專利名稱：蛋白酶體抑制劑mg132作為菊酯類殺蟲劑增效劑的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及蛋白酶體抑制劑MG132的一種新功能，具體是蛋白酶體抑制劑 MG132作為菊酯類殺蟲劑增效劑的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
使用有機(jī)殺蟲劑是消滅農(nóng)林、衛(wèi)生害蟲，保證農(nóng)林作物增產(chǎn)和人民身體健康的 重要手段。然而，隨著有機(jī)殺蟲劑的廣泛使用和劑量增加，導(dǎo)致了害蟲抗藥性的發(fā)生及 發(fā)展，增大了利用殺蟲劑消滅害蟲的難度，加劇了對(duì)環(huán)境的破壞和對(duì)人類健康的威脅。 因此，尋找有效方法，提高害蟲對(duì)有機(jī)殺蟲劑的敏感性是目前迫切需要解決的問題。
蛋白酶體是生物體內(nèi)的一種巨型蛋白質(zhì)復(fù)合物，主要作用是降解細(xì)胞不需要的 或受到損傷或折疊錯(cuò)誤的的蛋白質(zhì)。蛋白酶體也是一類抗原遞呈系統(tǒng)(Class I Antigen Presentation)的重要成員。MG132是一種蛋白酶體抑制劑，它可以與蛋白酶體的催化亞 基結(jié)合從而抑制蛋白酶體的功能。發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供蛋白酶體抑制劑MG132的一種新用途。
本發(fā)明的技術(shù)方案是蛋白酶體抑制劑MG132可以作為菊酯類殺蟲劑增效劑的應(yīng)用。
上述技術(shù)方案中所說的菊酯類殺蟲劑可以是但不僅限于溴氰菊酯。
上述技術(shù)方案中所說的蛋白酶體抑制劑可以是但不僅限于MG132.發(fā)明人使用蛋白酶體抑制劑MG132抑制抗溴氰菊酯蚊細(xì)胞的蛋白酶體功能，隨后用 CCK-8法對(duì)細(xì)胞存活率進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果顯示，使用蛋白酶體抑制劑MG132處理抗溴氰 菊酯蚊細(xì)胞后，細(xì)胞在溴氰菊酯作用下的存活率較對(duì)照組明顯降低(P<0.05),表明蛋白 酶體抑制劑MG132增加了蚊細(xì)胞對(duì)溴氰菊酯的敏感性。
參照世界衛(wèi)生組織蚊幼蟲生物測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)方法，進(jìn)一步用蛋白酶體抑制劑 MG132和溴氰菊酯共同對(duì)蚊的四齡幼蟲進(jìn)行生物測(cè)定。結(jié)果顯示，用蛋白酶體抑制劑 MG132處理的蚊四齡幼蟲的存活率較對(duì)照組明顯降低(p<0.05),表明蛋白酶體抑制劑 MG132增加了蚊幼蟲對(duì)溴氰菊酯的敏感性。該實(shí)驗(yàn)使用了 3種不同抗性水平的蚊幼蟲進(jìn) 行檢測(cè)，3次結(jié)果一致。
體內(nèi)和體外的實(shí)驗(yàn)結(jié)果均表明，蛋白酶體抑制劑MG132可以增加蚊對(duì)溴氰菊酯 的敏感性。
蛋白酶體抑制劑MG132已經(jīng)作為商品化試劑被應(yīng)用于科學(xué)研究及其他領(lǐng)域。由 于其可以增加蚊蟲對(duì)溴氰菊酯的敏感性，其作為溴氰菊酯殺蟲劑的增效劑的應(yīng)用可以理 解。具體的應(yīng)用可以是但不僅限于以下方式，如將蛋白酶體抑制劑MG132添加到溴氰菊 酯中，可以增強(qiáng)殺蟲劑的功效。
本發(fā)明的有益效果體現(xiàn)在，提供了蛋白酶體抑制劑MG132的一種新用途，為研 制新型高效的有機(jī)殺蟲劑，提供了新途徑。


圖1是不同濃度的MG132對(duì)蚊抗性細(xì)胞存活率的影響。
圖2是MG132處理后蚊抗性細(xì)胞對(duì)溴氰菊酯抗性的改變。
圖3是不同濃度的MG132對(duì)蚊幼蟲存活率的影響。
具體實(shí)施方式
實(shí)施例中所用的MG132購自美國Santa craz公司，溴氰菊酯購自美國Sgma公司。
除非特別說明，本發(fā)明中所使用的術(shù)語，一般為本領(lǐng)域普通技術(shù)人員通常理解 的含義。
下面結(jié)合具體的實(shí)施例，并參照數(shù)據(jù)進(jìn)一步詳細(xì)地描述本發(fā)明。這些實(shí)施例只 是為了舉例說明本發(fā)明，而非以任何方式限制本發(fā)明的范圍。
在以下的實(shí)施例中，未詳細(xì)描述的各種過程和方法是本領(lǐng)域中公知的常規(guī)方 法。所用試劑的來源、商品名以及有必要列出其組成成分者，均在首次出現(xiàn)時(shí)標(biāo)明，其 后所用相同試劑如無特殊說明，均以首次標(biāo)明的內(nèi)容相同。
實(shí)施例1蛋白酶體抑制劑MG132增加抗溴氰菊酯蚊細(xì)胞對(duì)溴氰菊酯的敏感性。
正常蚊C6/36細(xì)胞購自中國典型培養(yǎng)物保藏中心，在本實(shí)驗(yàn)室用溴氰菊酯逐代 篩選70余代，建立抗溴氰菊酯蚊C6/36細(xì)胞系,LC50為1256.8mg/ml，是正常蚊細(xì)胞的 8.9 倍。
發(fā)明者先設(shè)置一系列濃度梯度的MG132 (OuM-4 uM)作用于抗溴氰菊酯蚊細(xì) 胞，檢測(cè)細(xì)胞存活率以確定合適的MG132實(shí)驗(yàn)濃度。如圖1所示，選擇IuM作為MG132在 實(shí)驗(yàn)中的濃度。
實(shí)驗(yàn)分對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組。實(shí)驗(yàn)組蚊細(xì)胞用IuM蛋白酶體抑制劑MG132處理， 對(duì)照組細(xì)胞則不做處理(DMSO對(duì)照)。在細(xì)胞培養(yǎng)液中加入一系列濃度梯度的溴氰菊 酯(10°·5,10, 101·5, 100,1025mg/L) 72小時(shí)后，用CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞的存活率。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果(圖2)在1(^,10,1015, 100,1025mg/L的溴氰菊酯濃度下，實(shí)驗(yàn)組 的細(xì)胞存活率依次為90% , 76% , 74% , 59%和50%，對(duì)照組的細(xì)胞存活率依次為97% , 93%, 85%, 75%和74% (P<0.05)。實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞存活率較對(duì)照組相比顯著降低，表明 蛋白酶體抑制劑MG132可以提高抗溴氰菊酯蚊細(xì)胞對(duì)溴氰菊酯的敏感性。
實(shí)施例2蛋白酶體抑制劑MG132增加抗溴氰菊酯蚊四齡幼蟲對(duì)溴氰菊酯的敏感 性。
淡色庫蚊敏感品系由中國軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院提供，從未暴露于任何殺蟲劑，其對(duì)溴 氰菊酯的LC50為O.OOSppm;在本實(shí)驗(yàn)室經(jīng)過不同濃度的溴氰菊酯數(shù)十代篩選，得到了 不同水平的抗性蚊，分別用0.05ppm和0.56ppm的溴氰菊酯維持培養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)分MG132對(duì) 照組，溴氰菊酯對(duì)照組和MG132+溴氰菊酯實(shí)驗(yàn)組，每組20只蚊四齡幼蟲，分別在3種品系蚊中進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
為了確定合適的MG132工作濃度，我們將蚊四齡幼蟲暴露于一系列濃度梯度的 MG132 (OuM —8 uM)中，觀察幼蟲存活。結(jié)果如圖3，選擇1 uM作為MG132在實(shí) 驗(yàn)中的濃度。
MG132對(duì)照組用IuM MG132處理蚊四齡幼蟲M小時(shí)，計(jì)數(shù)幼蟲存活數(shù)。
溴氰菊酯對(duì)照組將幼蟲暴露于溴氰菊酯M小時(shí)后，計(jì)數(shù)幼蟲存活數(shù)。
MG132+溴氰菊酯實(shí)驗(yàn)組先用luMMG132處理蚊四齡幼蟲，將幼蟲暴露于溴氰 菊酯M小時(shí)后，計(jì)數(shù)幼蟲存活數(shù)。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果存活0.56ppm 0.05ppm 0.008ppmMG132 對(duì)照組202019溴氰菊酯組對(duì)照組131715MG132+溴氰菊酯實(shí)驗(yàn)組 51211結(jié)果表明，使用蛋白酶體抑制劑MG132后可以增加蚊幼蟲對(duì)溴氰菊酯的敏感性。
權(quán)利要求
1.蛋白酶體抑制劑MG132作為菊酯類殺蟲劑增效劑的應(yīng)用。
2.如權(quán)利要求1所說的應(yīng)用，其特征在于，所說的菊酯類殺蟲劑是溴氰菊酯。
全文摘要
本發(fā)明涉及蛋白酶體抑制劑MG132的一種新功能，具體是蛋白酶體抑制劑MG132作為菊酯類殺蟲劑增效劑的應(yīng)用。本發(fā)明提供了蛋白酶體抑制劑MG132的一種新用途，為研制新型高效的有機(jī)殺蟲劑，提供了新途徑。
文檔編號(hào)A01P7/04GK102017965SQ20101054875
公開日2011年4月20日 申請(qǐng)日期2010年11月18日 優(yōu)先權(quán)日2010年11月18日
發(fā)明者于婧, 孫林春, 孫海波, 孫艷, 朱昌亮, 沈波, 焦健華, 賀驥, 馬磊 申請(qǐng)人:南京醫(yī)科大學(xué)