專利名稱：白雪菇菌種及子實體的培養(yǎng)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種野生食用菌菌種和子實體的培養(yǎng)方法，尤其涉及一種白雪菇菌種 及子實體的培養(yǎng)方法。
背景技術(shù)：
全世界10000多種的野生大型真菌中，半數(shù)以上具有不同經(jīng)濟價值，其中不少于 2000種有重要的食用價值和藥用價值。我國已知的食用菌有1000多種，200多種可以試驗 性栽培，約100多種可經(jīng)濟性栽培，50多種商業(yè)性栽培，工業(yè)化栽培的約10多種，大部分野 生菌類還未馴化栽培成功。摸索出具有較高食用價值和藥用價值食用、藥用菌的人工培養(yǎng)、 馴化栽培方法，一直以來是食用菌科研工作者和從業(yè)人員研究的熱點之一。目前大部分野 生食用菌還不能人工栽培，主要是因為有些是共生菌，離開共生環(huán)境無法完成生活史，不能 培養(yǎng)出子實體，有些是因為沒有摸索出適合野生菌生長的培養(yǎng)基配方、生長環(huán)境條件或栽 培管理方法，有些是分離不出純菌絲體等等。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種可人工栽培、品質(zhì)優(yōu)、具有保健和醫(yī)藥功效潛力的食用 菌新品種白雪菇菌種及子實體的培養(yǎng)方法。本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)的本發(fā)明的白雪菇菌種及子實體的培養(yǎng)方法，包括步驟A、純菌絲體的分離培養(yǎng)采集野生未開傘白雪菇子實體，在無菌條件下進行消毒后接入專用斜面培養(yǎng)基 上，在溫度25-28°C、空氣相對濕度< 65%的黑暗環(huán)境培養(yǎng)10-15天，馴化獲得白雪菇菌絲 體；B、進行白雪菇專用原種和生產(chǎn)種的培養(yǎng)；C、進行白雪菇子實體培育；用培育后的白雪菇子實體重復(fù)上述步驟，能重復(fù)進行白雪菇子實體的培育；所述白雪菇菌絲體和白雪菇子實體由中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生 物中心收藏保存，登記入冊編號為CGMCCNo. 1190。由上述本發(fā)明提供的技術(shù)方案可以看出，本發(fā)明所述的白雪菇菌種及子實體的培 養(yǎng)方法，培養(yǎng)的白雪菇菌絲體和白雪菇子實體可人工栽培、品質(zhì)優(yōu)、具有保健和醫(yī)藥功效潛 力。


圖1為本發(fā)明中菌棒的平面布置圖；圖2為本發(fā)明中菌棒布置的剖面圖。保藏信息
保藏微生物(株)分類命名肥腳百鬼傘，又名肥環(huán)柄菇；俗稱白雪菇；UMW^.^ ( tt ) iiT^^ Leucocoprinus cepaetipes (Sow. :Fr. )Part.保藏單位中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(CGMCC)；保藏單位地址北京市海淀區(qū)中關(guān)村北一條13號，中國科學(xué)院微生物研究所；保藏日期2004年7月14日；保藏編號CGMCCNo. 1190。
具體實施方式
本發(fā)明的白雪菇(肥腳白鬼傘)菌種及子實體的培養(yǎng)方法，其較佳的具體實施方 式，包括步驟A、純菌絲體的分離培養(yǎng)采集野生未開傘白雪菇子實體，在無菌條件下進行消毒后接入專用斜面培養(yǎng)基 上，在溫度25-28°C、空氣相對濕度< 65%的黑暗環(huán)境培養(yǎng)10-15天，馴化獲得白雪菇菌絲 體；B、進行白雪菇專用原種和生產(chǎn)種的培養(yǎng)；C、進行白雪菇子實體培育；用培育后的白雪菇子實體重復(fù)上述步驟，能重復(fù)進行白雪菇子實體的培育；所述白雪菇菌絲體和白雪菇子實體由中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生 物中心收藏保存，登記入冊編號為CGMCCNo. 1190。所述步驟A包括步驟Al、專用斜面培養(yǎng)基的制作，包括專用斜面培養(yǎng)基的原料配方包括每配制容量為1000毫升的培養(yǎng)基包括野生白雪菇生長地的闊葉林下腐殖土 100 克、粉碎成顆粒的黃豆50克、切成顆?；蚱瑺畹娜テゑR鈴薯200克、葡萄糖20克、蛋白胨2 克、磷酸二氫鉀2克、硫酸鎂1克、維生素B12 4片、瓊脂20克；所述專用斜面培養(yǎng)基制作的工藝流程包括首先，根據(jù)需要配制的專用斜面培養(yǎng)基的量按上述配方稱取原料，每配制容量為 1000毫升的培養(yǎng)基用1500毫升水浸泡并不斷攪拌腐殖土 5分鐘，并用4層紗布過濾取濾 液，向濾液中加入黃豆粗粉煮沸10分鐘，加入去皮馬鈴薯續(xù)煮10分鐘，用紗布過濾取濾 液；然后，向濾液中加入瓊脂煮溶，加入葡萄糖攪拌，加入蛋白胨、磷酸二氫鉀、硫酸 鎂，并調(diào)酸堿度；之后，用管分裝、將管塞棉塞、滅菌、擺斜面、檢驗備用；A2、白雪菇純菌絲體的接種和培養(yǎng)，包括首先，在無菌條件下對野生未開傘白雪菇進行消毒，從子實體頂部取米粒大小菌 肉接種到所述專用斜面培養(yǎng)基上，將菌肉的一半壓入培養(yǎng)基；然后，將接好的斜面放在溫度25_28°C、空氣相對濕度< 65%的黑暗環(huán)境培養(yǎng)， 10-15天后獲得白雪菇菌絲體；菌絲長滿后繼續(xù)轉(zhuǎn)管或接二級種或4_8°C保藏。
所述步驟B包括步驟B1、專用原種、生產(chǎn)種培養(yǎng)基的制作，包括專用原種、生產(chǎn)種培養(yǎng)基的原料配方包括小麥或玉米粒70份、闊葉林下腐殖土 10份、棉籽殼5份、雜木屑5份、麥麩4份、 玉米粉2份、碳酸鈣2份、復(fù)合肥1份、白糖1份，并含維生素少量，含水量占調(diào)配好后的培 養(yǎng)基重量的55% -60% ；專用原種、生產(chǎn)種培養(yǎng)基的制作流程包括根據(jù)需要調(diào)配的培養(yǎng)基的量按上述配方比例稱量各成分，每配制100公斤的培養(yǎng) 基，稱量小麥或玉米粒70公斤，加水浸泡3小時，然后水煮，煮至小麥或玉米粒無白心但小 麥?；蛴衩琢１砥げ黄萍纯?，過濾出濾液留下，用于配其他成分；將棉籽殼5公斤加所述濾 液10公斤預(yù)濕；將闊葉林下腐殖土 10公斤、雜木屑5公斤、麥麩4公斤、玉米粉2公斤、碳 酸鈣2公斤、復(fù)合肥1公斤、白糖1公斤充分混合，加30公斤濾液，充分拌勻；將拌好的料與 預(yù)濕的棉籽殼和煮好的小麥或玉米?；旌显谝黄?，充分拌勻；B2、裝袋、滅菌和接種選用常規(guī)聚丙烯菌種袋，將配好的專用原種、生產(chǎn)種培養(yǎng)基裝袋，接入步驟A中獲 得的白雪菇菌絲體，滅菌、接種按常規(guī)方法進行；B3、菌種培養(yǎng)將接好的原種和生產(chǎn)種袋放入培養(yǎng)箱或培養(yǎng)室培養(yǎng)，保持溫度25_28°C、空氣相對 濕度< 65%的黑暗環(huán)境；培養(yǎng)7-10天后菌絲長滿培養(yǎng)基表面時，用一只手捏緊袋口，另一只手輕輕揉搓培 養(yǎng)基，使袋子表面長有菌絲的培養(yǎng)基與袋子中下部未長菌絲的培養(yǎng)基混合，進行二次接種； 經(jīng)此處理后，再培養(yǎng)7-10天菌絲長滿全袋，直接能夠用于生產(chǎn)。所述步驟C包括步驟C1、子實體培育的培養(yǎng)基的制作包括子實體培育的培養(yǎng)基的原料配方包括闊葉林下腐殖土 10份、棉籽殼40份、雜木屑35份、麥麩10份、玉米粉3份、碳酸 鈣1份、復(fù)合肥1份、白糖1份，含水量占調(diào)配好后的培養(yǎng)基重量的55% -60% ；培養(yǎng)基的制作流程包括根據(jù)需要調(diào)配的培養(yǎng)基的量按上述配方比例稱量各成分，每配制100公斤子實體 培育的培養(yǎng)基，將棉籽殼放入拌料機內(nèi)，按棉籽殼水=4 6比例加水，充分翻拌、預(yù)濕， 預(yù)濕后堆置36-48小時；將闊葉林下腐殖土、雜木屑、麥麩、玉米粉、碳酸鈣、復(fù)合肥、白糖充 分混合，按料水比5 6加水，充分拌勻，將拌好的混合料與預(yù)濕的棉籽殼混合，充分拌 勻；C2、對步驟B中培養(yǎng)好的白雪菇專用原種和生產(chǎn)種菌袋進行出菇管理，包括將長好的菌袋搬入出菇場所，脫去塑料袋，將脫去塑料袋的菌棒整齊排放，每畦橫 放2棒作一排，畦寬度60厘米，菌棒間距離5-10厘米；采集闊葉林下腐殖土，曬干作為覆土材料備用；覆土?xí)r，將準備好的覆土材料加清 水調(diào)制成含水量20%，將覆土材料填充在菌棒之間，蓋住菌棒的四分之三。增加培養(yǎng)場所光線，光照度100-5001x，避免陽光直射，保持環(huán)境溫度15_25°C，空氣相對濕度80% -95%,保持通風(fēng)換氣，用噴細霧方式加濕，保持覆土表面濕潤、不發(fā)白，10 天后子實體原基發(fā)生；子實體原基發(fā)生后，保持培養(yǎng)場所光照度2001x，溫度20°C，空氣相對濕度90%， 增加通風(fēng)換氣，保持覆土表面濕潤、不發(fā)白，5天后，見子實體未開傘時即采收。白雪 ，學(xué)名“肥環(huán)柄菇”、亦稱“肥腳白鬼傘”，是一種未馴化栽培成功的營養(yǎng)豐 富、具有較高經(jīng)濟價值的珍稀野生食用菌。據(jù)廣州分析測試中心對本發(fā)明之成功馴化培養(yǎng)的子實體分析表明白雪菇的粗 蛋白含量達到25. 6%，多糖含量達到3. 06%。根據(jù)《食品安全性毒理學(xué)評價程序和方法》 GB15193. (3、4、5、7)-2003進行毒性試驗，結(jié)果表明白雪菇子實體無毒，安全可吃。本發(fā)明采用配制專門針對馴化珍稀野生食用菌白雪菇的培養(yǎng)基，純化出白雪菇 純菌絲體，并培養(yǎng)出白雪菇的子實體，首次在國內(nèi)外成功采集分離出白雪菇菌絲體，已 被中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心收藏保存(保藏中心登記入冊編號 CGMCCNo. 1190)，并在國內(nèi)外首次馴化栽培出白雪菇的子實體，為業(yè)界提供了一種人工大規(guī) 模生產(chǎn)新食用菌品種-白雪菇菌種及子實體的方法。下面對本發(fā)明的白雪菇子實體及其培養(yǎng)方法進行詳細的描述，該方法步驟如下 1、純菌絲體的分離培養(yǎng)對采集的野生未開傘白雪菇子實體，在無菌條件下進行消毒后接入專用斜面培養(yǎng) 基上，在溫度25-28°C、空氣相對濕度< 65%的黑暗環(huán)境培養(yǎng)10-15天，馴化獲得白雪菇菌 絲體。其具體方法為①專用斜面培養(yǎng)基制作a)專用斜面培養(yǎng)基配方(舉例)野生菇生長地的闊葉林下腐殖土 100克，黃豆 (粉碎成顆粒)50克，去皮馬鈴薯200克(切成1立方厘米左右顆?；蚯衅?，葡萄糖20克， 蛋白胨2克，磷酸二氫鉀2克，硫酸鎂1克，維生素B12 4片，瓊脂20克，培養(yǎng)基最終容量 為1000毫升。b)專用斜面培養(yǎng)基制作的工藝流程原料的稱量一用1500毫升水浸泡并不斷攪 拌腐殖土 5分鐘一用4層紗布過濾取濾液一濾液加入黃豆粗粉煮沸10分鐘一加入去皮馬 鈴薯續(xù)煮10分鐘一紗布過濾取濾液一濾液加入瓊脂煮溶一加入葡萄糖攪拌一加入蛋白 胨、磷酸二氫鉀、硫酸鎂等一按常規(guī)方法調(diào)酸堿度一分裝一塞棉塞一滅菌一擺斜面一檢驗 備用。②純菌絲體的接種和培養(yǎng)a)在無菌條件下對野生未開傘白雪菇進行消毒，從子實體頂部取米粒大小菌肉接 種到馴化專用斜面培養(yǎng)基上，將菌肉的一半壓入培養(yǎng)基。b)將接好的斜面放在溫度25-28°C、空氣相對濕度< 65%的黑暗環(huán)境培養(yǎng)，10-15 天后獲得白雪菇菌絲體。菌絲長滿后可繼續(xù)轉(zhuǎn)管或接二級種，亦可保藏在冰箱內(nèi)。③用專用斜面培養(yǎng)基對菌絲體進行定期轉(zhuǎn)管繁殖，4_8°C保藏，蠟封管口棉塞，從 2004年至今不發(fā)生退化。④菌種和子實體送中國科學(xué)院微生物研究所鑒定，并于2004年7月14日由 中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心收藏保存(保藏中心登記入冊編號 CGMCCNo. 1190)。
2、白雪菇專用原種、生產(chǎn)種的培養(yǎng)①專用原種、生產(chǎn)種培養(yǎng)基配方小麥或玉米粒70%，闊葉林下腐殖土(剔除石塊、粗樹枝等)10%，棉籽殼5%，雜 木屑5%，麥麩4%，玉米粉2%，碳酸鈣2%，復(fù)合肥1%，白糖1%，及維生素少量，含水量占 調(diào)配好后的培養(yǎng)基重量的55% -60%。②專用原種、生產(chǎn)種的調(diào)配(舉例)根據(jù)需要調(diào)配的培養(yǎng)基的量按上述配方比例稱量各成分，按配100公斤來計，稱 量小麥或玉米粒70公斤，加水浸泡3小時，然后水煮，煮至小麥或玉米粒無白心但小麥?；?玉米粒表皮不破即可，過濾出濾液留下，用于配其他成分。稱取闊葉林下腐殖土、棉籽殼等 成分；將棉籽殼加濾液10公斤預(yù)濕；將闊葉林下腐殖土(剔除石塊、粗樹枝等)10公斤、雜 木屑5公斤、麥麩4公斤、玉米粉2公斤、碳酸鈣2公斤、復(fù)合肥1公斤、白糖1公斤充分混 合，加30公斤濾液，充分拌勻；將拌好的料與預(yù)濕的棉籽殼和煮好的小麥或玉米?；旌显?一起，充分拌勻，即成含水量約55%的原種、生產(chǎn)種用培養(yǎng)基。③裝袋、滅菌、接種a)裝袋配好的培養(yǎng)料要及時裝袋，選用菌種袋通常用長X寬為31厘米X 17厘 米、厚5絲米的聚丙烯袋。裝料時，培養(yǎng)料裝三分之一袋即可，無需壓實，裝好料后，先套上 專用頸圈，然后用棉塞或無棉塑料蓋封口，并將菌種袋外壁掃干凈。b)滅菌培養(yǎng)基的滅菌通常用高壓蒸汽滅菌鍋，按常規(guī)方法滅菌，滅菌后，將袋搬 入接種室，待袋內(nèi)培養(yǎng)料溫度降至30°C以下即可接種。c)接種原種、栽培種的接種必須按無菌操作規(guī)程進行。按常規(guī)方法進行接種即可。④菌種培養(yǎng)接好的原種、栽培種，應(yīng)盡快放入培養(yǎng)箱或培養(yǎng)室培養(yǎng)，保持溫度25_28°C、空氣相 對濕度< 65%的黑暗環(huán)境。培養(yǎng)期間，必須經(jīng)常檢查，發(fā)現(xiàn)菌絲生長不正?；蛭廴镜囊皶r 揀出，在上述環(huán)境條件下，40天左右長滿全袋。可以采用快速培養(yǎng)新方法(二次接種法)，具體操作是培養(yǎng)7-10天的菌絲長滿 培養(yǎng)基表面時，用一只手捏緊袋口，另一只手輕輕揉搓培養(yǎng)基，使袋子表面長有菌絲的培養(yǎng) 基與袋子中下部未長菌絲的培養(yǎng)基混合，進行二次接種；經(jīng)此處理后，再培養(yǎng)7-10天菌絲 即可長滿全袋，直接可用于生產(chǎn)，新方法比傳統(tǒng)的培養(yǎng)方法在培養(yǎng)時間上，由40天左右縮 短至15-20天，大大節(jié)省時間、場地，從而提高經(jīng)濟效益。3、白雪菇子實體培育①子實體培育的培養(yǎng)基配方闊葉林下腐殖土(剔除石塊、粗樹枝等)10%，棉籽 殼40%，雜木屑35%，麥麩10%，玉米粉3%，碳酸鈣1%，復(fù)合肥1%，白糖1%，含水量占調(diào) 配好后的培養(yǎng)基重量的55% -60%。②培養(yǎng)基的調(diào)配(舉例)按配100公斤來計，稱量闊葉林下腐殖土(剔除石塊、粗樹枝等)10公斤，棉籽殼 40公斤，雜木屑35公斤，麥麩10公斤，玉米粉3公斤，碳酸鈣1公斤，復(fù)合肥1公斤，白糖 1公斤，含水量占調(diào)配好后的培養(yǎng)基重量的55%。將棉籽殼放入拌料機內(nèi)，按棉籽殼水 =4 6比例加水，開動拌料機充分翻拌、預(yù)濕，預(yù)濕后堆置36-48小時，將闊葉林下腐殖土
8(剔除石塊、粗樹枝等)、雜木屑、麥麩、玉米粉、碳酸鈣、復(fù)合肥、白糖1等材料充分混合，按 料水比5 6加水，充分拌勻，將拌好的混合料與預(yù)濕的棉籽殼加入拌料機，充分拌勻，即成 含水量約55%左右的栽培用培養(yǎng)基。③菌袋培養(yǎng)按常規(guī)食用菌袋式栽培方式裝袋、滅菌、接種的菌袋，盡快放入培養(yǎng)室培養(yǎng)，保持 溫度25-28°C、空氣相對濕度< 65%的黑暗環(huán)境，每天通風(fēng)2-3次，45天左右長滿全袋，即可 進行出菇管理。④菌袋培養(yǎng)接好的菌袋，盡快放入培養(yǎng)室培養(yǎng)，保持溫度25-28°C、空氣相對濕度< 65%的黑 暗環(huán)境，每天通風(fēng)2-3次，培養(yǎng)期間，必須經(jīng)常檢查，發(fā)現(xiàn)菌絲生長不正常或污染的要及時 揀出，在上述環(huán)境條件下，45天左右長滿全袋，即可進行出菇管理。⑤出菇管理菌絲長滿、長透菌袋后，開始進行出菇管理。a)栽培場地整理可以在菇房或大棚(要遮陽，不能陽光直射)內(nèi)進行，先清理干 凈地面、打掃環(huán)境衛(wèi)生，地面以噴霧方式噴石灰水，以噴濕地面為度，適當通風(fēng)至地面無積 水。b)菌棒排放及間距如圖1所示(俯視圖，圖內(nèi)5排均為菌棒，菌棒底部及四周為 土壤。)，將長好的菌袋搬入出菇場所，脫去塑料袋(不能弄碎菌棒)，將脫去塑料袋的菌棒 整齊排放，每畦橫放2棒作一排，畦寬度約60厘米，菌棒間距離5-10厘米。c)采用“菌棒半覆土法”如圖2所示，(切面圖，圓形均為菌棒，其余為覆土材 料。)，采集闊葉林下腐殖土(剔除石塊、粗樹枝等)，曬干備用，覆土?xí)r，將準備好的覆土材 料加清水調(diào)制成含水量20 %，將覆土材料填充在菌棒之間，蓋住菌棒的四分之三左右。d)誘導(dǎo)子實體形成增加培養(yǎng)場所光線，光照度100-5001X，避免陽光直射，保持 環(huán)境溫度15-25°C，空氣相對濕度80% -95%，保持通風(fēng)換氣，用噴細霧方式加濕，保持覆土 表面濕潤不發(fā)白。10天左右可見子實體原基發(fā)生，進入發(fā)育階段管理。e)子實體發(fā)育管理保持培養(yǎng)場所光照度2001x左右，溫度20°C左右，空氣相對濕 度90%左右，增加通風(fēng)換氣，保持覆土表面濕潤、不發(fā)白，5天左右可見子實體未開傘時即 采收。f)采收當子實體長至5厘米左右高、未開傘即要采收，子實體開傘后會降低甚至 失去商品價值。采收時，將整叢子實體采下，除去基部的雜質(zhì)，可鮮品銷售，亦可烘干，鮮品 味道鮮美、干品香氣濃郁。g)重復(fù)d_f，可收3批菇。h)清理廢料，打掃衛(wèi)生，進入下一次栽培。本發(fā)明的優(yōu)點及創(chuàng)新點1、本發(fā)明采用的是野外采集的野生白雪菇，未見有分離成功的報道。2、本發(fā)明的菌種制作采用專用的新培養(yǎng)基配方和相配套的新配制方法，具有適合 白雪菇菌絲生長發(fā)育的營養(yǎng)，2004年7月至今未發(fā)生退化。3、原種、栽培種及栽培用培養(yǎng)基都添加闊葉林下腐殖土，并采用“半覆土新工藝” 是馴化栽培成功因素之一。
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4、原種、栽培種培養(yǎng)7-10天時采用新發(fā)明的二次接種法，比現(xiàn)有方法縮短培養(yǎng)時 間一半，顯著提高生產(chǎn)效率。5、菌棒半覆土法是專門馴化白雪菇的方法，使子實體容易發(fā)生、生長良好，且采收 時子實體干凈很少粘上泥土。6、誘導(dǎo)子實體形成及子實體發(fā)育管理階段，采取了特定的光照度、環(huán)境溫度、空氣 相對濕度等條件，以保證子實體原基發(fā)生及子實體未開傘。具體實施例，包括步驟 1、野生菌種分離(1)制作專用培養(yǎng)基原料及配比野生菇生長地的闊葉林下腐殖土 100克，黃豆(粉碎成顆粒)50克， 去皮馬鈴薯200克(切成1立方厘米左右顆?；蚯衅?，葡萄糖20克，蛋白胨2克，磷酸二 氫鉀2克，硫酸鎂1克，維生素B13片，瓊脂20克。營養(yǎng)濾液制作用1500毫升水浸泡腐殖土 5分鐘期間不斷攪拌一用4層紗布過濾 取濾液一水煮沸黃豆粗粉10分鐘一加去皮馬鈴薯續(xù)煮10分鐘一紗布過濾，獲得營養(yǎng)濾液。斜面試管制作營養(yǎng)濾液加20克瓊脂煮溶，加葡萄糖20克，蛋白胨2克，磷酸二氫 鉀2克，硫酸鎂1克，維生素B13片，攪拌并按常規(guī)方法調(diào)酸堿度至pH值為6. 5，將營養(yǎng)液分 裝入試管中，塞好棉塞進行，滅菌后擺斜面，檢驗無污染后用于接種。(2)接種及擴繁采集野生未開傘白雪菇子實體，經(jīng)消毒后接入專用斜面培養(yǎng)基 上，在溫度25-28°C、空氣相對濕度<65%的黑暗環(huán)境培養(yǎng)12天，獲得白雪菇母種。將獲得 的母種再轉(zhuǎn)接到斜面培養(yǎng)基上，在上述同樣條件下培養(yǎng)進行繁殖，生長好后供給制作原種。2、專用原種、生產(chǎn)種的制作按配(干料重)200公斤培養(yǎng)基來計，稱量小麥或玉米粒140公斤，闊葉林下腐殖 土(剔除石塊、粗樹枝等)20公斤，棉籽殼10公斤，雜木屑10公斤，麥麩8公斤，玉米粉4公 斤，碳酸鈣4公斤，復(fù)合肥2公斤，白糖2公斤，及維生素BllOO片。按發(fā)明內(nèi)容(2)操作， 配制出含水量約55%的原種、生產(chǎn)種用培養(yǎng)基。然后及時裝袋、滅菌。冷卻后接種，原種、栽 培種的接種必須按無菌操作規(guī)程進行。按常規(guī)方法進行接種即可。菌種培養(yǎng)接好的原種、栽培種，應(yīng)盡快放入培養(yǎng)箱或培養(yǎng)室培養(yǎng)，保持溫度 25-28°C、空氣相對濕度< 65%的黑暗環(huán)境。采用新法實現(xiàn)快速培養(yǎng)，原種、栽培種分別培養(yǎng) 15天左右即可。3、子實體培育(1)培養(yǎng)基的調(diào)配按配1000公斤栽培用培養(yǎng)基來計，稱量闊葉林下腐殖土(剔除石塊、粗樹枝 等)100公斤，棉籽殼400公斤，雜木屑350公斤，麥麩100公斤，玉米粉30公斤，碳酸鈣10 公斤，復(fù)合肥10公斤，白糖10公斤，按發(fā)明技術(shù)方案(3)②配成含水量55%的培養(yǎng)基。(2)裝袋、滅菌、接種按常規(guī)食用菌袋式栽培方式進行操作。(3)菌袋培養(yǎng)、出菇管理、采收等按發(fā)明技術(shù)方案(3)③、④、⑤進行操作。子實體開傘后會降低甚至失去商品價值。采收時，將整叢子實體采下，除去基部的 雜質(zhì)，可鮮品銷售，亦可烘干，鮮品味道鮮美、干品香氣濃郁。本發(fā)明的有益效果是采用從野生環(huán)境中采集的前人未栽培馴化成功的白雪菇子實體中分離出純化菌種，并根據(jù)野生子實體的生長特性經(jīng)研究試驗，探索出人工培養(yǎng)白雪 菇子實體的方案。經(jīng)檢測分析人工培養(yǎng)的白雪菇子實體成分，其中蛋白質(zhì)含量超過25%，多 糖含量為3. 06%，比許多已栽培成功的菌類高。菌類多糖具有提高免疫力等方面功效，白雪 菇的馴化栽培成功，將為人類增加保健產(chǎn)品上佳原料。本發(fā)明使人工栽培的食用菌種類增加了新的品種，白雪菇的鮮菇和干品都具有很 好的口感和味道，可大規(guī)模生產(chǎn)，供應(yīng)國內(nèi)外市場，將產(chǎn)生巨大的社會經(jīng)濟效益。以上所述，僅為本發(fā)明較佳的具體實施方式
，但本發(fā)明的保護范圍并不局限于此， 任何熟悉本技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員在本發(fā)明揭露的技術(shù)范圍內(nèi)，可輕易想到的變化或替換， 都應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。
權(quán)利要求
一種白雪菇菌種及子實體的培養(yǎng)方法，其特征在于，包括步驟A、純菌絲體的分離培養(yǎng)采集野生未開傘白雪菇子實體，在無菌條件下進行消毒后接入專用斜面培養(yǎng)基上，在溫度25-28℃、空氣相對濕度＜65％的黑暗環(huán)境培養(yǎng)10-15天，馴化獲得白雪菇菌絲體；B、進行白雪菇專用原種和生產(chǎn)種的培養(yǎng)；C、進行白雪菇子實體培育；用培育后的白雪菇子實體重復(fù)上述步驟，能重復(fù)進行白雪菇子實體的培育；所述白雪菇菌絲體和白雪菇子實體由中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心收藏保存，登記入冊編號為CGMCCNo.1190。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的白雪菇菌種及子實體的培養(yǎng)方法，其特征在于，所述步驟A包 括步驟A1、專用斜面培養(yǎng)基的制作，包括 專用斜面培養(yǎng)基的原料配方包括每配制容量為1000毫升的培養(yǎng)基包括野生白雪菇生長地的闊葉林下腐殖土 100克、 粉碎成顆粒的黃豆50克、切成顆粒或片狀的去皮馬鈴薯200克、葡萄糖20克、蛋白胨2克、 磷酸二氫鉀2克、硫酸鎂1克、維生素B12 4片、瓊脂20克； 所述專用斜面培養(yǎng)基制作的工藝流程包括首先，根據(jù)需要配制的專用斜面培養(yǎng)基的量按上述配方稱取原料，每配制容量為1000 毫升的培養(yǎng)基用1500毫升水浸泡并不斷攪拌腐殖土 5分鐘，并用4層紗布過濾取濾液，向 濾液中加入黃豆粗粉煮沸10分鐘，加入去皮馬鈴薯續(xù)煮10分鐘，用紗布過濾取濾液；然后，向濾液中加入瓊脂煮溶，加入葡萄糖攪拌，加入蛋白胨、磷酸二氫鉀、硫酸鎂，并 調(diào)酸堿度；之后，用管分裝、將管塞棉塞、滅菌、擺斜面、檢驗備用； A2、白雪菇純菌絲體的接種和培養(yǎng)，包括首先，在無菌條件下對野生未開傘白雪菇進行消毒，從子實體頂部取米粒大小菌肉接 種到所述專用斜面培養(yǎng)基上，將菌肉的一半壓入培養(yǎng)基；然后，將接好的斜面放在溫度25-28°C、空氣相對濕度< 65%的黑暗環(huán)境培養(yǎng)，10-15 天后獲得白雪菇菌絲體；菌絲長滿后繼續(xù)轉(zhuǎn)管或接二級種或4-8°C保藏。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的白雪菇菌種及子實體的培養(yǎng)方法，其特征在于，所述步驟B包 括步驟B1、專用原種、生產(chǎn)種培養(yǎng)基的制作，包括 專用原種、生產(chǎn)種培養(yǎng)基的原料配方包括小麥或玉米粒70份、闊葉林下腐殖土 10份、棉籽殼5份、雜木屑5份、麥麩4份、玉米 粉2份、碳酸鈣2份、復(fù)合肥1份、白糖1份，并含維生素少量，含水量占調(diào)配好后的培養(yǎng)基 重量的55% -60% ；專用原種、生產(chǎn)種培養(yǎng)基的制作流程包括根據(jù)需要調(diào)配的培養(yǎng)基的量按上述配方比例稱量各成分，每配制100公斤的培養(yǎng)基， 稱量小麥或玉米粒70公斤，加水浸泡3小時，然后水煮，煮至小麥或玉米粒無白心但小麥?；蛴衩琢１砥げ黄萍纯?，過濾出濾液留下，用于配其他成分；將棉籽殼5公斤加所述濾液10 公斤預(yù)濕；將闊葉林下腐殖土 10公斤、雜木屑5公斤、麥麩4公斤、玉米粉2公斤、碳酸鈣2 公斤、復(fù)合肥1公斤、白糖1公斤充分混合，加30公斤濾液，充分拌勻；將拌好的料與預(yù)濕的 棉籽殼和煮好的小麥或玉米粒混合在一起，充分拌勻； B2、裝袋、滅菌和接種選用常規(guī)聚丙烯菌種袋，將配好的專用原種、生產(chǎn)種培養(yǎng)基裝袋，接入步驟A中獲得的 白雪菇菌絲體，滅菌、接種按常規(guī)方法進行； B3、菌種培養(yǎng)將接好的原種和生產(chǎn)種袋放入培養(yǎng)箱或培養(yǎng)室培養(yǎng)，保持溫度25-28°C、空氣相對濕度 < 65%的黑暗環(huán)境；培養(yǎng)7-10天后菌絲長滿培養(yǎng)基表面時，用一只手捏緊袋口，另一只手輕輕揉搓培養(yǎng) 基，使袋子表面長有菌絲的培養(yǎng)基與袋子中下部未長菌絲的培養(yǎng)基混合，進行二次接種；經(jīng) 此處理后，再培養(yǎng)7-10天菌絲長滿全袋，直接能夠用于生產(chǎn)。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的白雪菇菌種及子實體的培養(yǎng)方法，其特征在于，所述步驟C包 括步驟Cl、子實體培育的培養(yǎng)基的制作包括 子實體培育的培養(yǎng)基的原料配方包括闊葉林下腐殖土 10份、棉籽殼40份、雜木屑35份、麥麩10份、玉米粉3份、碳酸鈣1 份、復(fù)合肥1份、白糖1份，含水量占調(diào)配好后的培養(yǎng)基重量的55% -60% ； 培養(yǎng)基的制作流程包括根據(jù)需要調(diào)配的培養(yǎng)基的量按上述配方比例稱量各成分，每配制100公斤子實體培育 的培養(yǎng)基，將棉籽殼放入拌料機內(nèi)，按棉籽殼水=4 6比例加水，充分翻拌、預(yù)濕，預(yù)濕 后堆置36-48小時；將闊葉林下腐殖土、雜木屑、麥麩、玉米粉、碳酸鈣、復(fù)合肥、白糖充分混 合，按料水比5 6加水，充分拌勻，將拌好的混合料與預(yù)濕的棉籽殼混合，充分拌勻； C2、對步驟B中培養(yǎng)好的白雪菇專用原種和生產(chǎn)種菌袋進行出菇管理，包括 將長好的菌袋搬入出菇場所，脫去塑料袋，將脫去塑料袋的菌棒整齊排放，每畦橫放2 棒作一排，畦寬度60厘米，菌棒間距離5-10厘米；采集闊葉林下腐殖土，曬干作為覆土材料備用；覆土?xí)r，將準備好的覆土材料加清水調(diào) 制成含水量20%，將覆土材料填充在菌棒之間，蓋住菌棒的四分之三。增加培養(yǎng)場所光線，光照度100-5001X，避免陽光直射，保持環(huán)境溫度15-25°C，空氣相 對濕度80 % -95 %，保持通風(fēng)換氣，用噴細霧方式加濕，保持覆土表面濕潤、不發(fā)白，10天后 子實體原基發(fā)生；子實體原基發(fā)生后，保持培養(yǎng)場所光照度2001x，溫度20°C，空氣相對濕度90%，增加 通風(fēng)換氣，保持覆土表面濕潤、不發(fā)白，5天后，見子實體未開傘時即采收。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種白雪菇(肥腳白鬼傘)菌種及子實體的培養(yǎng)方法，采集野生未開傘白雪菇子實體，在無菌條件下進行消毒后接入專用斜面培養(yǎng)基上，在溫度25-28℃、空氣相對濕度＜65％的黑暗環(huán)境培養(yǎng)10-15天，馴化獲得白雪菇菌絲體；之后進行白雪菇專用原種和生產(chǎn)種的培養(yǎng)和白雪菇子實體培育。白雪菇菌絲體和白雪菇子實體由中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心收藏保存，登記入冊編號為CGMCCNo.1190?？扇斯ぴ耘?、品質(zhì)優(yōu)、具有保健和醫(yī)藥功效潛力。
文檔編號A01H4/00GK101874453SQ201010160080
公開日2010年11月3日 申請日期2010年4月28日 優(yōu)先權(quán)日2010年4月28日
發(fā)明者何煥清, 潘新華 申請人:潘新華;何煥清