專利名稱：：消除環(huán)境中禽流感病毒的竹醋液提取物的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種環(huán)境消毒劑產(chǎn)品及其制備方法，尤其是一種可以有效消除空氣、土壤等環(huán)境中禽流感病毒，防止人禽交叉感染的消除環(huán)境中禽流感病毒竹醋液提取物及其制備方法。
背景技術(shù)：
：禽流感是A型禽流感病毒所引起的一種禽類急性高度致死性傳染病。雞、火雞、鴨和鵪鶇等家禽及野鳥、水禽、海鳥等均可感染，但以雞和火雞為主。豬、貓、猴等多種動(dòng)物和人類也可感染。禽流感最早于1878年發(fā)生在意大利，歷史上曾被稱為雞瘟或真性雞瘟。一百多年來(lái)，禽流感不斷地侵襲著整個(gè)世界的養(yǎng)禽業(yè)，并直接威脅人類的健康和生命。1997年和2003年，東南亞地區(qū)兩次爆發(fā)H5N1型禽流感，造成數(shù)千萬(wàn)只家禽染病死亡，及20余人感染禽流感病毒而死亡。病毒是寄生于宿主活細(xì)胞內(nèi)的微生物，凡對(duì)病毒有抑制或殺滅作用的藥物，對(duì)宿主細(xì)胞也有一定毒性，這給抗病毒藥物的研制帶來(lái)很大困難。在禽流感的防治中，至今還沒(méi)有很理想的化療藥物。竹子提取物(竹醋液)是竹材干餾產(chǎn)物.，含有200多種化學(xué)成份，主要用于驅(qū)蟲、除臭、殺菌、保健及農(nóng)業(yè)土壤改良等方面。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種使用方便、天然環(huán)保、可以有效殺滅環(huán)境中禽流感病毒的竹醋液提取物及其制備方法。本發(fā)明解決上述問(wèn)題所采用的技術(shù)方案是該制備方法包括以下步驟，將竹材粉碎，自然干燥或烘干至含水率1015%;置于干餾釜中加熱至150200°C，干餾57小時(shí)，收集竹醋液；將收集到的竹醋液自然沉淀749天，過(guò)濾，再減壓蒸餾25小時(shí)，收集餾出液；在收集到的餾出液中，添加乙醇，在15018(TC，1.11.4個(gè)大氣壓條件下，反應(yīng)釜中反應(yīng)24小時(shí)，分層，除去生成的乙酸乙酯，得到精制竹醋液，添加穩(wěn)定劑，得到最終產(chǎn)品。本發(fā)明所添加的穩(wěn)定劑按重量百分比，為0.31.5%的碳酸氫鈉，0.52%的碳酸鈉，0.21%的吐溫80中的一種或幾種。本發(fā)明按重量比，以餾出液乙醇=4:1的比例添加乙醇。本發(fā)明在溫度60±2°C、真空度300士50pa的條件下進(jìn)行減壓蒸餾。本發(fā)明所述的竹材為竹塊或竹屑。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有以下有益效果該竹醋液提取物采用竹材為原料，材料天然環(huán)保，其制備方法簡(jiǎn)單、加工方便，且產(chǎn)品具有良好的殺菌效果。以下為該竹醋液提取物功效的實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證1、材料與方法(1)受試產(chǎn)品本竹醋液提取物消毒劑，黃褐色液體，有機(jī)酸含量58%。(2)禽流感病毒毒株為A/Goose/GuangDong/l/96(H5Nl)，由國(guó)家禽流感參考實(shí)驗(yàn)室保存。(3)雞胚10日齡SPF雞胚，由中國(guó)農(nóng)科院哈爾濱獸醫(yī)研究所實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。(4)預(yù)備試驗(yàn)A、病毒EIDso的測(cè)定將H5亞型禽流感病毒10倍稀釋，接種10日齡SPF雞胚，每個(gè)稀釋度5枚雞胚(O.lml/胚)，測(cè)定病毒的半數(shù)感染劑量(EID50)。B、竹醋液提取物消毒劑對(duì)雞胚的毒性試驗(yàn)將原液、1:5、1:10、1:50、1:100、1:500倍稀釋的竹醋液提取物消毒劑分別接種10R齡SPF雞胚，每個(gè)稀釋度接種5枚雞胚(O.lml/胚)，將接種的雞胚置37。C溫箱中培養(yǎng)96小時(shí)。24小時(shí)以內(nèi)死亡的雞胚去掉，記錄雞胚死亡情況。(5)竹醋液提取物消毒劑對(duì)病毒的殺滅率試驗(yàn)采用Kkin-Defors懸浮方法進(jìn)行竹醋液提取物消毒劑對(duì)禽流感病毒的殺滅試驗(yàn)，以滅菌生理鹽水稀釋的不同稀釋度的竹醋液提取物消毒劑與病毒作用一定時(shí)間，然后不同稀釋度作用混合液進(jìn)行10倍系列稀釋，接種檢測(cè)感染雞胚情況。分別取1065ELD5。/0.lmlH5亞型禽流感病毒懸液與1:50、1:100、1:500、1:600、1:700、1:900、1:1000倍稀釋的竹醋液提取物消毒劑按1:9混合，在20土1'C條件下作用10分鐘后，快速再用滅菌生理鹽水做10倍遞進(jìn)稀釋，做8個(gè)稀釋度，每個(gè)稀釋度接種5枚雞胚(0.1ml/胚)。陰性對(duì)照組用滅菌生理鹽水代替竹醋液提取物消毒劑，同法自理；稀釋液接種種10日齡SPF雞胚，每個(gè)稀釋度接種5枚雞胚(O.lml/胚)。將接種雞胚置37'C恒溫箱中培養(yǎng)，記錄雞胚死亡情況。24小時(shí)以內(nèi)死亡的雞胚去掉，24小時(shí)以后的死胚及時(shí)取出，至96小時(shí)全部取出，逐個(gè)取尿囊液做血凝(HA)試驗(yàn)，血凝陽(yáng)性者判為雞胚感染。按照雞胚感染的結(jié)果，按下列方程式計(jì)算試驗(yàn)組和對(duì)照組雞胚感染的陽(yáng)性率、樣本含ELDso與殺滅率。陽(yáng)性率=血凝陽(yáng)性雞胚/接種雞胚；樣本含ELD5o量的對(duì)數(shù)^L—d(S—0.5)(L為最低稀釋倍數(shù)的對(duì)數(shù)；d為稀釋度間對(duì)數(shù)的差；S為各稀釋列陽(yáng)性率之和。)病毒殺滅率=(對(duì)照樣本含ELD5o量一試驗(yàn)樣本含ELD5o量)/對(duì)照樣本含ELD5o量X100。/q2、結(jié)果(1)病毒ELDso的測(cè)定由附表1可知，將H5亞型禽流感病毒10倍系列稀釋，接種10日雞胚，每個(gè)稀釋度5枚雞胚(O.lml/胚)，試驗(yàn)結(jié)果顯示病毒的半數(shù)感染劑量ELDso為1065ELD50/0.1ml。附表1:H5亞型禽流感病毒ELD5G的測(cè)定<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>其中分子為有血凝活性胚數(shù)，分母為接胚數(shù)(2)竹醋液提取物消毒劑對(duì)雞胚的最大無(wú)毒劑量由附表2可知，將原液、1:5、1:10、1:50、1:100、1:500倍稀釋的竹醋液提取物消毒劑分別接種10日齡雞胚，每個(gè)稀釋度5枚雞胚(O.lml服)，試驗(yàn)結(jié)果顯示竹醋液提取物消毒劑對(duì)雞胚的最大無(wú)毒劑量為1:50倍稀釋的竹醋液提取物消毒劑。附表2:竹醋液提取物消毒劑對(duì)雞胚的最大無(wú)毒劑量<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>其中分子為死亡胚數(shù)，分母為接胚數(shù)(3)竹醋液提取物消毒劑對(duì)禽流感病毒的殺滅作用將l:50、1:100、1:500、1:600、1:700、h900、1:1000倍稀釋的竹醋液提取物消毒劑，分別與1065EID5Q/0.1ml的H5亞型禽流感病毒懸液(9:1)作用IO分鐘，不同稀釋濃度的竹醋液提取物消毒劑殺滅病毒率結(jié)果見(jiàn)附表3。附表3:竹醋液提取物消毒劑對(duì)H5N1亞型禽流感病毒的殺滅率<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>3、結(jié)論采用Klein-Defors懸浮殺滅與感染實(shí)驗(yàn)方法，將竹醋液提取物消毒劑在不同稀釋度下，分別與H5N1亞型禽流感病毒(9:l)體外直接作用，以此檢測(cè)竹醋液提取物消毒劑在體外對(duì)禽流感病毒的殺滅效果。結(jié)果表明，與禽流感病毒作用IO分鐘后，1:50至1:600倍濃度范圍內(nèi)竹醋液提取物消毒劑對(duì)病毒的殺滅率為100%，有完全的殺滅病毒作用。圖1為本發(fā)明實(shí)施例的具體流程圖。具體實(shí)施方式參見(jiàn)圖1，制備方法如下(1)取l噸竹塊或竹屑，粉碎，烘干至含水率15%;(2)置于干餾釜中加熱至18(TC，干餾6小時(shí)，收集干餾液；(3)將收集到的干餾液自然沉淀15天，過(guò)濾，再于6(TC、300pa真空度下減壓蒸鎦3小時(shí)，收集餾出液；(4)在收集到的餾出液中，按重量比，以餾出液乙醇=4:1的比例添加乙醇，在160。C，1.2個(gè)大氣壓條件下，反應(yīng)釜中反應(yīng)3小時(shí)，分層，除去生成的乙酸乙酯，得到精制竹醋液，添加重量百分比為1.0%的碳酸氫鈉作為穩(wěn)定劑，得到最終產(chǎn)品，灌裝為成品。所添加的穩(wěn)定劑也可為0.31.5%的碳酸氫鈉，0.52%的碳酸鈉，0.21%的吐溫80中的一種或幾種。所得到的竹醋液提取物按重量百分比主要包括以下成分-乙酸苯甲酸苯酚2—甲氧基苯酚4一甲氧基苯酚4一乙基苯酚2.08.0%0.50,8%2.54.0%3.07.0%1.52.0%2.53.0%2，6—二甲氧基苯酚2.04.0%乙基愈創(chuàng)木酚其它酚類物質(zhì)酮類化合物醛類化合物余量為水。0.53.0%。0.23.0%0.11.0%0.11.0%權(quán)利要求1、一種消除環(huán)境中禽流感病毒的竹醋液提取物的制備方法，其特征在于包括以下步驟(1)將竹材粉碎，自然干燥或烘干至含水率10～15％；(2)置于干餾釜中加熱至150～200℃，干餾5～7小時(shí)，收集竹醋液；(3)將收集到的竹醋液自然沉淀7～49天，過(guò)濾，再減壓蒸餾2～5小時(shí)，收集餾出液；(4)在收集到的餾出液中，添加乙醇，在150～180℃，1.1～1.4個(gè)大氣壓條件下，反應(yīng)釜中反應(yīng)2～4小時(shí)，分層，除去生成的乙酸乙酯，得到精制竹醋液，添加穩(wěn)定劑，得到最終產(chǎn)品。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的消除環(huán)境中禽流感病毒的竹醋液提取物的制備方法，其特征在于所添加的穩(wěn)定劑按重量百分比，為0.31.5%碳酸氫鈉，0.52%碳酸鈉，0.21%吐溫80中的一種或幾種。3、根據(jù)權(quán)利要求1所述的消除環(huán)境中禽流感病毒的竹醋液提取物的制備方法，其特征在于按重量比，以餾出液乙醇=4:i的比例添加乙醇。4、根據(jù)權(quán)利要求1所述的消除環(huán)境中禽流感病毒的竹醋液提取物的制備方法，其特征在于在溫度60±2"、真空度300土50pa的條件下進(jìn)行減壓蒸餾。5、根據(jù)權(quán)利要求1所述的消除環(huán)境中禽流感病毒的竹子提取物的制備方法，其特征在于所述的竹材為竹塊或竹屑。全文摘要本發(fā)明涉及一種可以有效消除空氣、土壤等環(huán)境中禽流感病毒，防止人禽交叉感染的消除環(huán)境中禽流感病毒竹醋液提取物及其制備方法。其包括以下步驟將竹材粉碎，自然干燥或烘干至含水率10～15％；置于干餾釜中加熱至150～200℃，干餾5～7小時(shí)，收集竹醋液；將收集到的竹醋液自然沉淀7～49天，過(guò)濾，再減壓蒸餾2～5小時(shí)，收集餾出液；在收集到的餾出液中，添加乙醇，在150～180℃，1.1～1.4個(gè)大氣壓條件下，反應(yīng)釜中反應(yīng)2～4小時(shí)，分層，除去生成的乙酸乙酯，得到精制竹醋液，添加穩(wěn)定劑，得到最終產(chǎn)品。本發(fā)明具有使用方便、天然環(huán)保、可以有效殺滅環(huán)境中禽流感病毒的優(yōu)點(diǎn)。文檔編號(hào)A01P1/00GK101126028SQ20071007041公開日2008年2月20日申請(qǐng)日期2007年8月3日優(yōu)先權(quán)日2007年8月3日發(fā)明者王衍彬,童曉青,華錢申請(qǐng)人:浙江省林業(yè)科學(xué)研究院