專利名稱：大鼠心肌缺血/再灌注模型的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)及臨床研究造模，具體講是大鼠心肌缺血/再灌注模型的制 備方法。
背景技術(shù)：
眾所周知，對(duì)于急性心肌梗塞，目前公認(rèn)的最為有效的治療方法是冠狀動(dòng)脈再灌 注，然而冠狀動(dòng)脈再灌注存在再灌注損傷問(wèn)題，因此，再灌注損傷的研究及防治已成為人們 研究的熱點(diǎn)問(wèn)題。在動(dòng)物體內(nèi)阻斷冠狀動(dòng)脈左前降支造成急性心肌缺血，并在預(yù)定時(shí)間內(nèi) 恢復(fù)血供予以再灌注是模擬人類缺血性心臟病恢復(fù)血供治療必需的實(shí)驗(yàn)方法。大鼠以其冠 狀動(dòng)脈側(cè)支循環(huán)少、心肌壞死出現(xiàn)早、重復(fù)性及穩(wěn)定性好、費(fèi)用低廉等優(yōu)點(diǎn)而成為制作心肌 缺血/再灌注損傷模型的首選實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。目前，在大鼠心肌缺血/再灌注模型的制備過(guò)程中，結(jié)扎冠狀動(dòng)脈左前降支的方 法包括①心臟原位結(jié)扎法，其優(yōu)點(diǎn)是心臟處于正常解剖位置，對(duì)心臟生理功能影響較小，但 是此法通常暴露的視野小，心臟不易固定，結(jié)扎冠狀動(dòng)脈時(shí)很難把握進(jìn)針位置及深度，易出 血；且需剪斷肋骨，耗時(shí)長(zhǎng)，操作困難；同時(shí)操作過(guò)程需要進(jìn)行氣管插管，使用動(dòng)物呼吸機(jī) 呼吸、給氧；動(dòng)物麻醉通常使用烏拉坦進(jìn)行全麻，因此麻醉時(shí)間較長(zhǎng)，術(shù)后蘇醒慢；此外，在 去除氣管插管后，容易因氣管內(nèi)分泌物增加而造成動(dòng)物窒息死亡，手術(shù)存活率不高于90%。 ②胸腔外結(jié)扎法，其優(yōu)點(diǎn)是操作中可視性強(qiáng)，無(wú)需剪斷肋骨，結(jié)扎冠狀動(dòng)脈在胸腔外進(jìn)行， 失血少、損傷小，且耗時(shí)短。目前采用此法制備缺血/再灌注模型時(shí)常用的麻醉藥包括戊 巴比妥鈉、水合氯醛和乙醚。但是，戊巴比妥鈉的呼吸抑制作用比較明顯，術(shù)后易引起大鼠 呼吸衰竭甚至死亡；水合氯醛本身具有致心律失常的作用；乙醚麻醉常使呼吸道分泌物增 多，易引起呼吸道阻塞。在使用心臟原位結(jié)扎法或胸腔外結(jié)扎法造模時(shí)，傳統(tǒng)的結(jié)扎冠狀動(dòng)脈的具體操作 方法包括推管法和壓管法。推管法是將結(jié)扎線穿過(guò)硬質(zhì)塑料管，使用止血鉗或紋式鉗提線 推管壓迫冠脈造成缺血，缺血結(jié)束時(shí)松止血鉗解除管對(duì)冠脈壓迫恢復(fù)血液灌流。該方法存 在以下缺點(diǎn)，首先是心臟跳動(dòng)使管的位置發(fā)生改變，不能保證實(shí)驗(yàn)過(guò)程中維持恒定的缺血 效果；其次管切面接觸心臟表面，心肌遭受的機(jī)械損傷嚴(yán)重；另外，使用止血鉗或紋式鉗維 持管對(duì)冠脈的壓迫，不僅損傷加重，而且心臟受到外力牽拉，不能很好地模擬臨床實(shí)際情 況，尤其是需要?jiǎng)討B(tài)監(jiān)測(cè)動(dòng)物心功能時(shí)，測(cè)量數(shù)據(jù)可能會(huì)偏離真實(shí)情況。壓管法是將管放置 在心表面，將線系在管上阻斷冠脈形成缺血，缺血結(jié)束時(shí)抽出管恢復(fù)血液灌流，但由于管不 易固定和缺血效果不好目前使用較少。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的在于克服現(xiàn)有大鼠心肌缺血/再灌注模型制備方法的上述不足，提供 一種操作簡(jiǎn)單、耗時(shí)短、大鼠存活率較高的大鼠心肌缺血/再灌注模型的制備方法。本大鼠心肌缺血/再灌注模型的制備方法，缺血/再灌注大鼠模型的制備過(guò)程包括下述依次的將大鼠麻醉、剪開(kāi)胸部皮膚擠出心臟、結(jié)扎冠脈左前降支與松結(jié)扎線，其步驟 特征為1.麻醉麻醉藥物是2% 3%異氟烷，將大鼠放在誘導(dǎo)箱中采用異氟烷進(jìn)行吸入麻醉后， 從誘導(dǎo)箱取出，在面罩下繼續(xù)吸入異氟烷以維持麻醉；大鼠麻醉儀器是美國(guó)Matrx公司小 動(dòng)物麻醉機(jī)。2.剪開(kāi)胸部皮膚擠出心臟將胸部消毒，剪開(kāi)胸部皮膚，撐開(kāi)皮下肌肉進(jìn)入胸腔，將心臟直接從肋間擠出。3.結(jié)扎冠脈左前降支采用活結(jié)結(jié)扎冠脈左前降支起始端，結(jié)扎完畢，冠脈缺血，把心臟送回胸腔，并將 結(jié)扎線一端置于胸腔外，進(jìn)行“U”字褥式縫合關(guān)閉胸腔。4.松結(jié)扎線缺血結(jié)束后，直接把露在胸腔外的結(jié)扎線松開(kāi)，冠脈恢復(fù)血供。這樣避免了 二次開(kāi) 胸。本發(fā)明所述的麻醉藥物2% 3%異氟烷，是異氟烷與以氧氣為主的吸入氣體體 積百分比。上述的大鼠心肌缺血/再灌注模型的制備方法，其特征是所述的大鼠為一組，作 為心肌缺血/再灌注組，該組的例數(shù)最少為6只。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有如下優(yōu)點(diǎn)1.采用異氟烷吸入麻醉，使大鼠麻醉平穩(wěn)，藥物副作用小，安全性高，可控性強(qiáng)，復(fù) 蘇快；2.采用活結(jié)結(jié)扎冠狀動(dòng)脈，使用這種在心臟表面打活結(jié)形成缺血的方法避免了推 管法對(duì)心肌的機(jī)械損傷，而且由于不需要止血鉗等來(lái)固定管可以防止外力牽拉，保證心臟 在自然狀態(tài)下搏動(dòng)，動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)心功能時(shí)，數(shù)據(jù)穩(wěn)定可靠，同時(shí)可以避免二次開(kāi)胸；3.操作簡(jiǎn)單，節(jié)約時(shí)間(一個(gè)模型制備約30秒鐘)，成功率高(制備模型60例， 成功60例，大鼠存活率可達(dá)到100% )，能夠更好的去模擬臨床缺血/再灌注損傷。


圖1是冠狀動(dòng)脈結(jié)扎前心電圖II導(dǎo)聯(lián)典型圖。圖2是冠狀動(dòng)脈結(jié)扎后心電圖II導(dǎo)聯(lián)典型圖。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例詳細(xì)說(shuō)明本發(fā)明的具體實(shí)施方式
，但本發(fā)明的具體實(shí)施方式
不局 限于下述的實(shí)施例。實(shí)施例一本實(shí)施例共60只雄性Wistar大鼠，分為缺血/再灌注組與偽手術(shù)組兩個(gè)組，每組 為30只。缺血/再灌注組本實(shí)施例以30只出生8-10周，體重180_220g的雄性Wistar大鼠，缺血30min，再灌注池為例，說(shuō)明本大鼠心肌缺血/再灌注模型的制備方法。每只大鼠都按下述依次的步 驟進(jìn)行麻醉、剪開(kāi)胸部皮膚擠出心臟、結(jié)扎冠脈左前降支與松結(jié)扎線，其步驟特征為1.麻醉將大鼠置于Matrx小動(dòng)物麻醉機(jī)誘導(dǎo)箱中，用2% 3%異氟烷誘導(dǎo)麻醉后，將大 鼠從誘導(dǎo)箱中取出，在隨后的手術(shù)過(guò)程中，繼續(xù)用麻醉面罩給予異氟烷吸入維持麻醉。連接 心電圖，并且利用BL-420生物信號(hào)記錄分析系統(tǒng)記錄術(shù)前標(biāo)準(zhǔn)II導(dǎo)聯(lián)心電圖。2.剪開(kāi)胸部皮膚擠出心臟用酒精棉球擦拭手術(shù)區(qū)皮膚，剪開(kāi)皮膚，用穿有4號(hào)線的縫皮針在切口兩端環(huán)形 穿線不結(jié)扎。分離皮下組織、胸大肌及胸小肌，于左側(cè)第三肋間，用16號(hào)血管鉗沿第三肋間 鈍性分離肋間肌，同時(shí)撐開(kāi)3、4肋骨進(jìn)入胸腔，用左手拇指及四指將心臟擠出胸腔。3.結(jié)扎冠脈左前降支在左心耳下方2mm處用眼科針4-0絲線穿線，進(jìn)針為1 1.5mm，寬為2 3mm，結(jié) 扎冠狀動(dòng)脈左前降支，此處用的是活結(jié)結(jié)扎，成功結(jié)扎冠狀動(dòng)脈后(Imin內(nèi)可見(jiàn)心電圖II 導(dǎo)聯(lián)ST段抬高與高聳的T波融合，呈弓背向上單向曲線，說(shuō)明結(jié)扎成功)迅速將心臟送回 胸腔，并將結(jié)扎線一端置于胸腔外，輕擠胸腔排出胸腔氣體，同時(shí)提拉已穿好的縫皮4號(hào)線 并結(jié)扎，即進(jìn)行“U”字褥式縫合關(guān)閉胸腔。4.松結(jié)扎線結(jié)扎30min缺血結(jié)束后，輕拉置于胸腔外的結(jié)扎線一端，將活結(jié)松開(kāi)，冠脈恢復(fù)血 供，心肌順利進(jìn)行血液再灌注?？梢愿鶕?jù)實(shí)驗(yàn)的需要規(guī)定再灌注時(shí)間，本實(shí)施例的灌注時(shí)間 是3h。偽手術(shù)組下面以30只出生8-10周，體重180_220g的雄性Wistar大鼠為例，說(shuō)明本模型偽 手術(shù)組大鼠的制備方法。每只大鼠都按下述依次的步驟進(jìn)行麻醉、剪開(kāi)胸部皮膚擠出心臟 與冠脈左前降支只穿線不結(jié)扎，其步驟特征為1 麻醉將大鼠置于Matrx小動(dòng)物麻醉機(jī)誘導(dǎo)箱中，用2% 3%異氟烷誘導(dǎo)麻醉后，將大 鼠從誘導(dǎo)箱中取出，在隨后的手術(shù)過(guò)程中，繼續(xù)用麻醉面罩給予異氟烷吸入維持麻醉。連接 心電圖，并且利用BL-420生物信號(hào)記錄分析系統(tǒng)記錄術(shù)前標(biāo)準(zhǔn)II導(dǎo)聯(lián)心電圖。2.剪開(kāi)胸部皮膚擠出心臟用酒精棉球擦拭手術(shù)區(qū)皮膚，剪開(kāi)皮膚，用穿有4號(hào)線的縫皮針在切口兩端環(huán)形 穿線不結(jié)扎。分離皮下組織、胸大肌及胸小肌，于左側(cè)第三肋間，用16號(hào)血管鉗沿第三肋間 鈍性分離肋間肌，同時(shí)撐開(kāi)3、4肋骨進(jìn)入胸腔，用左手拇指及四指將心臟擠出胸腔。3.冠脈左前降支只穿線不結(jié)扎在左心耳下方2mm處用眼科針4-0絲線穿線，進(jìn)針為1 1.5mm，寬為2 3mm，將 心臟送回胸腔，并將結(jié)扎線一端置于胸腔外，輕擠胸腔排出胸腔氣體，同時(shí)提拉已穿好的縫 皮4號(hào)線并結(jié)扎，即進(jìn)行“U”字褥式縫合關(guān)閉胸腔。模型測(cè)試結(jié)果1.心電圖ST段變化情況對(duì)于偽手術(shù)組大鼠，手術(shù)前后心電圖ST段無(wú)明顯改變，見(jiàn)圖1 ；缺血/再灌注組大鼠，手術(shù)前后心電圖ST段變化明顯，見(jiàn)圖2，冠狀動(dòng)脈結(jié)扎后Imin內(nèi)可見(jiàn)心電圖II導(dǎo)聯(lián)ST 段抬高與高聳的T波融合，呈弓背向上單向曲線，說(shuō)明結(jié)扎成功。再灌注池末，心電圖ST 段明顯下降，且T波回落。2.心肌梗死面積變化情況再灌注池后，結(jié)扎兩組大鼠的冠脈，向每只大鼠心腔內(nèi)快速注入2% Evan’ s Blue,自根部剪下心臟，剪去心房、右心室，冰生理鹽水漂洗，垂直于左心室長(zhǎng)軸將其切成 1 2mm厚的環(huán)形薄片，37°C水浴中TTC(氯化三苯四氮唑)染色15min。正常心肌為藍(lán) 色，梗死區(qū)為白色，缺血心肌未梗死區(qū)為紅色。梗死區(qū)面積大小以
梗死區(qū)面積_ w
權(quán)利要求
1.一種大鼠心肌缺血/再灌注模型的制備方法，缺血/再灌注大鼠模型的制備過(guò)程包 括下述依次的將大鼠麻醉、剪開(kāi)胸部皮膚擠出心臟、結(jié)扎冠脈左前降支與松結(jié)扎線，其步驟 特征為I.麻醉麻醉藥物是2% 3%異氟烷，將大鼠放在誘導(dǎo)箱中采用異氟烷進(jìn)行吸入麻醉后，從誘 導(dǎo)箱取出，在面罩下繼續(xù)吸入異氟烷以維持麻醉；大鼠麻醉儀器是美國(guó)Matrx公司小動(dòng)物 麻醉機(jī)；II.剪開(kāi)胸部皮膚擠出心臟將胸部消毒，剪開(kāi)胸部皮膚，撐開(kāi)皮下肌肉進(jìn)入胸腔，將心臟直接從肋間擠出；III.結(jié)扎冠脈左前降支采用活結(jié)結(jié)扎冠脈左前降支起始端，結(jié)扎完畢，冠脈缺血，把心臟送回胸腔，并將結(jié)扎 線一端置于胸腔外，進(jìn)行“U”字褥式縫合關(guān)閉胸腔；IV.松結(jié)扎線缺血結(jié)束后，直接把露在胸腔外的結(jié)扎線松開(kāi)，冠脈恢復(fù)血供。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的大鼠心肌缺血/再灌注模型的制備方法，其特征是所述的 大鼠為一組作為心肌缺血/再灌注組，該組的例數(shù)最少為6只。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的大鼠心肌缺血/再灌注模型的制備方法，其特征是還另有 一組為偽手術(shù)組；偽手術(shù)組的每只大鼠都按下述依次的步驟進(jìn)行麻醉、剪開(kāi)胸部皮膚擠 出心臟、冠脈左前降支。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種大鼠心肌缺血/再灌注模型的制備方法，制備過(guò)程包括下述依次的步驟Ⅰ.麻醉 麻醉藥物是2％～3％異氟烷，將大鼠放在誘導(dǎo)箱中采用異氟烷進(jìn)行吸入麻醉后，從誘導(dǎo)箱取出，在面罩下繼續(xù)吸入異氟烷以維持麻醉；Ⅱ.剪開(kāi)胸部皮膚擠出心臟 將胸部消毒，剪開(kāi)胸部皮膚，撐開(kāi)皮下肌肉進(jìn)入胸腔，將心臟直接從肋間擠出；Ⅲ.結(jié)扎冠脈左前降支 采用活結(jié)結(jié)扎冠脈左前降支起始端，結(jié)扎完畢，把心臟送回胸腔，結(jié)扎線一端置于胸腔外，縫合關(guān)閉胸腔；Ⅳ.松結(jié)扎線 缺血結(jié)束后，直接把露在胸腔外的結(jié)扎線松開(kāi)，冠脈恢復(fù)血供。本發(fā)明操作簡(jiǎn)單、耗時(shí)短、大鼠存活率較高。
文檔編號(hào)A61D1/00GK102077807SQ201010605898
公開(kāi)日2011年6月1日 申請(qǐng)日期2010年12月18日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月18日
發(fā)明者曹成章, 梁峰, 溫永金, 燕子 申請(qǐng)人:太原鋼鐵(集團(tuán))有限公司