)以及努力保持足夠的總體身體評分。本領域技術人員也將認識到本發(fā)明的化合物和方案的可選應用可包括為胚胎植入準備受體母牛。參考本發(fā)明的優(yōu)選實施例的各個方面，申請人已經開發(fā)出申請人希望以名稱 SuperSync 商業(yè)化的用于留體激素制劑的優(yōu)選配方。SuperSync 制劑的配方是雌激素化合物、孕激素和用于實現(xiàn)可注射形式的合適的賦形劑的組合。在本申請中“雌激素”化合物是指人工或合成的雌激素(即，留體雌激素化合物)或其衍生物、類似物或促效藥，以及它們的任何組合。類似，在本申請中“孕激素”指人工或合成的孕酮(即，留體孕激素類化合物)， 例如，孕酮、羥孕酮、甲羥孕酮、烯丙孕素、諾孕美特、左炔諾孕酮或其它孕激素類化合物或者其任何衍生物、類似物或促效藥，以及它們的任何組合。優(yōu)選地，所述雌激素化合物選自雌二醇17-β或苯甲酸雌二醇或它們的衍生物、類似物、促效藥等。為了取得適于肌肉內注射的制劑，所述雌激素化合物和孕激素與賦形劑復合，所述賦形劑優(yōu)選組合了無水載體(例如芝麻籽油、棉花籽油、橄欖油)和一種或多種賦形劑溶劑。在優(yōu)選實施例中，所述賦形劑溶劑是苯甲醇(最終體積的約10%)和共溶劑苯甲酸苯甲酯(最終體積的約10%)。Excimer與至少lmg/mL的雌激素化合物(優(yōu)選1. 25mg/mL)復合。 對于2cm3的劑量，優(yōu)選的制劑提供2-3mg雌二醇17-β，這是對于啟動小母?；蚰概?包括非?？?non-bovine)母牛)的發(fā)情，或者換而言之，重設卵泡波有效的量，以及提供至少30 mg/mL的孕激素類化合物(優(yōu)選地，多于40 mg/mL，大約60 mg/mL),已經發(fā)現(xiàn)這對于從注射日期起保持黃體完整5天以上是有效的。雌二醇17-β的最大量應當不超過每劑5 mg。圖3描述了根據(jù)本發(fā)明的過程的SuperSync 方案的方法學，圖4提供了以逐步方式描述本發(fā)明的方案的方法學的流程圖。最初(圖4中的步驟402)，有必要通過確定 45-60天產后時間段識別方案的第0天。不早于此時間段開始該方案確?；謴土说淖訉m。 在第0天(步驟404)，通過肌肉內(IM)注射，優(yōu)選地，在動物的頸部，施用2cm3的專有配方 (SuperSync )0所述專有制劑的配方可以適度改變，但是，在優(yōu)選實施例中，包括孕酮和雌二醇，比例為60 mg/mL的孕酮比1. 25 mg/mL的雌二醇。該專有制劑應當在第0天的前12 小時內施用。在以上描述的所述方案(SuperSync 方案)中施用的制劑，在同期發(fā)情的過程中通常執(zhí)行以下功能。孕激素和雌二醇的專有制劑提供了獨特的協(xié)同效應。如上所述，孕激素成分使母牛或小母牛不發(fā)情并且延長發(fā)情周期。孕激素/雌二醇組合，在第0天施用時，重設動物的卵泡波。前列腺素(PG)準備啟動動物的發(fā)情。在前列腺素之后施用的雌二醇進一步促進排卵。促性腺激素釋放激素(&iRH)，如上所述，是觸發(fā)排卵或使新卵泡波形成開始的激素。促黃體生成激素(LH)也觸發(fā)排卵，卵泡刺激激素(FSH)促進卵泡形成。孕激素模仿在排卵之后由黃體產生的自然孕酮，它為懷孕準備子宮并且用于防止母?；蛐∧概；氐桨l(fā)情狀態(tài)。雌二醇是最普通的并且通常被認為是最有效的雌激素。雌二醇17-β是趨向于導致母牛最快反應的自然存在的激素。苯甲酸雌二醇是雌二醇17-β的可能的替代物。因此， 在第0天施用的所述專有制劑(SuperSync )中包含的組合物執(zhí)行向著所述方案的目標的重要功能。孕激素通過關閉垂體功能幫助保持黃體處于良好狀態(tài)。實質上，孕激素確保黃體保持完整。雌二醇用于重設卵泡波。特別地，雌二醇17-β (Ε2)中止(knock off)主要卵泡，因此釋放卵母細胞(排卵)，卵母細胞(一旦受精)變成卵。破裂的卵泡也變成黃體或者加到黃體上(假設之前存在黃體)。SuperSync 方法的第二動作步驟(步驟406)發(fā)生在第X天，其中第X天是第0天之后5-8天中的任何一天，當然該步驟可以在黃體充分再形成之后盡快開始。因此，在第X 天，通過肌肉內注射施用5cm3的前列腺素(PG)，優(yōu)選地，在動物的頸部，并且優(yōu)選地在早上 8點之后四小時內，最佳地在早上9點之后1小時內。在優(yōu)選實施方案中，所使用的前列腺素(PG)可以是以 Lutalyse (Pharmacia & Upjohn Co. of Michigan 的注冊商標)銷售的產品，該產品包含氨丁三醇鹽形式的自然存在的前列腺素F2 α (地諾前列素)。每毫升包含等于5mg地諾前列素的地諾前列素氨丁三醇?；蛘撸趦?yōu)選實施方案中，前列腺素(PG)可以是以htrumate (Schering-Plough of New Jersey的注冊商標)銷售的產品，該產品是與前列腺素F2 α結構上相關的合成前列腺素類似物。每毫升的無色水溶液包含^^mcg的氯前列烯醇鈉(等于250mcg的氯前列烯醇)。在任何情況下，前列腺素用于使小母?；蚰概０l(fā)情，由此，使構成黃體的黃色組織破裂，引起氣味釋放或者其它發(fā)情跡象。由此該過程迫使排卵，排卵是完全發(fā)情的開始。第三動作步驟(步驟408)通常發(fā)生在第Y天，第Y天是緊接著第X天之后那天，但是應當發(fā)生在施用第二制劑之后12-36小時內，其中在第Y天的某個時間，優(yōu)選地在下午1 點之后四個小時內，最佳地在下午1點之后1個小時內，施用Icm3的雌二醇。雌二醇的施用用于刺激垂體釋放引起排卵(即，卵母細胞滴下，外陰膨脹等)的激素。在優(yōu)選方案中的此處及其它地方使用的雌二醇優(yōu)選是雌二醇17 β (Ε2)或者苯甲酸雌二醇，當然，應當理解， 作為不是那么優(yōu)選的替代物，可以使用各種其它天然或合成雌激素化合物、或其衍生物、類似物或促效藥，以及它們的任何組合。也應當理解，也可以使用替換的濃度和/或體積，風險是使優(yōu)選實施方案中的劑量的益處微小。例如，應當理解，只要施用了至少1毫克的雌二醇17-β或者生物功能等效劑量的替代的留體雌激素化合物，就可以通過施用其它濃度的雌激素化合物實現(xiàn)本發(fā)明的某些方面。SuperSync 方案最后動作步驟(步驟410)在第Z天執(zhí)行，第Z天是緊接著第Y天的那天，其中在第Z天，優(yōu)選地，在下午2點之后四個小時內，最佳地，在下午2點之后1個小時內，實施授精。可以用冷凍的或解凍的精子進行授精，實際受精通常發(fā)生在授精之后 4-6小時。本領域技術人員將認識到，如上所述的本發(fā)明的方案比與CIDR 裝置的使用相關聯(lián)的那些方案勞動強度更小，并且可以用于遺傳學上不適于CIDR 使用的雌性動物(例如， 通常不能將CIDR 保持在適當位置的肉用母牛)或者忍受不了 CIDR (例如，陰道由于先前的懷孕而留下傷疤)的雌性個體。本發(fā)明的方案對于母牛和小母牛創(chuàng)傷更小，并且可期望與 CIDR 系統(tǒng)相比，在施用該方案期間通常維持更好的總體健康。雖然已經結合一組優(yōu)選實施方案描述了所述方案和專有制劑，但是本領域技術人員將認識到，在不脫離本發(fā)明的精神及范圍的情況下，可以對所述方案和對所述配方進行某些修改?；讷F群的大小和/或母牛和小母牛個體的大小和總體健康進行的改變將變得顯而易見。類似地，考慮所述方案所針對的特定應用，對構成專有制劑的化合物的比例的改變對于本領域技術人員將是顯而易見的。換而言之，將所述方案用于自然或人工授精與所述方案在胚胎植入方面的類似應用比較，一些所述改變將是適當?shù)?。如所述，考慮到本發(fā)明的基本概念，這些改變并不必然脫離本發(fā)明的精神和范圍。
申請人使用本發(fā)明能夠實現(xiàn)的結果驚人地優(yōu)于現(xiàn)有技術。例如，雖然并未公開，受控的研究已經表明了使用無CIDR 的方案在未交配過的牛奶場Holstein小母牛中獲得了高得多的受孕率，在所述無CIDR 的方案中在第6天施用了第二制劑。類似地，雖然可能由于差的控制，結果可能不同，但是使用本發(fā)明的同期發(fā)情已經初步報告了這樣的程度，即， 獸群的超過90%幾乎同時達到發(fā)情，據(jù)報告彼此之間兩小時。由于對本領域所面臨的大量困難和挑戰(zhàn)的更徹底的理解，本發(fā)明的很多其它目的、特征和優(yōu)點將從本申請的剩余部分中顯而易見，然后，本領域所面臨的大量困難和挑戰(zhàn)對于本領域技術人員而言又將顯而易見。最后，雖然在本發(fā)明范圍內存在很多可選改變、 修改和替代，但是本領域普通技術人員應當根據(jù)在現(xiàn)有技術以及本申請的各種描述的背景下所考慮的對所附權利要求(包括在此及相關申請的審查過程中對這些權利要求的任何修改)的閱讀來考慮本發(fā)明的范圍。例如，本發(fā)明的可選實施方案涉及在移植體母牛中使用一種第一制劑(以更高的劑量)以實現(xiàn)在為胚胎形成、收集和轉移到受體母牛做準備時的成功同期發(fā)情。該實施方案對taurine母牛是有效的，但是對于Brahman或其它瘤(zebu)母牛尤其有效。圖5描述了根據(jù)本發(fā)明的過程的DonorSync 方案的方法學。對于該實施方案，使用之前的實施方案中的第O天的制劑的優(yōu)選變型中的一個或多個，來準備移植體母牛。然而，這些制劑的注射量比在先前的描述中有所增加，優(yōu)選地，增加30%到150%。最優(yōu)選地，向移植體母牛注射劑量為3. 0-4. 5cm3的第一制劑，并且在四天之后，開始一日兩次的肌肉內施用卵泡刺激激素 (FSH)的多日過程，以產生更多的卵母細胞，以注射前列腺素使所有成熟的卵泡破裂結束。 在排卵后，通常在1214小時中對移植體母牛授精數(shù)次。之后，在第T天，優(yōu)選第7天，從移植體收集胚胎并且將其轉移到受體或者冷凍保存。
權利要求
1.一種通過肌肉內注射施用的可注射制劑，用于促進健康、成熟、處于發(fā)情周期中的雌性牛的無CIDR同期發(fā)情，該制劑包括(a)數(shù)量對于引起健康的成熟的處于發(fā)情周期中的雌性牛的發(fā)情有效的留體雌激素化合物，例如雌二醇17-β、苯甲酸雌二醇、或其任何衍生物、類似物和促效藥，以及它們的任何組合，以及(b)留體孕激素，用于在注射該留體孕激素之后保持黃體完整至少5天的時間段，該留體孕激素例如是孕酮、羥孕酮、甲羥孕酮、烯丙孕素、諾孕美特、左炔諾孕酮或其它孕激素類化合物或者其任何衍生物、類似物或促效藥， 以及它們的任何組合；以及(c)與所述雌激素化合物和所述孕激素復合以產生適于肌肉內注射的化合物的無水賦形劑。
2.如權利要求1所述的制劑，其中在復合之后所述孕激素類的濃度至少為30mg/mL。
3.如權利要求1所述的制劑，其中所述雌激素化合物、所述孕激素和所述賦形劑以如下的量組合，以體積計，所述雌激素化合物相對于總的可注射制劑的濃度至少為0. 025%。
4.如權利要求1所述的制劑，其中所述雌激素化合物和所述孕激素以如下的體積組合，所述雌激素化合物的濃度為0. 05-1. 0%，以體積相對于可注射制劑的總體積計算。
5.如權利要求1所述的制劑，其中所述雌激素化合物和所述孕激素以如下的體積組合，所述雌激素化合物的濃度為0. 06-0. 125%，以體積相對于可注射制劑的總體積計算。
6.一種無CIDR 的方法，該方法不使用陰道內激素分配裝置來改善一個或多個在產后至少45天的、健康的成熟的處于發(fā)情周期的雌性牛的同期發(fā)情率和受精率，該方法包括如下順序的步驟(a)在第0天通過肌肉內注射向每一個所述健康的成熟的處于發(fā)情周期的雌性牛施用第一留體激素制劑，以引起健康的成熟的處于發(fā)情周期的雌性牛發(fā)情，該第一留體激素制劑包括在無水賦形劑中復合的雌激素化合物和孕激素的組合；以及(b)之后，在第X天的某個時間(其中第X天是第0天之后5-8天)，向每一個所述健康的成熟的處于發(fā)情周期的雌性牛施用包括前列腺素或其生物功能等效物的第二制劑，第二制劑的量對于啟動發(fā)情是有效的；以及(c)之后，在施用所述第二制劑之后12-36小時，向每一個所述健康的成熟的處于發(fā)情周期的雌性牛施用第三制劑，該第三制劑包括數(shù)量迫使排卵的雌激素化合物。
7.根據(jù)權利要求6所述的方法，還包括如下額外的步驟在施用所述第三制劑之后不少于12小時的第Z天嘗試使每一個所述健康的成熟的處于發(fā)情周期的雌性牛懷孕。
8.根據(jù)權利要求7所述的方法，其中引起健康的成熟的處于發(fā)情周期的雌性牛發(fā)情的包括雌激素化合物和孕激素的組合的所述第一留體激素制劑在第0天的前12個小時內施用，所述第二制劑在第X天的早上8點之后四個小時內施用，第X天是第0天之后6-7天， 所述第三制劑在第Y天的下午1點之后四個小時之內施用，并且所述嘗試使懷孕的步驟包括在第Z天的下午2點之后四個小時之內的人工授精。
9.根據(jù)權利要求8所述的方法，其中引起健康的成熟的處于發(fā)情周期的雌性牛發(fā)情的包括雌激素化合物和孕激素的組合的所述第一留體激素制劑在第0天的前12個小時內施用，所述第二制劑在第X天的早上9點之后一個小時內施用，其中第X天是第0天之后6天， 所述第三制劑在第Y天的下午1點之后1個小時內施用，并且所述授精在第Z天的下午2 點之后1個小時內進行。
10.如權利要求6所述的方法，其中所述第一留體激素制劑是可注射制劑，通過肌肉內注射施用，用于促進健康的成熟的處于發(fā)情周期的雌性牛的無CIDR同期發(fā)情，該第一甾體激素制劑包括(a)數(shù)量對于引起健康的成熟的處于發(fā)情周期中的雌性牛的發(fā)情有效的甾體雌激素化合物，例如雌二醇17-β、苯甲酸雌二醇、或其任何衍生物、類似物和促效藥，以及它們的任何組合，以及(b)留體孕激素，用于在注射該留體孕激素之后保持黃體完整至少 5天的時間段，該留體孕激素例如是孕酮、羥孕酮、甲羥孕酮、烯丙孕素、諾孕美特、左炔諾孕酮或其它孕激素類化合物或者其任何衍生物、類似物或促效藥，以及它們的任何組合；以及 (c)與所述雌激素化合物和所述孕激素復合以產生適于肌肉內注射的化合物的賦形劑。
11.根據(jù)權利要求6所述的方法，其中所述第一留體激素制劑是可注射制劑，通過肌肉內注射施用，用于促進健康的成熟的處于發(fā)情周期的雌性牛的無CIDR同期發(fā)情，該第一甾體激素制劑包括(a)數(shù)量對于引起健康的成熟的處于發(fā)情周期中的雌性牛的發(fā)情有效的甾體雌激素化合物，例如雌二醇17-β、苯甲酸雌二醇、或其任何衍生物、類似物和促效藥， 以及它們的任何組合，以及(b)留體孕激素，用于在注射該留體孕激素之后保持黃體完整至少5天的時間段，該留體孕激素例如是孕酮、羥孕酮、甲羥孕酮、烯丙孕素、諾孕美特、左炔諾孕酮或其它孕激素類化合物或者其任何衍生物、類似物或促效藥，以及它們的任何組合； 以及(c)與所述雌激素化合物和所述孕激素復合以產生適于肌肉內注射的化合物的無水賦形劑，并且，進一步，其中所述雌激素化合物、所述孕激素和所述賦形劑以如下的量組合，以體積計，所述雌激素化合物相對于總的可注射制劑的濃度為0. 05%-1. 0%。
12.根據(jù)權利要求7所述的方法，其中所述第一留體激素制劑是可注射制劑，通過肌肉內注射施用，用于促進健康的成熟的處于發(fā)情周期的雌性牛的無CIDR同期發(fā)情，該第一甾體激素制劑包括(a)數(shù)量對于引起健康的成熟的處于發(fā)情周期中的雌性牛的發(fā)情有效的甾體雌激素化合物，例如雌二醇17-β、苯甲酸雌二醇、或其任何衍生物、類似物和促效藥， 以及它們的任何組合，以及(b)留體孕激素，用于在注射該留體孕激素之后保持黃體完整至少5天的時間段，該留體孕激素例如是孕酮、羥孕酮、甲羥孕酮、烯丙孕素、諾孕美特、左炔諾孕酮或其它孕激素類化合物或者其任何衍生物、類似物或促效藥，以及它們的任何組合； 以及(c)與所述雌激素化合物和所述孕激素復合以產生適于肌肉內注射的化合物的賦形劑，并且，進一步，其中所述雌激素化合物和所述孕激素以如下體積組合，所述雌激素化合物的濃度為0. 06-0. 125%，以體積相對于可注射制劑的總體積計算。
13.一種不使用陰道內激素分配裝置來提高一個或多個健康的未交配過的小母牛的同期發(fā)情率和受精率的方法，該方法包括如下順序的步驟(a)在第0天通過肌肉內注射向每一個所述健康的未交配過的小母牛施用第一留體激素制劑，以引起健康的未交配過的小母牛發(fā)情，該第一留體激素制劑包括雌激素化合物和孕激素的組合；以及(b)之后，在第X天的某個時間(其中第X天是第0天之后5-8天)，向每一個健康的未交配過的小母牛施用包括前列腺素或其等效物的第二制劑，第二制劑的量對于啟動發(fā)情是有效的；以及(c)之后，在施用所述第二制劑之后不少于12小時的第Y天(其中第Y天比第X天晚一天)的某個時間，向每一個健康的未交配過的小母牛施用第三制劑，該第三制劑包括數(shù)量迫使排卵的雌激素化合物；以及(d)之后，在施用所述第三制劑之后不少于12小時的第Z天(其中第Z天比第Y天晚一天)的某個時間，對每一個所述健康的未交配過的小母牛授精。
14.根據(jù)權利要求13所述的方法，其中在第0天的前12個小時內施用所述引起健康的未交配的小母牛發(fā)情的包括雌激素化合物和孕激素的組合的第一留體激素制劑，在第X天的早上8點之后四個小時內施用所述第二制劑，第X天是第0天之后6-7天，在第Y天的下午1點之后四個小時之內施用所述第三制劑，并且在第Z天的下午2點之后四個小時內執(zhí)行所述授精。
15.根據(jù)權利要求14所述的方法，其中在第0天的前12個小時內施用所述引起健康的未交配過的小母牛發(fā)情的包括雌激素化合物和孕激素的組合的第一留體激素制劑，在第 X天的早上9點之后1個小時內施用所述第二制劑，第X天是第0天之后6天，在第Y天的下午1點之后1個小時之內施用所述第三制劑，并且在第Z天的下午2點之后1個小時內執(zhí)行所述授精。
全文摘要
本發(fā)明涉及同期發(fā)情制劑和有效的無CIDR方案。注射無水賦形劑中的雌激素和孕激素類激素化合物的可注射制劑以使不行經的有胎盤雌性動物同期發(fā)情，以及應用該獨特制劑以實現(xiàn)同期發(fā)情的5-9天方案。
文檔編號A01N45/00GK102291992SQ201080005437
公開日2011年12月21日 申請日期2010年1月26日 優(yōu)先權日2009年1月26日
發(fā)明者哈爾·維特, 詹妮弗·約卡姆 申請人:哈爾·維特, 詹妮弗·約卡姆