專利名稱：牛羊無動物源凍精稀釋液及牛羊冷凍精液的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物與化學(xué)科學(xué)，特別提供了一種用無動物來源成份配制 的牛羊精液稀釋液以及利用此種稀釋液制作牛羊冷凍精液的方法。
背景技術(shù)：
現(xiàn)有技術(shù)中，動物的各種精液稀釋液的成份組成還沒有擺脫完全離開 動物來源成份的發(fā)展程度，并且精液稀釋液的保存方法主要還停留在現(xiàn)用 現(xiàn)配或冷凍保存的水平。在上述的這種狀態(tài)下，必然存在著通過稀釋液中 的動物來源成份在動物與人類之間傳播各種疫病的潛在風(fēng)險。過于簡單的 單一的精液稀釋液的保存方法，在很大程度上限制了動物人工授精技術(shù)的 推廣，增加了配制稀釋液的勞動量，浪費(fèi)了精液稀釋液，影響了勞動生產(chǎn) 率的提高。
因此，人們期望獲得一種用無動物來源成份配制的動物(例如牛羊) 精液稀釋液以及利用此種稀釋液制作動物(例如牛羊)冷凍精液的方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于從非動物來源成份中篩選出有效物質(zhì)配制動物的精 液稀釋液，杜絕傳統(tǒng)稀釋液傳播疫病的潛在危險；并且改進(jìn)了傳統(tǒng)的精液 稀釋液的保存方法，延長了精液稀釋液的保存時間，簡化了精液稀釋液的 使用方法，填補(bǔ)了現(xiàn)有技術(shù)在此方面的空白。本發(fā)明所述牛羊無動物源凍精稀釋液，其特征在于所述稀釋液中至 少包含有如下成分之一或其組合海藻糖、丙二醇、大豆卵磷脂、可溶性 大豆蛋白質(zhì)、氮一三羥甲基氨基乙垸磺酸、十二酰硫酸鈉。
優(yōu)選方案中，在所述稀釋液中還包含有如下成分之一或其組合乳糖、果 糖、乙二醇、乙二胺四乙酸、三羥甲基胺基甲烷；
進(jìn)一步優(yōu)選方案在所述稀釋液中還包含有如下成分之一或其組合膽固 醇、赤蘚糖醇、醋鉻酸、磷脂酰絲氨酸、大豆異黃酮；
在所述稀釋液中還包含有用于提高解凍后的精子活力、延長精子解凍后存 活時間的如下成分之一或其組合氯前列烯醇、維生素B12、咖啡因、維生 素E亞硒酸鈉注射液、蔗糖、磷酸鹽緩沖液、氮一三羥甲基氨基乙烷磺酸
(TES)、維生素Bl、VE、PG、乙二胺四乙酸(EDTA)、三羥甲基胺基甲烷(Tris)、 磷酸鹽緩沖液(PBS.無無犢牛血清BSA成份)、半胱氨酸、甘露醇、青霉素、 鏈霉素。
優(yōu)選方案中，所述牛羊無動物源凍精稀釋液中所包含的各種成分及其 含量可以為(以下所述的各種物質(zhì)質(zhì)量/體積為相對質(zhì)量/體積比例關(guān) 系)果糖蔗糖乳糖海藻糖乙二胺四乙酸(EDTA):三羥甲基胺基 甲烷(Tris):氮一三羥甲基氨基乙烷磺酸(TES):醋酸鉻半胱氨酸=
(0. 5g 1.4g): (1.5g 5g): (2g 5g): (0. 3g lg): (lg 2. 5g): (1.5g 4g): (0.001g 0.002g): (0.001g 0.01g): (0.01g 0.2g);
磷酸鹽緩沖液(PBS.無犢牛血清BSA成份)VE亞硒酸鈉注射溶液磷酸 鹽緩沖液乙二醇丙二醇赤薊糖醇甘露醇膽固醇=(lml 3ml):
(0. lml lml): (lml 6ml): (1ml 5ml): (1. 5ml 7ml): (0. lml 1. 5ml):(0. lml 1.5ml): (0. lml lml)。
本發(fā)明所述牛羊無動物源凍精稀釋液的配制要求具體可以是(以下所 述的各種物質(zhì)質(zhì)量/體積為相對質(zhì)量/體積比例關(guān)系)-
第一步，用電子天平稱取果糖0.85g、蔗糖3.10g、乳糖3.75g、海藻 糖0.58g、乙二胺四乙酸(EDTA) 1.80g、三羥甲基胺基甲烷(Tris) 2. 45g、 氮一三羥甲基氨基乙烷磺酸(TES) 0.015g、醋酸鉻0.003g、磷酸鹽緩沖液 (PBS.無無犢牛血清BSA成份)2.0ml、磷酸鹽緩沖液3.0ml、半胱氨酸 0.05g、乙二醇或丙二醇或二者的組合共6.0ml、赤薊糖醇0.50ml、甘露醇 0.50ml、膽固醇0.30ml;加入雙蒸餾水3. Oml后將上述物質(zhì)充分混合，加 熱煮沸后立即冷卻，再加入雙蒸餾水，使原有物質(zhì)保持加熱煮沸前的體積；
第二步，將上述物質(zhì)充分混勻后，向通過上述過程獲得的混合液中再 加入以下物質(zhì):磷脂酰絲氨酸2.18g、可溶性大豆蛋白2.00g、大豆卵磷脂 0.25g、 VB10.18g、 VB120.09g、咖啡因0. Olg、氯前列烯醇0.013g、十二酰硫 酸鈉0.50ml、青霉素10萬單位、鏈霉素0.1g;
第三步，將上述物質(zhì)加入后充分混合，然后放入5。C 1(TC的避光環(huán)境 中靜置20小時以上，取其上清液，棄去容器底部的不溶成份，在溫度為2 °C 8°C、排出空氣、避光的條件下密封保存。
本發(fā)明牛羊無動物源凍精稀釋液的主要成份為糖源、緩沖劑、醇類低 溫保護(hù)劑、卵磷脂類物質(zhì)、可溶性大豆蛋白質(zhì)、B族維生素、氯前列烯醇、 咖啡因、氮一三羥甲基氨基乙烷磺酸及抗菌素等多種藥品。其中必要成份為海藻糖、乳糖、果糖、丙二醇、乙二醇、乙二胺四乙酸、三羥甲基胺 基甲垸、十二酰硫酸鈉、大豆卵磷脂、可溶性大豆蛋白質(zhì)、氮一三羥甲基 甲基氨基乙烷磺酸等成份
與以前其它國內(nèi)稀釋液所不同之處在于，首次在稀釋液中使用了海藻 糖、丙二醇、膽固醇、赤蘚糖醇、大豆卵磷脂、可溶性大豆蛋白質(zhì)、氮一 三羥甲基氨基乙烷磺酸、十二酰硫酸鈉、醋鉻酸、磷脂酰絲氨酸、大豆異 黃酮等成份。
而氯前列烯醇、維生素Bi2、咖啡因、維生素E亞硒酸鈉注射液等微量 成份及蔗糖、磷酸鹽緩沖液的使用，起到了進(jìn)一步提高了解凍后的精子活 力、延長了精子解凍后的存活時間的作用。
乙二醇、丙二醇、膽固醇、大豆卵磷脂、磷脂酰絲氨酸、大豆異黃酮 等成份的添加提高了精子的耐凍性能，減少了精子在冷凍過程中頂體的破 壞程度，明顯減輕了用甘油對精子的毒副作用，最終對提高凍配母羊的受 胎率起到了非常積極的作用。
牛羊細(xì)管凍精稀釋液的主要特征是取代了傳統(tǒng)的稀釋液中的卵黃、奶 類、蜂蜜等動物來源的成份，使所研制的牛羊凍精稀釋液的成份中不含上 述種類物質(zhì)，但用于制作細(xì)管凍精的使用效果與原來傳統(tǒng)配的使用效果無 顯著差異。
由于所發(fā)明的無動物來源的細(xì)管凍精稀釋液的原液為濃縮液，滲透壓 較高，加之由于濃縮液中含有的抗菌素類藥品在稀釋后的濃度為抑菌濃度， 而在原液中的濃度為殺菌濃度，從而有力保證了所配制的無動物來源的凍 精稀釋液無病源微生物存在，在較低的冷藏溫度下可以做到長期保存。本發(fā)明牛羊冷凍精液的制作方法，將牛或羊的精子和稀釋液充分混合， 然后降溫并保存；其特征在于所述稀釋液中至少包含有如下成分之一或 其組合海藻糖、丙二醇、大豆卵磷脂、可溶性大豆蛋白質(zhì)、氮一三羥甲 基氨基乙烷磺酸、十二酰硫酸鈉。
優(yōu)選方案中，在所述稀釋液中還包含有如下成分之一或其組合 乳糖、果糖、乙二醇、乙二胺四乙酸、三羥甲基胺基甲烷；膽固醇、 赤蘚糖醇、醋鉻酸、磷脂酰絲氨酸、大豆異黃酮；氯前列烯醇、維生素Bu、 咖啡因、維生素E亞硒酸鈉注射液、蔗糖、磷酸鹽緩沖液；氮一三羥甲基 氨基乙垸磺酸(TES)、維生素B1、 VE、 PG、乙二胺四乙酸(EDTA)、三羥甲 基胺基甲烷(Tris)、磷酸鹽緩沖液(PBS.無無犢牛血清BSA成份)、半胱 氨酸、甘露醇、青霉素、鏈霉素。
本發(fā)明所述動物冷凍精液的制作過程依次是
第一步，所述的稀釋液將精液稀釋并混合均勻，稀釋倍數(shù)為l: 1 1:
20，稀釋是精液及稀釋液的溫度范圍要求是3(TC 35'C;
第二步，將用稀釋液稀釋好的精液以1. 5'C 2. 0'C/min的降溫速度進(jìn) 行降溫直至12 18'C，；然后將稀釋好的精液以0. 5 1. 5XVmin的速度進(jìn) 行降溫至8°C 10°C;再將稀釋好的精液從8'C 1(TC開始以0.1 rC/min 的速度降溫至(TC 4t:并在此溫度下平衡0. 5小時 2小時；
第三步，在一100'C土5。C的條件下降溫冷凍3min 8min后，然后將盛 放動物冷凍精液的容器浸入液氮中包裝或/和保存。優(yōu)選方案在所述動物冷凍精液的制作過程中，對稀釋好的精液以1.5 °C 2.0°C/min的降溫速度進(jìn)行降溫直至12 18°〇后，將其放入事先已調(diào) 好溫度的低溫柜中(此時灌裝機(jī)及任何與精液接觸的工具的溫度均與稀釋 好的精液的當(dāng)前溫度相等)進(jìn)行等溫灌裝、打印，并擺放于細(xì)管架上；當(dāng) 將稀釋好的動物精液降溫至0。C 4-C并在等溫條件下經(jīng)0. 5小時 2小時 平衡后，將平衡后的細(xì)管精液放入與其等溫的溫度緩沖箱中，將箱體封閉 后移送到一 100 °C ± 5 °C的槽式冷凍儀內(nèi)進(jìn)行降溫冷凍；
在實(shí)際操作中，對稀釋好的動物精液在一10(TC土5'C的條件下降溫冷 凍3min 8min后，將冷凍后的動物精液連同其包裝抽樣取出浸入液氮5秒 鐘 0. 5小時，再將其從液氮中取出投入38'C 4(TC的溫水中解凍在38°C 下鏡檢，檢査合格后才將冷凍后的動物精液連同其包裝全部浸入液氮中包 裝和保存。
在配制稀釋液的過程中，所用藥品均為分析純化學(xué)試劑，所用配藥工 具必須經(jīng)過徹底消毒并要求無任何消毒藥劑成份殘留；
相對于現(xiàn)有技術(shù)而言，本發(fā)明所述動物(例如牛羊)的精液稀釋液 的成份組成擺脫了動物來源成份，同時精液稀釋液的保存方法也脫離了原 有的現(xiàn)用現(xiàn)配或在較短時間內(nèi)簡單冷凍保存的水平。從而徹底消除了通過 稀釋液中的動物來源成份在動物與人類之間傳播各種疫病的潛在風(fēng)險。更 為實(shí)用、技術(shù)效果更好的精液稀釋液的保存方法，必將在很大程度上促進(jìn) 動物人工授精技術(shù)的推廣，減少配制稀釋液的勞動量，減少了精液稀釋液的浪費(fèi)，提高了勞動生產(chǎn)率。其具有巨大的經(jīng)濟(jì)和社會價值。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1
1)配置動物精液稀釋液
用電子天平稱取果糖0.85克，蔗糖3.10克，乳糖3.75克，海藻糖0.58 克，乙二胺四乙酸1.80克，三羥甲基胺基甲烷2.45克，氮一三羥甲基 氨基乙垸磺酸0.015克，醋酸鉻0.003克，磷酸鹽緩沖液(無犢牛血清成 份)液2.0ml， VE亞硒酸鈉注射溶液0.30ml，磷酸鹽緩沖液3.0ml半胱氨酸 0.05克，乙二醇2.50ml，丙二醇3.50ml，赤薊糖醇0.50ml，甘露醇0.50ml, 膽固醇0.301111，加入雙蒸餾水3.0ml。以上物質(zhì)充分混合，加熱煮沸后立即 冷卻，再加入雙蒸餾水，使原有物質(zhì)保持加熱煮沸前的體積，用力攪拌， 使用雙蒸水與原藥液充分混勻，再加入以下物質(zhì):磷脂酰絲氨酸2.18克， 可溶性大豆蛋白2.00克，大豆卵磷脂0.25克，大豆異黃酮O. IO克，維生 素810. 18克，維生素w0.09克，咖啡因0.05克，氯前列烯醇0.013克， SLS0.50ml，青霉素IO萬單位，鏈霉素0.1克。在容量瓶中使用權(quán)上述物 質(zhì)充分混合，勿使干粉樣藥品物質(zhì)粘于容器的內(nèi)壁上，加入攪拌子，用攪 拌器充分?jǐn)嚢?小時，然后放入5'C 1(TC的避光環(huán)境中靜置20小時以上， 取其上清液，以5000轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速離心20分鐘，棄去容器底部的不溶成份， 放入2"C 8。C的棕色容器中，排出空氣，密封保存。
在配制稀釋液的過程中，所用藥品均為分析純化學(xué)試劑，所用配藥工 具必須經(jīng)過徹底消毒并要求無任何消毒藥劑成份殘留；2) 精液處理
將剛采集的動物(例如牛羊)精液，用注射器量取射精量，通過顯 微鏡檢査合格后，立即用與其等溫的稀釋液(溫度為30°C 35°C)進(jìn)行稀 釋，稀釋倍數(shù)為1: 1 1: 20，加入稀釋液后再用注射器反復(fù)緩慢抽推數(shù)次 直至精液與稀釋液混合均勻。
稀釋好的精液以1. 5°C 2. OtV分鐘的降溫速度進(jìn)行降溫，當(dāng)稀釋好的 精液的溫度下降到15'C時，放入事先已調(diào)好溫度的低溫柜中(此時灌裝機(jī) 及任何與精液接觸的工具的溫度均為15'C)進(jìn)行灌裝、打印，并擺放于細(xì)
管架上。調(diào)整低溫操作柜，使柜中的精液以rc/分鐘的速度進(jìn)行降溫至8
°C 10°C，再從8T: l(TC以0.5/鐘的速度降溫至0， 'C 4。C平衡0.5小 時 2小時。
3) 精液冷凍-
將平衡后的細(xì)管精液放入與其等溫的溫度緩沖箱中，將箱體封閉后， 反箱體移送到一10(TC土5'C的槽式冷凍儀內(nèi)，取出已碼放好精液的細(xì)管架， 放入槽內(nèi)進(jìn)行降溫冷凍，通過槽內(nèi)風(fēng)扇的轉(zhuǎn)動，使槽內(nèi)各方位降溫比較均 勻，冷凍3分鐘 8分鐘后，將細(xì)管凍精取出數(shù)劑浸入液氮，再從液氮中取 出投入38。C 4(TC的溫水中解凍在38'C下鏡檢，檢査合格后將所剩余精液 全部浸入液氮中包裝和保存。
將細(xì)管凍精迅速放入38-C 40'C的溫水中，至細(xì)管凍精表面剛呈現(xiàn)透 明時立即取出，在25t:下進(jìn)行輸精。細(xì)管凍精解凍后的活力達(dá)54.88%，頂 體完整率達(dá)到66. 56%，細(xì)管凍精解凍后具有授精能力的時間達(dá)到18小時以上，以遼寧絨山羊?yàn)閷?shí)驗(yàn)對象，解凍后輸精使母羊的情期受胎率達(dá)到87% 以上。
實(shí)施例2:
1) 配置動物精液稀釋液
用電子天平稱取果糖0.85克，蔗糖3.10克，乳糖3.75克，海藻糖0.58 克，乙二胺四乙酸1.80克，三羥甲基胺基甲烷2.45克，氮一三羥甲基 氨基乙垸磺酸0.015克，醋酸鉻0.003克，磷酸鹽緩沖液(無犢牛血清成 份)2.0ml，磷酸鹽緩沖液3.0ml半胱氨酸0.05克，乙二醇6.00ml，赤薊糖 醇0.50ml，甘露醇0.50ml，膽固醇0.30ml，加入雙蒸餾水3.0ml。以上物 質(zhì)充分混合，加熱煮沸后立即冷卻，再加入雙蒸餾水，使原有物質(zhì)保持加 熱煮沸前的體積，用力攪拌，使用雙蒸水與原藥液充分混勻，再加入以下 物質(zhì):磷脂酰絲氨酸2. 18克，可溶性大豆蛋白2.00克，大豆卵磷脂0.25 克，維生素B10.18克，維生素B120. 09克，咖啡因0. 01克，，青霉素10 萬單位，鏈霉素0.1克。在容量瓶中使用權(quán)上述物質(zhì)充分混合，勿使干粉 樣藥品物質(zhì)粘于容器的內(nèi)壁上，加入攪拌子，用攪拌器充分?jǐn)嚢?小時， 然后放入5"C 1(TC的避光環(huán)境中靜置20小時以上，取其上清液，以5000 轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速離心20分鐘，棄去容器底部的不溶成份，放入2t: 8-c的棕 色容器中，排出空氣，密封保存。
在配制稀釋液的過程中，所用藥品均為分析純化學(xué)試劑，所用配藥工 具必須經(jīng)過徹底消毒并要求無任何消毒藥劑成份殘留；
2) 精液處理-
將剛采集的精液，用注射器量取射精量，通過顯微鏡檢査合格后，立即用與其等溫的稀釋液(溫度為30'C 35t:)進(jìn)行稀釋，稀釋倍數(shù)為l: 1 1: 20，加入稀釋液后再用注射器反復(fù)緩慢抽推數(shù)次直至精液與稀釋液混合均勻。
稀釋好的精液以1.5-C 2.(TC/分鐘的降溫速度進(jìn)行降溫，當(dāng)稀釋好的 精液的溫度下降到15'C時，放入事先已調(diào)好溫度的低溫柜中(此時灌裝機(jī) 及任何與精液接觸的工具的溫度均為15°C)進(jìn)行灌裝、打印，并擺放于細(xì)
管架上。調(diào)整低溫操作柜，使柜中的精液以rc/分鐘的速度進(jìn)行降溫至8
°C 10°C，再從8。C l(TC以0.5/鐘的速度降溫至0， nC 4。C平衡0.5小 時 2小時。
3) 精液冷凍
將平衡后的細(xì)管精液放入與其等溫的溫度緩沖箱中，將箱體封閉后， 反箱體移送到一10(TC士5t:的槽式冷凍儀內(nèi)，取出己碼放好精液的細(xì)管架， 放入槽內(nèi)進(jìn)行降溫冷凍，通過槽內(nèi)風(fēng)扇的轉(zhuǎn)動，使槽內(nèi)各方位降溫比較均 勻，冷凍3分鐘 8分鐘后，將細(xì)管凍精取出數(shù)劑浸入液氮，再從液氮中取 出投入38。C 4(TC的溫水中解凍在38。C下鏡檢，檢査合格后將所剩余精液 全部浸入液氮中包裝和保存。
4) 精液解凍
將細(xì)管凍精迅速放入38。C 4(TC的溫水中，至細(xì)管凍精表面剛呈現(xiàn)透明時 立即取出，在25'C下進(jìn)行輸精。
細(xì)管凍精解凍后的活力達(dá)48.95%，頂體完整率達(dá)到60. 50%，細(xì)管凍精解凍 后具有授精能力的時間達(dá)到ll小時以上，以遼寧絨山羊?yàn)閷?shí)驗(yàn)對象，解凍 后輸精使母羊的情期受胎率達(dá)到75%以上。
權(quán)利要求
1、 牛羊無動物源凍精稀釋液，其特征在于所述稀釋液中至少包含有 如下成分之一或其組合海藻糖、丙二醇、大豆卵磷脂、可溶性大豆蛋白 質(zhì)、氮—三羥甲基氨基乙垸磺酸、十二酰硫酸鈉。
2、 按照權(quán)利要求1所述牛羊無動物源凍精稀釋液，其特征在于在所 述稀釋液中還包含有如下成分之一或其組合乳糖、果糖、乙二醇、乙二 胺四乙酸、三羥甲基胺基甲垸。
3、 按照權(quán)利要求2所述牛羊無動物源凍精稀釋液，其特征在于 在所述稀釋液中還包含有如下成分之一或其組合膽固醇、赤蘚糖醇、醋鉻酸、磷脂酰絲氨酸、大豆異黃酮。
4、 按照權(quán)利要求3所述牛羊無動物源凍精稀釋液，其特征在于 在所述稀釋液中還包含有用于提高解凍后的精子活力、延長精子解凍后存活時間的如下成分之一或其組合氯前列烯醇、維生素B12、咖啡因、 維生素E亞硒酸鈉注射液、蔗糖、磷酸鹽緩沖液、氮一三羥甲基氨基乙垸 磺酸、維生素B1、 VE、 PG、乙二胺四乙酸、三羥甲基胺基甲垸、半胱氨酸、 甘露醇、青霉素、鏈霉素。
5、 按照權(quán)利要求1 4之一所述牛羊無動物源凍精稀釋液，其特征在 于其包含有如下成分中的至少一種，各種成分及其含量具體為果糖蔗糖乳糖海藻糖乙二胺四乙酸三羥甲基胺基甲垸氮 一三羥甲基氨基乙烷磺酸醋酸鉻半胱氨酸=(0.5g 1.4g): (1.5g 5g): (2g 5g): (0. 3g lg): (lg 2. 5g): (1.5g 4g): (0. 001g 0. 002g):(0. 001g 0. Olg): (0. 01g 0. 2g);磷酸鹽緩沖液VE亞硒酸鈉注射溶液磷酸鹽緩沖液乙二醇丙二醇: 赤薊糖醇甘露醇膽固醇=(lml 3ml): (0. lml lml): (lml 6ml):(lml 5rnl): (1. 5ml 7ml): (0. lml L 5ml): (0. lml 1. 5ml): (0. lml lml)。
6、 按照權(quán)利要求5所述牛羊無動物源凍精稀釋液，其特征在于所述 稀釋液的配制要求具體是第一步，用電子天平稱取果糖0. 85g、蔗糖3.10g、乳糖3. 75g、海藻 糖0.58g、乙二胺四乙酸1.80g、三羥甲基胺基甲烷2.45g、氮一三羥甲基 氨基乙垸磺酸0. 015g、醋酸鉻0. 003g、磷酸鹽緩沖液2. Oml、磷酸鹽緩沖 液3.0ml、半胱氨酸0.05g、乙二醇或丙二醇或二者的組合共6.0ml、赤薊 糖醇0.50ml、甘露醇0.50ml、膽固醇0.30ml;加入雙蒸餾水3. Oml后將上 述物質(zhì)充分混合，加熱煮沸后立即冷卻，再加入雙蒸餾水，使原有物質(zhì)保 持加熱煮沸前的體積；第二步，將上述物質(zhì)充分混勻后，向通過上述過程獲得的混合液中再 加入以下物質(zhì):磷脂酰絲氨酸2.18g、可溶性大豆蛋白2.00g、大豆卵磷脂 0. 25g、 VB10.18g、 VB120.09g、咖啡因0. Olg、青霉素10萬單位、鏈霉素0. lg;第三步，將上述物質(zhì)加入后充分混合，然后放入5。C 1(TC的避光環(huán)境 中靜置20小時以上，取其上清液，棄去容器底部的不溶成份，在溫度為2 °C 8t:、排出空氣、避光的條件下密封保存。
7、 牛羊冷凍精液的制作方法，將?；蜓虻木雍拖♂屢撼浞只旌?，然 后降溫并保存；其特征在于所述稀釋液中至少包含有如下成分之一或其組合海藻糖、丙二醇、大豆卵磷脂、可溶性大豆蛋白質(zhì)、氮一三羥甲基 氨基乙垸磺酸、十二酰硫酸鈉。
8、 按照權(quán)利要求7所述牛羊冷凍精液的制作方法，其特征在于 在所述稀釋液中還包含有如下成分之一或其組合-乳糖、果糖、乙二醇、乙二胺四乙酸、三羥甲基胺基甲烷；膽固醇、 赤蘚糖醇、醋絡(luò)酸、磷脂酰絲氨酸、大豆異黃酮；氯前列烯醇、維生素Bu、 咖啡因、維生素E亞硒酸鈉注射液、庶糖、磷酸鹽緩沖液；氮一三羥甲基 氨基乙烷磺酸、維生素Bl、 VE、 PG、乙二胺四乙酸、三羥甲基胺基甲烷、 半胱氨酸、甘露醇、青霉素、鏈霉素。
9、 按照權(quán)利要求8所述牛羊冷凍精液的制作方法，其特征在于所述 動物冷凍精液的制作過程依次是第一步，所述的稀釋液將精液稀釋并混合均勻，稀釋倍數(shù)為h 1 1: 20，稀釋是精液及稀釋液的溫度范圍要求是3(TC 35-C;第二步，將用稀釋液稀釋好的精液以1. 5aC 2. (TC/min的降溫速度進(jìn) 行降溫直至12 18°C，；然后將稀釋好的精液以0. 5 L 5°C/min的速度進(jìn) 行降溫至8°C 10°C;再將稀釋好的精液從8。C 1(TC開始以0. l l°C/min 的速度降溫至0t: 4'C并在此溫度下平衡0. 5小時 2小時；第三步，在一10(TC土5nC的條件下降溫冷凍3min 8min后，然后將盛 放動物冷凍精液的容器浸入液氮中包裝或/和保存。
10、 按照權(quán)利要求9所述牛羊冷凍精液的制作方法，其特征在于所 述動物冷凍精液的制作過程中對稀釋好的精液以1. 5。C 2. (TC/min的降溫速度進(jìn)行降溫直至12 18'c后，將其放入事先已調(diào)好溫度的低溫柜中進(jìn)行等溫灌裝、打印，并擺放于細(xì)管架上；當(dāng)將稀釋好的動物精液降溫至(TC 4°C并在等溫條件下經(jīng)0. 5小時 2 小時平衡后，將平衡后的細(xì)管精液放入與其等溫的溫度緩沖箱中，將箱體 封閉后移送到一 100 °C ± 5 °C的槽式冷凍儀內(nèi)進(jìn)行降溫冷凍。
全文摘要
牛羊無動物源凍精稀釋液，其至少包含有如下成分之一或其組合海藻糖、丙二醇、大豆卵磷脂、可溶性大豆蛋白質(zhì)、氮-三羥甲基氨基乙烷磺酸、十二酰硫酸鈉。一種使用上述的牛羊無動物源凍精稀釋液的牛羊冷凍精液的制作方法，將?；蜓虻木雍拖♂屢撼浞只旌?，然后降溫并保存。相對于現(xiàn)有技術(shù)而言，本發(fā)明所述動物精液稀釋液擺脫了動物來源成份；其保存方法更為實(shí)用、技術(shù)效果更好，徹底消除了通過稀釋液中的動物來源成份在動物與人類之間傳播各種疫病的潛在風(fēng)險。其必將在很大程度上促進(jìn)動物人工授精技術(shù)的推廣，提高了勞動生產(chǎn)率和經(jīng)濟(jì)效益；其具有巨大的經(jīng)濟(jì)和社會價值。
文檔編號A01N1/02GK101310729SQ200710011389
公開日2008年11月26日 申請日期2007年5月23日 優(yōu)先權(quán)日2007年5月23日
發(fā)明者劉興偉, 宋先忱, 張世偉, 張文軍, 楊文凱, 豆興堂, 迪 韓 申請人:遼寧省遼寧絨山羊育種中心;遼寧省遼寧絨山羊原種場有限公司