專利名稱：：本占地菇的菌床栽培方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及本占地燕(hon-shimejimushroom,Lyophyllumshimeji)的菌床栽培方法。
背景技術(shù)：
：本占地菇為10月中旬左右生長(zhǎng)在白櫟林或者白櫟和日本赤松的混合林的地上的蘑菇。在日本，本占地菇被認(rèn)為是可食用的蘑菇中的質(zhì)量最高的蘑菇。具體而言，日本有句諺語(yǔ)同時(shí)提到本占地菇和松茸(Tricholomamatsutake):"松茸香，占地美"。近年來，人們?cè)O(shè)想使用培養(yǎng)基來人工栽培可食用的蘑菇(例如金針菇(Flammulinavelutipes)、平菇(Pleurotusostreatus)、滑燕(Pholiotanameko)、真姬燕(Hypsizygusmarmoreus)、灰樹花(Grifolafrondosa)等)的菌床栽培方法，其中所述培養(yǎng)基是通過將鋸末與米糠、麥糠等營(yíng)養(yǎng)源混合而制得的。因此能夠在一年中穩(wěn)定地收獲蘑菇，而無需考慮季節(jié)的因素。由于本占地菇為極為美味的蘑菇，因此人們希望確立其獨(dú)屬的人工栽培方法。然而，本占地菇為菌根真菌，而上述金針菇等為木材腐朽真菌。因此，人們認(rèn)為難以對(duì)本占地菇實(shí)施人工菌床栽培方法。然而，日本滋賀縣森林研究中心(ForestResearchCenterofShigaPrefecture)的太田博士首次成功地進(jìn)行了本占地菇的人工菌床栽培。專利文獻(xiàn)1(JP-A-07-l15844)披露了使用麥類的本占地菇的菌床栽培方法，并且在非專利文獻(xiàn)l(JournalofTheMycologicalSocietyofJapan,第39巻，第1320頁(yè)，1998)中披露了在使用麥類的培養(yǎng)基上形成本占地菇子實(shí)體的試驗(yàn)。此外，專利文獻(xiàn)2(JP-A-06-153695)披露了一種使用下列培養(yǎng)基來進(jìn)行菌根真菌的菌絲栽培方法，其中該培養(yǎng)基以泥炭(peat-moss)作為基材并添加有淀粉等。該發(fā)明人在非專利文獻(xiàn)2(JournalofTheMycologicalSocietyofJ即an，第35巻，第192195頁(yè)，1994)中報(bào)道了通過下列培養(yǎng)基來形成本占地菇子實(shí)體的試驗(yàn)，其中該培養(yǎng)基以泥炭作為基材并添加有淀粉等。然而，由于專利文獻(xiàn)l(JP-A-07-115844)的方法中使用的培養(yǎng)基中所用的麥類的價(jià)格較高，因而該培養(yǎng)基的成本較高。此外，專利文獻(xiàn)2(JP-A-06-153695)的發(fā)明人的方法中所形成的子實(shí)體的收率較低，因此至今尚未達(dá)到工業(yè)生產(chǎn)的水平。近年來，披露了多種以本占地菇的工業(yè)栽培為目的的本占地菇的栽培方法。專利文獻(xiàn)3(JP-A-2000-106752)披露了一種在本占地菇的菌床上進(jìn)行栽培的培養(yǎng)基(其含有黍亞科(Panicumsubfamily)植物)以及使用該培養(yǎng)基的本占地菇栽培方法。此外，專利文獻(xiàn)4(JP-A-2002-247917)披露了一種本占地菇的菌床栽培方法，其中通過下列步驟來形成3子實(shí)體制備至少含有玉米粉和闊葉樹鋸屑的混合培養(yǎng)基，然后在該混合培養(yǎng)基上、在水濕潤(rùn)狀態(tài)下接種本占地菇的菌絲，并將它們?cè)?0°C以下培養(yǎng)。專利文獻(xiàn)5(JP-A-2005-27585)披露了一種本占地菇的菌床栽培方法，其中將粉碎的牡蠣殼與培養(yǎng)基混合，當(dāng)本占地菇的菌絲被接種在所述培養(yǎng)基上并在水濕潤(rùn)狀態(tài)下培養(yǎng)時(shí)能夠產(chǎn)生子實(shí)體。另外，將該培養(yǎng)基的pH值調(diào)節(jié)在不超過7的范圍內(nèi)。專利文獻(xiàn)6(JP-A-2007-54044)中披露了一種本占地菇的菌床栽培方法，其中混合培養(yǎng)基是通過將少量的麥類和/或米類與含有玉米粉及鋸屑的培養(yǎng)基進(jìn)行混合而制得的。將本占地菇接種在該混合培養(yǎng)基上、并在水濕潤(rùn)狀態(tài)下進(jìn)行培養(yǎng)后，形成子實(shí)體。在專利文獻(xiàn)1(JP-A-07-l15844)中，通過將本占地菇菌株在23。C下培養(yǎng)70天、然后將溫度降至15t:來檢查是否形成子實(shí)體原基。另外，通過用泥炭覆蓋培養(yǎng)基表面，子實(shí)體的形成率增加。此夕卜，在非專利文獻(xiàn)1(JournalofTheMycologicalSocietyofJ即an，第39巻，第1320頁(yè)，1998)中，在22。C下進(jìn)行培養(yǎng)步驟過程中當(dāng)本占地菇的菌絲在整個(gè)培養(yǎng)基上鋪展時(shí)，通過在培養(yǎng)基上添加厚度為1cm的泥炭來形成子實(shí)體。此后將該培養(yǎng)基培養(yǎng)2周，然后在培養(yǎng)結(jié)束后將其轉(zhuǎn)移至15°C的形成室中。在非專利文獻(xiàn)2(JournalofTheMycologicalSocietyofJ即an，第35巻，第192195頁(yè)，1994)中，將本占地菇菌株接種在培養(yǎng)基上，然后在23。C下培養(yǎng)并老化后，在16t:的形成室中進(jìn)行形成操作，從而在此后的第1315天觀察子實(shí)體原基的形成。在專利文獻(xiàn)3(JP-A-2000-106752)中披露了這樣的瓶栽培方法，該方法包括制備培養(yǎng)基、填充在瓶中、滅菌、接種、培養(yǎng)、發(fā)芽、生長(zhǎng)和收獲的各個(gè)步驟，其中在培養(yǎng)后的發(fā)芽步驟中形成子實(shí)體原基。此外，在實(shí)施例中，通過覆蓋紅泥(Akadamasoil)來進(jìn)行發(fā)芽步驟。在專利文獻(xiàn)4(JP-A-2002-247917)的實(shí)施例中，將本占地菇菌株在23。C下培養(yǎng)60天后，通過用鹿沼土(Ka皿masoil)覆蓋培養(yǎng)基的上面來進(jìn)一步培養(yǎng)7天。然后，將其轉(zhuǎn)移至15t:的形成室中來促進(jìn)子實(shí)體的形成。在專利文獻(xiàn)5(JP-A-2005-27585)的實(shí)施例中，將本占地菇菌株在23。C下培養(yǎng)70天，然后轉(zhuǎn)移至設(shè)定為15t:的形成室中。另外，在小的子實(shí)體發(fā)育時(shí)去除菌蓋，并且在其生長(zhǎng)至子實(shí)體的菌傘(pileus)張開的階段時(shí)收獲子實(shí)體。在專利文獻(xiàn)6(JP-A-2007-54044)的實(shí)施例中，將本占地菇菌株在23。C下培養(yǎng)55天，然后以鹿沼土覆蓋培養(yǎng)基的上面以進(jìn)一步培養(yǎng)10天。然后，將其轉(zhuǎn)移至設(shè)定為15t:的形成室中以促進(jìn)子實(shí)體的形成。[專利文獻(xiàn)1]JP-A-07-l15844[專利文獻(xiàn)2]JP-A-06-153695[專利文獻(xiàn)3]JP-A-2000-106752[專利文獻(xiàn)4]JP-A-2002-247917[專利文獻(xiàn)5]JP-A-2005-27585[專利文獻(xiàn)6]JP-A-2007-54044[非專利文獻(xiàn)1]JournalofTheMycologicalSocietyofJ即an，第39巻，第1320頁(yè)，1998[非專利文獻(xiàn)2]JournalofTheMycologicalSocietyofJ即an，第35巻，第192195頁(yè)，1994
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明人基于類似于上述專利文獻(xiàn)3所披露的技術(shù)開始進(jìn)行本占地菇的商業(yè)栽培。然而，由于進(jìn)行大規(guī)模商業(yè)栽培時(shí)需要穩(wěn)定地生產(chǎn)，因此要對(duì)這些技術(shù)進(jìn)行進(jìn)一步的改善。因此，鑒于上述情況，本發(fā)明的目的之一是提供一種允許穩(wěn)定地、大規(guī)模商業(yè)栽培本占地菇的菌床栽培方法。通常認(rèn)為在本占地菇的菌床栽培方法中，在從菌絲培養(yǎng)到子實(shí)體形成的過程中需要保持良好的透氣性(非專利文獻(xiàn)l)。本發(fā)明人進(jìn)行了栽培研究以考察影響本占地菇的菌床栽培的若干因素，并深入考察了這些因素對(duì)大規(guī)模商業(yè)栽培的影響。結(jié)果，本發(fā)明人驚訝地發(fā)現(xiàn)，與常規(guī)情況相比，在本占地菇的菌床栽培方法的發(fā)芽步驟中，當(dāng)透氣性未得以改善、而是(A的濃度增加時(shí)，幼芽(小芽)的形成率變高。此外，還發(fā)現(xiàn)在子實(shí)體的生長(zhǎng)步驟中，當(dāng)C02濃度增加時(shí)，子實(shí)體的收率提高。另外，即使在生長(zhǎng)成為本占地菇特征性的大型子實(shí)體時(shí)，菌柄部分的孔隙也會(huì)減少甚至消失，而這在過去是難以控制的。另外，能夠抑制菌傘的張開，從而獲得了適于栽培高質(zhì)量的大型子實(shí)體的方法。因此，本發(fā)明的實(shí)施方案涉及本占地菇的菌床栽培方法，該方法包括如下步驟中的至少一個(gè)步驟在高C02濃度的環(huán)境條件下進(jìn)行部分或全部的發(fā)芽步驟；以及在高C02濃度的環(huán)境條件下進(jìn)行部分或全部的子實(shí)體生長(zhǎng)步驟。因此，本發(fā)明的實(shí)施方集涉及本占地菇的菌床栽培方法，其中在發(fā)芽步驟中高0)2濃度為2，500ppm或更高、優(yōu)選為5，OOOppm或更高、更優(yōu)選為5，OOOppm至35，000卯m、進(jìn)一步更優(yōu)選為10，OOOppm至20，OOO卯m。本發(fā)明的實(shí)施方案涉及本占地菇的菌床栽培方法，其中在子實(shí)體生長(zhǎng)步驟中高C02濃度為5，OOOppm或更高、優(yōu)選為5，OOOppm至35，000卯m、更優(yōu)選為10，OOOppm至20，OOO卯m。此外，所述本占地菇的菌床栽培方法中的發(fā)芽步驟可在上述環(huán)境條件下進(jìn)行至少一天、優(yōu)選進(jìn)行1天至10天、更優(yōu)選進(jìn)行3天至6天。另外，子實(shí)體生長(zhǎng)步驟可在上述環(huán)境條件下進(jìn)行至少2天、優(yōu)選進(jìn)行2天至5天。另外，只有發(fā)芽步驟和子實(shí)體生長(zhǎng)步驟中的一個(gè)步驟可在所述環(huán)境條件下進(jìn)行，或者發(fā)芽步驟以及子實(shí)體生長(zhǎng)步驟均可在上述環(huán)境條件下進(jìn)行。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施方案，提供這樣的本占地菇的菌床栽培方法，其中通過大規(guī)模商業(yè)栽培來穩(wěn)定地生產(chǎn)本占地菇。通過利用本發(fā)明，可穩(wěn)定地獲得具有優(yōu)異形狀的本占地菇的大型子實(shí)體。具體實(shí)施例方式下面對(duì)本發(fā)明的示例性實(shí)施方案進(jìn)行詳細(xì)說明。本說明書中所用的術(shù)語(yǔ)"本占地菇"為在分類學(xué)上被分類為L(zhǎng)yophyllumShimeji的蘑菇。對(duì)于本發(fā)明中所使用的本占地菇的菌株沒有特別限定，其可以是可用于人工菌床栽培方法的任何市售菌株或者經(jīng)培育而由野生型子實(shí)體獲得的任何菌株，其中所述培育方法為(例如)組織分離法、篩選法、雜交法、細(xì)胞融合法、基因重組法等。例如，可以列舉如下適于栽培的菌株LyophyllumshimejiLa01-27(FERMBP-10960)、LyophyllumshimejiLa01-20(FERMBP-10959)、Lyophyll咖shimejiLa01-37(FERMP-17456)、Lyophyll咖shimejiLa01-45(FERMP-17457)、LyophyllumshimejiLa01-46(FERMP-17458)、及其突變菌株。對(duì)上述菌株沒有限定，其可以是可用于菌床栽培中的任何菌株。對(duì)本發(fā)明示例性實(shí)施方案的本占地菇的菌床栽培方法沒有特別限定，其可以是能夠在高C02濃度的環(huán)境條件下進(jìn)行的任何菌床栽培方法，因此可采用瓶栽培法、袋栽培法、箱栽培法等。以下，通過以瓶栽培法為例子來對(duì)本發(fā)明示例性實(shí)施方案的本占地菇的菌床栽培方法進(jìn)行描述，其中該方法包括下列步驟制備培養(yǎng)基、填充到瓶中、滅菌、接種、培養(yǎng)、(根據(jù)需要進(jìn)行真菌刮擦(fungalscr即ing)，該步驟為通過刮擦培養(yǎng)基的菌種培養(yǎng)部分和培養(yǎng)基的表面來加速子實(shí)體原基的形成)、形成原基、發(fā)芽(小芽的形成和生長(zhǎng))、根據(jù)需要進(jìn)行插條(小芽)的分離和嫁接、由小芽生長(zhǎng)為成熟的子實(shí)體、以及收獲成熟的子實(shí)體等。以下對(duì)這些示例性步驟進(jìn)行示意性描述，但本發(fā)明的示例性實(shí)施方案不局限于所述示意性描述的內(nèi)容。"制備培養(yǎng)基"是指這樣的步驟將菌床栽培中所用的各種基材進(jìn)行稱量并混合，然后加水以將水分調(diào)整為適于本占地菇的菌床栽培的水分潤(rùn)濕狀態(tài)。對(duì)本占地菇的菌床栽培用培養(yǎng)基(也稱為培養(yǎng)基質(zhì))沒有特別限定，其可以是可用于栽培的任何材料，但玉米與鋸屑的組合是合適的。關(guān)于鋸屑，可使用得自于闊葉樹或針葉樹的任何鋸屑，優(yōu)選使用得自針葉樹的鋸屑，例如可列舉得自雪松(Sugioga)的鋸屑。對(duì)本說明書中所使用的術(shù)語(yǔ)玉米沒有特別限定，其可以是含有玉米種子的任何種類的玉米，例如可以列舉玉米的新鮮種子、以及種子的干燥、粉碎、壓碎或者加熱壓碎的產(chǎn)品。以加熱壓碎的玉米和得自于雪松(Sugioga)的鋸屑為例，對(duì)玉米與得自于針葉樹的鋸屑的混合比例進(jìn)行說明。玉米與得自于針葉樹的鋸屑可以按照任何比例進(jìn)行混合，只要在該比例下能夠進(jìn)行本占地菇的栽培即可。從實(shí)現(xiàn)高產(chǎn)量的角度考慮，以干燥重量計(jì)，加熱壓碎的玉米在菌床栽培用培養(yǎng)基中的含量下限為40%或更高、優(yōu)選為50%或更高、更優(yōu)選為60%或更高。當(dāng)加熱壓碎的玉米的含量下限低于40%時(shí)，所獲得的本占地菇的產(chǎn)量會(huì)大幅下降，這是不利的。此外，由于加熱壓碎的玉米的吸水性低，因此在菌床栽培用培養(yǎng)基中玉米的含量過高時(shí)，菌床栽培用培養(yǎng)基的水分保持能力降低，水滯留在培養(yǎng)瓶的下部，這有時(shí)會(huì)造成較差的菌絲繁殖。因此，以干燥重量計(jì)，加熱壓碎的玉米在菌床栽培用培養(yǎng)基中的含量上限為80%或更低、優(yōu)選為75%或更低、更優(yōu)選為70%或更低。此外，還是在加熱壓碎的玉米和Sugioga(雪松)的情況下，對(duì)菌床栽培用培養(yǎng)基的含水量進(jìn)行說明。有利的是，根據(jù)本領(lǐng)域技術(shù)人員的常識(shí)，將菌床栽培用培養(yǎng)基的含水量調(diào)節(jié)至水不滯留在培養(yǎng)瓶下部的程度。對(duì)含水量沒有特別限定，例如為68重量％或更低、優(yōu)選為66重量％或更低。然而，當(dāng)含水量超過64重量％時(shí)，培養(yǎng)基中的氣隙減少，因此有時(shí)會(huì)造成較差的菌絲繁殖，從而使得在一些情況下所獲得的子實(shí)體的產(chǎn)量和質(zhì)量降低。因此，更為有利的是，將含水量調(diào)節(jié)為64重量％或更低。就此而言，當(dāng)含水量過低時(shí)，由于培養(yǎng)基干燥等因素的影響，會(huì)出現(xiàn)較差的菌絲繁殖和畸形、或者較難產(chǎn)生子實(shí)體的情況。艮卩，將含水量?jī)?yōu)選調(diào)節(jié)為50重量％或更高、更優(yōu)選為55重量％或更高。通過考慮水分調(diào)節(jié)后6的培養(yǎng)基的性狀，可任選地設(shè)定含水量。"填充在瓶中"是將菌床栽培用培養(yǎng)基填充到瓶中的步驟。示意性地，該步驟為在壓力下用制得的菌床栽培用培養(yǎng)基對(duì)通常用于瓶栽培法的容量為400ml至2，300ml的耐熱性廣口培養(yǎng)瓶進(jìn)行填充。例如，當(dāng)使用容量為1，100ml的瓶子時(shí)，向其中加入550g至900g、優(yōu)選600g至850g、更優(yōu)選650g至750g的制得的菌床栽培用培養(yǎng)基。此外，在經(jīng)壓填的菌床栽培用培養(yǎng)基中，鉆出一個(gè)或多個(gè)孔徑為約1cm至3cm的孔(也稱為洞)，并將瓶子塞住?？筛鶕?jù)瓶口的尺寸來可任選地設(shè)定每個(gè)瓶子的孔數(shù)，但本占地菇的栽培可以更合適地通過(例如)在經(jīng)壓填的菌床栽培用培養(yǎng)基的表面區(qū)域的中部鉆出孔徑為1.5cm至2.Ocm的孔、并在該中間孔的周圍鉆出四個(gè)孔徑為1cm的孔來進(jìn)行。"滅菌"可以是將培養(yǎng)基中的所有微生物殺滅的步驟。在利用蒸汽的常壓滅菌法的情況下，通常在98t:至IO(TC下進(jìn)行4小時(shí)至12小時(shí)，或者在高壓滅菌的情況下，在lore至125t:下、優(yōu)選在118t:下進(jìn)行30分鐘至90分鐘。在本發(fā)明中，有時(shí)將通過這種方式制得的培養(yǎng)基稱作栽培用培養(yǎng)基。"接種"為在滅菌后放冷的培養(yǎng)基中種植菌種培養(yǎng)物的步驟。通常，通過將本占地菇菌絲在液體培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)而制得的液體菌種培養(yǎng)物用作菌種培養(yǎng)物。盡管對(duì)用于制備液體菌種培養(yǎng)物的培養(yǎng)基沒有特別限定，然而可以列舉含有葡萄糖、蛋白胨和酵母提取物為主要成分、并且補(bǔ)充有KH^(VMgS(V7HW等的PGY液體培養(yǎng)基；或1/2PGY液體培養(yǎng)基；含有葡萄糖和酵母提取物為主要成分的GY培養(yǎng)基；1/2GY培養(yǎng)基等?？蓪⒈菊嫉毓骄z接種于所述液體培養(yǎng)基中、并在(例如)25t:下培養(yǎng)10至15天，由此獲得的制備物用作液體菌種培養(yǎng)物。可使用燒瓶或者發(fā)酵罐進(jìn)行液體菌種培養(yǎng)物的培養(yǎng)。當(dāng)對(duì)液體菌種培養(yǎng)物進(jìn)行培養(yǎng)以進(jìn)行大規(guī)模栽培時(shí)，從培養(yǎng)天數(shù)可以縮短、而體積更大的角度來看，使用發(fā)酵罐是合適的。盡管對(duì)在栽培培養(yǎng)基上接種菌種培養(yǎng)物時(shí)使用的液體菌種培養(yǎng)物的菌種培養(yǎng)物含量沒有特別限定，但是干燥的菌種培養(yǎng)物含量例如為0.lg/1至10g/l，優(yōu)選為lg/1至7g/l，尤其優(yōu)選為2g/1至5g/1。此外，可以列舉每個(gè)容量為1，100ml的廣口瓶中，菌種培養(yǎng)物的接種體積可為約5ml至30ml。另外，還可使用常規(guī)已知的固體菌種培養(yǎng)物。例如，可以將通過將接種有液體菌種培養(yǎng)物(其通過上述步驟獲得)的菌床栽培用培養(yǎng)基在25t:下培養(yǎng)60至150天來進(jìn)行菌絲繁殖，由此獲得的制備物可用作固體菌種培養(yǎng)物。例如，在每個(gè)容量為1，100ml的廣口瓶中，可無菌地接種大約15g這種固體菌種培養(yǎng)物。"培養(yǎng)"為對(duì)接種有菌種培養(yǎng)物的培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)的步驟，該步驟要進(jìn)行菌絲的伸長(zhǎng)、在整個(gè)培養(yǎng)基上的鋪展、以及老化。一般而言，菌絲在溫度為2(TC至25t:、濕度為50%至80%的條件下在菌床栽培用的接種后的整個(gè)培養(yǎng)基上進(jìn)行鋪展，然后進(jìn)一步老化。另外，可省略老化。可根據(jù)培養(yǎng)基的體積來任選地設(shè)定培養(yǎng)步驟，當(dāng)使用容量為1，100ml的瓶子時(shí)，培養(yǎng)步驟通常進(jìn)行80天至120天，優(yōu)選進(jìn)行約100天。培養(yǎng)步驟可分為預(yù)培養(yǎng)步驟和后培養(yǎng)步驟，可在稍低的溫度下進(jìn)行使菌絲旺盛地伸長(zhǎng)的后培養(yǎng)步驟。在這種情況中，預(yù)培養(yǎng)步驟在75天到85天內(nèi)完成，而后培養(yǎng)步驟在25天到35天內(nèi)完成。"形成原基"為形成本占地菇的子實(shí)體原基的步驟。在培養(yǎng)步驟完成后，將培養(yǎng)混合物轉(zhuǎn)移至室內(nèi)，并除去瓶蓋以形成子實(shí)體原基，其中所述室內(nèi)的環(huán)境為溫度為1『C至22°〇、優(yōu)選為約201:，濕度為60%至80%，光照度為l，OOO勒克斯或更低。形成原基的步驟需要10天至20天。此外，(例如)在上述后培養(yǎng)步驟中，通過在累積光照度為20勒克斯_小時(shí)或更高的條件下進(jìn)行光照射，可在培養(yǎng)基的表面(栽培培養(yǎng)基的上部區(qū)域的表面區(qū)域)上形成子實(shí)體原基。"發(fā)芽"為從子實(shí)體原基形成幼芽(形成小芽在從子實(shí)體原基分化的原基頂部形成灰白色真菌菌傘的狀況)、并且根據(jù)需要促進(jìn)幼芽(小芽)的生長(zhǎng)的步驟。發(fā)芽步驟通常在如下條件下進(jìn)行5天至15天溫度為1(TC至2(TC、優(yōu)選為約151:，濕度為80%或更高、優(yōu)選超過100%的高濕條件，并且光照度為1，000勒克斯。由于在發(fā)芽步驟中增濕易于生成露水，因此為了防濕，菌床表面可覆蓋有帶孔的塑料板、波紋板等，或者可將培養(yǎng)瓶翻轉(zhuǎn)過來以進(jìn)行培養(yǎng)。此外，為了加速小芽的生長(zhǎng)，根據(jù)需要可使用合適的覆蓋土材料，用覆蓋土來覆蓋菌床表面。下面所描述的"插條"為將發(fā)芽步驟中所獲得的小芽嫁接到菌床栽培用培養(yǎng)基上以形成成熟的子實(shí)體的操作中所使用的分離的小芽。當(dāng)需要制備大型子實(shí)體并且需要子實(shí)體的形狀一致時(shí)，可進(jìn)行插條的分離步驟和插條的嫁接步驟。"插條的分離"是指將經(jīng)發(fā)芽步驟長(zhǎng)成的子實(shí)體分離的步驟。通過選擇對(duì)應(yīng)于栽培品種的最適宜方法，可進(jìn)行插條的分離。例如，可用手或整瓶器(pinsetter)從菌床上收集可易于分離的小芽，當(dāng)小芽難于分離時(shí)，可借助可任選的工具(例如解剖刀、菜刀、抹刀等)對(duì)所需小芽進(jìn)行分離和采集。"插條的嫁接"是將通過插條的分離步驟而獲得的插條嫁接到用于使子實(shí)體生長(zhǎng)的培養(yǎng)基的可任選位置上的步驟。插條要被嫁接上的培養(yǎng)基可以是插條分離時(shí)所用的培養(yǎng)基(插條分離后的培養(yǎng)基)，或者由所述培養(yǎng)基(其中蘑菇菌絲已在整個(gè)培養(yǎng)基上鋪展)單獨(dú)制備的培養(yǎng)基，例如培養(yǎng)步驟中的培養(yǎng)基或發(fā)芽步驟中的培養(yǎng)基。另外，在通過將插條嫁接至這些培養(yǎng)基上而獲得成熟的子實(shí)體后，也可再次使用所述培養(yǎng)基。在培養(yǎng)步驟中從菌絲剛在整個(gè)培養(yǎng)基上鋪展之后直至熟化結(jié)束這中間的任何培養(yǎng)基均可用作培養(yǎng)基，但是優(yōu)選使用培養(yǎng)步驟之后70天或更多天、更優(yōu)選使用培養(yǎng)步驟之后80天至120天的培養(yǎng)混合物。此外，在發(fā)芽步驟中從剛開始發(fā)芽直至發(fā)芽結(jié)束這中間的任何一種培養(yǎng)基均可用作培養(yǎng)基。當(dāng)子實(shí)體原基、小芽等已經(jīng)在嫁接用培養(yǎng)基上形成時(shí)，可首先將這些子實(shí)體原基、小芽等去除，然后將用作插條的小芽嫁接至所需位置。就此而言，可將去除的小芽用作嫁接中所使用的插條。對(duì)嫁接方法沒有特別的限定，可包括任何使嫁接插條生長(zhǎng)并在菌床上與菌絲融合的方法。另外，可將插條嫁接在培養(yǎng)基表面的任意位置處。例如，在培養(yǎng)步驟之前或者發(fā)芽步驟之前將插條插入或固定在形成于菌床上的孔中是有利的，如接種孔、通氣孔等。還可在插條步驟之前將這些插條插入新鉆的孔內(nèi)。這些孔的孔徑可以是任何能夠使插條插入的孔徑，因此沒有特別的限定，這些孔的直徑通?？蔀?mm至20mm，優(yōu)選為4mm至10mm。當(dāng)將一個(gè)插條(如小芽)嫁接至培養(yǎng)基上的一個(gè)孔中并使其生長(zhǎng)時(shí)，可制得獨(dú)立的、具有優(yōu)異形狀的、較大尺寸的子實(shí)體，該子實(shí)體并不為苗態(tài)(plantshape)。另外，可將若干小芽嫁接至一個(gè)孔內(nèi)。此時(shí)，各子實(shí)體的底部粘連在一起并形成苗態(tài)，但是由于粘連部分僅限于子實(shí)體底部的較小部分，因此可輕易地將它們彼此分開，從而可獲得具有較大尺寸以及優(yōu)異形狀的獨(dú)立的成熟子實(shí)體，這與通過將一個(gè)小芽嫁接至一個(gè)孔內(nèi)而獲得子實(shí)體的情況類似。此外，通過對(duì)用作插條的子實(shí)體的尺寸進(jìn)行劃分、并且將具有大致相同尺寸的插條嫁接至培養(yǎng)基中并對(duì)其栽培進(jìn)行控制，可獲得具有均勻尺寸的成熟子實(shí)體。就此而言，當(dāng)將諸如小芽的插條嫁接至(例如插入)孔中時(shí)，有利的是，以使小芽直立并且一部分小芽與培養(yǎng)基接觸的方式插入。"由小芽生長(zhǎng)為成熟的子實(shí)體"為在幾乎與發(fā)芽步驟相同的條件下進(jìn)行的5天至15天的步驟，不同之處在于光照度通常為2，000勒克斯或更低(在本說明書中，有時(shí)將其簡(jiǎn)稱為生長(zhǎng)步驟)。由于在小芽生長(zhǎng)為成熟的子實(shí)體的過程中幾乎不會(huì)受到露水潤(rùn)濕的影響，因此不用有孔的塑料板、波紋板等進(jìn)行覆蓋是有利的。在上述發(fā)芽步驟之后，在小芽生長(zhǎng)為成熟子實(shí)體的步驟中，通過除去培養(yǎng)基表面中部區(qū)域處的幼芽(小芽)以外的其它幼芽、尤其是除去培養(yǎng)基表面邊緣(瓶的邊緣區(qū)域)處的幼芽，由此通過進(jìn)行生長(zhǎng)步驟，可在瓶的中部區(qū)域穩(wěn)定地獲得苗態(tài)(多株生長(zhǎng)(multiplegrowth))的成熟子實(shí)體。就此而言，在除去培養(yǎng)基表面中部區(qū)域處的幼芽以外的其它幼芽時(shí)，可以沿著瓶的邊緣區(qū)域采用機(jī)械方式將它們除去。在這些處理之后通過進(jìn)行生長(zhǎng)步驟，可有效地使它們生長(zhǎng)成為苗態(tài)的成熟子實(shí)體。此外，當(dāng)在上述發(fā)芽步驟或者在小芽生長(zhǎng)為成熟子實(shí)體的生長(zhǎng)步驟的早期(生長(zhǎng)步驟的第五天以前)中加入下述步驟時(shí)，可獲得具有較高商業(yè)價(jià)值的單株生長(zhǎng)(single-grown)的較大尺寸的本占地菇子實(shí)體，所述步驟為使幼芽在培養(yǎng)基表面上發(fā)育，篩選出期望其生長(zhǎng)成為成熟子實(shí)體的一些幼芽，并且除去其他的幼芽。就此而言，在篩選幼芽的步驟中，可采用機(jī)械方式鉸去瓶邊緣區(qū)域的幼芽，并且有時(shí)根據(jù)需要，也可通過機(jī)械方式鉸去在培養(yǎng)基表面的中部處所形成的幼芽。在這些處理之后，通過進(jìn)一步鉸去除了適于生長(zhǎng)的子實(shí)體(幼芽)之外的其它幼芽、并對(duì)剩余的小芽進(jìn)行篩選和培育，可使其有效地生長(zhǎng)成為具有優(yōu)異形狀的大型本占地菇子實(shí)體。通過在高C02濃度的環(huán)境條件下進(jìn)行部分或全部的上述發(fā)芽步驟和/或生長(zhǎng)步驟來實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的示例性實(shí)施方案。高C02濃度的環(huán)境條件是指C02濃度為2，500ppm或更高、優(yōu)選5，000ppm或更高、更優(yōu)選5，000ppm至35，000卯m、進(jìn)一步更優(yōu)選10，OOOppm至20，OOOppm的環(huán)境條件。更具體而言，發(fā)芽步驟中的C02濃度為2，500ppm或更高、優(yōu)選5，OOO卯m或更高、更優(yōu)選5，OOO卯m至35，000卯m、進(jìn)一步更優(yōu)選10，OOO卯m至20，OOO卯m。生長(zhǎng)步驟中的C02濃度為5，OOOppm或更高、優(yōu)選5，OOOppm至35，000卯m、更優(yōu)選7，OOOppm至20，000卯m、進(jìn)一步更優(yōu)選7，OOOppm至8，OOO卯m。就此而言，上述的高C02濃度的環(huán)境條件不是指C02濃度恒定不變的條件，而是包括C02濃度在上述范圍內(nèi)變化的條件。對(duì)在高濃度下調(diào)節(jié)C02濃度的方法沒有特別的限定，其可以是任何能夠使C02濃度保持在高濃度下的方法，并且可以通過控制在其中進(jìn)行發(fā)芽步驟和/或生長(zhǎng)步驟的場(chǎng)所(房間)的通風(fēng)來調(diào)節(jié)C02濃度，或者通過使用諸如C02氣體或干冰之類的C02源以及通風(fēng)裝置來調(diào)節(jié)所述場(chǎng)所的(A濃度。在發(fā)芽步驟中，可利用培養(yǎng)瓶的蓋子來調(diào)節(jié)0)2濃度。例如，在培養(yǎng)步驟之后并且在進(jìn)行發(fā)芽步驟之前，可以部分或完全地關(guān)閉培養(yǎng)瓶蓋的排氣部分，或者可將培養(yǎng)瓶蓋更換為透氣性較低的蓋子。關(guān)于高C02濃度的環(huán)境條件的設(shè)定時(shí)間，發(fā)芽步驟可在上述環(huán)境條件下進(jìn)行至少1天、優(yōu)選1天至10天、更優(yōu)選3天至6天的發(fā)芽步驟。發(fā)芽步驟初始時(shí)即可進(jìn)入高C02濃度期。在高0)2濃度的環(huán)境條件下進(jìn)行發(fā)芽步驟之后，發(fā)芽步驟可在常規(guī)0)2濃度(約1，OOOppm或更低)的環(huán)境條件下繼續(xù)進(jìn)行額外的1天至3天。關(guān)于在生長(zhǎng)步驟中高(A濃度的環(huán)境條件的設(shè)定時(shí)間，該生長(zhǎng)步驟至少為2天，優(yōu)選為3天至5天。生長(zhǎng)步驟初始時(shí)即可進(jìn)入高C02濃度期。在高C02濃度的環(huán)境條件下進(jìn)行生長(zhǎng)步驟之后，可通過在常規(guī)C02濃度(低于5，000卯m)的環(huán)境條件下繼續(xù)進(jìn)行子實(shí)體的生長(zhǎng)步驟來進(jìn)行成熟子實(shí)體的生長(zhǎng)。通過上述步驟可獲得成熟子實(shí)體，并且可以通過進(jìn)行收獲來完成成熟子實(shí)體的栽培的全部步驟。盡管通過瓶栽培法對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了說明，但是本發(fā)明可以用于本占地菇的任何菌床栽培方法，而不局限于上述的瓶栽培法。根據(jù)本說明書，濕度超過100%的高濕條件是指由于在高于飽和蒸汽量的條件下進(jìn)行增濕而使水分以霧狀物的形式懸浮的條件?？墒褂肧aginomiyaSeisakusho，Inc.的裝置(商品名HumidEye100)進(jìn)行測(cè)量，以數(shù)值化地表達(dá)這種高濕條件。所述裝置利用了這樣的方法通過加熱使空氣中的水分減少、并通過濕度傳感器進(jìn)行檢測(cè)，然后對(duì)由于加熱而降低的部分進(jìn)行校正。因此，該數(shù)值與100%或更小的相對(duì)濕度相等，而當(dāng)該數(shù)值超過100%時(shí)，其為將空氣中的含水量轉(zhuǎn)化為水蒸汽、并以其與飽和水蒸汽量的比值的形式來表達(dá)的數(shù)值。另外，關(guān)于增濕的方法，可以方便地使用增濕器，例如超聲增濕器、蒸汽增濕器、噴霧增濕器等。本發(fā)明示例性實(shí)施方案提供了本占地菇的菌床栽培方法，該方法提高了幼芽(小芽)的形成率。由于本發(fā)明顯著地提高了小芽的形成率，因此本占地菇的穩(wěn)定生產(chǎn)使得商業(yè)栽培成為可能。另外，由于小芽的形成率得到提高，因此可穩(wěn)定地生產(chǎn)苗態(tài)(多株生長(zhǎng))的本占地菇。在通過插條分離步驟和插條嫁接步驟的組合來生產(chǎn)大型本占地菇時(shí)，可穩(wěn)定地獲得大量的優(yōu)良插條。另外，在通過與幼芽鉸除步驟相組合來生產(chǎn)大型本占地菇時(shí)，可產(chǎn)生大量的幼芽，從而可使幼芽穩(wěn)定地保持在培養(yǎng)瓶的中部區(qū)域附近(其為形成子實(shí)體的合適區(qū)域)，并且在適于生長(zhǎng)成為大型本占地菇的培養(yǎng)基位置處非常易于使幼芽生長(zhǎng)并篩選優(yōu)異的幼芽。因此，可以在保持高產(chǎn)量的條件下穩(wěn)定地進(jìn)行本占地菇子實(shí)體的栽培。另外，由于本發(fā)明抑制了成熟子實(shí)體的菌傘的張開，因此可以制備具有較高商業(yè)價(jià)值的形狀的本占地菇。利用如下示例性實(shí)施例對(duì)本發(fā)明示例性實(shí)施方案進(jìn)一步進(jìn)行說明，但本發(fā)明不局限于如下實(shí)施例的范圍。實(shí)施例1將LyophyllumshimejiLa01-27(FERMBP-10960)的菌絲接種在100ml的PGY液體培養(yǎng)基(組成葡萄糖2.0%(w/v)、蛋白胨0.2%(w/v)、酵母提取物0.2%(w/v)、KH2P040.05%(w/v)、MgS047H200.05%(w/v))中，在振蕩(100rpm)的條件下在25°C下培養(yǎng)7天。將2ml的培養(yǎng)混合物在200ml相同的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，并在振蕩(100rpm)的條件下培養(yǎng)7天。隨后，將全部的培養(yǎng)混合物接種在容積為200升、且裝有160升相同培養(yǎng)基的發(fā)酵罐(由KomatsukawaSeisakusho株式會(huì)社制造)中，并攪拌培養(yǎng)6天(攪拌速度100rpm，通風(fēng)率25升/分鐘)，從而制得液體菌種培養(yǎng)物。另一方面，將壓碎的玉米(由IisakaSeibakusha株式會(huì)社生產(chǎn))與針葉樹的鋸屑(由TomoeBussan株式會(huì)社生產(chǎn))以2:1的干燥重量比(壓碎的玉米針葉樹的鋸屑)混合，并向其中加入使培養(yǎng)基的最終含水量為62重量％的體積的水以充分?jǐn)嚢杌旌?。將混合物放入聚丙烯廣口瓶(1，100ml)中(包括瓶子和瓶蓋在內(nèi)的總重量為800g)，并進(jìn)行壓填。在壓填后的材料表面的中心鉆出一個(gè)孔徑為2.Ocm的孔，并且在以壓填后的材料表面的中心為圓心、且直徑為4cm的圓周上鉆出4個(gè)孔徑為lcm且深度為約10cm的洞，然后將培養(yǎng)瓶蓋上蓋子。將加蓋的培養(yǎng)瓶在11『C下高壓蒸汽滅菌30分鐘，然后自然冷卻至20°C，從而制得菌床栽培用培養(yǎng)基(固體培養(yǎng)基)。將大約12.5ml的上述液體菌種培養(yǎng)物接種在該固體培養(yǎng)基上，并在暗室內(nèi)在溫度為20°C、濕度為70%至75%的條件下培養(yǎng)菌絲105天(預(yù)培養(yǎng)80天，后培養(yǎng)25天)，并在確認(rèn)形成原基后結(jié)束該步驟。接下來，將該培養(yǎng)物分為常規(guī)方法(對(duì)照)組和使用高C02濃度方案的發(fā)芽步驟組，并且各組均使用12個(gè)瓶子來進(jìn)行發(fā)芽。在除去瓶蓋并將瓶子翻轉(zhuǎn)之后，將對(duì)照組在發(fā)芽室中發(fā)芽7天，其中發(fā)芽室的溫度被控制為16。C，由HumidEye100(由SaginomiyaSeisakusho，Inc.制造)表示的濕度為115%至120%，培養(yǎng)基表面上的光照度為100勒克斯或更低(明暗間隔為30分鐘)。另一方面，在將栽培瓶加蓋的同時(shí)進(jìn)行發(fā)芽，將0)2濃度方案設(shè)定為高(A濃度狀態(tài)。在該測(cè)試方案中所用的瓶蓋是這樣制成的在其正中位置處鉆出直徑為6mm的穿孔以測(cè)量栽培瓶?jī)?nèi)的C02濃度、并在其上面覆蓋聚氯乙烯膠帶，在完成上述培養(yǎng)步驟之后用該瓶蓋替換通常所用的瓶蓋。在高C02濃度方案中，在與對(duì)照組相同的發(fā)芽室內(nèi)進(jìn)行5天的發(fā)芽，隨后除去瓶蓋并將瓶翻轉(zhuǎn)，然后再繼續(xù)進(jìn)行另外2天的發(fā)芽。利用由VAISALA制造的C02測(cè)定儀(型號(hào)GMT220系列)來測(cè)定發(fā)芽室內(nèi)的C02濃度，并將GASTEC制造的檢測(cè)管(型號(hào)No.2L)插入穿孔內(nèi)，以測(cè)量高C02濃度方案中的栽培瓶?jī)?nèi)的C02濃度。關(guān)于采用檢測(cè)管進(jìn)行的測(cè)量，每次測(cè)量?jī)蓚€(gè)栽培瓶中的C02濃度，取平均值作為測(cè)量值。按照每天一次的頻率測(cè)量各發(fā)芽步驟過程中的(A濃度。(A濃度的測(cè)量結(jié)果示于表l中。[表1]<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>接下來，將各測(cè)試方案的培養(yǎng)瓶恢復(fù)至正常位置，并轉(zhuǎn)移至生長(zhǎng)室內(nèi)，并在100勒克斯或更低的光照度(明暗間隔為30分鐘)下使幼芽生長(zhǎng)四天，其中生長(zhǎng)室的溫度被控制為15。C，并且由H咖idEye100(SaginomiyaSeisakusho，Inc.制造)表示的數(shù)值為110%至115%。然后，數(shù)出在各培養(yǎng)瓶的培養(yǎng)基表面上所形成的幼芽(小芽)的數(shù)量。結(jié)果示于表2中。[表2]<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>從表2中可看出，對(duì)照組中幼芽的平均數(shù)量為20，而高C02濃度方案中幼芽的平均數(shù)量為90，這是對(duì)照組中幼芽的平均數(shù)量的4.5倍。此外，與對(duì)照組相比，高C02濃度方案中幼芽的尺寸更為均勻。實(shí)施例2按照與實(shí)施例1相同的方式完成培養(yǎng)步驟并獲得培養(yǎng)混合物。接下來，將混合物轉(zhuǎn)移至發(fā)芽室中，并在50勒克斯或更低(明暗間隔為30分鐘)的光照度下進(jìn)行7天的發(fā)芽，其中發(fā)芽室的溫度被控制為16t:，并且由HumidEye100(SaginomiyaSeisakusho，Inc.制造)表示的濕度值為115%至120%。此時(shí)，設(shè)置8組測(cè)試方案(每個(gè)測(cè)試方案使用12個(gè)瓶子)，在未除去瓶蓋的條件下進(jìn)行0天、1天、2天、3天、4天、5天或6天的發(fā)芽，并且在除去瓶蓋并將瓶子翻轉(zhuǎn)后繼續(xù)發(fā)芽7天、6天、5天、4天、3天、2天或1天，從而完成發(fā)芽步驟。通過與實(shí)施例1相同的方法來測(cè)量發(fā)芽階段中的C02濃度。瓶蓋內(nèi)的C02濃度在10，OOOppm至25，OOO卯m間變化，并且室內(nèi)的平均C02濃度為1，050ppm。接下來，將各測(cè)試方案的培養(yǎng)瓶恢復(fù)至正常位置，并轉(zhuǎn)移至生長(zhǎng)室內(nèi)，在100勒克斯或更低的光照度(明暗間隔為30分鐘)下使幼芽生長(zhǎng)2天，其中生長(zhǎng)室的溫度被控制為15。C，并且由HumidEye100(SaginomiyaSeisakusho,Inc.制造)表示的濕度值為110%至115%。然后，數(shù)出在各培養(yǎng)瓶的培養(yǎng)基表面上所形成的幼芽(小芽)的數(shù)量并計(jì)算各測(cè)試方案中幼芽的平均數(shù)量。結(jié)果示于表3中。[表3]12<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>由上述結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在發(fā)芽階段中，當(dāng)在C02濃度超過10，OOOppm的高C02濃度的環(huán)境條件下進(jìn)行至少一天的發(fā)芽時(shí)，所獲得的幼芽的數(shù)量會(huì)增加。實(shí)施例3按照與實(shí)施例1相同的方式完成培養(yǎng)步驟并獲得培養(yǎng)混合物。接下來，設(shè)定三組測(cè)試方案以進(jìn)行發(fā)芽。S卩，作為對(duì)照組，在除去瓶蓋并將瓶子翻轉(zhuǎn)后，在發(fā)芽室中發(fā)芽7天，其中發(fā)芽室的溫度被控制為16°C，由HumidEye100(SaginomiyaSeisakusho，Inc.制造)表示的濕度值為115%至120%，培養(yǎng)基表面上的光照度為50勒克斯或更低(明暗間隔為30分鐘)。其余兩個(gè)測(cè)試方案如下其中在一個(gè)方案中，培養(yǎng)瓶被加蓋(加蓋方案)，而在另一個(gè)作為對(duì)照的方案中，用聚氯乙烯膠帶將瓶蓋與培養(yǎng)瓶間的固定區(qū)域的半圓部分密封(半密封方案)，并在相同的發(fā)芽室內(nèi)進(jìn)行發(fā)芽。通過與實(shí)施例1相同的方法來測(cè)量發(fā)芽階段的(A濃度。在加蓋方案中，瓶蓋內(nèi)的平均C02濃度為20，OOO卯m。此外，在半密封方案中，瓶蓋內(nèi)的平均C02濃度為25，OOO卯m。另外，室內(nèi)的平均(A濃度為l，OOO卯m。接下來，除去瓶蓋并將各培養(yǎng)瓶恢復(fù)至正常位置，并轉(zhuǎn)移至生長(zhǎng)室內(nèi)，并在IOO勒克斯或更低的光照度(明暗間隔為30分鐘)下使幼芽生長(zhǎng)2天，其中生長(zhǎng)室的溫度被控制為15。C，并且由HumidEye100(SaginomiyaSeisakusho,Inc.制造)表示的濕度值為110%至115%;然后，數(shù)出在各培養(yǎng)瓶的培養(yǎng)基表面上所形成的幼芽(小芽)的數(shù)量，以計(jì)算各測(cè)試方案中每12瓶的幼芽平均數(shù)量。結(jié)果，對(duì)照組的平均數(shù)量為60，加蓋方案的平均數(shù)量為120，而半密封方案的平均數(shù)量為115，從而表明，在高C02濃度環(huán)境下進(jìn)行發(fā)芽時(shí)，幼芽的數(shù)量會(huì)增加。實(shí)施例4按照與實(shí)施例1相同的方式完成培養(yǎng)步驟并獲得培養(yǎng)混合物。接下來，在除去瓶蓋并將瓶子翻轉(zhuǎn)后，在發(fā)芽室中發(fā)芽7天，其中發(fā)芽室的溫度被控制為16。C，由HumidEye100(SaginomiyaSeisakusho，Inc.制造)表示的濕度值為115%至120%，并且培養(yǎng)基表面上的光照度為50勒克斯或更低(明暗間隔為30分鐘)。通過控制發(fā)芽室的通風(fēng)裝置將發(fā)芽階段中的平均C02濃度調(diào)節(jié)為2，500卯m、5，OOOppm和7，OOO卯m，并且計(jì)算各測(cè)試方案中每16個(gè)瓶的平均幼芽數(shù)量。結(jié)果，數(shù)量分別為45、68和92，這表明在高C02濃度環(huán)境下進(jìn)行發(fā)芽時(shí)，幼芽的數(shù)量會(huì)增加。實(shí)施例5按照與實(shí)施例1相同的方式完成培養(yǎng)步驟并獲得培養(yǎng)混合物。接下來，在除去各培養(yǎng)混合物的瓶蓋并將瓶子翻轉(zhuǎn)后，將瓶轉(zhuǎn)移至發(fā)芽室中，并在100勒克斯或更低(明暗間隔為30分鐘)的光照度下進(jìn)行7天的發(fā)芽，其中發(fā)芽室的溫度被控制為15。C，并且由H咖idEye100(SaginomiyaSeisakusho，Inc.制造)表示的濕度值為115%至120%。然后，將培養(yǎng)瓶恢復(fù)至正常位置，并轉(zhuǎn)移至生長(zhǎng)室內(nèi)，并使其在50勒克斯至100勒克斯或更低的光照度下生長(zhǎng)2天，從而獲得用作插條的小芽，其中生長(zhǎng)室的溫度被控制為15。C，并且由H咖idEye100(SaginomiyaSeisakusho,Inc.制造)表示的濕度值為95%至105%。然后，使用鑷子將上述獲得的小芽作為插條逐一嫁接至另一固體培養(yǎng)基的4個(gè)孔(不包括培養(yǎng)基表面中心處的孔)內(nèi)，其中所述固體培養(yǎng)基是利用上述培養(yǎng)步驟之前的工藝而制得的。制備一批(16瓶)嫁接有插條的固體培養(yǎng)基，其中8個(gè)瓶子用類似于實(shí)施例1的高(A濃度發(fā)芽方案(測(cè)試方案)中所用的瓶蓋覆蓋，其余8個(gè)瓶子未蓋蓋子(對(duì)照方案)，然后將小芽在上述生長(zhǎng)室中在相同的條件下進(jìn)行生長(zhǎng)，不同之處在于將由HumidEye100(SaginomiyaSeisakusho,Inc.制造)表示的濕度值設(shè)定為105%至120%。在測(cè)試方案中，在生長(zhǎng)開始后的第四天除去瓶蓋、并在第十天收獲子實(shí)體，而在生長(zhǎng)開始后的第十天收獲對(duì)照方案的子實(shí)體，測(cè)量各子實(shí)體的產(chǎn)量(g/瓶)和孔隙含量(％)。另外，使用由RikenKeiki制造的C02測(cè)定儀(型號(hào)RI_85)來測(cè)定生長(zhǎng)室的C02濃度。按照與實(shí)施例1相同的方法測(cè)量測(cè)試方案的培養(yǎng)瓶中的C02濃度。另外，按照每天一次的頻率測(cè)量生長(zhǎng)步驟過程中的C02濃度。結(jié)果，在測(cè)試階段中，室內(nèi)的C02濃度大約為低于5，OOOppm，并且培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的平均C02濃度為約20，OOO卯m。結(jié)果，在測(cè)試方案中，每瓶的平均產(chǎn)量由81g增至85g，并且孔隙含量(即，在菌柄部分中產(chǎn)生了孔隙的子實(shí)體所占的比例)由6%降至3%。另外，對(duì)具有張開的菌傘(菌傘邊緣未巻曲)的子實(shí)體所占的比例進(jìn)行檢測(cè)，在測(cè)試方案中這一比例為3%，而在對(duì)照方案中這一比例為28%。這表明，在測(cè)試方案中菌傘張開的情況顯著降低，因而可獲得具有優(yōu)異形狀的子實(shí)體。根據(jù)本發(fā)明，提供一種菌床栽培方法，其中通過大規(guī)模的商業(yè)栽培可穩(wěn)定地生產(chǎn)本占地菇。通過采用這種方法，可穩(wěn)定地栽培具有高的幼芽(小芽)形成率的本占地菇。此外，由于成熟子實(shí)體的菌傘張開得以抑制，因此可生產(chǎn)具有較高商業(yè)價(jià)值的形狀的本占地菇。盡管參照本發(fā)明的具體實(shí)施方案對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)說明，但是對(duì)本領(lǐng)域的技術(shù)人員顯而易見的是，可在不脫離本發(fā)明范圍的情況下，對(duì)本發(fā)明進(jìn)行各種修改和改變。權(quán)利要求一種本占地菇的菌床栽培方法，包括如下步驟中的至少一個(gè)步驟在高CO2濃度的環(huán)境條件下進(jìn)行部分或全部的發(fā)芽步驟；以及在高CO2濃度的環(huán)境條件下進(jìn)行部分或全部的子實(shí)體生長(zhǎng)步驟。2.根據(jù)權(quán)利要求l所述的栽培方法，其中在所述發(fā)芽步驟中所述高(A濃度為2，500ppm或更高。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的栽培方法，其中在所述子實(shí)體生長(zhǎng)步驟中所述高C02濃度為5，OOOppm或更高。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的栽培方法，其中在高C02濃度的環(huán)境條件下至少進(jìn)行一天的發(fā)芽步驟。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的栽培方法，其中在高C02濃度的環(huán)境條件下至少進(jìn)行兩天的子實(shí)體生長(zhǎng)步驟。全文摘要本發(fā)明提供一種本占地菇的菌床栽培方法，其中發(fā)芽步驟和/或子實(shí)體生長(zhǎng)步驟是在高CO2濃度的環(huán)境條件下進(jìn)行的。高CO2濃度的環(huán)境條件的例子包括在發(fā)芽步驟中CO2濃度為2,500ppm或更高以及在子實(shí)體生長(zhǎng)步驟中CO2濃度為5,000ppm或更高。由于本發(fā)明的實(shí)施方案提高了本占地菇的菌床栽培方法中小芽的形成率，因此可通過大規(guī)模的商業(yè)栽培來穩(wěn)定地生產(chǎn)本占地菇。文檔編號(hào)A01G1/04GK101743855SQ20091022628公開日2010年6月23日申請(qǐng)日期2009年11月27日優(yōu)先權(quán)日2008年11月28日發(fā)明者加藤郁之進(jìn),喜多昭彥,日下部克彥,杉森武,橋本麻由,河合高志申請(qǐng)人:寶生物工程株式會(huì)社