專利名稱：一種羅非魚育種標記方法
技術領域：
本發(fā)明屬于在水產(chǎn)養(yǎng)殖領域中魚類標記的技術，是一種在羅非魚育種中實現(xiàn)識別 群體和檢測每一條魚的技術方法。
背景技術：
羅非魚具有生長快，適應性強，肉質(zhì)鮮嫩的特點，是我國主導養(yǎng)殖淡水品種，對我 國出口創(chuàng)匯具有重要意義。近年來，由于過度追求羅非魚產(chǎn)量，忽視親本間種質(zhì)資源保護， 導致親本不純，近親雜交，影響羅非魚產(chǎn)業(yè)快速發(fā)展。為培育出優(yōu)質(zhì)高效羅非魚新品種，必 須通過選育解決當前存在問題。在羅非魚育種過程中，實驗池塘的有限性和育種的規(guī)?；?尤其是家系選育)影 響育種工作的順利進行，而通過對羅非魚進行標記追蹤，就可以減少池塘的數(shù)量和避免因 環(huán)境不同而造成的誤差；還可以觀察到不同品種或品系羅非魚混養(yǎng)在一起它們之間遺傳 力、群體的變異性和遺傳參數(shù)區(qū)別；并可以比較同一品系羅非魚在相同養(yǎng)殖環(huán)境下，不同個 體之間生長速度、遺傳變異，為育種工作提供便利。中國水產(chǎn)科學研究院珠江水產(chǎn)研究所 李勝杰等在魚類標志技術的研究進展(《現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技》，2008年，第20期，224-226)研究 中，提出始于19世紀20年代的切鰭標記是指將魚的1個或多個鰭條部分切除，再生的鰭條 在一定程度上會發(fā)生扭曲，從而產(chǎn)生標志，該方法對魚的傷害較小，對魚體本身生長沒有影 響，可以較容易的對比試驗前后標記魚與未標記魚的性狀差別；但也有少數(shù)研究者發(fā)現(xiàn)經(jīng) 過一段時間后分不清鰭條是否被切，很難辨認。在實際生產(chǎn)中，我們也發(fā)現(xiàn)因為羅非魚鰭條 再生能力強，過不久又可以長出，剪鰭條確實不能滿足羅非魚育種標記的需要；中國水產(chǎn)科 學研究院淡水漁業(yè)研究中心董在杰等申請的專利“一種羅非魚個體標記的方法”(申請?zhí)?200810018667. 9)主要是把PIT標記芯片注射入羅非魚體內(nèi)進行個體標記，這種體內(nèi)標記， 能提高標記的保留率，標記不會脫落，有效識別率高；標記過程對魚體的損傷程度較小，不 會影響羅非魚的正?；顒樱侵贿m用于較大規(guī)格的魚；由于PTI標很小，發(fā)射的信號弱， 因此，信號的檢測范圍小，檢測器必須離動物15cm左右。此外，這種標及相關的設備較貴， 用于較大規(guī)模標志的設備花費近20000美元，用于小規(guī)模標志的簡易設備花費也需2000美 元。標記本身也較貴，1個標記要花到近10美元；中國科學院水生生物研究所張?zhí)昧值仍?魚類標志技術的研究進展(《中國水產(chǎn)科學》，2003年，第3期10卷，246-253)研究中，提出 化學標志法，即在魚體表面下注射一種特殊的化學物質(zhì)，這些物質(zhì)能夠被人們識別，主要是 使用熒光色素可見標志。Pierson等的實驗表明，羅非魚經(jīng)過IlOd的飼養(yǎng)，熒光物質(zhì)保持率 為78%，熒光組與剪鰭組的標志保持率沒有顯著差異，而且這2組標志魚的成活率也沒有 顯著；但是熒光標志的檢測效果差異較大，不能用于個體的識別，只能作為群體標志，其局 限性無疑限制了其使用范圍。但是，使用拔羅非魚背鰭硬鰭鰭條的方法對羅非魚進行標記， 目前國內(nèi)外未見報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是在羅非魚的育種中，由于羅非魚各世代之間、子代與親本之間、 以及雜交系子代與親本之間，外形特征差異不顯著，因此通過采用拔掉背鰭硬鰭條方法來 標記羅非魚群體和個體，追蹤其來源、父母本、系譜、生產(chǎn)表現(xiàn)等情況，同時在進行與經(jīng)濟性 狀相關的檢測時，對混養(yǎng)的不同個體和家系進行識別，提高遺傳參數(shù)估計的準確性，同時為 魚的留種親本提供身份標記，實現(xiàn)羅非魚交配可控性，避免近交衰退。本發(fā)明所采用的技術方法包括1、標記前的準備；2、魚體標記方法和標記計劃； 3、魚體的標記。1、標記前的準備練魚、吊魚；選取12. 5cm直嘴止血鉗、解剖刀片，酒精棉球，同時準 備撈角、毛巾、100L大白桶和氣石，并用濃度為75%的酒精對直嘴血鉗、解剖刀片進行消毒。2、魚體標記組合和標記計劃①羅非魚背鰭硬鰭為17 18條，羅非魚背鰭硬鰭第1、2條不進行標記，采用將羅 非魚1條或4條背鰭硬鰭鰭條全部拔掉方法標記，至第17條結束標記，其余標記組合如下A 單條背鰭鰭條標記從第3條到第17條，還剩下15條鰭條，15種標記方式；B:兩條背鰭鰭條標記從第3條鰭條開始組合，如3-4 ； 3-5 ； 3-6......與第3條鰭條組合的雙鰭條標記，共有14種標記方式；與第4條鰭條組合的雙鰭條標記，共有13種標記方式；.........以此類推，雙鰭條標記共有105種標記方式。C:三條背鰭鰭條標記從3、4 鰭條開始組合，如 3-4-5 ；3-4-6 ；3-4-7......與第3、4條鰭條組合的三鰭條標記，共有13種標記方式；與第3、5條鰭條組合的三鰭條標記，共有12種標記方式；以此類推，三鰭條標記共有455種標記方式。D 四條背鰭鰭條標記從第3、4、5 鰭條開始組合，如 3-4-5-6 ；3-4-6-7 ；3-4-7-8......與第3、4、5條鰭條組合的四鰭條標記，共有78種標記方式；與第3、5、6條鰭條組合的四鰭條標記，共有66種標記方式；.........以此類推，以第3條鰭條為開頭四鰭條標記共有364種標記方式；以此類推，以第4條鰭條為開頭的四鰭條標記有286種標記方式；以第5條鰭條為開頭的四鰭條標記有220種標記方式；以第6條鰭條為開頭的四鰭條標記有165種標記方式；以第7條鰭條為開頭的四鰭條標記有120種標記方式；以第8條鰭條為開頭的四鰭條標記有84種標記方式；以第9條鰭條為開頭的四鰭條標記有56種標記方式；以第10條鰭條為開頭的四鰭條標記有35種標記方式；
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以第11條鰭條為開頭的四鰭條標記有20種標記方式；以第12條鰭條為開頭的四鰭條標記有10種標記方式；以第13條鰭條為開頭的四鰭條標記有4種標記方式；以第14條鰭條為開頭的四鰭條標記有1種標記方式；故四條鰭條標記方式共有364+286+220+165+120+84+56+35+20+10+4+1 = 1365 種總標記數(shù)量為15+105+455+1365= 1940 種②標記計劃如需要標記魚的群體，則可以使用單鰭條標記方法；如需要標記魚 群中不同個體，則先需要計算標記魚的數(shù)量，然后采用上述列出的組合，進行標記。3、魚體的標記標記時先把魚平放在桌子上，拿一塊毛巾蓋住其眼睛，用75%酒 精消毒需要拔鰭條部位；用解剖刀片把與需要拔掉的鰭條相連薄膜分離，一只手輕壓羅非 魚，然后用止血鉗夾緊該鰭條，連根部一起拔起，立即用75 %的酒精消毒鰭條根部創(chuàng)口處 30秒；將標記完的魚放在2%的食鹽溶液中進行浸泡消毒。本發(fā)明的有益效果1、本發(fā)明操作簡單，可標記數(shù)量多，對魚體損傷程度較小，標記的保留率98%以 上，有效識別率98%以上，可以將不同標記魚區(qū)分開來，區(qū)分效果十分明顯，不會影響羅非 魚的正?；顒?，能夠滿足大規(guī)模羅非魚的選育育種標記的需要。2、本發(fā)明對魚幼體和成魚都可以標記，而且通過對標記與不標記魚的生長對比發(fā) 現(xiàn)，標記對羅非魚的生長無影響；本發(fā)明采用拔背鰭硬鰭鰭條標記不同世代的羅非魚，同池 混養(yǎng)，可以評價子代共4代羅非魚的生長性能。3、本發(fā)明所用的羅非魚個體標記成本非常低(包括12. 5cm直嘴止血鉗、解剖刀 片)，標記每條魚的成本為0. 05元人民幣，而且檢測的魚只需在幼體期標記一次將終身攜 帶，既節(jié)約了成本，也減少了多次標記對魚體的傷害。
具體實施例方式本實驗是在國家級廣西南寧羅非魚良種場進行的。本發(fā)明方法包括1、標記前的準備；2、魚體標記方法和標記計劃；3、魚體的標記。1、標記前的準備1)、拉網(wǎng)練魚對將進行做標記的魚于前一天停喂，進行拉網(wǎng)鍛煉，拉網(wǎng)使魚適應外界應激；同時 魚在密集過程中分泌黏液和排出糞便，增加耐缺氧適應力。拉網(wǎng)時，將魚慢慢地趕至網(wǎng)中， 提起網(wǎng)衣，使魚在半離水狀態(tài)下，經(jīng)30分鐘后放回原塘中。2)、拉網(wǎng)捕魚做標記之前，拉網(wǎng)捕魚，挑選需要做標記的200尾規(guī)格相差不大的一個羅非魚家 系，體重在20克左右，以消除初始規(guī)格相差太大造成的影響，其中100尾準備標記。搬至2 個小水池(長3mX寬1.5mX高2m)中暫放，小水池充氧，保證將標記的魚不缺氧死亡。2、魚體標記組合和標記計劃羅非魚背鰭硬鰭為15 18條，采用將羅非魚兩條背 鰭硬鰭鰭條全部拔掉方法標記，其中羅非魚背鰭硬鰭第1、2條不進行標記，標記至第17條 結束，其標記組合如下與第3 條鰭條組合的標記有3-4 ；3-5 ；3-6 ；3-7 ；3-8 ；3-9 ；3-10 ；3-11 ；3-12 ；16 ；3-17 ；共 14 種標記方式。與第4 條鰭條組合的標記有4-5 ；4-6 ；4-7 ；4-8 ；4-9 ；4-10 ；4-11 ；4-12 ；4-13 ；
4-14；4-15 ；4-16 ；4-17 ；共 13 種標記方式。以此類推，與第5條鰭條組合的標記共12種標記方式；與第6條號鰭條組合的標記共11種標記方式；與第7條鰭條組合的標記共10種標記方式；與第8條鰭條組合的標記共9種標記方式；與第9條鰭條組合的標記共8種標記方式；與第10條鰭條組合的標記共7種標記方式；與第11條鰭條組合的標記共6種標記方式；與第12條鰭條組合的標記共5種標記方式；與第13條鰭條組合的標記共4種標記方式；與第14條鰭條組合的標記有14-15 ；1種標記方式?？倶擞浄绞?5+14+13+12+11+10+9+8+7+6+5+4+1= 100 種標記方式3、魚體的標記在同一養(yǎng)殖環(huán)境下對魚類準確的識別，需要魚體本身具有一種特有的標記。魚體 識別標記較多，包括剪鰭、熒光色素可見標記，或外部注射進魚體(如上述提到的PIT標記 芯片等)。本方法在羅非魚類育種技術中采用了拔掉背鰭硬鰭鰭條的標記方法，獨特地識別 大數(shù)量需要追蹤魚中的每一尾。具體標記程序是1)、從小水池中撈20尾魚放至100L大白桶中，放氣石充氧；2)、標記時先用撈角把魚平放在桌子上，拿一塊毛巾蓋住其眼睛，用75%酒精消毒 需要拔鰭條部位；3)、用解剖刀片把與需要拔掉的鰭條相連薄膜分離；4)、一只手輕壓羅非魚，然后用止血鉗夾緊該鰭條，連根部一起拔起，5)、立即用75%的酒精消毒鰭條根部創(chuàng)口處30秒；將標記完的魚放在2%的食鹽 溶液中進行浸泡消毒。在標記后對標記和未標記各100尾魚測量其體重、體長等生長指標，已標記魚與 未標記魚放在同一張小塘中進行培育，30天后統(tǒng)計標記后的各項參數(shù)，并測量所有魚生長 性狀指標。在整個標記魚與未標記魚培育期間，標記魚死亡2尾，死亡率2%，標記魚感染2 尾，感染率2%，標記物丟失的魚0條，丟失率0。也就是說在標記的100尾后，魚的成活率 為98%，未感染所占比例為98%，標記的保持率為100%，有效識別率為100%。標記前后 平均體重、平均體長的變化情況見表1。未標記魚前后變化情況見表2。表1標記魚與未標記魚標記前后指標變化情況
6 從上述兩表可看出，標記魚與未標記魚在平均體重、平均體長等生長性狀的變化 幾乎無差別，從而通過對標記與不標記魚的生長對比發(fā)現(xiàn)，標記對羅非魚的生長無影響。
權利要求
一種羅非魚育種標記方法，其特征在于1)、標記前的準備練魚、吊魚；選取直嘴止血鉗、解剖刀片，酒精棉球，同時準備撈角、毛巾、大白桶和氣石，并消毒；2)、魚體標記組合和標記計劃①羅非魚背鰭硬鰭為17～18條，其中第1、2條不進行標記，采用將羅非魚1條或4條背鰭硬鰭鰭條全部拔掉方法標記，至第17條結束標記，其余標記組合如下A單條背鰭鰭條標記方法有15種；B兩條背鰭鰭條標記方法有105種；C三條背鰭鰭條標記方法有455種；D四條背鰭鰭條標記方法有1365種；總標記數(shù)量為15+105+455+1365＝1940種；②標記計劃如需要標記魚的群體，則可以使用單鰭條標記方法；如需要標記魚群中不同個體，則先需要計算標記魚的數(shù)量，然后采用上述列出的組合，進行標記；3)、魚體的標記標記時先把魚平放在桌子上，蓋住其眼睛，用酒精消毒需要拔鰭條部位；用解剖刀片把與需要拔掉的鰭條相連薄膜分離，一只手輕壓羅非魚，然后用止血鉗夾緊該鰭條，連根部一起拔起，立即用酒精消毒鰭條根部創(chuàng)口處；將標記完的魚放在2％的食鹽溶液中進行浸泡消毒。
全文摘要
一種羅非魚育種標記方法，首先計算需要標記魚的數(shù)量，然后根據(jù)該數(shù)量，選取相應組合準備進行標記。標記時先把魚平放在桌子上，拿一塊毛巾蓋住其眼睛，用75％酒精消毒需要拔鰭條部位；用解剖刀片把與需要拔掉的鰭條相連薄膜分離，一只手輕壓羅非魚，然后用止血鉗夾緊該鰭條，連根部一起拔起，立即用75％的酒精消毒鰭條根部創(chuàng)口處；將標記完的魚放在2％的食鹽溶液中進行浸泡消毒。本發(fā)明操作簡單，成本低，對魚體的損傷程度較小，標記的保留率98％以上，有效識別率100％，不會影響羅非魚的正?；顒?，能夠滿足大規(guī)模羅非魚育種標記需要。
文檔編號A01K61/00GK101926296SQ20101023510
公開日2010年12月29日 申請日期2010年7月23日 優(yōu)先權日2010年7月23日
發(fā)明者唐瞻楊, 唐章生, 張永德, 曾蘭, 朱佳杰, 李莉萍, 林勇, 甘西, 陳忠 申請人:廣西壯族自治區(qū)水產(chǎn)研究所