專利名稱：星星草愈傷組織的誘導(dǎo)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明提供了一種愈傷組織的培養(yǎng)方法，尤其是一種星星草愈傷組織的誘導(dǎo)方 法。
背景技術(shù)：
隨著人口的不斷增加，生態(tài)環(huán)境的不斷惡化及人類對草地的過度利用，導(dǎo)致土壤 鹽漬化面積逐年擴大，土壤鹽漬化已經(jīng)稱為一個世界性問題。專家一致認為，在世界范圍 內(nèi)過去已有大面積次生鹽漬化的發(fā)展，而且隨著新灌溉區(qū)的建立，鹽漬化仍在不斷產(chǎn)生、惡 化。與工程措施修復(fù)土壤相比較，生物學(xué)措施具有投資少、見效快的特點，尤其是利用鹽生 植物修復(fù)土壤不僅能利用鹽堿地獲得良好的經(jīng)濟效益，而且鹽堿土壤在利用的同時也得到 改良，一舉兩得。MM^ (Puccinellia tenuifIora(Turcz.) scribn. et Merr.), ^7^^:^4 ^-M 多年生鹽生草本植物。地理分布以哈薩克斯坦、阿爾泰到亞庫梯地區(qū)為多，我國東北、內(nèi)蒙 古、華北、西北及青海等省均有分布。星星草的最大特點在于有很強的抗鹽堿能力，能在PH 9-11的鹽堿地上生長發(fā)育，經(jīng)常在光堿斑周圍構(gòu)成星星草群落、羊草+星星草群落等。另 外，星星草蛋白質(zhì)含量高，適口性好，是馬、牛、羊喜食的優(yōu)良牧草。利用星星草，黑龍江、吉 林及內(nèi)蒙古河套灌區(qū)的鹽堿地的治理取得了顯著的效果。近年來，生物技術(shù)育種在重要農(nóng)作物育種工作中已經(jīng)廣泛使用，很多研究成果已 應(yīng)用于生產(chǎn)實踐。牧草生物技術(shù)育種研究工作起步比較晚，但也已取得了較明顯的進展，在 美國、加拿大及歐洲的一些國家，生物技術(shù)已經(jīng)應(yīng)用于牧草育種的不同方面。在牧草的組織 培養(yǎng)特別是愈傷組織培養(yǎng)中經(jīng)?？沙霈F(xiàn)一些變異植株。在羊茅、黑麥草的組織培養(yǎng)過程中 曾觀察到細胞學(xué)和形態(tài)學(xué)變異以及染色體變異的植株。目前，在利用體細胞克隆變異進行 牧草育種工作中，經(jīng)常采用在培養(yǎng)基中加入化學(xué)誘變劑或結(jié)合物理誘變等技術(shù)，進一步增 加變異頻率，以期提高育種效率，并已成功培育出苜蓿、狗芽草、結(jié)縷草和野大麥等多種優(yōu) 良的抗性牧草。但星星草的自然發(fā)芽率低且新品種較少。目前常用的實生種苗繁殖、分蘗 繁殖均受季節(jié)的影響，且繁殖系數(shù)較低，不適用于星星草的繁殖；自然或人工雜交的方法繁 育新品種不僅難度較大，且時間持續(xù)過長。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是，提供一種星星草愈傷組織的誘導(dǎo)方法，以有利于 星星草的繁殖和新品種培育。本發(fā)明是這樣實現(xiàn)的，星星草愈傷組織的誘導(dǎo)方法，所述的方法是，先配置出愈傷 組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基，配置時，采用基本培養(yǎng)基MS或N6，在基本培養(yǎng)基內(nèi)分別加入基本培養(yǎng)基 重量的2 4%的蔗糖和基本培養(yǎng)基重量的0. 2 0. 4%的植物凝膠并進行混合，將上述混 合后的物料的PH值調(diào)整為5. 7 5. 9，然后添加激素，激素的用量為每升上述混合后的物料 添加0. 01 0. 5mg，制成愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基；將星星草成熟種子剝?nèi)シf殼，用自來水浸泡0. 7 0. 9小時，用無菌水沖洗后，再用質(zhì)量百分比濃度為70%的酒精浸泡30 60秒，用 質(zhì)量百分比濃度為0. 09 0. 11%的氯化汞或質(zhì)量百分比濃度為1. 8 2. 的次氯酸鈉 對星星草成熟種子進行消毒處理后，用無菌水沖洗，再將星星草成熟種子接種于愈傷組織 誘導(dǎo)培養(yǎng)基，在24 溫度下，暗培養(yǎng)27 四天。這種星星草愈傷組織誘導(dǎo)方法，可有效克服星星草數(shù)量少、種類不足的問題。與自 然育種相比，該方法可更好地應(yīng)用于星星草組織培養(yǎng)快繁技術(shù)和利用體細胞克隆變異進行 牧草育種工作?？朔藢嵣N苗繁殖、分蘗繁殖受季節(jié)的影響、繁殖系數(shù)較低的問題；易于 繁育新品種，繁育時間短。該方法還可為星星草無性系植物種群的生態(tài)學(xué)研究提供較純的 植株。
具體實施例方式下面進一步說明本發(fā)明。所述的激素為2，4_ 二氯苯氧乙酸、6-芐氨基嘌呤和植物激素KT中的一種。2， 4-二氯苯氧乙酸一般簡稱為2，4-D、6-芐氨基嘌呤一般簡稱為6-BA。植物激素KT可簡稱 為KT。所述的植物激素KT也稱為激動素KT或外源激素KT。試驗表明星星草成熟種子接種于愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基后，5 10天萌發(fā)出芽，14 天左右芽基部膨大開始形成愈傷；愈傷組織形成初期，生長十分緩慢，外觀呈現(xiàn)半透明的乳 白色，水漬狀，外表粘稠且柔軟。在不同的誘導(dǎo)培養(yǎng)基條件下，均能誘導(dǎo)出愈傷組織，2，4_二 氯苯氧乙酸對愈傷組織的誘導(dǎo)效果顯著，2，4_ 二氯苯氧乙酸的增加明顯促進愈傷組織的形 成?；九囵B(yǎng)基N6相對于基本培養(yǎng)基MS為基礎(chǔ)的誘導(dǎo)培養(yǎng)基誘導(dǎo)的愈傷組織質(zhì)地較為致 密，可能是基本培養(yǎng)基N6的氮源能夠促進愈傷組織緊密生長。實施例1星星草愈傷組織的誘導(dǎo)方法，所述的方法是，先配置出愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基，配置 時，采用基本培養(yǎng)基N6，在基本培養(yǎng)基內(nèi)分別加入基本培養(yǎng)基重量的4%的蔗糖和基本培 養(yǎng)基重量的0. 2%的植物凝膠并進行混合，將上述混合后的物料的pH值調(diào)整為5. 9，然后添 加激素，激素的用量為每升上述混合后的物料添加0. Olmg，制成愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基；將 星星草成熟種子剝?nèi)シf殼，用自來水浸泡0. 9小時，用無菌水沖洗后，再用質(zhì)量百分比濃度 為70%的酒精浸泡30秒，用質(zhì)量百分比濃度為2. 的次氯酸鈉對星星草成熟種子進行 消毒處理后，用無菌水沖洗，再將星星草成熟種子接種于愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基，在溫度 下，暗培養(yǎng)四天。所添加的激素為2，4-二氯苯氧乙酸。實施例2星星草愈傷組織的誘導(dǎo)方法，所述的方法是，先配置出愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基，配置 時，采用基本培養(yǎng)基MS，在基本培養(yǎng)基內(nèi)分別加入基本培養(yǎng)基重量的2%的蔗糖和基本培 養(yǎng)基重量的0. 4%的植物凝膠并進行混合，將上述混合后的物料的pH值調(diào)整為5. 7，然后添 加激素，激素的用量為每升上述混合后的物料添加0. 5mg，制成愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基；將星 星草成熟種子剝?nèi)シf殼，用自來水浸泡0. 7小時，用無菌水沖洗后，再用質(zhì)量百分比濃度為 70%的酒精浸泡60秒，用質(zhì)量百分比濃度為0. 09%的氯化汞對星星草成熟種子進行消毒 處理后，用無菌水沖洗，再將星星草成熟種子接種于愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基，在^TC溫度下，暗培養(yǎng)27天。所添加的激素為6-芐氨基嘌呤。實施例3星星草愈傷組織的誘導(dǎo)方法，所述的方法是，先配置出愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基，配置 時，采用基本培養(yǎng)基N6，在基本培養(yǎng)基內(nèi)分別加入基本培養(yǎng)基重量的3%的蔗糖和基本培 養(yǎng)基重量的0. 3%的植物凝膠并進行混合，將上述混合后的物料的pH值調(diào)整為5. 8，然后 添加激素，激素的用量為每升上述混合后的物料添加0. 25mg，制成愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基； 將星星草成熟種子剝?nèi)シf殼，用自來水浸泡0. 8小時，用無菌水沖洗后，再用質(zhì)量百分比濃 度為70%的酒精浸泡45秒，用質(zhì)量百分比濃度為0. 10%的氯化汞對星星草成熟種子進行 消毒處理后，用無菌水沖洗，再將星星草成熟種子接種于愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基，在25°C溫度 下，暗培養(yǎng)觀天。所添加的激素為植物激素KT。
權(quán)利要求
1.星星草愈傷組織的誘導(dǎo)方法，其特征在于，所述的方法是，先配置出愈傷組織誘導(dǎo) 培養(yǎng)基，配置時，采用基本培養(yǎng)基MS或N6，在基本培養(yǎng)基內(nèi)分別加入基本培養(yǎng)基重量的 2 4%的蔗糖和基本培養(yǎng)基重量的0. 2 0. 4%的植物凝膠并進行混合，將上述混合后 的物料的PH值調(diào)整為5. 7 5. 9，然后添加激素，激素的用量為每升上述混合后的物料添 加0. 01 0. 5mg，制成愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基；將星星草成熟種子剝?nèi)シf殼，用自來水浸泡 0. 7 0. 9小時，用無菌水沖洗后，再用質(zhì)量百分比濃度為70%的酒精浸泡30 60秒，用 質(zhì)量百分比濃度為0. 09 0. 11%的氯化汞或質(zhì)量百分比濃度為1. 8 2. 的次氯酸鈉 對星星草成熟種子進行消毒處理后，用無菌水沖洗，再將星星草成熟種子接種于愈傷組織 誘導(dǎo)培養(yǎng)基，在24 溫度下，暗培養(yǎng)27 四天。
2.如權(quán)利要求1所述的星星草愈傷組織的誘導(dǎo)方法，其特征在于，所述的激素為2， 4- 二氯苯氧乙酸、6-芐氨基嘌呤和植物激素KT中的一種。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種星星草愈傷組織的誘導(dǎo)方法，所述的方法是，先配置出愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基，采用基本培養(yǎng)基MS或N6，在基本培養(yǎng)基內(nèi)分別加入蔗糖和植物凝膠并進行混合，然后添加激素，制成愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基；將星星草成熟種子剝?nèi)シf殼，浸泡、沖洗后，再用酒精浸泡，用氯化汞或次氯酸鈉消毒處理，用無菌水沖洗，再將種子接種于愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基，在24～26℃溫度下暗培養(yǎng)。這種星星草愈傷組織誘導(dǎo)方法，可有效克服星星草數(shù)量少、種類不足的問題。可更好地應(yīng)用于星星草組織培養(yǎng)快繁技術(shù)和利用體細胞克隆變異進行牧草育種工作?？朔藢嵣N苗繁殖、分蘗繁殖受季節(jié)的影響、繁殖系數(shù)較低的問題；易于繁育新品種，繁育時間短。
文檔編號A01H4/00GK102138520SQ20101010694
公開日2011年8月3日 申請日期2010年2月3日 優(yōu)先權(quán)日2010年2月3日
發(fā)明者馮會, 孫國榮, 張曉博, 王臺, 石文山, 陳剛 申請人:濱州職業(yè)學(xué)院