專利名稱：一種用靈發(fā)素誘導(dǎo)甘蔗愈傷組織的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種用靈發(fā)素誘導(dǎo)甘蔗愈傷組織的方法。
背景技術(shù)：
甘蔗愈傷組織的獲得，被認(rèn)為是甘蔗良種快速繁殖、脫毒復(fù)壯、轉(zhuǎn)基因育種、輻照 誘變育種等各種現(xiàn)代生物技術(shù)體系得以在甘蔗種植業(yè)成功建立的必要環(huán)節(jié)。而現(xiàn)有可查資 料表明，目前用于誘導(dǎo)甘蔗(外植體多為蔗梢幼葉)愈傷組織發(fā)生的植物生長(zhǎng)物質(zhì)(Plant growth substances)幾乎無(wú)一例外都屬于生長(zhǎng)素類(Auxin)，包括2，4-D (2，4_ 二氯苯氧乙 酸)，NAA(萘乙酸)和IBA(吲哚丁酸)等，其中以2，4-D的應(yīng)用得最為普遍，效果也被認(rèn)為 最好。但是，2，4-D是人工化學(xué)合成的苯類衍生物，具有毒性和殘留，其誘導(dǎo)甘蔗愈傷組織 的使用濃度高達(dá)2. 0-3. Omg ·廠1，在低濃度下誘導(dǎo)率往往不足50%。再者，2，4_D誘導(dǎo)出的 愈傷組織很容易褐化和板結(jié)，直接影響愈傷組織的繼續(xù)增殖與分化，嚴(yán)重的褐化甚至導(dǎo)致 外植體的死亡。為此，技術(shù)人員不得不頻繁地把外植體轉(zhuǎn)接到新鮮的培養(yǎng)基上，既麻煩又費(fèi) 工。靈發(fā)素(LingfaSU，LFS，代號(hào)PGR-08)是一種新型的生物源植物生長(zhǎng)物質(zhì)，屬于腺嘌呤 衍生物，無(wú)毒害和殘留。它既具有細(xì)胞分裂素(CTK)的基本化學(xué)結(jié)構(gòu)和生物活性，又同時(shí)具 有生長(zhǎng)素(Auxin)的生物活性。LFS已在被公認(rèn)為難以組培的中藥材一三七的愈傷組織 誘導(dǎo)中獲得成功(許鴻源，等。中藥材，2004，27(1) :1-3)。LFS在甘蔗愈傷組織誘導(dǎo)中的 最佳使用濃度不到2，4-D的十分之一，但其誘導(dǎo)率卻可高達(dá)90%以上，獲得的愈傷組織不 易褐化，或只輕度褐化，不易板結(jié)，增殖快，生命力強(qiáng)。所以，將來(lái)在甘蔗生物技術(shù)研究和應(yīng) 用中極有可能成為2，4-D的替代品。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種用靈發(fā)素誘導(dǎo)甘蔗愈傷組織的方法。本發(fā)明以如下技術(shù)方案解決上述技術(shù)問(wèn)題一種用靈發(fā)素誘導(dǎo)甘蔗愈傷組織的方 法，包括如下步驟以甘蔗末梢部位的幼葉切片為外植體，以MS固體培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，添加靈發(fā) 素0. 05-0. 50mg · L—1，制成改良型MS固體培養(yǎng)基，在常規(guī)培養(yǎng)條件下用于甘蔗愈傷組織的 誘導(dǎo)。本發(fā)明的突出優(yōu)點(diǎn)在于本發(fā)明用于甘蔗愈傷組織的誘導(dǎo)，誘導(dǎo)效率高達(dá)90% _95%，而且愈傷組織不易 褐化，質(zhì)地疏松不板結(jié)，增殖快，生命力強(qiáng)。
具體實(shí)施例方式以下通過(guò)實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案作進(jìn)一步說(shuō)明。本發(fā)明所述用靈發(fā)素誘導(dǎo)甘蔗愈傷組織的方法，包括如下步驟按常規(guī)采集甘蔗末梢部位的幼葉作外植體，表面消毒殺菌后切成大約1，0X0. 5cm2的小片分別接入添加有靈發(fā)素0. 05-0. 50mg · Γ1的改良型MS固體培養(yǎng)基中，用 于甘蔗愈傷組織的誘導(dǎo)。培養(yǎng)條件:ρΗ 5. 8-6. 0 ；光照1500-20001χ. 10-12小時(shí)/天；溫度 晝 / 夜 28/25( 士 1)°C。表1中例1為對(duì)比例，例2至例5為添加不同量的靈發(fā)素實(shí)施例，其余操作條件和 方法步驟相同。表1.添加不同量的靈發(fā)素與2，4_D誘導(dǎo)甘蔗愈傷組織的對(duì)比實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù) 表1中LFS為靈發(fā)素。表1內(nèi)數(shù)據(jù)為培養(yǎng)20天的數(shù)據(jù)，20天內(nèi)不轉(zhuǎn)換新鮮培養(yǎng)基。*注出愈率(％)出愈幼葉切片數(shù)/接種幼葉切片數(shù)X 100%。褐化率(％ )褐化幼葉切片數(shù)(無(wú)論出愈與否)/接種幼葉切片數(shù)X100%。褐化程度(％ )以“ + ”多少表示。板結(jié)率(％):愈傷組織緊實(shí)、難增殖分化的幼葉切片數(shù)/出愈幼葉切片 數(shù) X100%o轉(zhuǎn)綠率(％ )部分愈傷組織呈現(xiàn)綠色的幼葉切片數(shù)/出愈幼葉切片數(shù)X 10從表1的五個(gè)實(shí)施例對(duì)比實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)可以看出，采用本發(fā)明誘導(dǎo)甘蔗愈傷組織的出 愈率與愈傷組織質(zhì)量?jī)?yōu)于對(duì)照例。上述五個(gè)實(shí)施實(shí)例對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案做了較為詳細(xì)地描述，但是在本發(fā)明的基 礎(chǔ)上，本領(lǐng)域的技術(shù)人員對(duì)基本培養(yǎng)基MS進(jìn)行替換或?qū)μ砑游锛捌溆昧窟M(jìn)行補(bǔ)充與修改， 是顯而易見(jiàn)的事。因此，凡在誘導(dǎo)甘蔗愈傷組織的培養(yǎng)程序中添加有靈發(fā)素的，均屬于本發(fā) 明要求保護(hù)的范圍。
權(quán)利要求
一種用靈發(fā)素誘導(dǎo)甘蔗愈傷組織的方法。其特征是，以甘蔗末梢部位的幼葉切片為外植體，以MS固體培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，添加靈發(fā)素0.05-0.50mg·L-1，制成改良型MS固體培養(yǎng)基，在常規(guī)培養(yǎng)條件下用于甘蔗愈傷組織的誘導(dǎo)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述用靈發(fā)素誘導(dǎo)甘蔗愈傷組織的方法。其特征是，所述誘導(dǎo)是在 pH 5. 8-6. 0 ；光照1500-20001x. 10-12小時(shí)/天；溫度晝/夜28/25 (士 1) V的條件下進(jìn) 行。
全文摘要
一種用靈發(fā)素誘導(dǎo)甘蔗愈傷組織的方法。以MS為基本培養(yǎng)基，添加靈發(fā)素0.05-0.5mg·L-1配制成改良型固體培養(yǎng)基，以甘蔗幼葉切片作外植體，按常規(guī)進(jìn)行無(wú)菌培養(yǎng)。該方法用于甘蔗愈傷組織的誘導(dǎo)，誘導(dǎo)效率高達(dá)90％-95％，而且愈傷組織不易褐化，質(zhì)地疏松不板結(jié)，增殖快，生命力強(qiáng)。
文檔編號(hào)A01H4/00GK101861834SQ201010216180
公開(kāi)日2010年10月20日 申請(qǐng)日期2010年7月2日 優(yōu)先權(quán)日2010年7月2日
發(fā)明者余坤興, 劉麗敏, 劉曉燕, 劉紅堅(jiān), 盧曼曼, 唐紅琴, 方鋒學(xué), 李松, 楊榮仲, 淡明, 游建華, 藍(lán)桃菊, 許鴻源, 譚芳, 龔銀花 申請(qǐng)人:廣西壯族自治區(qū)甘蔗研究所