專利名稱：滇北球花報(bào)春的組培快繁方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及植物組織培養(yǎng)，具體地說(shuō)，涉及滇北球花報(bào)春(Primula denticulata ssp.sino-denticulata)的組織培養(yǎng)快速繁殖方法。
背景技術(shù)：
滇北球花報(bào)春(Primula denticulata ssp.sino-denticulata)為報(bào)春花科報(bào)春花屬植物，是一種非常美麗的園林觀賞花卉。滇北球花報(bào)春(Primula denticulata ssp.sino-denticulata)是多年生草本花卉，整個(gè)植株呈蓮座狀，根狀莖發(fā)達(dá)，向上生5到多個(gè)葉叢，以播種繁殖為主，一般于春季播種后，經(jīng)過(guò)營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)于次年2月底始花，生長(zhǎng)較慢，且繁殖系數(shù)低。除播種繁殖外，報(bào)春花屬無(wú)性繁殖，可用的方法有分株(葉叢)繁殖，組織培養(yǎng)繁殖，少數(shù)多年生種類可采用扦插繁殖，然而分株繁殖的方法遠(yuǎn)不能滿足生產(chǎn)需求。
組織培養(yǎng)是快速繁殖優(yōu)良植物品種的一條重要途徑，報(bào)春花屬已有不少種進(jìn)行了組織培養(yǎng)的相關(guān)報(bào)道，但是滇北球花報(bào)春(Primuladenticulata ssp.sino-denticulata)的組織培養(yǎng)卻沒(méi)有相關(guān)研究與報(bào)道，因此需要研究滇北球花報(bào)春(Primula denticulata ssp.sino-denticulata)的組織培養(yǎng)，并形成一套專門的快繁技術(shù)體系。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種滇北球花報(bào)春(Primula denticulata ssp.sino-denticulata)的組培快繁方法，提高滇北球花報(bào)春(Primuladenticulata ssp.sino-denticulata)的繁殖系數(shù)、生根率及移栽成活率，并結(jié)合其它相關(guān)的技術(shù)措施，使滇北球花報(bào)春(Primula denticulata ssp.sino-denticulata)的種苗生產(chǎn)、種質(zhì)保存等能夠得到較好的的保障。
為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的，本發(fā)明的一種滇北球花報(bào)春(Primuladenticulata ssp.sino-denticulata)組培方法包括外植體選擇、表面消毒、不定芽誘導(dǎo)、繼代培養(yǎng)、生根培養(yǎng)與試管苗移栽。
所述的外植體為滇北球花報(bào)春的腋芽。
所述不定芽誘導(dǎo)和繼代的培養(yǎng)基為MS+2.0mg/l 6-BA+0.1mg/lNAA，pH為5.8～5.9。其光照條件為自然散射光2500～3000Lux加人工輔助光1500～2000Lux。Lux(勒克司)為照度的單位。
所述生根培養(yǎng)基為MS或MS+0.2mg/l NAA，優(yōu)選為MS+0.2mg/lNAA，pH為5.8～5.9。
其光照條件為自然散射光2500～3000Lux加人工輔助光2500～3000Lux。
經(jīng)在生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)2～3周后，煉苗3～4天移栽至溫室細(xì)草炭土中培養(yǎng)。
外植體采用0.1％升汞溶液消毒4～5min。
組培苗適宜的培養(yǎng)溫度為20～23℃之間，超過(guò)25℃組培苗變黃甚至逐漸死亡。
組培苗的移栽適宜溫度為18～25℃之間，過(guò)高或過(guò)低都不利于試管苗的成活。
具體地組培快繁方法為選滇北球花報(bào)春的腋芽為外植體，經(jīng)水沖洗干凈，采用0.1％升汞溶液消毒4～5min，在無(wú)菌條件下經(jīng)蒸餾水反復(fù)清洗，接種至誘導(dǎo)培養(yǎng)基MS+2.0mg/l 6-BA+0.1mg/l NAA中，pH為5.8，光照條件為自然散射光2500～3000Lux加人工輔助光1500～2000Lux；之后移至相同培養(yǎng)基增殖，繼代2～3次，生根培養(yǎng)基為MS+0.2mg/l NAA，pH為5.8，光照條件為自然散射光3000Lux以內(nèi)加人工輔助光2500～3000Lux；溫度保持在20～23℃之間；生根培養(yǎng)2～3周，煉苗3～4天后，移至細(xì)草炭土中培養(yǎng)，保持濕度高于80％，每天噴水2～3次。2周后逐步揭去覆蓋膜正常培養(yǎng)。
一般來(lái)說(shuō)以腋芽為外植體，對(duì)植株的破壞性比較大，但對(duì)于一些比較珍貴，且急需擴(kuò)繁的材料，以腋芽為外植體進(jìn)行擴(kuò)繁，可以在短時(shí)間內(nèi)獲得大量的再生植株；通過(guò)腋芽再生的滇北球花報(bào)春(Primuladenticulata ssp.sino-denticulata)試管苗生長(zhǎng)健壯，對(duì)后期的生長(zhǎng)觀察發(fā)現(xiàn)，基本能保持其優(yōu)良種性不變。組培快繁的試管苗，在生長(zhǎng)過(guò)程中，不易受到病蟲(chóng)害的侵染，但為了進(jìn)一步防止病蟲(chóng)害的產(chǎn)生，宜在生長(zhǎng)季內(nèi)噴施多菌靈、氧化樂(lè)果等3～4次為佳；試管苗移栽時(shí)的溫度應(yīng)控制在18～25℃之間，過(guò)高或過(guò)低都不利于試管苗的成活，夏季不宜進(jìn)行試管苗的移栽。
本發(fā)明的組培快繁方法繁育滇北球花報(bào)春(Primula denticulatassp.sino-denticulata)，2個(gè)月內(nèi)增殖系數(shù)達(dá)到3～4，生根率達(dá)95％以上，移栽成活率幾乎為100％，極大地提高了滇北球花報(bào)春(Primuladenticulata ssp.sino-denticulata)的繁殖系數(shù)，縮短成苗周期，又可降低成本，為今后大面積園林應(yīng)用和工廠化育苗提供了非常有效的方法；同時(shí)，以腋芽為外植體進(jìn)行增殖和快繁，能夠保持滇北球花報(bào)春(Primula denticulata ssp.sino-denticulata)的種性不變，為新品種培育中出現(xiàn)的較為珍貴稀有變種的保存提供了保障。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明滇北球花報(bào)春(Primula denticulata ssp.sino-denticulata)的組培快繁方法的優(yōu)點(diǎn)在于1.建立了一種滇北球花報(bào)春(Primula denticulata ssp.sino-denticulata)的組培快繁方法，相比傳統(tǒng)的報(bào)春花屬植物育苗繁殖方法，如播種繁殖和分株繁殖，極大地提高了滇北球花報(bào)春(Primula denticulata ssp.sino-denticulata)的繁殖系數(shù)，為科研研究和生產(chǎn)栽培提供了技術(shù)支持；2.通過(guò)組培快繁得到的幼苗，生長(zhǎng)強(qiáng)健，葉色濃綠，一致性強(qiáng)，成苗容易，適應(yīng)性較強(qiáng)，病蟲(chóng)害少，易于管理；3.利用組培快繁方法繁育滇北球花報(bào)春(Primula denticulata ssp.sino-denticulata)，解除了季節(jié)與氣候的限制，從而縮短了育苗周期，增加了繁殖量；4.利用組培快繁方法繁育滇北球花報(bào)春(Primula denticulata ssp.sino-denticulata)，可以保持優(yōu)良種或品種的特性不變，從而為新品種選育研究中變異保存提供了有效的方法。
具體實(shí)施例方式
以下實(shí)施例用于說(shuō)明本發(fā)明，但不用來(lái)限制本發(fā)明的范圍。
實(shí)施例1以滇北球花報(bào)春(Primula denticulata ssp.sino-denticulata)葉片為外植體探究不定芽誘導(dǎo)最適培養(yǎng)基選用長(zhǎng)勢(shì)良好的幼苗葉片作為外植體探究不定芽誘導(dǎo)最佳培養(yǎng)基配方。取滇北球花報(bào)春(Primuladenticulata ssp.sino-denticulata)的幼嫩葉片自來(lái)水沖洗5～6h，于水中滴一滴清潔劑震蕩15min，用軟毛刷輕輕刷去表面雜質(zhì)，自來(lái)水反復(fù)沖洗干凈；表面消毒70％酒精消毒15～20s，無(wú)菌水沖洗4～5次，0.1％升汞溶液消毒4～5min，再用無(wú)菌水沖洗4～5次。然后將消毒過(guò)的葉片切成1cm2的小塊(帶部分葉脈)接種在叢生芽的誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，每瓶接種5～6塊，每種培養(yǎng)基接10瓶，暗培養(yǎng)。其中，6-BA的濃度梯度0.5mg/l、1.0mg/l和2.0mg/l；NAA的濃度梯度0.05mg/l、0.1mg/l和0.5mg/l，培養(yǎng)基pH為5.8，采用兩因素完全隨機(jī)試驗(yàn)設(shè)計(jì)。
不同6-BA和NAA濃度影響滇北球花報(bào)春(Primula denticulata ssp.sino-denticulata)葉片的分化。接種4～5天后，葉片開(kāi)始腫脹皺縮，15天左右切口處變肥變厚，40天后，有培養(yǎng)基種葉片開(kāi)始產(chǎn)生愈傷并有少量不定芽的產(chǎn)生。不定芽分化的最佳濃度是6-BA 2.0mg/l和NAA0.1mg/l，此培養(yǎng)基上滇北球花報(bào)春(Primula denticulata ssp.sino-denticulata)誘導(dǎo)率達(dá)到45.1％，并且部分分化成芽。
實(shí)施例2以滇北球花報(bào)春(Primula denticulata ssp.sino-denticulata)腋芽為外植體進(jìn)行初培養(yǎng)和繼代培養(yǎng)選取生長(zhǎng)健壯的植株上的腋芽，自來(lái)水沖洗5～6h，消毒滅菌過(guò)程同葉片，接種在MS+6-BA 2.0mg/l+NAA 0.1mg/l叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，每瓶接種2～3個(gè)；光照條件為自然散射光3000Lux加上人工輔助光源1800±200Lux，光照時(shí)間14h。
當(dāng)腋芽接種在分化培養(yǎng)基上，不斷抽出新葉，10天開(kāi)始，抽出新葉的葉柄粗壯，基部變紅，逐漸形成淺綠色愈傷組織，2周后開(kāi)始有不定芽的分化；接種40天后，在腋芽新抽出的葉柄和葉片上，分化出大量的不定芽。
統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示在MS+6-BA 2mg/l+NAA 0.1mg/l的培養(yǎng)基上接種2個(gè)月后，平均每個(gè)腋芽能分化出不定芽的數(shù)目是40～50個(gè)，顯著多于葉片誘導(dǎo)的不定芽的數(shù)量。同時(shí)，溫度對(duì)于不定芽的誘導(dǎo)和組培苗的生長(zhǎng)起到非常關(guān)鍵的作用，在20～23℃之間，組培苗葉色濃綠，生長(zhǎng)健壯；超過(guò)25℃，組培苗變黃并逐漸死亡。在這樣的培養(yǎng)條件下，試管苗2個(gè)月的增值系數(shù)達(dá)到3～4，極大地提高了滇北球花報(bào)春(Primula denticulata ssp.sino-denticulata)的繁殖系數(shù)。
實(shí)施例3滇北球花報(bào)春(Primula denticulata ssp.sino-denticulata)組培苗的生根培養(yǎng)當(dāng)不定芽在分化培養(yǎng)基上長(zhǎng)出2～3片葉子時(shí)，將其從愈傷組織上切除，轉(zhuǎn)移至生根培養(yǎng)基，配方MS、MS+NAA(0.1mg/l、0.2mg/l、0.5mg/l)中，pH為5.8；光照條件為自然散射光3000Lux加上人工輔助光源2500Lux，光照時(shí)間14h。
從生根所需要的時(shí)間來(lái)看，在培養(yǎng)基MS和MS+0.2mg/l NAA中生根所需時(shí)間最短，為8～10天，但在MS+0.2mg/l NAA中，組培苗生根量和長(zhǎng)勢(shì)明顯好于MS基本培養(yǎng)基，組培苗平均高度可達(dá)4.8cm，生根率為95％以上。
實(shí)施例4滇北球花報(bào)春(Primula denticulata ssp.sino-denticulata)組培苗的移栽生根培養(yǎng)兩周以后，待組培苗平均每株生根4～5條，根長(zhǎng)達(dá)到1cm時(shí)，即可開(kāi)始為移栽作準(zhǔn)備。煉苗是試管苗移栽前的過(guò)渡，可以幫助試管苗逐步適應(yīng)外界環(huán)境，使試管苗更健壯，葉色更加深綠，從而提高成活率。滇北球花報(bào)春(Primula denticulata ssp.sino-denticulata)試管苗煉苗3～4天后，移栽至溫室細(xì)草炭土中，草炭土提前鋪滿穴盤，清水浸透；試管苗移栽后保持濕度80％以上，覆薄膜并每天噴水2～3次，2周以后即可逐步進(jìn)行正常管理，移栽成活率幾乎為100％。
雖然，上文中已經(jīng)用一般性說(shuō)明及具體實(shí)施方案對(duì)本發(fā)明作了詳盡的描述，但在本發(fā)明基礎(chǔ)上，可以對(duì)之作一些修改或改進(jìn)，這對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見(jiàn)的。因此，在不偏離本發(fā)明精神的基礎(chǔ)上所做的這些修改或改進(jìn)，均屬于本發(fā)明要求保護(hù)的范圍。
權(quán)利要求
1.一種滇北球花報(bào)春的組培快繁方法，包括外植體選擇、表面消毒、不定芽誘導(dǎo)、繼代培養(yǎng)、生根培養(yǎng)與試管苗移栽，其特征在于，所述的外植體為滇北球花報(bào)春的腋芽，所述不定芽誘導(dǎo)和繼代的培養(yǎng)基為MS+2.0mg/l 6-BA+0.1mg/l NAA，pH為5.8～5.9，所述生根培養(yǎng)基為MS或MS+0.2mg/l NAA，pH為5.8～5.9。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組培快繁方法，其特征在于，所述不定芽誘導(dǎo)、繼代培養(yǎng)時(shí)，光照條件為自然散射光2500～3000Lux加人工輔助光1500～2000Lux。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的組培快繁方法，其特征在于，所述生根培養(yǎng)基為MS+0.2mg/l NAA。
4.根據(jù)權(quán)利要求1～3任意一項(xiàng)所述的組培快繁方法，其特征在于，所述生根培養(yǎng)時(shí)，光照條件為自然散射光2500～3000Lux加人工輔助光2500～3000Lux。
5.根據(jù)權(quán)利要求1～4任意一項(xiàng)所述的組培快繁方法，其特征在于，所述組培苗的培養(yǎng)溫度為20～23℃。
6.根據(jù)權(quán)利要求1～5任意一項(xiàng)所述的組培快繁方法，其特征在于，所述組培苗的移栽溫度為18～25℃。
7.根據(jù)權(quán)利要求1～6任意一項(xiàng)所述的組培快繁方法，其特征在于，所述外植體采用0.1％的升汞溶液消毒4～5min。
8.根據(jù)權(quán)利要求1～7任意一項(xiàng)所述的組培快繁方法，其特征在于，所述的組培苗經(jīng)在生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)2～3周后，煉苗3～4天移栽至溫室細(xì)草炭土中培養(yǎng)。
9.根據(jù)權(quán)利要求1～8任意一項(xiàng)所述的組培快繁方法，其特征在于，選滇北球花報(bào)春的腋芽為外植體，經(jīng)水沖洗干凈，采用0.1％的升汞溶液消毒4～5min，在無(wú)菌條件下經(jīng)蒸餾水反復(fù)清洗，接種至誘導(dǎo)培養(yǎng)基MS+2.0mg/l 6-BA+0.1mg/l NAA中，pH為5.8，光照條件為自然散射光2500～3000Lux加人工輔助光1500～2000Lux；之后移至相同培養(yǎng)基增殖，繼代2～3次，生根培養(yǎng)基為MS+0.2mg/l NAA，pH為5.8，光照條件為自然散射光2500～3000 Lux加人工輔助光2500～3000Lux；溫度保持在20～23℃之間；生根培養(yǎng)2～3周，煉苗3～4天后，移至細(xì)草炭土中培養(yǎng)，保持濕度高于80％，每天噴水2～3次。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種滇北球花報(bào)春的組培快繁方法，包括外植體選擇、表面消毒、不定芽誘導(dǎo)、繼代培養(yǎng)、生根培養(yǎng)與試管苗移栽。本發(fā)明的滇北球花報(bào)春(Primula denticulata ssp.sino－denticulata)組培快繁方法，一個(gè)腋芽可誘導(dǎo)產(chǎn)生40～50個(gè)左右的新芽，經(jīng)過(guò)繼代30～40天左右增殖系數(shù)為3～4，生根率可達(dá)到95％以上，移栽成活率幾乎為100％，實(shí)現(xiàn)了通過(guò)快繁技術(shù)對(duì)優(yōu)良滇北球花報(bào)春(Primuladenticulata ssp.sino－denticulata)單株的保存，同時(shí)大大提高了滇北球花報(bào)春的育苗生產(chǎn)能力，縮短成苗時(shí)間又可降低成本，為報(bào)春花的大面積推廣應(yīng)用提供了技術(shù)支持。
文檔編號(hào)A01G7/06GK101015280SQ20071006405
公開(kāi)日2007年8月15日 申請(qǐng)日期2007年2月16日 優(yōu)先權(quán)日2007年2月16日
發(fā)明者張啟翔, 李翠娟, 潘會(huì)堂, 梁樹(shù)樂(lè), 程堂仁, 孫明 申請(qǐng)人:北京林業(yè)大學(xué)