專利名稱：：一種植物源抑菌提取物及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種植物源抑菌提取物及其作為天然防腐劑的應(yīng)用。(二)
背景技術(shù)：
：根據(jù)防腐劑來源的不同，可將防腐劑分為天然防腐劑和人工合成防腐劑兩大類。長期以來由于天然防腐劑的成本較高，在食品加工中未能得到普遍應(yīng)用，而以山梨酸鉀、苯曱酸鈉為代表的人工合成防腐劑因其價(jià)格低廉、防腐效果好而在食品加工中得到了廣泛應(yīng)用。然而，部分人工合成的防腐劑有誘癌性、致畸性和易引起食物中毒等問題，如苯曱酸鹽，可能會(huì)引起食物中毒，亞硝酸鹽和硝酸鹽可能會(huì)生成致癌的亞硝胺。此外，目前的化學(xué)防腐劑抗菌能力有限，由于抗菌失效而導(dǎo)致食品變質(zhì)的中毒事件時(shí)有發(fā)生。而天然防腐劑具有抗菌性強(qiáng)、安全無毒、水溶性好、熱穩(wěn)定性好、作用范圍廣等合成防腐劑無法比擬的優(yōu)點(diǎn)，因此開發(fā)高效、安全、穩(wěn)定的天然防腐劑已成為食品科學(xué)研究的熱點(diǎn)之一。近年來，天然抑菌物質(zhì)的研究報(bào)告很多，其中抑菌效果好的植物可以作為抑菌物質(zhì)的潛在替代源，從而具有了研究的應(yīng)用價(jià)值和經(jīng)濟(jì)價(jià)值。這些抑菌植物的功用很多，如種植樟樹等可以凈化空氣環(huán)境；柿樹葉不僅具有抑菌作用，還可以舒緩,胃痙攣，營養(yǎng)健康，可以開發(fā)為新型的茶飲料；另有桔皮和馬蹄皮等加工后的廢料中有抑菌作用的桔皮精油,可用于抑菌、抗癌作用的馬蹄皮中的黃色層，在國內(nèi)外均有較多的研究。天然防腐劑不但對人體健康無害，而且還具有一定的營養(yǎng)價(jià)值，隨著研究的深入，被揭示的天然抗菌物質(zhì)越來越多。根據(jù)天然防腐劑的來源，將其分為三類，4天然植物中提取，來源于動(dòng)物的天然防腐劑，來源于微生物類的天然防腐劑。發(fā)明主要涉及來源于植物的天然抗菌物質(zhì)。國內(nèi)外在這方面的研究報(bào)告非常多，簡單幾個(gè)舉例子。如貴州師范大學(xué)研究的矮楊梅葉的抑菌作用，在我國《中藥大辭典》、《貴州中藥資源》等文獻(xiàn)中記載的民間中草藥矮楊梅(MyricananaCeval),是自然分布于我國西南部分地區(qū)的楊梅科常綠灌木植物。貴州西部矮楊梅資源豐富,一些地區(qū)還集中生長著長期分化形成的多個(gè)變異體復(fù)合居群。在貴州畢節(jié)、水城一帶的鼻族、布依族、苗族鄉(xiāng)寨，除以矮楊梅的根、莖、果入藥有治療腸炎、止血、關(guān)節(jié)痛等藥用功效外，還有用葉治燙傷，癰腫、腹痛等疾病的習(xí)俗。北京農(nóng)學(xué)院研究了桑葉水煎劑對常見微生物的抑菌作用，以及在不同pH值條件下的抑菌效果。研究結(jié)果表明，桑葉提取液對供試細(xì)菌的生長有明顯的抑制作用，其中對微球菌的抑制最強(qiáng)，其次為沙門氏菌和大腸桿菌,對枯草芽孢桿菌的作用較弱。抑菌效果隨著桑葉水煎劑濃度的增加而加強(qiáng)。自古以來，桑葉就被認(rèn)為有止咳、防高血壓、清肝明目、治療盜汗等功效，對于風(fēng)熱感冒、頭痛、目赤、口渴、肺咳、咽喉肺痛有良好的效果。隨著科學(xué)技術(shù)的不斷進(jìn)步，人們對桑葉的作用有了更深入的了解。研究人員不但發(fā)現(xiàn)了桑葉有降血糖、減肥、降低血液黏度等作用的一些生理活性物質(zhì)。此外，枇杷葉、樟樹葉、構(gòu)樹葉、柿樹葉、番石榴葉等都是研究的熱門，在這些研究中，可以發(fā)現(xiàn)，各種植物葉子的作用是十分廣泛的，可以降血壓、降血糖、減肥等?；赹i物的這些作用，以及人們對天然、綠色食品的需求，以植物葉片作為天然防腐添加劑用于食品中來達(dá)到抑菌的目的，不但在食品加工業(yè)將有廣闊的應(yīng)用前景，并且在環(huán)境保護(hù)等方面做出了一定貢獻(xiàn)。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明目的是提供一種植物源抑菌提取物及其在制備天然防腐劑中的應(yīng)用。本發(fā)明采用的技術(shù)方案是一種植物源抑菌提取物，由質(zhì)量配比(各原料均以干重計(jì))如下的原料提取得到桔皮1.025.(H分枇杷葉0.5-55.0份樟樹葉0.1-12.0份楊梅葉1.0~15.0份柿樹葉1.025.0份所述提取方法如下將桔皮、枇杷葉、樟樹葉、楊梅葉、柿樹葉的干燥植物碎片混合，加入質(zhì)量為植物碎片質(zhì)量總和1020倍的蒸餾水，4090。C保溫提取l~3h，離心、過濾，收集濾液，記為濾液l，濾渣加入質(zhì)量為濾渣質(zhì)量10~20倍的70~95%乙醇，4060。C保溫提取24h,離心、過濾，收集濾液，記為濾液2，合并濾液1和濾液2，濃縮，得到所述柏:物源抑菌纟是取物。本發(fā)明通過對十種植物材料(樟樹葉、楊梅葉、枇杷葉、夾竹桃葉、柿樹葉、桔皮、石榴葉、葡萄葉、紅葉李和桑樹葉)運(yùn)用水+醇提法提取方法提取抑菌液，并做單劑和復(fù)配劑的抑菌測試，探索何種復(fù)配方案抑菌效果最好。實(shí)驗(yàn)中所用菌種是大腸桿菌(G-)(Escherichiacoli)和金黃色葡萄球菌(G+)(Staphylococcusaureus)。大腸桿菌，革蘭氏陰性短桿菌，是人和動(dòng)物腸道中的正常棲居菌，兼性厭氧菌。金黃色葡萄球菌，是人類化膿感染中最常見的病原菌；球形，直徑0.8ium左右，顯微鏡下排列成葡萄串狀，無芽胞、鞭毛，大多數(shù)無莢膜，革蘭氏染色陽性；需氧或兼性厭氧，最適生長溫度37°C,最適生長pH值7.4。實(shí)驗(yàn)的最關(guān)鍵部分是混合復(fù)配，在混合復(fù)配中，復(fù)配效果的評價(jià)是十分重要的?；靹┰u價(jià)在農(nóng)藥中很普遍，在每年登記的農(nóng)藥產(chǎn)品中，混劑占一半以上。評價(jià)的方法有多種，如Finney法、Sun法、Wgdley法、Bliss法等。在參考了《關(guān)于農(nóng)藥混用評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)的討論》一文后，得知在最常用的Finney法、Sun法和Wadley法中，F(xiàn)inney法增效標(biāo)準(zhǔn)最高，相當(dāng)于Sim法共毒系數(shù)要>260以上才為增效，而拮抗標(biāo)準(zhǔn)相當(dāng)于共毒系數(shù)<50;Sun法按照通常標(biāo)準(zhǔn)共毒系數(shù)50120為加成，這要求太低，由于生物試驗(yàn)誤差較大，難以反映真實(shí)增效或拮抗作用；而Wadley法規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)0.5~1.5要求較為合適,相當(dāng)于共毒系數(shù)80150。因此，在本發(fā)明中選用了Wadley法。通過Wadley法分別獲得對革蘭氏陰性菌大腸桿菌和革蘭氏陽性菌金黃色葡萄球菌的最佳配方，考察了兩種配方在不同酸堿度下對大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的抑制作用，并以山梨酸鉀為陽性對照，兩配方分別對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、沙門氏菌、枯草芽孢桿菌、變形桿菌、志賀氏菌等微生物的抑制效果研究，以及將復(fù)配物添加于牛奶、果汁和鮮肉食品，在常^下放置考察防腐效果，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在堿性環(huán)境'中復(fù)配物的防腐效果優(yōu)于0.05%山梨酸鉀。優(yōu)選的，所述植物源抑菌提取物由質(zhì)量配比如下的原料提取得到桔皮1.26份枇杷葉50.3份樟樹葉0.19份楊梅葉1.18份才乖初十葉2.964分。按照上述配方提取得到提取物對大腸桿菌有較好的抑制作用，可用于制備大腸桿菌抑菌劑。優(yōu)選的，所述植物源抑菌提取物由質(zhì)量配比如下的原料提取得到桔皮22.07份枇杷葉1.034分樟樹葉3.964分楊梅葉4.71份柿樹葉20.32份。按照上述配方提取得到提取物對金黃色葡萄球菌有輕.好的抑制作用，可用于制備金黃色葡萄球菌抑菌劑。本發(fā)明還涉及所述植物源抑菌提取物作為食品防腐劑中的應(yīng)用，尤其是適用于用作偏中性環(huán)境食品的防腐劑。本發(fā)明的有益效果主要體現(xiàn)在1、本發(fā)明采用兩兩復(fù)配與混合復(fù)配的設(shè)計(jì)方法篩選抑菌活性物質(zhì)，此方法在農(nóng)藥復(fù)配中有應(yīng)用，在天然活性藥物篩選復(fù)配中鮮見報(bào)道。2、在弱酸條件下，篩選獲得的抑菌D配方與J配方在較低濃度下(D配方為0.06%，J配方為0.005%)抑菌效果與人工合成防腐劑山梨酸鉀(濃度為0.05%)相當(dāng)；在中性條件下，篩選獲得的抑菌D配方與J配方在較低濃度下(D配方為0.06%,J配方為0.005%)抑菌效果優(yōu)于人工合成防腐劑山梨酸鉀(濃度為0.05%)。本配方尤其適合用于偏中性食品。83、篩選獲得的抑菌D配方和J配方在酸味食品(果汁)、弱酸味食品(肉糜)和偏中性食品(牛奶)中對微生物的抑菌作用試驗(yàn)表明，在偏中性食品中的抑菌效果好于人工合成防腐劑山梨酸鉀。4、本發(fā)明所用抑菌材料均為天然植物材料，原料易得成本低，安全無毒。具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步描述，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不僅限于此實(shí)施例1:抑菌活性篩選l.材料與方法1.1實(shí)驗(yàn)材料1.1.1菌種大腸桿菌、金黃色葡萄球菌中國計(jì)量學(xué)院微生物實(shí)驗(yàn)室提供。l丄2培養(yǎng)基營養(yǎng)肉湯牛肉膏3克，蛋白胨10克，NaC15克，水1000毫升，pH7.07.2。營養(yǎng)瓊脂牛肉膏3克，蛋白胨10克，NaC15克，瓊脂20克，水1000毫升。l丄3儀器VS-840K-U潔凈工作臺(tái)、ZHWY-2102C冷凍恒溫培養(yǎng)搖床、ES-315高壓蒸汽滅菌鍋、GZX-9240MBE數(shù)顯鼓風(fēng)干燥箱、PHX型智能生化培養(yǎng)箱、ZHWY-11030往復(fù)式水浴恒溫培養(yǎng)搖床、電爐、電子天平等。1.2.方法1.2.1植物葉片抑菌活性成分的提取1.2丄1抑菌物質(zhì)的纟是耳又采集新鮮的植物葉片或果皮(無蟲斑點(diǎn)，大小適中)，去柄用自來水洗去表面異物，置烘箱中完全烘干后，取出碾成碎末備用。準(zhǔn)確稱取樣品20g放入1000ml燒杯中，加蒸餾水300ml。放入溫度為40。C的恒溫水浴鍋中，振蕩提取2小時(shí)，離心2000r/min,15min,過濾至另一燒杯中；濾渣加入75。/。的乙醇200ml，》文入溫度為50。C的恒溫水浴鍋中，振蕩提耳又3小時(shí)，離心2000r/min，15min,過濾至另一燒杯中；再將兩次所得的提取液合并濃縮裝瓶。1.2.1.2固形物含量和提耳又物得率的測定提取液取5mL烘干，稱恒重，固體占的百分含量即固形物含量。得率是指每克樣品中所得提取液烘干后的固形物的含量。得率的計(jì)算取充分千燥的〗#養(yǎng)皿底或蓋，稱其質(zhì)量Mp加入5ml提取液，充分烘干后，稱其質(zhì)量M2，得率-(M2-Mjxv/(5x20)xi00%。其中，V為濃縮后提取液總體積。1.2.2提取物抑菌測定方法1.2.2.1供試菌種的培養(yǎng)和菌懸液的配制細(xì)菌采用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基37。C培養(yǎng)。將大腸桿菌、金黃色葡萄球菌分別接種在牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基上或營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上，37r;培養(yǎng)24h。用接種環(huán)分別挑取少許培養(yǎng)好的菌體于裝有無菌生理鹽水的試管內(nèi)，振蕩均勻，制成菌懸液。用平板菌落計(jì)數(shù)法測定其菌液濃度，并用稀釋法，使菌液含菌數(shù)為104個(gè)/ml,即為供試菌懸液。1.2.2.2提取物抑菌率的測定抑菌率的大小可以反映提取液抑菌功能的高低,影響抑菌率的有兩個(gè)因素，一是提取方法，二是提取液濃度。經(jīng)過預(yù)試驗(yàn)的探索比較，發(fā)現(xiàn)濃度分為原液、IO倍稀I奪、20倍稀釋、40倍稀釋、60倍稀釋、80倍稀釋這六個(gè)梯度比較合理，相應(yīng)的將這六個(gè)梯度設(shè)置為Cl、C2、C3、C4、C5、C6,其中C為英文濃度Concentration的縮寫。將稀釋后的提取液各加3ml到平皿中與約10ml的營養(yǎng)瓊脂混合，制成抑菌平板。在滅過菌的含有20ml營養(yǎng)肉湯的試管中，^#入金黃色葡萄球菌和大腸桿菌的菌種，在搖床中37'C培養(yǎng)45小時(shí)后，用移液器取50ul菌液涂布到抑菌平板上，恒溫箱中37。C培養(yǎng)10小時(shí)，菌落計(jì)數(shù)。抑菌率(％)=(對照培養(yǎng)菌落數(shù)-樣品培養(yǎng)菌落數(shù))/對照培養(yǎng)菌落數(shù)><100%1.2.3兩兩復(fù)配抑菌經(jīng)過比較后，在水+醇提中選出抑菌效果最好的六種提取液，各取7mlil:1的比例混合作為原液C1，然后進(jìn)行濃度梯度稀釋成C2、C3、C4、C5、C6，再測試抑菌率，使用wadley法進(jìn)行評價(jià)比較。Wadley法公式(1)復(fù)配劑的混合理論藥效EC50為e:c、0(理論)—■_a+b+c_a/EC(A)5Q+b/EC(B)5Q+c/EC(C)50復(fù)配劑中各種殺菌單劑分別為A,B,C,相應(yīng)所占比例為a，b,c。(2)混劑的EC50實(shí)際值通過實(shí)驗(yàn)測定得到。(3)增效比SR。e(K理論)—eg。(實(shí)際)當(dāng)0.5〈SR〈1.5時(shí),為相加作用；當(dāng)SRM.5時(shí)，為增效作用當(dāng)SR0.5時(shí)，為拮抗作用。注EC50是指抑制50%的病菌生長所需的有效濃度，稱為"有效中濃度"。1.2.4混合復(fù)配抑菌根據(jù)兩兩復(fù)配的結(jié)果對金黃色葡萄球菌和大腸桿菌分別有復(fù)配增效或相加效果的材料再進(jìn)行正交試驗(yàn)復(fù)配。對金黃色葡萄球菌和大腸桿菌的抑菌提取液的提取復(fù)配方案分別設(shè)計(jì)L16(4勺的正交設(shè)計(jì)，抑菌濃度換算為以原料干重計(jì)，如表l、表2。表l:對金黃色葡萄球菌的抑菌試驗(yàn)L16(45)的五因素四水平表因素(原料質(zhì)量，干重g)水平ABCDE(才爭斗對葉)(桔皮)(樟樹葉)(水匕;te葉)(楊梅葉)120.3230.3410.6312.5712.9422.03222.073.961.0294.70631.70657.3761.210.570.54141.01851.75960.5310.210.23表2:對大腸桿菌的抑菌試驗(yàn)L16(45)的五因素四水平表因素(原料子質(zhì)量，干重g)水平ABCDE(柿樹葉)(桔皮葉)(樟樹葉)(水匕把葉)(楊梅葉)'120.3230.3410.6350.2812.9422.9638.621.35312.571.17631.131.2590.6574.5770.61240.360.1340.1882.8570.2291.2.5復(fù)配物對不同微生物的抑菌結(jié)果1.2.5.1復(fù)配物中高低劑量的選擇配制液體培養(yǎng)基，設(shè)置7個(gè)不同復(fù)配物的濃度(最高濃度為100%抑菌)，將復(fù)配物添加于液體培養(yǎng)基中，然后接種大腸桿菌、金黃色葡萄球菌，i殳空白對照(加復(fù)配物^旦不接種)，培養(yǎng)10小時(shí)，在490nm下測OD值。取三個(gè)濃度分別作為中高低劑量。1.2.5.2復(fù)配物高中低劑量對微生物的抑制作用才艮據(jù)吸光度的測定，D7取濃度0.0468g/ml、0.0006g/ml、0.00004g/ml作為高中低劑量，J2取濃度0.0066g/ml、0.00005g/ml、0.000013g/ml作為高中低劑量。配制營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，分別取3ml不同濃度的復(fù)配物加入已滅菌的培養(yǎng)m中，倒平板；將金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、沙門氏菌、枯草芽孢桿菌、變形桿菌、志賀氏菌接種到5ml已滅菌的營養(yǎng)肉湯中，37。C搖晃培養(yǎng)4h;取培養(yǎng)好的細(xì)菌20ul加入150ml無菌水中，搖勻；取稀釋好的菌液40ul加入含有不同濃度復(fù)配物(高中低劑量)、山梨酸鉀(0.05%,w/w)和空白對照(加3ml無菌水)的營養(yǎng)瓊脂平板上，涂布；將細(xì)菌放到37。C下培養(yǎng)10h,測定菌落數(shù)。1.2.6復(fù)配物在不同酸堿條件下的抑菌效果(取100°/。抑菌的濃度)根據(jù)吸光度的測定，D7取濃度(以植物葉片或果皮干重計(jì))0.0468g/ml、0.0006g/ml、0.00004g/ml作為高中低劑量，J2取濃度0.0066g/ml、0.00005g/ml、0.000013g/ml作為高中低劑量。配制不同pH值的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，倒平板；將金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、沙門氏菌、枯草芽孢桿菌、變形桿菌、志賀氏菌接種到5ml已滅菌的營養(yǎng)肉湯中，37。C搖晃培養(yǎng)4h;取培養(yǎng)好的細(xì)菌20ul加入150ml無菌水中，搖勻；取稀釋好的菌液40ul分別加入含有不同濃度復(fù)配物(高中低劑量)和0.05%山梨酸鉀和空白對照(加3ml無菌水)的不同pH值的營養(yǎng)瓊脂平板上，涂布，于37。C下培養(yǎng)10h，測定菌落數(shù)。1.2.7復(fù)配物對不同食品的防腐效果將蘋果榨汁，肉絞成肉泥。將蘋果汁、牛奶和肉泥每種分別放入5個(gè)滅過菌的三角瓶里，每個(gè)三角瓶中50ml(g)，封口。每組三角瓶中分別加入復(fù)配物D7和J2的及山梨酸鉀，濃度分別為山梨酸鉀0.05%、D7配方為0.06%和J2配方為0.005%，并估支空白對照(什么都不加)，所有樣品經(jīng)密封后再巴氏滅菌，在常溫下放置一個(gè)月，取樣測定菌落數(shù)，分別換算成復(fù)配物和山梨酸鉀的抑菌率。2.結(jié)果與分析2.1不同原料水加醇提法的得率比較(見表3)表3:不同原料水加醇提法的得率比較<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>2.2不同原料的復(fù)配實(shí)驗(yàn)才艮據(jù)不同原料、不同濃度的抑菌效果，篩選出石榴、葡萄、柿子、桔皮、樟樹、楊梅和枇杷七種抑菌效杲好的材料進(jìn)行下一步的兩兩復(fù)配實(shí)驗(yàn)。不同濃度、不同材料兩兩復(fù)配實(shí)驗(yàn)混合理論藥效EC50根據(jù)復(fù)配物所占比例及抑菌效果由公式算出，EC50的實(shí)際值由檢測得出。由EC50的理論值與實(shí)際值由公式計(jì)算出增效比，增效比的計(jì)算與分析結(jié)果見表4、5。表4:復(fù)配對大腸桿菌抑制作用的混合效果評價(jià)<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>2.3混合復(fù)配結(jié)果與分析兩兩復(fù)配的結(jié)果對金黃色葡萄球菌有復(fù)配增效或相加作用的為:1)柿樹、橘皮、樟樹、枇杷、楊梅；對大腸桿菌有復(fù)配增效或相加效杲的為2)柿樹、橘皮、樟樹、枇杷、楊梅。實(shí)施例2:根據(jù)植物葉提取得率和提取液固形物含量的換算，得出以下濃度對應(yīng)的提取方案為表6:對金黃色葡萄球菌的抑菌試驗(yàn)1^6(45)的五因素四水平表<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>根據(jù)表6各因素水平，按照表8中各原料用量配比(表8中組合1的各因素均為水平l,表示A為20.32g、B為30.34g、C為10.63g、D為12.57g、E為12.94g，與表6中水平1相同)，取各原料的干燥粉末混合,然后取混合粉末20g按照實(shí)施例1方法進(jìn)行提取和抑菌試驗(yàn)，結(jié)果見表8:表8:混合復(fù)配得率和對金黃色葡萄球菌的抑菌正交試驗(yàn)L16(4"結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>J8243211634256.13%75.41%J913423076538.46%47.87%J1024118804915.21%51.歸J11124957484.50.89%16.89%J1234213314035.56.16%65.08%J13414234413187.514.29%13.93%J1442314841750.511，/。50.33%J1542411418167.04%84.26%J1644121511136.34%6.07%Kl0,42090.30160.42210.32990.5475K20.48240.41350.51680,28080.3754K30.45410.45660.61520.65700.5217K40,58930.77500.39260.67910.5021R值0.16840,47340,22260.39830.1721從表8中得出的R值可以看出復(fù)配物對金黃色葡萄球菌的抑菌作用中桔皮的影響最大，其后影響程度由大到小依次為枇杷、樟樹、楊梅、柿樹。從表8中的抑菌率中得出J2對金黃色葡萄球菌的抑制作用最好，J15的抑菌率次之，J4、J8、J3、J12、J6、J1Q、J5、J"對金黃色葡萄球菌的抑菌率也達(dá)到50%以上。.^'根據(jù)表7各因素水平，按照表9中各原料用量配比(表9中組合1的各因素均為水平l,表示A為20.32g、B為30.34g、C為10.63g、D為50.28g、E為12.94g,與表7中水平1相同)，取各原料的干燥粉末混合,然后取混合粉末20g按照實(shí)施例1方法進(jìn)行提取和抑菌試驗(yàn)，結(jié)果見表9:表9:混合復(fù)配得率和對大腸桿菌的抑菌正交試驗(yàn)L16(45)結(jié)果組合因素(各因素用量參見表7)菌落數(shù)(cfu)得率抑菌率(%)ABCDE12平均(%)Dl11111200117158,58.41%64.86%D2122221351191277.01%26.39%D31315313914610.55%67.63%D414444138187162.510.090/o63.97%D5212417013015015.75%66.74%D62214161138149,59.38%66,85%D72.341226440033211.77%71.84%D82432128721124912.76%44.79%D93134228822225516.45%43.46%17<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>0.0006g/ml,h復(fù)配物為0.00005g/ml,以復(fù)配物混合粉末干重計(jì))在pH5條件下0.05%山梨酸鉀的抑菌作用除變形桿菌外均優(yōu)于0.06%的D配方，而0.005%J配方除枯草芽胞桿菌和大腸桿菌外均優(yōu)于0.05%的山梨酸鉀，0.005%J配方較適合酸味食品中添加；在pH6條件下0.06%D配方除沙門氏菌和大腸桿菌外均優(yōu)于0.05%山梨酸鉀，0.005。/。J配方對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌和志賀氏菌的抑制作用強(qiáng)于0.05%山梨酸鉀；在pH7條件下0.06%D配方除變形桿菌和志賀氏菌抑菌效果微低于0.05%山梨酸鉀外，對其他試驗(yàn)微生物均高于0.05%山梨酸鉀，0.005%J配方除沙門氏菌外抑菌效果均高于0.05%山梨酸鉀，由此可見，無論D配方還是J配方在中性條件下抑菌效果均好于山梨酸鉀。表復(fù)配物在不同酸堿條件下的抑菌效果^\押'菌率々)金黃色葡萄球菌大腸桿菌沙門氏菌枯草芽孢桿菌變形桿菌志賀氏菌D7配方554.9673.6665.7334.9673.332.58667.1757.0437.5945.7570.795.88720.9376.3732.4357.402楊4.05J2酉己方581.8860.0175.9550.0575.0845.37656.1752.8232.4526.2947.8132.48744.4831.0728.7019.5339.9235.08山梨酸鉀0.05%569.0775.4972.8855.4171.4221.30649.3250.5739.6230.7149.1812.6070.8930.4430.4917.4228.94.11.143.2.4對不同食品的防腐效果經(jīng)巴氏滅菌的密封樣品常溫放置一個(gè)月后，各取10g或10mL進(jìn)行梯度稀釋，取1(T1、10-2和10-3的濃度進(jìn)行涂布平板，在37。C下培養(yǎng)24h,計(jì)菌落數(shù)。根據(jù)公式計(jì)算抑菌率19抑醉(%)=舶樣品"^i^，菌,，%2白樣品囷洛數(shù)從所得結(jié)果看，D7和J2在酸味食品(果汁)在抑菌效果略低于山梨酸鉀，在弱酸味食品(肉糜)中抑菌效果與山梨酸鉀基本相當(dāng)，在中性食品(牛奶)中的抑菌效果好于山梨酸鉀。表10:添加抑菌物的食品在常溫下放置一個(gè)月對微生物的抑制效果^"^^抑菌物抑菌率(^)^^D7配方0.06%J2配方0.005%0.05%山梨酸鉀~~~~~—^果汁73.656.485.1肉糜79.076.081.4牛奶96.698.450.320權(quán)利要求1.一種植物源抑菌提取物，由質(zhì)量配比如下的原料提取得到桔皮1.0～25.0份枇杷葉0.5～55.0份樟樹葉0.1～12.0份楊梅葉1.0～15.0份柿樹葉1.0～25.0份；所述提取方法如下將桔皮、枇杷葉、樟樹葉、楊梅葉、柿樹葉的干燥植物碎片混合，加入質(zhì)量為植物碎片質(zhì)量總和10～20倍的蒸餾水，40～90℃保溫提取1～3h，離心、過濾，收集濾液，記為濾液1，濾渣加入質(zhì)量為濾渣質(zhì)量10～20倍的70～95％乙醇，40～60℃保溫提取2～4h，離心、過濾，收集濾液，記為濾液2，合并濾液1和濾液2，濃縮，得到所述植物源抑菌提取物。2.如權(quán)利要求1所述的植物源抑菌提取物，其特征在于所述植物源抑菌提取物由質(zhì)量配比如下的原料提取得到桔皮1.26份枇杷葉50.3份樟樹葉0.19+分楊梅葉1.18份棉初t葉2.964分。3.如權(quán)利要求1所述的植物源抑菌提取物，其特征在于所述植物源抑菌提取物由質(zhì)量配比如下的原料提取得到桔皮22.07份才比^巴葉1.03份樟樹葉3.96份楊梅葉4.71份柿樹葉20.32份。4.如權(quán)利要求1所述的植物源抑菌提取物作為食品防腐劑的應(yīng)用。5.如權(quán)利要求2所述的植物源抑菌提取物在制備大腸桿菌抑菌劑中的應(yīng)用。6.如權(quán)利要求3所述的植物源抑菌提取物在制備金黃色葡萄球菌抑菌劑中的應(yīng)用。全文摘要本發(fā)明提供了一種植物源抑菌提取物及其在制備天然防腐劑中的應(yīng)用。所述植物源抑菌提取物，由質(zhì)量配比(各原料均以干重計(jì))如下的原料提取得到桔皮1.0～25.0份，枇杷葉0.5～55.0份，樟樹葉0.1～12.0份，楊梅葉1.0～15.0份，柿樹葉1.0～25.0份。本發(fā)明采用兩兩復(fù)配與混合復(fù)配的設(shè)計(jì)方法篩選抑菌活性物質(zhì)，篩選獲得抑菌配方在較低濃度下與人工合成防腐劑山梨酸鉀比，效果較明顯，尤其適用于偏中性食品中；本發(fā)明所用抑菌材料均為天然植物材料，原料易得、成本低，安全無毒。文檔編號(hào)A01N65/36GK101647474SQ200910152589公開日2010年2月17日申請日期2009年9月17日優(yōu)先權(quán)日2009年9月17日發(fā)明者張擁軍,朱麗云申請人:中國計(jì)量學(xué)院