專利名稱：一種瑞香狼毒提取物制劑及其新用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種植物提取物，特別是涉及一種瑞香狼毒提取物制劑及 其新用途。
背景技術(shù)：
植物源農(nóng)藥因其低毒、低殘留、與環(huán)境和諧、符合現(xiàn)代環(huán)保和人們 健康的要求而越來越引起世界各國高度重視，近幾年掀起了一個研究開 發(fā)植物源農(nóng)藥的高潮。植物是生物活性化合物的天然寶庫，其產(chǎn)生的次
生代謝產(chǎn)物超過40萬種，其中的許多化學物質(zhì)具有殺蟲或抗菌活性，如 萜烯類、生物堿、類黃酮、甾體、酚類、獨特的氨基酸和多糖等；從植 物中提取這些活性物質(zhì)對植物病菌不但起直接的抑制作用，同時還可能 含有一些活性物質(zhì)和營養(yǎng)成分，剌激植物自身產(chǎn)生抗病菌活性物質(zhì)和機 能，又可以提高和改進植物營養(yǎng)生長條件而提高抗病能力。
瑞香狼毒fiSte/Zerac/wmae^wwe,又名斷腸草、打碗花、山丹花、' 悶頭花、 一把香，為我國瑞香科狼毒屬植物。它是多年生草本植物，再 生能力強，產(chǎn)種量多，生物量大，耐干旱，耐寒冷，廣泛分布于地勢高 峻、氣候惡劣、自然條件復雜的高山和亞高山草地。由于其具有極顯著 的生理活性， 一直為國內(nèi)外藥學和化學工作者們所關(guān)注，現(xiàn)已被列入《世 界藥學文摘》數(shù)據(jù)庫中。呂全，賈秀貞等對狼毒根提取物的進行了生物 活性測定，認為狼毒根水浸液與乙醇提取物對舞毒蛾幼蟲和油松毛蟲有 拒食作用。何靜對包括狼毒在內(nèi)的七種植物粗提物抑制常見植物病菌進 行了研究，認為狼毒對辣椒絲核病菌有抑制作用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的一個目的在于公開一種瑞香狼毒提取物制劑及其制備方法； 本發(fā)明的另一個目的在于公開瑞香狼毒提取物制劑防治桃褐腐病的新用 途。
本發(fā)明瑞香狼毒根提取物制劑及其制備方法為-稱取瑞香狼毒根粉末80-100重量份，加入石油醚800-1000體積份，搖 床上浸提，靜置2-4h，搖動2-4h;提取液過濾，溫度30-40°C、壓強 0. 04-0. 15MPA條件下真空干燥，將溶劑全部揮發(fā)；用丙酮溶解，配成濃度為 0. 0005-0. 0015g/ml或0. 01-0. 03g/ml的制劑。
本發(fā)明瑞香狼毒根提取物制劑及其制備方法為
稱取瑞香狼毒根粉末90重量份，加入石油醚900體積份，搖床上浸提， 靜置3h，搖動3h;提取液過濾，溫度30-40°C、壓強0.04-0. 15MPA條件下 真空干燥，將溶劑全部揮發(fā);用丙酮溶解，配成濃度為0. 001g/ml或0. 02g/ml 的制劑。
上述方法中的溶媒石油醚還可以氯仿、水、甲醇、乙醇、乙酸乙酯、替 換分別得到氯仿提取物制劑、乙酸乙酯提取物制劑、甲醇提取物制劑或水 提取物制劑、乙醇提取物制劑。
上述發(fā)明所述的重量份和體積份的關(guān)系是g/ml。
本發(fā)明所述的重量份與體積份的比例為克/毫升。


圖1瑞香狼毒對采后桃褐腐病的抑制效果 圖2瑞香狼毒不同溶劑提取物對采后桃PAL酶的影響 下面實驗例或?qū)嵤├糜谶M一步說明但不限于本發(fā)明。 實驗例1瑞香狼毒提取物制劑對桃褐腐病原菌離體試驗
采用生長速率法測定瑞香狼毒提取物制劑對桃褐腐病原菌的抑制作用； 在無菌條件下，取制備的濃度為1 mg/ml瑞香狼毒提取濃縮液1. 5ml倒入滅 菌培養(yǎng)皿中(d=9cm)，再加入融化冷卻至4(TC左右的13. 5 mLPDA培養(yǎng)基中搖 勻，凝固后分別用打空器(d=0.4cm)接入供試菌株，每個菌種設(shè)3個重復， 以相應量的丙酮溶劑加入到培養(yǎng)基中作為對照。每個菌落按十字交叉法測量 2次，以其平均值代表菌落的大小，抑菌率的計算公式如下 純生長量二菌落平均直徑-菌餅直徑，
抑菌率=[(對照純生長量-處理純生長量)X100/對照純生長量]X100%; 瑞香狼毒提取物制劑對桃褐腐病原菌的抑制效果如表1所示表1瑞香狼毒不同溶劑提取物對桃褐腐病原菌的抑制效果
溶劑 水 甲醇 乙醇 乙酸乙酯 氯仿
處理 1. 13 0.80 0.67 0.40 2.03
對照 3.48 2.02 1.27 3.30 3.38
抑菌率(％) 76.30 75.31 68.97 100.0 45.30
結(jié)果顯示瑞香狼毒六種溶劑提取物對桃褐腐病原菌的抑制效果不同； 其中瑞香狼毒乙酸乙脂提取物的抑制作用最強，達到了 100%;石油醚、甲醇 和水提取物對桃褐腐病原菌的作用效果也很明顯，抑菌率分別為87.65%、
76. 30%和75. 31%;乙醇提取物也具有生物活性，抑菌率達到了 68. 97%;水、甲 醇、乙醇、乙酸乙脂、石油醚五種提取物都對桃褐腐病原菌有明顯的抑制作 用。
實驗例2桃活體試驗
選擇外觀整齊、無病蟲害和機械損傷的桃果實，用2%氯酸鈉溶液消毒2 min后，自來水沖洗約5 min，晾干備用；用接種針在果實背部、臉部刺3 mm(寬) X 4mm(深)的傷口，將傷口表面晾干，接濃度為20 mg/ml瑞香狼毒提取物制 劑處理液60 u I，把果實靜置2 h,使溶劑丙酮完全揮發(fā)；接種病菌懸浮 液20ul;傷口晾干后將果實放在300 mm X200腿X 100 mm的塑料包裝盒 中，外套塑料袋以保持相對濕度在95%左右，存放于室溫(25。C左右)；每隔 24h統(tǒng)計果實病斑直徑；每次處理21個果實，3次重復，結(jié)果見圖l;
從圖l可以看出，桃在接種桃褐腐病原菌開頭24小時內(nèi)不發(fā)??；當在 48小時后測量時，乙酸乙脂提取物處理的桃不發(fā)病，其他處理的桃不同程度 地出現(xiàn)了病班，但經(jīng)瑞香狼毒提取物制劑處理的桃病斑都小于對照，發(fā)病情 況由輕到重排列為石油醚、甲醇、氯仿、乙醇、水；當?shù)谌鞙y量時，經(jīng) 乙酸乙脂提取物處理的桃才開始出現(xiàn)病班，其他處理桃的病班有所擴大，但 情況要好于對照；第四天時，對照病班直徑已達到3.83cm，經(jīng)水提取物、甲 醇提取物、乙醇提取物、乙酸乙脂提取物、氯仿提取物、石油醚提取物桃的 病班直徑依次為3. 09cm、 3. 08cm、 2. 75cm、 2. 33cm、 2. 58cm、 2.84cm;第 五天時，對照病斑已達到6.08cm，經(jīng)水提取物、甲醇提取物、乙醇提取物、 乙酸乙脂提取物、氯仿提取物、石油醚提取物處理的桃病斑直徑依次為 4. 22cm、 3. 88cm、 3. 17cm、 2. 62cm、 3. 76cm、 3. 66cm，分別為對照病斑直徑 的69%、 64%、 52%、 43%、 62°/。、 60%。結(jié)果表明，瑞香狼毒六種溶劑提取物對桃的保鮮有一定作用，能夠起到 防治桃褐腐病原菌引起的腐爛作用。經(jīng)六種提取物處理的桃病斑都要小于沒 經(jīng)處理的桃，再次說明瑞香狼毒含有豐富的活物質(zhì)能夠控制桃褐腐的蔓延， 尤其是乙酸乙脂提取物的生物活性非常明顯。
實驗例3酶的測試
1、 酶活性的誘導果實按照實驗例2的接種方法處理；果實處理后貯
藏于常溫下，每處理50果實，于Od、 ld、 2 d、 3 d、 4d取樣測定酶活性，
每次測定樣品取10個果實(病健交界處的果肉)，整個實驗重復2次；
2、 苯丙氨酸解氨酶(PAL)液制備與活性測定取3g果肉，再加入濃 度為0. 1 mol/L的硼酸緩沖液6ml ( Ph= 8. 7，內(nèi)含1腸1/L的EDTA， 20mmol/L 巰基乙醇)，冰浴勻漿，然后離心(12,000 rpm離心30 min， 4°C)，取上清 液用于酶活性測定；苯丙氨酸解氨酶活性測定參照薛應龍的方法加以改進， 以每小時AOD290變化0.01為1個酶活性單位；結(jié)果見圖2;
3、 實驗結(jié)果圖2顯示，瑞香狼毒不同溶劑提取物對采后桃苯丙氨酸 解氨酶的影響，總體酶的變化呈現(xiàn)高-低-高-低的特點，但不同溶劑提取物 對酶的影響效果不同；瑞香狼毒水提取物處理后的桃苯丙氨酸解氨酶的高峰 出現(xiàn)在第三天，相對于其他處理的桃，苯丙氨酸解氨酶的高峰推后一天；甲 醇提取物、石油醚提取物處理的桃苯丙氨酸解氨酶變化與其他處理桃的苯丙 氨酸解氨酶變化波動情況相同；乙醇提取物、氯仿提取物處理的桃苯丙氨酸 解氨酶高峰出現(xiàn)在第二天，酶活值為7.16A0D209/FW 4i、10. 7A0D209/FW 4i; 乙酸乙酯提取物處理的桃酶活性在第二天出現(xiàn)高峰值，并且都高于其他處理 桃的酶值，達到了 17. 8A0D209/FW h;
4、 結(jié)論氯仿提取物處理桃的酶活性在48h時，比其他提取物處理桃的 酶值高,可見氯仿提取物處理的桃抗病性要強與其他提取物處理的桃；在第 三天，氯仿提取物處理的桃酶活性10. 65A0D209/FW h，僅次于乙酸乙脂提 取物處理的酶活性；在第四天時，氯仿提取物處理的桃酶活性為3.14A 0D209/FW *h，也僅低于乙酸乙脂提取物處理的酶活性值4. 50AOD209/FW 'h。 乙酸乙脂提取物處理桃的酶活值在第二天和第四天都比其它處理桃的酶活 值高。
下述實施例均能實現(xiàn)上述實驗例的效果具體實施方式
實施例1:
稱取瑞香狼毒根粉末800kg，加入石油醚800L，搖床上浸提，靜置2-4h， 搖動2-4h;提取液過濾，溫度30-40°C、壓強0. 04-0. 15MPA條件下真空干 燥，將溶劑全部揮發(fā)；用丙酮溶解，配成濃度為0. 0005-0. 0015g/ml或 0.01-0. 03g/ml的制劑。 實施例2:
稱取瑞香狼毒根粉末90 kg，加入石油醚900L，搖床上浸提，靜置3h， 搖動3h;提取液過濾，溫度30-4(TC、壓強0. 04-0. 15MPA條件下真空干燥， 將溶劑全部揮發(fā)；用丙酮溶解，配成濃度為0. 001g/ml或0. 02g/ml的制劑。 實施例3:
稱取瑞香狼毒根粉末90 kg，加入氯仿900L,搖床上浸提，靜置3h，搖 動3h;提取液過濾，溫度30-4CTC、壓強0.04-0. 15MPA條件下真空干燥， 將溶劑全部揮發(fā)；用丙酮溶解，配成濃度為0. 001g/ml或0. 02g/ml的制劑。 實施例4:
稱取瑞香狼毒根粉末90 kg，加入水900L，搖床上浸提，靜置3h，搖動 3h;提取液過濾，溫度30-40。C、壓強0. 04-0. 15MPA條件下真空干燥，將溶 劑全部揮發(fā)；用丙酮溶解，配成濃度為0.001g/ml或0.02g/ml的制劑。 實施例5:
稱取瑞香狼毒根粉末90 kg，加入甲醇900L，搖床上浸提，靜置3h，搖 動3h;提取液過濾，溫度30-40°C、壓強0. 04-0. 15MPA條件下真空干燥， 將溶劑全部揮發(fā)；用丙酮溶解，配成濃度為0. 001g/ml或0. 02g/ml的制劑。 實施例6:
稱取瑞香狼毒根粉末90 kg，加入乙醇900L，搖床上浸提，靜置3h，搖 動3h;提取液過濾，溫度30-40°C、壓強0. 04-0. 15MPA條件下真空干燥， 將溶劑全部揮發(fā)；用丙酮溶解，配成濃度為0. 001g/ml或0. 02g/ml的制劑。 實施例7:
稱取瑞香狼毒根粉末90 kg，加入乙酸乙酯900L，搖床上浸提，靜置3h， 搖動3h;提取液過濾，溫度30-40。C、壓強0. 04-0. 15MPA條件下真空干燥， 將溶劑全部揮發(fā)；用丙酮溶解，配成濃度為0. 001g/ml或0. 02g/ml的制劑。
權(quán)利要求
1、瑞香狼毒根提取物制劑，其特征在于該制劑由如下方法制成稱取瑞香狼毒根粉末80-100重量份，加入石油醚800-1000體積份，搖床上浸提，靜置2-4h，搖動2-4h；提取液過濾，溫度30-40℃、壓強0.04-0.15MPA條件下真空干燥，將溶劑全部揮發(fā)；用丙酮溶解，配成濃度為0.0005-0.0015g/ml或0.01-0.03g/ml的制劑。
2、 如權(quán)利要求l所述的瑞香狼毒根提取物制劑，其特征在于該制劑由 如下方法制成稱取瑞香狼毒根粉末90重量份，加入石油醚900體積份，搖床上浸提， 靜置3h，搖動3h;提取液過濾，溫度30-4(TC、壓強0.04-0. 15MPA條件下 真空干燥，將溶劑全部揮發(fā);用丙酮溶解，配成濃度為0. 001g/ml或0. 02g/ml 的制劑。
3、 如權(quán)利要求1或2所述的瑞香狼毒根提取物制劑，其特征在于制成 該瑞香狼毒根提取物制劑方法中的石油醚用上述方法中的溶媒石油醚以氯 仿、水、甲醇、乙醇、乙酸乙酯替換分別得到氯仿提取物制劑、乙酸乙酯提 取物制劑、甲醇提取物制劑或水提取物制劑、乙醇提取物制劑。
4、 如權(quán)利要求1或2所述的瑞香狼毒根提取物制劑在抑制桃褐腐病原 菌的滅菌劑或桃的保鮮劑中的應用。
5、 如權(quán)利要求3所述的瑞香狼毒根提取物制劑在抑制桃褐腐病原菌的 滅菌劑或桃的保鮮劑中的應用中的應用。
6、 瑞香狼毒根提取物制劑的制備方法，其特征在于該方法為 稱取瑞香狼毒根粉末80-100重量份，加入石油醚800-1000體積份，搖床上浸提，靜置2-4h，搖動2-4h;提取液過濾，溫度30-40°C、壓強...0. 04-0. 15MPA條件下真空干燥，將溶劑全部揮發(fā)；用丙酮溶解，配成濃度為 0. 0005-0. 0015g/ml或0. 01-0. 03g/ml的制劑。
7、 如權(quán)利要求6所述的瑞香狼毒根提取物制劑的制備方法，其特征在 于該方法為稱取瑞香狼毒根粉末90重量份，加入石油醚900體積份，搖床上浸提， 靜置3h，搖動3h;提取液過濾，溫度30-40。C、壓強0. 04-0. 15MPA條件下 真空干燥，將溶劑全部揮發(fā);用丙酮溶解，配成濃度為0. OOlg/ml或0. 02g/ml 的制劑。
8、 如權(quán)利要求6或7所述的瑞香狼毒根提取物制劑的制備方法，其特 征在于該方法中的石油醚以氯仿、水、甲醇、乙醇、乙酸乙酯替換分別得到 氯仿提取物制劑、乙酸乙酯提取物制劑、甲醇提取物制劑或水提取物制劑、 乙醇提取物制劑。
全文摘要
本發(fā)明公開一種瑞香狼毒提取物制劑及其制備方法和新用途。稱取瑞香狼毒根粉末80-100重量份，加入石油醚800-1000體積份，搖床上浸提，靜置2-4h，搖動2-4h；提取液過濾，溫度30-40℃、壓強0.04-0.15MPa條件下真空干燥，將溶劑全部揮發(fā)；用丙酮溶解，配成濃度為0.0005-0.0015g/ml或0.01-0.03g/ml的制劑。本發(fā)明瑞香狼毒提取物制劑對防治桃褐腐病有明顯的抑制作用。
文檔編號A01P3/00GK101416643SQ20081005651
公開日2009年4月29日 申請日期2008年1月21日 優(yōu)先權(quán)日2008年1月21日
發(fā)明者師光祿, 溫哲屹, 王有年 申請人:北京農(nóng)學院