專利名稱：：與黃瓜單性花基因m共分離的分子標(biāo)記的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及的是基因工程
技術(shù)領(lǐng)域：
的分子標(biāo)記，具體是與黃瓜單性花基因M共分離的分子標(biāo)記。
背景技術(shù)：
：黃瓜(CucumissativusL)是葫盧禾斗(Cucurbitaceae)舌甘瓜屬(cucumis)一年蔓生的草本植物，原產(chǎn)溫暖濕潤的喜馬拉雅山南麓的印度北部地區(qū)，傳入我國栽培己有2000多年的歷史，我國是黃瓜的次生起源中心。黃瓜作為世界十大重要的蔬菜作物之一，也是我國主栽蔬菜作物之一。由于其多樣的性型分化，在大量的生理學(xué)和遺傳學(xué)研究的基礎(chǔ)上，黃瓜已逐漸成為研究植物性型分化的模式材料。常見的黃瓜品種是雌雄花獨立著生的異花同株型(monoecious);不過某些品種也會出現(xiàn)兩性花(hermaphrodite)。黃瓜單性花性狀研究始于1921年，一般認為單性花(不完全花，雌花或雄花)是黃瓜的野生性狀，其對兩性花(完全花)性狀具有顯性作用。單性/兩性花性狀由M/m(monoecious)基因控制，其與黃瓜全雌性控制基因F(female)共同作用，控制黃瓜的主要性型分化。由單性花(雌花)發(fā)育成的果實一般為長條狀，瓜條長寬比較大，符合大眾的食用傳統(tǒng)；由兩性花發(fā)育成的果實為球形，因其不具有消費習(xí)慣優(yōu)勢，故在長期育種實踐中培育的品種較少。但有研究表明，兩性花黃瓜品種具有明顯高于單性花株的結(jié)實率；兩性花株的始座果節(jié)位也明顯低于單性花株。這兩方面的因素決定了兩性花株的單株總產(chǎn)量要高于單性花株。另外，也有報道稱兩性花株的生長速度快于單性花株。更為重要的是，單基因位點決定性型分化是葫蘆科甜瓜屬(還包括甜瓜)所特有的表型。該基因位點的克隆和作用方式的闡明將豐富植物性型決定機制研究。不難預(yù)見，如果以該基因作為工具，改造其它植物，特別是在植物界絕大部分比例的自花授粉植物，將可能產(chǎn)生極大的經(jīng)濟和社會價值。對黃瓜單性花性型決定M基因分子水平的研究主要開始于2000年以后。有多篇研究報告視圖從基因的表達差異入手克隆該基因，但均沒有獲得滿意的結(jié)果。2008年，Liu等和Li等利用不同的植物分離群體分別對M基因進行了分子標(biāo)記定位，前者用一個來源近等基因系親本構(gòu)建的96株F2群體將M基因定位在一個2.5cM的遺傳區(qū)間內(nèi)；后者使用兩個栽培品種配置的約900株的F2群體將M基因定位在6.1cM的區(qū)間內(nèi)，并發(fā)現(xiàn)一個在該群體內(nèi)與M基因共分離的標(biāo)記S—ME8SA7。詳細結(jié)果可以參看Liu，S.Q等在《TheoreticalandAppliedGenetics》(理論應(yīng)用遺傳學(xué))2008年第117期927933頁發(fā)表的題為《GeneticassociationofETHYLENE-INSENSITIVE3-likesequencewiththesex-determiningMlocusincucumber(CucumissativusL)》(黃瓜性另U決定M位點與類乙烯響應(yīng)基因ETHYLENE-INSENSITIVE3序列的遺傳相關(guān)性)一文；以及Li，Z等在《TheoreticalandAppliedGenetics》(理論應(yīng)用遺傳學(xué))2008年第117期12531260頁發(fā)表的題為{Developmentandfinemappingofthreeco-dominantSCARmarkerslinkedtotheM/mgeneinthecucumberplant(CucumissativusL.)》(三個與黃瓜M/m基因連鎖的共顯性SCAR標(biāo)記的開發(fā)及精細定位)一文。但上述標(biāo)記還存在分析群體相對較小，連鎖距離相對較遠等問題，還不足以克隆M基因位點的候選基因。隨著生物技術(shù)水平的不斷發(fā)展，克隆目的基因的方法也層出不窮，圖位克隆方法是其中一種可以在基因產(chǎn)物未知的情況下，克隆目的基因的有效方法。圖位克隆技術(shù)是根據(jù)目的基因在基因組(染色體)中的位置(基因座位)信息進行的，在利用分離群體的遺傳連鎖分析獲得位于該位點附近的緊密連鎖的分子標(biāo)記的基礎(chǔ)上，通過構(gòu)建高密度的分子連鎖圖譜，經(jīng)過染色體步移(跳躍)，開發(fā)新的更加緊密連鎖的分子標(biāo)記，不斷縮小候選區(qū)間進而最終克隆該基因的方法。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明涉及兩種與黃瓜單性花基因M共分離的分子標(biāo)記。本發(fā)明第一次將基因組DNA序列與M基因建立起聯(lián)系，因而對關(guān)于單性花/兩性花的黃瓜分子標(biāo)記輔助育種體系的建立更有幫助；本發(fā)明的分子標(biāo)記可以簡便、快速、高通量地應(yīng)用于黃瓜育種實踐。本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)的本發(fā)明涉及的第一種與黃瓜單性花基因M共分離的分子標(biāo)記，具有SEQIDN0:1和SEQIDNO:2所示序列。所述第一種分子標(biāo)記由SEQIDN0:6所示的上游引物和SEQIDN0:7所示的下游引物擴增得到。本發(fā)明涉及的第二種與黃瓜單性花基因M共分離的分子標(biāo)記，具有SEQIDN0:3所示序列。所述第二種分子標(biāo)記由SEQIDN0:8所示的上游引物和SEQIDN0:9所示的下游引物擴增得到。本發(fā)明涉及的第一種與黃瓜單性花基因M共分離的分子標(biāo)記是一個SCAR標(biāo)記(暫定名為C2)，其中SEQIDN0:l所示的845個核苷酸的片段與單性花基因M共分離，SEQIDN0:2所示的840個核苷酸的片段與兩性花基因m共分離。本發(fā)明涉及的第二種與黃瓜單性花基因M共分離的分子標(biāo)記是一個SCAR標(biāo)記(暫定名為P97)，該分子標(biāo)記覆蓋的含有單核苷酸多態(tài)性的黃瓜基因組序列區(qū)域為序列表中SEQIDN0:4中的561個核苷酸序列和SEQIDN0:5中的561個核苷酸序列。本發(fā)明第一次將基因組DNA序列與M基因建立起聯(lián)系，因而對關(guān)于單性花/兩性花的黃瓜分子標(biāo)記輔助育種體系的建立更有幫助；本發(fā)明的分子標(biāo)記可以簡便、快速、高通量地應(yīng)用于黃瓜育種實踐。圖1是SCAR標(biāo)記C2對黃瓜親本材料S52，H34，F(xiàn)!世代單株及在&群體隨機單株的檢測結(jié)果圖2是SCAR標(biāo)記P97對黃瓜親本材料S52，H34，F(xiàn),世代單株及在&群體隨機單株的檢測結(jié)果圖。具體實施例方式下面結(jié)合具體實施例，進一步闡述本發(fā)明。這些實施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。下列實施例中未注明具體條件的實驗方法，通常按照常規(guī)條件，例如Sambrook等《分子克隆實驗室手冊》(NewYork:ColdSpringHarborLaboratoryPress,1989)中所述的條件，或按照制造廠商所建議的條件。其他本實施例的實施條件說明如下本實施例中涉及的分子標(biāo)記S—ME8SA7已公開，可參看Li，Z等在《TheoreticalandAppliedGenetics》(理論應(yīng)用遺傳學(xué))2008年第117期12531260頁發(fā)表的題為《Developmentandfinemappingofthreeco_dominantSCARmarkerslinkedtotheM/mgeneinthecucumberplant(CucumissativusL.)》(三個與黃瓜M/m基因連鎖的共顯性SCAR標(biāo)記的開發(fā)及精細定位)一文；本實施例中涉及的黃瓜基因組BAC文庫的篩選操作已公開，可參看Guan，Y等在《ProgressofNaturalScience》(自然科學(xué)進展)2008年第18期143147頁發(fā)表的題為{ConstructionofaBAClibraryfromcucumber(Cucumissativusandidentificationoflinkagegroupspecificclones》(黃瓜BAC文庫的構(gòu)建及連鎖群特異克隆的鑒定)一文；本實施例中涉及的基因預(yù)測軟件GENSCAN和FGENESH可分別通過網(wǎng)址http://genes.mit.edu/GENSCAN.html/禾口htt?！ㄎ?softberry.com/免費在線使用，參數(shù)使用"Arabidopsis"設(shè)定；本實施例中涉及的PCR產(chǎn)物克隆測序中所使用的E.coliDH5a菌株可參看李欣,等在《食品與生物技術(shù)學(xué)報》2007年第26期4851頁發(fā)表的題為《電轉(zhuǎn)化法制備高轉(zhuǎn)化效率的E.coli感受態(tài)細胞研究》一文；本實施例中涉及的E.coliDH5a菌株可通過公開市售的商業(yè)渠道取得，購于寶生物工程(大連)有限公司，公司地址大連經(jīng)濟技術(shù)開發(fā)區(qū)東北二街19號。本實施例的實施步驟具體如下步驟一，遺傳分離群體的構(gòu)建與共分離分析1.F2分離群體的構(gòu)建歐洲溫室類型自交系H34(父本)，兩性花品種，正常生長條件下全株著生兩性花，植株生長速度較快，成熟果實成球型，深綠色；華南類型自交系S52(母本)，單性花品種，植株生長早期(較低節(jié)位)著生雄花，隨后雄花雌花交替分布，生長后期(較高節(jié)位)完全著生雌花，植株生長速度較慢，成熟果實長條狀，白色。二者雜交獲得Ft子代，單性花株(強雌株)，果實長條狀，墨綠色。自交系S52、H34、R子代和單性花株/兩性花株判斷標(biāo)準(zhǔn)，可參看Li，Z等在《TheoreticalandAppliedGenetics》(理論應(yīng)用遺傳學(xué))2008年第117期1253—1260頁發(fā)表的題為《Developmentandfinemappingofthreeco-dominantSCARmarkerslinkedtotheM/mgeneinthecucumberplant(CucumissativusL.)》(三個與黃瓜M/m基因連鎖的共顯性SCAR標(biāo)記的開發(fā)及精細定位)一文。本實施例利用R代自交產(chǎn)生F2代群體。共種植約2700株F2單株，鑒定單性花株/兩性花株，卡方分析法進行驗證。2.交換單株的篩選①黃瓜基因組DNA的提取用CTAB法提取親本及F2分離群體的葉片總DNA。方法為取植株上部幼嫩葉片在液氮中快速研磨成粉末狀，放于1.5ml的離心管中；加入預(yù)熱的500WCTAB提取緩沖液，6(TC水浴0.5h-lh;加入等體積氯仿異戊醇，其中氯仿與異戊醇的體積比為24:1，混勻后12000r/min4°C離心10min;將上清液轉(zhuǎn)入新的離心管，加等體積異丙醇，輕輕混勻，冰浴0.5h以上；12000r/min4°C離心10min;倒去上清液，用體積分數(shù)為70%的乙醇沖洗沉淀兩次，干燥后，加入TE緩沖液溶解后，加入10ug/ml的RNA酶去除RNA，37。C水浴30min;在0.8%瓊脂糖凝膠電泳，以50ng/y1的入DNA為標(biāo)準(zhǔn)，估計所得DNA的濃度；后用TE稀釋終濃度為30ng/ul，存于-2(TC備用。②標(biāo)記掃描&分離群體利用與已有的與M基因連鎖的分子標(biāo)記(S一ME8SA7)和本發(fā)明中開發(fā)的2個分子標(biāo)記(C2和P97)掃描上述獲得的F2分離群體，尋找標(biāo)記基因型(通過分析顯隱親本獲得)與性狀表現(xiàn)型(單性花/兩性花)的差別單株，檢測標(biāo)記與M基因的共分離性。PCR體系基因組DNA30ng，引物O.2Mmol/L，200Mmol/LdNTPs，2醒ol/LMgCl2，lXTaq緩沖液，0.5UTaqDNA聚合酶，總反應(yīng)體系為10叱，其中TaqDNA聚合酶購于Promega公司。PCR擴增程序程序如下表<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>上述PCR產(chǎn)物檢測方法為標(biāo)記S_ME8SA7使用3%瓊脂糖凝膠電泳顯示結(jié)果；標(biāo)記C2使用6%變性聚丙烯酰胺凝膠電泳分離；標(biāo)記P97使用1.5%瓊脂糖凝膠電泳顯示結(jié)果。聚丙烯酰胺凝膠電泳緩沖液為1XTBE，50W恒功率，電泳lh。電泳后進行銀染。銀染方法為將帶膠的玻璃板放入固定液中，在搖床上輕輕搖動至指示劑顏色褪去，其中固定液的組成為冰醋酸、無水乙醇、蒸餾水的體積比為1:10:100;用超純水洗lmin-3min;將沖洗后的膠板放入染色液中搖動半小時，其中染色液的組分為2g/L硝酸銀；將染色后的膠板放入超純水中漂洗5s后放入裝有顯影液的塑料盒中，輕輕搖動至條帶清晰，放入自來水中沖洗3min;室溫下干燥，干燥后拍照，其中顯影液是在lL蒸餾水中加入15gNaOH和3ml甲醛混勻得到的。③多態(tài)性片段的回收、克隆和測序?qū)⒍鄳B(tài)性片段從聚丙烯酰胺凝膠上切下，置于離心管中，用槍頭搗碎，加入超純水沖洗三遍，然后加入10ul超純水95'C水浴15min，快速離心取上清液，用相對應(yīng)的SRAP引物進行PCR擴增，PCR反應(yīng)體系為目標(biāo)條帶DNA5ul，引物O.5umol/L，200umol/LdNTPs，lXTaqBuffer,1.5咖ol/LMgCl2，2UTaqDNA聚合酶，總反應(yīng)體系為50ul，其中TaqDNA聚合酶購于Promega公司。目標(biāo)條帶PCR擴增程序為94°C5min;35cycles，94°C30s;50°C30s;72°Clmin;72°C5min。將PCR產(chǎn)物中加入goldview熒光染料3ul，4'C下放置10min讓染料同DNA結(jié)合，然后加入上樣緩沖液2ul，混勻后通過1%瓊脂糖凝膠電泳分離，在紫外燈下切下目標(biāo)片段放入1.5ml的離心管中，用DNA回收試劑盒回收，其中DNA回收試劑盒為上海生工UNIQ-10柱式DNA膠回收試劑盒，產(chǎn)品號為Cat.No.SK1132。將回收產(chǎn)物與載體連接采用上海申能博彩公司的pUCm-Tvector系統(tǒng)。用電擊法將連有目標(biāo)片段的T-vector轉(zhuǎn)化進入E.coliDH5a感受態(tài)細胞，將菌液均勻涂布于LB固體培養(yǎng)基的平板上，涂好的平板倒置于37。C培養(yǎng)箱培養(yǎng)過夜，挑菌、搖菌及PCR菌液檢測，進行相關(guān)序列的測定。步驟二，染色體步移與標(biāo)記開發(fā)1.黃瓜基因組BAC文庫的掃描本實施例利用PCR法對黃瓜基因組BAC文庫進行掃描篩選，所有PCR反應(yīng)體系均為BAC文庫質(zhì)粒20ng，雙向引物各O.2Wnol/L，200Wnol/LdNTPs，2腿ol/LMgCl2，lXTaq緩沖液，0.5UTaqDNA聚合酶，總反應(yīng)體系為10W，8其中TaqDNA聚合酶購于Promega公司。擴增程序為94°C3min;40cycles，94°C20s，65°C30s，72°C30s;72°C5min，1.5%瓊脂糖凝膠電泳顯示結(jié)果。2.遺傳分子標(biāo)記的開發(fā)本實施例首先利用先前報道的標(biāo)記S—ME8SA7掃描BAC文庫獲得含有該片段的克隆B78;利用B78克隆T7端序列信息設(shè)計PCR擴增片段掃描文庫獲得另一個含有該片段信息的克隆B07。對克隆B07進行鳥槍法測序并拼接后獲得該克隆全長約80.6kb序列。利用基因預(yù)測軟件GENSCAN和FGENESH預(yù)測該序列區(qū)段，獲得一條候選基因序列。在黃瓜親本材料S52和H34間分析該候選基因序列，發(fā)現(xiàn)2個多態(tài)性位點。其一位于預(yù)測的第二個內(nèi)含子中，并利用這一多態(tài)性開發(fā)出共顯性SCAR標(biāo)記，隨后對其進行測序并獲得SEQIDN0:1和SEQIDN0:2中的序列信息，該標(biāo)記命名為C2(圖1);另一多態(tài)性位點位于潛在編碼區(qū)下游97個核苷酸處，并利用這一單核苷酸多態(tài)性，通過將上游引物的3'端最后一個核苷酸與顯性親本序列相匹配的辦法，開發(fā)出一個顯性SCAR標(biāo)記，隨后對其進行測序并獲得SEQIDN0:3中的序列信息，該標(biāo)記命名為P97(圖2)。經(jīng)連鎖分析發(fā)現(xiàn)，C2標(biāo)記和P97標(biāo)記在約2700株分離群體中與M基因共分離?；谝陨辖Y(jié)果，在約2700單株分離群體中，本實施例中的2個分子標(biāo)記將M基因位點與一條候選基因建立起了聯(lián)系。序列表<110>上海交通大學(xué)〈120>與黃瓜單性花基因M共分離的分子標(biāo)記<160>9<210>1<211>845<212>DNA<213>黃瓜(Cwc咖is5;g"rasZ.)<400>1AAATCCTGGTGATGCTTTGCTTGTCCCCACTCCTTACTATCCTGGGTAAGTTCATCATCA60CCTGTTCGTTTTCGTATTTCATTTCAAAAACCMTCTTTACTCTMTTACTATACCCTCA120AC嵐CGTTAAAATTTMCTCTCAAACCACTTTCCAAGTATGMGGTTTAATTTTMCGG180GCTCATGATTCTTGTATTTCAGTTGGATTTTTAAAAATGAATTTATAAACATTTCATCTC240CACMCATGAGTGAATATTTTGTTATCTACTTTTACTTCGTGGATGTTTTTTTTCCTTTC300AGTTGTCCTATATTTTTACTCTCTTCTTGTGTTGTACTCATGTTTTCTATCCTGGGGTGG360ACTACM嵐GATATACTATATCTAGCTCAAGATGTAAACMCGTGTATTTTACGAGACT420ACCGAMTCTTCAAAMTCC嵐CCTTMTTTTGAAAACTAGAAMATTGTAGTTTTTTA480MTTGTTATCAAAACGAGATCTTTATTCTTCTTGCTATCAMGATAATTGCMCCATATC540ACAAAACTTTATGAGTGTTTTTTTTTTTCAACTGTTCTATATTTTTACAACATTTTGAGT600TGTATTCATTTTTCTGTTAAAGATATATATATATATATMCTCMTATGTTMCTMGTA660GTTTTACGAGACTCTTCGTATMTTTCATGCACTMTMTATAGTTTCTTTTTCCAGATT720TGACAGAGATTTGAGATGGAGMCAGGAGTGAAMTTGTACCAATTCATTGTGACAGTTC780AAACAATTTTCAAATAACTCCAAAAGCATTAGAAGMGCTTATAATTCAGCAACGGMAT840GAAAA845〈210〉2<211>840<212〉DNA<213>黃瓜(C"c"j7/51sa"ras厶)<400〉210MATCCTGGTGATGCTTTGCTTGTCCCCACCCTGTTCGTTTTCGTATTTCATTTCMAAAACAAACGTTAMATTTAACTCTCAAACCACGCTCATGATTCTTGTATTTCAGTTGGATTTCACMCATGAGTGAATATTTTGTTATCTACAGTTGTCCTATATTTTTACTGTCTTCTTGTACTACAAAAAGATATACTATATCTAGCTCAACCG嵐TCTTCMAAATCC嵐CCTTAATMTTGTTATCA嵐CGAGATCTTTATTCTTACAAAACTTTATGAGTGTTTTTTTTTTTCATCATTTTTCTGTTAAAGATATATATATATAACGAGACTCTTCGTATMTTTCATGCACTAGAGATTTGAGATGGAGMCAGGAGTG嵐AATTTTCAAATMCTCCMMGCATTAGAAGTCCTTACTATCCTGGGTMGTTCATCATCA60CCAATCTTTACTCTMTTACTATACCCTCA120TTTCCAAGTATGMGGTTTAATTTTAACGG180TTAMAATGAATTTATAAACATTTCATCTC240TTTTACTTCGTGGATGTTTTTTTTCCTTTC300GTTGTACTCATGTTTTCTATCCTGGGGTGG360AGATGTAAACMCGTGTATTTTACGAGACT420TTTGAAMCTAGAAAAATTGTAGTTTTTTA480CTTGCTATCAMGATAATTGCMCCATATC540ACTGTTTTTTTACMCATTTTGAGTTGTAT600TATAACTCMTATGTTMCTAAGTAGTTTT660ATMTATAGTTTCTTTTTCCAGATTTGACA720TTGTACCMTTCATTGTGACAGTTCMACA780AAGCTTATAATTCAGCAACGGAAATGMM840<210>3<211>221<212〉腿<213>黃瓜<400>3AGATTCGCCGTATTTTGCTGGCTGGAAAGC嵐TCCTTCTGGTGTTATTC嵐TGGGCTTTTTATTTTGTTTTGTTTTGTTTTGT嵐CATGGAATCTATGAMCAGGTGTCATTTGATTGTATGATGAAGATCCTTATAATGAATCMC60AGCTGAGMTCMGTAAGMTATACAACTT120GATTTGGGTTTTTTTTMCTGGGTTTGTGT180TATTGGAGGAA221<210>4<211>561〈212>DNA<213>黃瓜(Cwcmw'ssatir"51Z.)<400>4ATGGCGATTGAGATTGAGATTGAGCAMATTCAAGTGTTGMCTTTCGCGMTTGGAACG60TCGGAAACACACGGTGMGATTCGCCGTATTTTGCTGGCTGG嵐GCGTATGATGAAGAT120CCTTATMTGMTCAACAMTCCTTCTGGTGTTATTCAMTGGGCTTAGCTGAGMTCM180GTMGMTATACMCTTTTTATTTTGTTTTGTTTTGTTTTGTAAACAGATTTGGGTTTTT240TTTAACTGGGTTTGTGTTGGMTCTATGMACAGGTGTCATTTGATTTATTGGAGGMTA300TTTGGAGGMMCTGTGAGGGAGAAGGGMTTATTTAMTTCTGGGTTTCGAGAAAATGC360TTTGTTTCAAGATTATCATGGCCTTTTCTCATTTAGMGTGCAATGGGMGTTTTATGGA420AG雄TTAGAGGTGGAAGAGCAMATTTGACCCMATCGAGTTGTTTTMCTGCTGGTGC480CACTGCTGCCMTGAGCTTCTTACTTTCATTCTTGC嵐TCCTGGTGATGCTTTGCTTGT540CCCCACTCCTTACTATCCTGG561<210〉5〈211〉561<212>腿<213>黃瓜<400〉5ATGGCGATTGAGATTGAGATTGAGCAAAATTCMGTGTTGMCTTTCGCGMTTGGMCG60TCGGAMCACACGGTGMGATTCGCCGTATTTTGCTTGCTGGAAAGCGTATGATGMGAT120CCTTATMTGMTCMCMATCCTTCTGGTGTTATTCMATGGGCTTAGCTGAGAATCM180GTAAGMTATACMCTTTTTATTTTGTTTTGTTTTGTTTTGTAAACAGATTTGGGTTTTT240TTTAACTGGGTTTGTGTTGGMTCTATGMACAGGTGTCATTTGATTTATTGGAGGMTA300TTTGGAGGAAAACTGTGAGGGAGMGGGAATTATTTAAATTCTGGGTTTCGAGAMATGC360TTTGTTTCMGATTATCATGGCCTTTTCTCATTTAGMGTGCMTGGGMGTTTTATGGA420AGAMTTAGAGGTGGAAGAGCMMTTTGACCCMATCGAGTTGTTTTMCTGCTGGTGC480CACTGCTGCCAATGAGCTTCTTACTTTCATTCTTGC嵐TCCTGGTGATGCTTTGCTTGT540CCCCACTCCTTACTATCCTGG561〈210>6<211〉20<212>麗〈213〉黃瓜〈400〉6AAATCCTGGTGATGCTTTGC20<210〉7〈211>20<212>DNA<213>黃瓜12<400>7TTTTCATTTCCGTTGCTCM20<210〉8〈211〉20<212>腿〈213>黃瓜(C"ciWis幼"rasZ.)〈400〉8AGATTCGCCGTATTTTGCTG20<210〉9〈211>24<212>腿<213〉黃瓜(Cuc咖is)<400>9TTCCTCCAATAAATCAAATGACAC2權(quán)利要求1、一種與黃瓜單性花基因M共分離的分子標(biāo)記，其特征在于，具有SEQIDNO1和SEQIDNO2所示序列。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的與黃瓜單性花基因M共分離的分子標(biāo)記，其特征是，由SEQIDN0:6所示的上游引物和SEQIDNO:7所示的下游引物擴增得到。3、一種與黃瓜單性花基因M共分離的分子標(biāo)記，其特征在于，具有SEQIDN0:3所示序列。4、根據(jù)權(quán)利要求4所述的與黃瓜單性花基因M共分離的分子標(biāo)記，其特征是，由SEQIDN0:8所示的上游引物和SEQIDN0:9所示的下游引物擴增得到。全文摘要本發(fā)明涉及基因工程
技術(shù)領(lǐng)域：
的與黃瓜單性花基因M共分離的分子標(biāo)記。第一種與黃瓜單性花基因M共分離的分子標(biāo)記，具有SEQIDNO1和SEQIDNO2所示序列；第二種與黃瓜單性花基因M共分離的分子標(biāo)記，具有SEQIDNO3所示序列。本發(fā)明第一次將基因組DNA序列與M基因建立起聯(lián)系，因而對關(guān)于單性花/兩性花的黃瓜分子標(biāo)記輔助育種體系的建立更有幫助；本發(fā)明的分子標(biāo)記可以簡便、快速、高通量地應(yīng)用于黃瓜育種實踐。文檔編號A01H1/04GK101580876SQ20091005331公開日2009年11月18日申請日期2009年6月18日優(yōu)先權(quán)日2009年6月18日發(fā)明者何歡樂,征李,潘俊松,潤蔡,陶倩怡申請人:上海交通大學(xué)