專利名稱：：海南產(chǎn)番木瓜籽提取物及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種番木瓜籽提取物，還涉及該提取物的制備方法及其作為食品、醫(yī)藥、化妝品、飼料或獸藥抗氧化添加劑的用途，屬于植物天然產(chǎn)物綜合開發(fā)利用
技術(shù)領(lǐng)域：
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背景技術(shù)：
：番木瓜(CaricaPapayaL.)是一種熱帶常綠果樹，原產(chǎn)墨西哥和中美洲，在我國主要分布于廣東、海南、廣西、云南、臺灣、福建等省區(qū)，在四川西昌和江西贛州也有少量分布，其中，海南是我國番木瓜栽培最適宜區(qū)。番木瓜果實(shí)用于消費(fèi)后，常遺棄大量的籽、果皮和植株殘?bào)w，引起人居環(huán)境污染，其為可開發(fā)利用的廢棄物資源。為了充分利用番木瓜植物資源，避免人居環(huán)境污染，有必要對番木瓜廢棄物開展抗氧化活性研究，并對番木瓜籽加以深加工利用。番木瓜除用于生產(chǎn)食用保健價(jià)值極高的水果外，在非洲國家還用作藥用，我國近年來也出現(xiàn)將番木瓜果實(shí)和廢棄物開發(fā)為新型藥物的趨勢，番木瓜果實(shí)也常用作保健品和化妝品開發(fā)。番木瓜富含蛋白酶、脂肪酶，這是其開發(fā)為藥物、用作化妝品和食品添加劑等的物質(zhì)基礎(chǔ)，前人主要圍繞番木瓜蛋白酶和脂肪酶開展了較為深入的理論與應(yīng)用研究。實(shí)際上，番木瓜提取物具有抗氧化活性也是其適宜作為藥物、用作化妝品和食品添加劑的重要原因之一，但關(guān)于番木瓜提取物具有抗氧化活性未見研究，對番木瓜次生代謝物圍繞其抗氧化活性加以開發(fā)利用的研究也未見報(bào)道。此外，目前因三聚氰胺和蘇丹紅等食品添加劑的毒性引起人群中的恐慌一直令人對食品添加劑談虎色變，加工產(chǎn)品的安全貯藏保鮮也是人們關(guān)注的焦點(diǎn)，因此，開發(fā)無毒的抗氧化添加劑是非常有必要。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一種番木瓜籽提取物，該提取物以消費(fèi)后的番木瓜籽為原料，實(shí)現(xiàn)廢物再利用，該提取物還具有抗氧化活性，對光照、金屬離子(鈣、鐵和鋅)穩(wěn)定，適宜于酸性條件，在10(TC以下隨溫度升高活性增強(qiáng)，且其安全無毒，可解決加工產(chǎn)品的貯藏保鮮和社會人群對添加劑的驚恐問題。本發(fā)明的目的還在于提供上述番木瓜籽提取物的制備方法，該制備方法工藝簡潔，提取效率高。實(shí)際上，本發(fā)明還提供上述番木瓜籽提取物作為食品、醫(yī)藥、化妝品、飼料或獸藥抗氧化添加劑的用途。本發(fā)明提供的番木瓜籽提取物，取番木瓜籽浸于乙醇中常溫浸提后，將濾液旋蒸至乙醇蒸干，得番木瓜籽的粗提物，將該粗提物用水溶解，再用有機(jī)溶劑萃取后濃縮即得番木瓜籽提取物。本發(fā)明提供的番木瓜籽提取物的制備方法，包括下述步驟(1)取番木瓜籽洗凈曬至八成干，粉碎后浸于乙醇中，常溫浸提1020天，過濾，3將濾渣浸于乙醇中常溫下再反復(fù)提取13次，每次提取510天，合并濾液在55t:下旋蒸至乙醇蒸干，得番木瓜籽粗提物；(2)將番木瓜籽粗提物用水溶解，再用有機(jī)溶劑萃取35次，合并萃取液，旋蒸后濃縮至除去有機(jī)溶劑后得番木瓜籽提取物。步驟(1)所述的乙醇的體積濃度為2090%。步驟(2)中所述的有機(jī)溶劑為石油醚、乙酸乙酯和正丁醇中的一種或幾種。步驟(2)中旋蒸時(shí)的溫度為5060°C。本發(fā)明提供的番木瓜籽提取物作為食品、醫(yī)藥、化妝品、飼料或獸藥抗氧化添加劑的用途。本發(fā)明具有如下優(yōu)點(diǎn)(1)該番木瓜籽提取物純天然、無毒副作用，且對光照、金屬離子(鈣、鐵和鋅)穩(wěn)定，適宜于酸性條件，其抗氧化活性在IO(TC以下隨溫度升高活性增強(qiáng)；(2)該番木瓜籽提取物原料易得，利廢率高，成本低廉，制備所得產(chǎn)品抗氧化活性高，可廣泛應(yīng)用于食品、醫(yī)藥、化妝品、獸藥及飼料等領(lǐng)域。圖1是番木瓜籽的乙醇粗提物和不同有機(jī)溶劑提取物的抗氧化活性圖；圖2是番木瓜籽的乙醇粗提物和不同有機(jī)溶劑提取物對0H清除能力圖。具體實(shí)施例方式以下實(shí)施例僅用于闡述本發(fā)明，而本發(fā)明的保護(hù)范圍并非僅僅局限于以下實(shí)施例。所述
技術(shù)領(lǐng)域：
的普通技術(shù)人員依據(jù)以上本發(fā)明公開的內(nèi)容均可實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的。第一部分番木瓜籽提取物及其制備方法和應(yīng)用實(shí)施例1本實(shí)施例提供的番木瓜籽提取物，通過如下的方法制備獲得取番木瓜籽浸于體積濃度為90%的乙醇中常溫浸提后，將濾液旋蒸至乙醇蒸干，得番木瓜籽的粗提物，將該粗提物用水溶解后，分別用有機(jī)溶劑石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取后濃縮即為番木瓜籽提取物。實(shí)施例2本實(shí)施例提供的番木瓜籽提取物，將番木瓜籽用自來水洗干凈；洗凈的種子在太陽下曬至八成干，用粉碎機(jī)粉碎；采用體積濃度為30%的乙醇常溫浸提法提取，第一次浸提20天，第2和第3次浸于乙醇中各浸提10天，每次浸提后及時(shí)用濾布過濾浸提液進(jìn)行回收，并將濾渣返回到浸提容器中，將回收的濾液合并后在密封容器中保存，在55t:下恒溫下進(jìn)行旋蒸濃縮，至乙醇溶劑完全蒸干為止，乙醇粗提物則積累在旋蒸瓶中；將總粗提物用水溶，分別先后用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，分別連續(xù)萃取5次，對萃取液在5(TC下進(jìn)行旋蒸濃縮，即得番木瓜籽提取物。實(shí)施例3本實(shí)施例提供的番木瓜籽提取物，將番木瓜籽用自來水洗干凈；洗凈的種子在太陽下曬至八成干，用粉碎機(jī)粉碎；采用體積濃度為50%的乙醇常溫浸提法提取，第一次浸4提2周，第二次和第三次浸于乙醇中各浸提1周，每次浸提后及時(shí)用濾布過濾浸提液進(jìn)行回收，并將濾渣返回到浸提容器中，將回收的濾液合并后在密封容器中保存；將乙醇提取液在55t:下進(jìn)行旋蒸濃縮至乙醇溶劑完全蒸干為止，乙醇粗提物則積累在旋蒸瓶中；將總粗提物用水溶，用正丁醇萃取，分別連續(xù)萃取3次，對萃取液在55t:下進(jìn)行旋蒸濃縮，即得番木瓜籽提取物。實(shí)施例3本實(shí)施例提供的番木瓜籽提取物，將番木瓜籽用自來水洗干凈；洗凈的種子在太陽下曬至八成干，用粉碎機(jī)粉碎；采用體積濃度為70%的乙醇常溫浸提法提取，第一次10天，第2、3和4次浸于乙醇中各浸提5天，每次浸提后及時(shí)用濾布過濾浸提液進(jìn)行回收，并將濾渣返回到浸提容器中，將回收的濾液合并后在密封容器中保存；將乙醇提取液在55°C下進(jìn)行旋蒸濃縮至乙醇完全蒸干為止，乙醇粗提物則積累在旋蒸瓶中；將總粗提物用水溶，依次用石油醚、乙酸乙酯萃取，分別連續(xù)萃取3次，對萃取液在55t:下進(jìn)行旋蒸濃縮，即得番木瓜籽提取物。實(shí)施例5取已制備好的番木瓜籽提取物，按0.001%0.1%的重量百分比加入到食品中去，作為抗氧化添加劑。實(shí)施例6取已制備好的上述番木瓜籽提取物，在藥品制備過程中，按0.01%0.05%的重量百分比加入，作為抗氧化添加劑。實(shí)施例7取已制備好的番木瓜籽提取物，在飼料封裝時(shí)，按0.001%0.1%的重量百分比加入到飼料中去，攪勻，作為抗氧化添加劑。實(shí)施例8取已制備好的番木瓜籽提取物，在化妝品的制備過程中，按0.005%0.1%的重量百分比加入到化妝品中去，作為抗氧化添加劑。實(shí)施例9取已制備好的番木瓜籽提取物，在獸藥的制備過程中，按0.01%0.05%的重量百分比加入到獸藥中去，作為抗氧化添加劑。第二部分番木瓜籽提取物的抗氧化活性2.1番木瓜提取物的抗氧化活性測試為便于比較分析各有機(jī)溶劑的抗氧化活性，在番木瓜籽提取物的制備過程中，將上述蒸干后的乙醇提取物保留極小一部分用作抗氧化活性、對環(huán)境與介質(zhì)穩(wěn)定性檢測，對剩下乙醇總粗提物用水溶，依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，各溶劑分別連續(xù)萃取3次，對各萃取液在55t:下進(jìn)行旋蒸濃縮，連同剩余水溶液的蒸餾物，分別得上述4種提取物。測定抗氧化活性時(shí)，乙醇粗提物、不同有機(jī)溶劑的萃取物均用匿S0溶解。2.1.1采用清除DPra自由基能力的方法對乙醇粗提物和各萃取物的總抗氧化活性進(jìn)行測定。用無水乙醇將DPra配制成6.5X10—4moLL—^勺溶液，置于冰箱中冷藏備用，使用時(shí)用無水乙醇稀釋成6.5X10—5mol.L—、實(shí)驗(yàn)共分3組，每組總體積為3mL，第一組在試管中加入2.5mLDPra溶液(6.5X10—5mol.L—0和0.5mL無水乙醇(試樣的溶劑)，混勻后在517nm波長處測吸光度值，記為A。；第二組加入2.5mLDPPH溶液(6.5X10—5mol.L-0和0.5mL試樣，搖勻，在室溫下避光反應(yīng)50min后測吸光度值，記為Ai;第三組加入2.5mL無水乙醇(DPra溶液的溶劑)和0.5mL0.lmg/mL試樣(乙醇總粗提物、各有機(jī)溶劑的萃取物和陽性對照Vc)，混勻后測定吸光度值，記為Aj。上述試樣配置法為將乙醇總粗提物、不同溶劑的萃取物和Vc的匿SO溶液用無水乙醇配置成lOOmg.L—1母液，再依次用無水乙醇稀釋成50、25、12.5、6.25和3.25mg.L—、分別測定吸光值&。按公式計(jì)算清除率清除率％=[l-(Ai-Aj)A。]X100X。以樣品質(zhì)量濃度(C)為橫坐標(biāo)，清除率(Y)為縱坐標(biāo)，求作工作曲線，并求出清除率為50%時(shí)樣品的質(zhì)量濃度(EC50)，樣品的活性結(jié)果即以半數(shù)清除質(zhì)量濃度(EC50)表示。番木瓜籽乙醇總粗體物和各不同溶劑的萃取物抗氧化活性如附圖l所示。乙醇總粗提物和不同溶劑的萃取物抗氧化活性與其濃度的線性回歸關(guān)系均極顯著或顯著，說乙醇明總粗提物和不同溶劑的萃取物均具有強(qiáng)弱不同的抗氧化活性。從線性回歸系數(shù)看，乙酸乙酯、正丁醇萃取物和陽性對照的較大，乙醇總粗提物的居中，石油醚和水萃取物的則最低。說明前三者抗氧化活性顯著受其濃度影響，具有較強(qiáng)的抗氧化活性；乙醇總粗提物抗氧化活性居中；石油醚和水萃取物抗氧化活性微弱。依據(jù)回歸方程計(jì)算乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物、乙醇總粗提物、石油醚萃取物、水萃取物和陽性對照的抗氧化EC50值分別為64.61、109.30、248.63U009.5、1628.33和66.96mg.mL—、可見，乙酸乙酯萃取物抗氧化活性略高于陽性對照，正丁醇萃取物約為陽性對照抗氧化活性的61.26%，總粗提物約為陽性對照抗氧化活性的26.93%，而石油醚和水萃取物則抗氧化活性相對于陽性對照極其微弱，分別為陽性對照的6.63%和4.11%。2.1.2采用TEAC法測定乙醇粗提物和各萃取物對ABTS+的清除活性。將7mmo1.L—丄ABTS+5mL與140mmol.L—^20888yL混合液在3。C下避光過夜，制備ABTS+貯備液。實(shí)驗(yàn)使用本貯備液時(shí)，用20mmol.L—1醋酸鈉緩沖液緩慢稀釋，制備ABTS+工作液，稀釋到入=734nm時(shí)，吸光度A二0.70士0.02為止。分別取總粗提物、不同溶劑萃取制備的提取物0.lmg.m1-1樣液30iiL，與ABTS+工作液3mL混合，搖勻反應(yīng)10s，制備測樣。以醋酸鈉緩沖液為參比，3t:下將測樣靜置6min，在入=734nm下測定吸光度A。以0、0.25、0.315、0.417、0.625、1.25和2.50mmol.L—1的Trolox代替上述測樣，測定各濃度下的吸光度A，繪制工作曲線，求吸光度A關(guān)于測樣濃度C的線性回歸方程。依此工作曲線，換算出以mmol.L，rox為單位的各測樣清除ABTS+活性。表1TEAC法和FRAP法的總抗氧化活性和抗2種活性氧活性表現(xiàn)<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>注數(shù)字后跟不同大寫英文字母表示差異極顯著(p<O.Ol)，跟相同大寫字母表示差異不顯著(P<0.01)。結(jié)果如表1所示。可見正丁醇萃取物抗氧化活性極顯著高于其它萃取物和乙醇總粗提物的；乙酸乙酯萃取物和總粗提物抗氧化活性無顯著差異，次之；石油醚萃取物抗氧化活性極顯著高于水萃取物的，極顯著低于其它各萃取物和總粗提物的；水萃取物抗氧化活性最低。2.1.3采用FRAP法測定乙醇粗提物和各萃取物的總抗氧化活性。將20mmol.L—1的FeCl36H202.5ml禾PlOmmol.L—1的TPTZ2.5ml混合，再融入300mmol.L—\pH3.6醋酸鹽緩沖液25ml中，制備混合液。取上述混合液1.8ml，在37t:水浴下，依次加入蒸餾水180yL、0.lmg.ml—1乙醇總粗提物和各萃取物樣液60yL，混勻后反應(yīng)30min。以甲醇為參比，在入=593nm時(shí)，讀取吸光度A。配置0、100、300、500、700、900和1000iimol.L—feSC^梯度溶液，以濃度為橫坐標(biāo)，吸光度A為縱坐標(biāo)，求作工作曲線和計(jì)算各相粗提物抗氧化活性?？寡趸钚杂肍RAP值表示，即每克果實(shí)干粉相當(dāng)于FeS04物質(zhì)的量(ymol.L—0。測樣3次重復(fù)。檢測結(jié)果如表1所示?？梢娨宜嵋阴ポ腿∥锟寡趸钚詷O顯著高于其他各萃取物和總粗提物的；而總粗提物、正丁醇和水萃取物相互間差異不顯著；石油醚萃取物抗氧化活性極顯著最低。2.1.4檢測各粗提物對02—清除能力。將pH7.8、65mmol.L—1的磷酸緩沖液1.OmL、7.5mmol.L—1黃嘌呤0.lmL、10mmo1.L—1氯化羥氨0.lmL、0.lmg.mL—1總粗提物和各有機(jī)溶劑的萃取物樣液0.lmL、重蒸水0.4mL和20yg.mL—1蛋白的黃嘌呤氧化酶0.3mL依次混合，混勻后在25。C水浴中反應(yīng)20min。取上述反應(yīng)液0.5mL，加入對19mmol.L—1氨基苯磺酸0.5mL和1.0%a-萘胺0.5mL，充分混合后放在室溫下反應(yīng)20min后，在A=530nm時(shí)測定吸光度A。以去離子水代替樣液進(jìn)行上述反應(yīng)，測定空白對照吸光度A。。以不同濃度梯度的a-生育酚代替樣液，求作標(biāo)準(zhǔn)曲線，a-生育酚濃度梯度為0、10、100、200、500、800、1000iimol丄—、02—清除能力用a-生育酚的量(iimol丄—0表示。測樣3次重復(fù)。檢測結(jié)果如表1所示。可見乙醇總粗提物02—清除能力極顯著高于其它各萃取物的；乙酸乙酯和水萃取物的02—清除能力差異不顯著，次之；正丁醇萃取物的02—清除能力極顯著低于總提物、乙酸乙酯和水萃取物的，僅極顯著高于石油醚萃取物的；石油醚萃取物的02—清除能力極顯著最低。2.1.5檢測乙醇總粗提物和各萃取物對H202清除能力。將20%TiCl4濃鹽酸溶液0.135mL、0.lmg.mL—1總粗提物和各萃取物樣液0.lmL、pH7.4的0.17mol.L—1磷酸緩沖液0.185mL和17.Omol.L-,H200.2mL混合，在室溫下反應(yīng)5min，產(chǎn)生白色絮狀物后，用3mol丄—、S043mL溶解；在A=410nm時(shí)測定吸光度A"以去離子水代替樣液，重復(fù)上述反應(yīng)，測定空白吸光度A。。以Vc代替樣液作標(biāo)準(zhǔn)曲線，Vc濃度梯度為0、20、40、60、80、lOOmg.mL-、用DMSO溶解。測樣重復(fù)3次。檢測結(jié)果如表1所示?？梢娨掖伎偞痔嵛锖鸵宜嵋阴ポ腿∥锏腍202清除能力差異不顯著；總粗提物的&02清除能力極顯著高于正丁醇、水和石油醚萃取物的；乙酸乙酯萃取物的H202清除能力同時(shí)與正丁醇和水萃取物的差異也不顯著，且極顯著高于石油醚萃取物的；石油醚萃取物的H202清除能力則最低。2.1.6檢測乙醇總粗提物和各萃取物對'0H清除能力。將lOmmol.L—1的FeSOfEDTA0.2mL、10mmo1.L—1的D-脫氧核糖O.5ml、不同濃度梯度的總粗提物和各萃取物的樣液0.lmL混合，用磷酸緩沖液定容至1.8mL;向上述混合液中加入lOmmol.L—力2020.2mL，在37"水浴下反應(yīng)lh;繼續(xù)加入2.8%TCA1.0mL、1.0%TBA10mL，混勻后沸水浴15min;冷卻后，在入=532nm下，比色測定4。在上述步驟中不加樣液，其余均相同，測得空白對照吸光度Ac。在上述步驟中，不加樣液和不在37t:水浴中反應(yīng)，測得空白背景吸光度A。。以苯甲酸鈉溶液代替樣液，作陽性對照，按照上述步驟測定其As。計(jì)算不同濃度梯度下的OH清除率，計(jì)算公式為清除率％=(A。-AS)X100/(A。-A。)。分別建立樣液、陽性對照濃度梯度與清除率線性回歸方程，并求出EC50值，依此對乙醇總粗提物、各萃取物和陽性對照比較OH清除能力。樣液濃度梯度為0.1、0.2、0.4、0.6、0.8和1.Omg.mL-、陽性對照苯甲酸鈉濃度梯度為:0.01、0.05、0.10、0.15、0.20和0.25mg.mL—、檢測結(jié)果如附圖2所示?？梢姡兔演腿∥锿?，其余各萃取物、總粗提物和陽性對照的OH清除能力與其濃度均極顯著或顯著正相關(guān)。表明除石油醚萃取物外，其余各萃取物和總粗提物均具有不同程度的'0H清除能力。依據(jù)線性回歸方程，乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物、水萃取物、乙醇總粗提物和陽性對照的，0H清除能力EC50值分別為0.09、0.21、0.33、0.76和0.10mg.mL—、可見乙酸乙酯提取物的0H清除稍能力強(qiáng)于陽性對照，而正丁醇、水萃取物0H清除能力約為陽性對照的47.62%和30.30%，乙醇總粗提物0H清除能力約為陽性對照的13.16%。目前天然藥物和食品體外抗氧化活性的測定尚無標(biāo)準(zhǔn)方法，現(xiàn)行方法各有局限性，采用不同方法評價(jià)天然產(chǎn)物抗氧化活性常表現(xiàn)不同的結(jié)果。因此，目前許多報(bào)道中均采用多種方法檢測天然產(chǎn)物抗氧化活性，對物質(zhì)的抗氧化活性作綜合鑒定。本申請采用多種測定方法檢測結(jié)果表明，番木瓜籽乙酸乙酯萃取物具有很強(qiáng)的抗氧化活性，正丁醇萃取物具有較強(qiáng)的抗氧化活性，而乙醇總粗提物則具有很強(qiáng)的清除02—和H202能力，這說明番木瓜籽抗氧化活性成分主要集中在乙酸乙酯和正丁醇萃取物，對其中抗氧化單體化合物值得分離純化，乙醇總粗提物表現(xiàn)出最強(qiáng)的清除02—和H202能力，說明清除02—和H202時(shí)，不同萃取物中的成分可能發(fā)生了復(fù)雜的相互作用，導(dǎo)致粗分后的各萃取物清除02—和H202能力下降。這與前人具有抗氧化活性的單體化合物比含有該單體化合物的粗提物抗氧化活性更弱的現(xiàn)象實(shí)質(zhì)上是一致的。總之，乙酸乙酯和正丁醇萃取物具有很強(qiáng)和較強(qiáng)的抗氧化活性，乙醇提取物具有很強(qiáng)的清除抗02—和H202能力。2.2番木瓜籽提取物的安全性能2.2.1番木瓜籽提取物的急性毒性研究取昆明種小鼠，按10g/kg灌胃給予上述實(shí)施例中番木瓜籽提取物，1天連續(xù)飼喂4次，每次間隔6h，然后給予正常飲食，對各個(gè)器官進(jìn)行病理性檢查，未發(fā)現(xiàn)臟器病變。2.2.2番木瓜籽提取物的長期毒性研究取昆明種小鼠，按中、大劑量組(4g/kg，8g/kg)灌胃給予上述實(shí)施例中番木瓜籽提取物，每天l次，連續(xù)灌胃處理14天后，測定小鼠體重、心功能、肝功能、腎功能、心電圖等指標(biāo)，給藥組分別與對照組比較，未見明顯異常。病理學(xué)檢查心、肝、腎、脾、肺、胃、十二指腸、大腸、小腸、腎上腺和生殖器等臟器，飼喂粗提物組分別與對照組比較，均無明顯中毒性改變。以上結(jié)果提示昆明種小鼠食用番木瓜籽乙酸乙酯和正丁醇萃取物安全無毒，可用作食品、醫(yī)藥、化妝品、飼料和獸藥加工的抗氧化添加劑。2.3番木瓜籽提取物對環(huán)境和常見介質(zhì)的穩(wěn)定性研究如上所述，上述番木瓜籽提取物具有很強(qiáng)和較強(qiáng)的DPra抗氧化活性，因此，對該提取物實(shí)施光、熱、酸堿、和金屬離子處理一定時(shí)間后，觀測DPK1抗氧化活性(EC50)的穩(wěn)定性。DPra法檢測與前述方法相同。同樣處理番木瓜籽乙醇提取物，觀測清除02—能力(每毫克粗提物相當(dāng)于生育酚的量)的穩(wěn)定性。DPK1法與清除02—能力檢測方法與前述方法相同。2.3.1光照的影響將上述番木瓜籽乙酸乙酯、正丁醇萃取物和乙醇提取物用匿SO溶解，在日光下照射，按每天光照時(shí)間12h計(jì)，分別如表2所示光照時(shí)間進(jìn)行處理。結(jié)果表明在不同時(shí)間里，乙醇總粗提物及各萃取物抗氧化活性均無顯著差異，說明乙醇粗提物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物的抗氧化活性對光照穩(wěn)定，在加工應(yīng)用中不需考慮光照對提取物的影響。表2不同光照時(shí)間對番木瓜籽提取物抗氧化活性的影響光照時(shí)間(h)024487296乙酸乙酯64.5865.2164.7664.6364.25正丁醇108.57107.85108.32108.62107.98乙醇提取物548.35548.74547.88547.92548.272.3.2溫度的影響將上述番木瓜籽乙酸乙酯、正丁醇萃取物和乙醇總粗提取物用匿S0溶解，在不同溫度下恒溫水浴4h，冷卻至室溫(30°C)后檢測抗氧化活性。不同溫度處理分別如表3所示。粗提物抗氧化活性存在極顯著差異，總體上在IO(TC以下，高溫下表現(xiàn)為各提取物抗氧化活性較強(qiáng)，說明番木瓜提取物作為抗氧化添加劑能耐加工過程中的加熱條件。表3不同溫度對番木瓜提取物的抗氧化活性的影響水浴溫度rc)30405060708090100乙酸乙酯64.58A63.73A58.36A49.47B40.36C41.29C42.77C40.28C正丁醇108.57A107.82A92.46B88.31BC83.68C75.67D76.13D75.93D乙醇提取物735.26A730.57A730.24A687.42B672.4犯593.78C548.57C548.35C2.3.3pH的影響將述番木瓜籽乙酸乙酯、正丁醇萃取物和乙醇提取物用匿SO溶解，在不同PH下測定粗提物抗氧化活性，分析不同pH下抗氧化活性變化特點(diǎn)，pH處理如表4所示。結(jié)果表明各提取物在酸性條件下抗氧化活性穩(wěn)定，堿性條件下則抗氧化活性極顯著減弱。說明各提取物適宜于作酸性加工品的抗氧化添加劑，而對堿性條件敏感。表4不同pH對番木瓜籽提取物抗氧化活性的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>2.3.4金屬離子的影響將上述番木瓜籽乙酸乙酯、正丁醇萃取物和乙醇提取物用匿S0溶解，在不同金屬離子介質(zhì)下檢測抗氧化活性，說明常見金屬離子對粗提物抗氧化活性影響。目前，在保健食品、藥物和精制飼料加工中，常添加鈣、鐵和鋅等金屬離子成分，以通過食用補(bǔ)充這些調(diào)節(jié)和保證機(jī)體生長發(fā)育的金屬元素，因此，以不添加金屬離子為對照，探討了這三種金屬離子對粗提物抗氧化活性的影響。表5中的結(jié)果表明不同金屬離子處理對各提取物抗氧化活性均無顯著影響，說明上述提取物的抗氧化活性對這3種金屬離子穩(wěn)定，在目前的保健品加工應(yīng)用中可以直接使用這些提取物作為抗氧化添加劑。表5不同金屬離子對番木瓜籽提取物抗氧化活性的影響金屬離子CKCa2+Fe3+Zn2+乙酸乙酯正丁醇64.58108.5765.45108.1565.42108.5964.77109.32乙醇提取物548.35549.71550.32546.9710權(quán)利要求一種番木瓜籽提取物，其特征在于，取番木瓜籽浸于乙醇中常溫浸提后，將濾液旋蒸至乙醇蒸干，得番木瓜籽的粗提物，將該粗提物用水溶解，再用有機(jī)溶劑萃取后濃縮即得番木瓜籽提取物。2.權(quán)利要求1所述的番木瓜籽提取物的制備方法，其特征在于，包括下述步驟(1)取番木瓜籽洗凈曬至八成干，粉碎后浸于乙醇中，常溫浸提1020天，過濾，將濾渣浸于乙醇中常溫下再反復(fù)提取13次，每次提取510天，合并濾液在55t:下旋蒸至乙醇蒸干，得番木瓜籽粗提物；(2)將番木瓜籽粗提物用水溶解，再用有機(jī)溶劑萃取35次，合并萃取液，旋蒸后濃縮至除去有機(jī)溶劑后得番木瓜籽提取物。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的番木瓜籽提取物的制備方法，其特征在于，步驟(1)中所述的乙醇的體積濃度為2090%。4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的番木瓜籽提取物的制備方法，其特征在于，步驟(2)中所述的有機(jī)溶劑為石油醚、乙酸乙酯和正丁醇中的一種或幾種。5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的番木瓜籽提取物的制備方法，其特征在于，步驟(2)中旋蒸時(shí)的溫度為5060°C。6.權(quán)利要求1所述的番木瓜籽提取物作為食品、藥品、化妝品、飼料或獸藥抗氧化添加劑的用途。全文摘要一種番木瓜籽提取物，取番木瓜籽溶于乙醇中常溫浸提后，將濾液旋蒸至乙醇蒸干，得番木瓜籽的粗提物，將該粗提物用水溶解，再用有機(jī)溶劑萃取后濃縮即為番木瓜籽提取物，還公開了上述提取物的制備方法及其用途。該提取物純天然、無毒副作用，且對光照、金屬離子(鈣、鐵和鋅)穩(wěn)定，適宜于酸性條件，其抗氧化活性在100℃以下隨溫度升高活性增強(qiáng)；該生產(chǎn)方法的原料易得，利廢率高，成本低廉，制備所得產(chǎn)品可廣泛應(yīng)用于食品、藥品、化妝品、獸藥及飼料等領(lǐng)域。文檔編號A23K1/14GK101731578SQ20101011281公開日2010年6月16日申請日期2010年2月9日優(yōu)先權(quán)日2010年2月9日發(fā)明者周開兵,戴好富,梅文莉,王輝申請人:中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院熱帶生物技術(shù)研究所