專利名稱：：治療對藥物有抗性的癌癥的方法治療對藥物有抗性的癌癥的方法發(fā)明領(lǐng)域概括而言，本發(fā)明涉及治療癌癥的方法。更具體而言，本發(fā)明涉及用于治療對藥物有抗性的癌癥和患有對藥物有抗性的癌癥的患者的方法和4-氨基取代的喹啉酮苯并咪唑基化合物如4-氨基-5-氟-3-5-(4-甲基哌溱-1-基)-lH-苯并咪唑-2-基j喹啉-2(lH)-酮化合物以及包含這類化合物的藥物制劑。發(fā)明背景多種化合物和組合物已經(jīng)被^=艮道具有對抗一種或多種血管內(nèi)皮生長因子受體酪氨酸激酶(VEGF-RTK)的活性。實(shí)例包括喹啉衍生物如WO98/13350中所述的喹啉衍生物、氨基煙酰胺衍生物(例如參見WO01/55114)、反義化合物(例如參見WO01/52卯4)、模擬肽(peptidomimetics)(例如參見WO01/52875)、喹唑啉衍生物(例如參見美國專利6,258，951)、單克隆抗體(例如參見EP1086705Al)、多種5，10，15，20-四芳基-p卜淋和5，10，15-三芳基-coiroles(例如參見WO00/27379)、雜環(huán)烷烴磺酸和烷爛羧酸f汴生物(例如參見DE19841985)、羥吲咮基喹唑啉4汙生物(例如參見WO99/10349)、1，4-二氮雜蒽(anthracine)衍生物(例如參見美國專利5，763，441)和噌啉f汴生物(例如參見WO97/34876)以及多種吲唑化合物(例如參見WO01/02369和WO01/53268)。多篇參考文獻(xiàn)中公開了4-羥基喹諾酮和4-羥基喹啉衍生物的合成。例如，Ukrainets等人已經(jīng)公開了3-(苯并咪唑-2-基)-4-羥基-2-氧代-l,2-二氬會(huì)啉的合成。Ukrainets，I.等人，TetrahedronLett.42，7747-7748(1995);Ukrainets，I.等人，KhimiyaGeterotsiklicheskikhSoedinii,2,239-241(1992)。Ukrainets還已經(jīng)公開了其它4-羥基全諾酮和硫類似物如lH-2-氧代-3-(2-苯并咪唑基)-4-羥基會(huì)啉的合成、抗驚厥和抗甲狀腺活性。Ukrainets，I.等人，KhimiyaGeterotsiklicheskikhSoedinii,1，105-108(1993);Ukrainets，I.等人，KhimiyaGeterotsiklicheskikhSoedinii,8，1105-1108(1993);Ukrainets，I.等人，Chem.HeterocyclicComp.33,600-604，(1997)。WO97/48694中公開了多種會(huì)啉衍生物的合成。公開了這些化合物能夠與核激素受體結(jié)合并且可用于刺激成骨細(xì)胞增殖和骨生長。還^Hf了這些化合物可用于治療或預(yù)防與核激素受體家族有關(guān)的疾病。WO92/18483中公開了其中喹淋的苯環(huán)被含硫基團(tuán)取代的多種會(huì)啉衍生物。公開了這些化合物可用于藥物制劑和用作藥物。已經(jīng)公開了喹諾酮和香豆素衍生物在與醫(yī)藥和藥物制劑無關(guān)的多種應(yīng)用中具有用途。描述制備用于可光聚合的組合物或發(fā)光性質(zhì)的喹諾酮衍生物的參考文獻(xiàn)包括Okamoto等人的美國專利5，801,212、JP8-29973、JP7-43896、JP6-9952、JP63-258903、EP797376和DE2363459。近來，參考文獻(xiàn)如WO02/22598和WO2004/043389中已經(jīng)公開了多種被取代的會(huì)啉酮化合物，包括喹啉酮苯并咪唑基化合物和4-氨基取代的會(huì)啉酮苯并咪唑基化合物、例如4-氨基-5-氟-3-[5-(4-甲基p底溱-l-基)-lH-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(lH)-酮。公開了這些化合物可抑制VEGF-RTKs。這些化合物還在^Hf的美國專利申請U.S.2002/0107392和U.S.2003/0028018以及美國專利6，605,617、6，774，237和6，762，194中被公開。近來，WO02/18383、U,S.2002/0103230和美國專利6，756,383中已經(jīng)公開了與苯并咪唑基查啉酮有關(guān)的雜環(huán)化合物。于2003年8月19日提交并且要求以下臨時(shí)申請各自的優(yōu)先權(quán)的WO2004/018419和U.S.2004/0092535中7>開了其它這類化合物以及這類化合物在抑制絲氨^/蘇氨酸激酶和酪氨酸激酶中的新用途于2002年8月23日提交的美國臨時(shí)申請60/405，729、于2002年11月13日提交的美國臨時(shí)申請60/426，107、于2002年11月13日提交的美國臨時(shí)申請60/426，226、于2002年11月13日提交的美國臨時(shí)申請60/426，282、于2002年11月21日提交的美國臨時(shí)申請60/428，210、于2003年4月3日提交的美國臨時(shí)申請60/460,327、于2003年4月3日提交的美國臨時(shí)申請、于2003年4月3日提交的美國臨時(shí)申請60/460，493、于2003年6月16日提交的美國臨時(shí)申請60/478，916和于2003年7月1日提交的美國臨時(shí)申請60/484，048。于2004年11月5日提交的以下專利申請中還公開了其它化合物、它們的合成方法、其乳酸鹽及其用途美國專利申請10/983，174、美國專利申請10/982,757和美國專利申請10/982,5423。本敬中的文件各自整體引入本文作為參考并用于所有目的，如同本文闡述了其全文一樣。近來已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了可用于治療癌癥的多種新化合物。例如，Gkevec⑧(甲磺酸伊馬替尼)是近來在多種不同癌癥中已經(jīng)顯示出顯著活性的化合物。于2001年5月Gleevec首次對慢性髓性白血病(CML)患者而言是可獲得的。根據(jù)Novartis網(wǎng)站，Gleevec被指示可用于治療新診斷的患有慢性期費(fèi)城染色體陽性(Ph+)CML的成人患者。隨訪是有限的。Gleevec還被指示可用于治療在a干擾素治療失敗后的原始細(xì)胞危象期、加速期或慢性期pH+CML患者。Gleevec還被指示可用于治療在干細(xì)胞移植后疾病已經(jīng)復(fù)發(fā)或者對a干擾素治療有抗性的pH+慢性期CML兒科患者。Gleevec已經(jīng)被批準(zhǔn)用于患有其它癌癥如胃腸道間質(zhì)瘤(GIST)的患者。例如，F(xiàn)DA于2002年2月1日批準(zhǔn)了Novartis將Gleevec用于治療患有KIT(CD117)陽性的不能切除和/或轉(zhuǎn)移的惡性GIST的患者。目前正在對在治療癌癥中的效能進(jìn)行測定的其它新的實(shí)驗(yàn)性藥物包括BAY43_9006(索拉非尼(sorafenib))和Brostallicin。美國食品與藥品管理局(FDA)已經(jīng)批準(zhǔn)了BAY43-9006為用于治療腎細(xì)胞癌的罕用藥狀態(tài)。正在對BAY"-9006用于治療轉(zhuǎn)移性腎細(xì)胞癌(腎癌的晚期形式)進(jìn)行評價(jià)。在歐盟，歐洲藥品局(EMEA)罕用藥品委員會(huì)(COMP)已經(jīng)準(zhǔn)許了類似的稱號。BAY43-9006是新的RAF激酶和VEGFR抑制劑，其通過兼有以下兩種抗癌活性而用于預(yù)防腫瘤生長抑制腫瘤細(xì)胞增殖和腫瘤血管發(fā)生。Brostallicin(PNU-166196)是在結(jié)構(gòu)上與偏端霉素A有關(guān)的合成的a-溴代丙烯酸第二代DNA小溝結(jié)合物，其目前在歐洲和美國處于II期試驗(yàn)。與其它小溝結(jié)合物相比，該化合物在臨床前模型中顯示出了廣泛的抗腫瘤活性，并且在體外顯著降低了在人造血祖細(xì)胞中的骨髓毒性。在常規(guī)抗腫瘤劑的細(xì)胞毒性不受影響或^皮降低的條件下，Brostallicin在對美法侖耐藥的L1210鼠白血病細(xì)胞中比在親本品系中顯示的活性高3倍(IC5o分別為0.46和1.45ng/mL)。盡管在開發(fā)治療癌癥的藥物組合物方面已經(jīng)取得了顯著的進(jìn)步，但是仍然需要治療癌癥的新方法。特別需要可用于治療對藥物有抗性的癌癥和患有對藥物有抗性的癌癥的患者的藥物組合物和用于制備藥物組合物的化合物。還需要可以與已知的抗癌劑聯(lián)合施用于患有對藥物有抗性的癌癥的患者的藥物組合物和化合物。發(fā)明概述本發(fā)明提供了治療癌癥的方法、治療對藥物有抗性的癌癥的方法以及用于在受治療者如患有對藥物有抗性的癌癥的那些受治療者中治療癌癥的藥盒和治療組合物。一方面，本發(fā)明提供了治療對藥物有抗性的癌癥的方法。該方法包括給需要其的受治療者施用式I化合物、該化合物的互變異構(gòu)體、該化合物的鹽、互變異構(gòu)體的鹽、其混合物或者包含該化合物、該化合物的互變異構(gòu)體、鹽、互變異構(gòu)體的鹽或其混合物的藥物組合物。在一些實(shí)施方案中，受治療者是患有對藥物有抗性的癌癥的癌癥患者。式I化合物具有下式結(jié)構(gòu)其中r1、r2、r3和r4可以相同或不同并且獨(dú)立地逸自H、Cl、Br、F、I、-or10基團(tuán)、^11111^基團(tuán)、取代或未取代的伯-、仲-或叔-烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的鏈烯基、取代或未取代的炔基、取代或未取代的雜環(huán)基或者取代或未取代的雜環(huán)基烷基；R5、R6、R和RS可以相同或不同并且獨(dú)立地選自H、Cl、Br、F、I、-OR13基團(tuán)、^11141^5基團(tuán)、-sr"基團(tuán)、取代或未取代的伯-、仲-或叔-烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的鏈烯基、取代或未取代的炔基、取代或未取代的雜環(huán)基、取代或未取代的雜環(huán)基烷基、取代或未取代的烷氧基烷基、取代或未取代的芳氧基烷基或者取代或未取代的雜環(huán)基氧基烷基；R"和R"可以相同或不同并且獨(dú)立地選自取代或未取代的烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的雜環(huán)基、取代或未取代的雜環(huán)基烷基、取代或未取代的烷氧基烷基、取代或未取代的芳氧基烷基或者取代或未取代的雜環(huán)基氧基烷基；R"和R"可以相同或不同并且獨(dú)立地選自取代或未取代的烷基、取代或未取代的芳基或者取代或未取代的雜環(huán)基；R"和R"可以相同或不同并且獨(dú)立地選自取代或未取代的烷基、取代或未取代的芳基或者取代或未取代的雜環(huán)基；并且R"選自取代或未取代的烷基、取代或未取代的芳基或者取代或未取代的雜環(huán)基。另一方面，本發(fā)明提供了治療癌癥的方法。該方法包括給需要其的受治療者施用選自曱磺酸伊馬替尼(Gleevec)、BAY43-9006、Brostallicin、來那度胺(Revlimid)、沙利度胺(Thalomid)、多西他賽(Taxotere)、埃羅替尼(erlotinib)(Tarceva)、vatalinib(PTK-787)、VEGF-trap、fenretidine、bortezomib、貝伐單抗(Avastin)、pertuzumab和/或利妥昔單抗的抗癌藥以及式I化合物、該化合物的互變異構(gòu)體、該化合物的鹽、互變異構(gòu)體的鹽、其混合物或者包含該化合物、該化合物的互變異構(gòu)體、鹽、互變異構(gòu)體的鹽或其混合物的藥物組合物。式I化合物具有上述的結(jié)構(gòu)和變量。另一方面，本發(fā)明提供了藥盒和治療組合物。藥盒和治療組合物包括抗癌藥和式I化合物、該化合物的互變異構(gòu)體、該化合物的鹽、互變異構(gòu)體的鹽或其混合物。治療組合物包括作為組合制劑用于同時(shí)、分別或依次使用來治療患有對藥物有抗性的癌癥的受治療者的抗癌藥和式I化合物、該化合物的互變異構(gòu)體、該化合物的鹽、互變異構(gòu)體的鹽或其混合物。式I化合物具有上述的結(jié)構(gòu)和變量。另一方面，本發(fā)明提供了在受治療者中抑制激酶的方法。該方法包括給需要其的受治療者施用式I化合物、該化合物的互變異構(gòu)體、該化合物的鹽、互變異構(gòu)體的鹽、其混合物或者包含該化合物、該化合物的互變異構(gòu)體、鹽、互變異構(gòu)體的鹽或其混合物的藥物組合物。式I化合物具有上迷的結(jié)構(gòu)和變量，受治療者是癌癥患者，并且激酶包含突變的看門殘基(gatekeeperresidue)。本發(fā)明的另外的目的、特征和優(yōu)點(diǎn)從以下詳述中將是顯而易見的。附圖簡述圖l是顯示SCID-beige小鼠在靜脈內(nèi)注射KMS-ll-luc細(xì)胞后采用IVIS顯像系統(tǒng)(Xenogen)得到的全身生物發(fā)光成像(BLI)的掃描圖。圖2顯示，用10\18-11-111"田胞注射并用4國氨基-5畫氟-3-16-(4-甲基口泉溱-1-基)-lH-苯并咪唑-2-基j喹啉-2(lH)-酮(20mg/kg/日)處置的SCID-BEIGE小鼠顯示出的平均光子計(jì)數(shù)顯著低于用載體處置的那些。圖3是SCID-beige小鼠在靜脈內(nèi)注射KMS-ll-luc細(xì)胞后采用IVIS顯像系統(tǒng)(Xenogen)得到的全身BLI的掃描圖。左側(cè)的BLI是用栽體處置的小鼠的81^1,右側(cè)的81^是用4-氨基畫5國氟-3-[6-(4畫甲基哌"秦國1-基)國111國苯并咪唑-2-基]會(huì)啉-2(lH)-酮(化合物，20mg/kg/日)處置的小鼠的BLI。圖4比較了靜脈內(nèi)注射KMS-ll-luc細(xì)胞、然后用載體(菱形)或用4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-111-苯并咪唑-2-基喹啉-2(111)-酮(三角形，20mg/kg/日)處置的SCID-beige小鼠的存活百分率。圖5-7表明4-氨基-5-氟-3-[6-(4-曱基哌溱-l-基)-lH-苯并咪唑-2-基l喹啉-2(1H)-酮(化合物1)調(diào)節(jié)FLT3靶標(biāo)表達(dá)，并證明了對抗MV4;11和RS4;11細(xì)胞的抗增殖作用。在圖5中，將MV4;11(A)或RS4;11(在FLT3配體的存在下)⑨)與化合物1的系列稀釋液孵育。在72小時(shí)孵育期后，通過MTS測定法測定了細(xì)胞成活力。使用非線性回歸計(jì)算了ECso值。將血清饑餓的MV4;11(ITD)(在圖6中)或RS^11(WT)(在圖7中)細(xì)胞與濃度增加的化合物1孵育3小時(shí)，然后將細(xì)胞溶解。如所示的那樣，將RS4;11細(xì)胞用FLT3配體(100ng/ml)刺激15分鐘。將全細(xì)胞溶解產(chǎn)物用抗人FLT3抗體進(jìn)行免疫沉淀，通過SDS-PAGE進(jìn)行解析。用抗磷酸酪氨酸抗體探測了免疫印跡(上泳道)。脫去膜，用抗FLT3再次進(jìn)行了探測，以證明FLT3的裝載相同(下泳道)。使用密度測定法將pFLT3的變化報(bào)告為基線(未經(jīng)處置)的百分?jǐn)?shù)。圖8和9表明，4-氨基-5_氟-3-[6_(4-甲基哌"泰-l-基)-lH-苯并咪唑-:2-基]喹啉-2(lH)-酮(化合物l)劑量依賴性地抑制MV4;11細(xì)胞中FLT3介導(dǎo)的ERK和STAT5磷酸化。將MV4;11細(xì)胞(血清饑餓的)與多種濃度的化合物l孵育3小時(shí)，通過蛋白質(zhì)印跡法檢測了細(xì)胞內(nèi)的pERK(圖8)，使用流式細(xì)胞儀測定了pSTAT5(圖9)。使用密度測定法將pERK或pSTAT5的變化報(bào)告為基線(未經(jīng)處置)的百分?jǐn)?shù)。圖IO表明，4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌"秦-l-基)-lH-苯并咪唑-2-基會(huì)啉在含有10%FBS的培養(yǎng)基中培養(yǎng)的MV4;11AML細(xì)胞在使用或不使用0.001、0.01、0.1、0.5和lpM化合物l的情況下孵育48小時(shí)。分析上層液的人VEGF水平(針對細(xì)胞蛋白含量進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化)。圖ll表明，4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌溱-l-基)-lH-苯并咪唑-2-基查啉-2(111)-酮(化合物1)在8(:10^00小鼠中抑制腫瘤異種移植物中？1^3和STAT5的磷酸化。將皮下帶有MV4;ll腫瘤(300mm3;11=3只小鼠/組)的SCID-NOD小鼠用載體或10mg/kg化合物l處置5天。在第5天于給藥后4、8、24和48小時(shí)將腫瘤切除，粉碎，立即快速冷凍(-70。C)。對于pFLT3或pSTAT5調(diào)節(jié)將肺瘤溶解產(chǎn)物用抗人FLT3或抗STAT5抗體進(jìn)行了免疫沉淀，通過SDS-PAGE進(jìn)行解析。用適宜的抗磷酸酪氨酸抗體探測免疫印跡(上泳道)。脫去膜，用抗FLT3或抗STAT5再次進(jìn)行纟果測，以測定作為裝載對照的總FLT3或STAT5蛋白(下泳道)。各泳道代表單獨(dú)的腫瘤。圖12-16表明了4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌喚-l-基)-lH-苯并咪唑-2-基l喹啉-2(lH)-酮(化合物l)在SCID-NOD小鼠中在人MV4;ll或RS4;ll白血病腫瘤的皮下異種移植物模型中的抗腫瘤活性。將(圖12)MV^11或(圖13)RS^ll細(xì)胞皮下植入到SCID-NOD小鼠(n-10只小鼠/組)的右脅腹中。在MV4;11研究中，當(dāng)腫瘤為300mm3時(shí)，口服施用載體(O)或以l(參)、5(A)或30(B)mg/kg/日的劑量口服施用化合物l，共計(jì)15天。在RS4;11研究中，當(dāng)腫瘤為300mm3時(shí)，口服施用載體(O)或以10(A)、30(畫)、IOO(令)或150一)mg/kg/日的劑量口服施用化合物l，共計(jì)8天。(圖14)化合物1的每天、間斷和周期性給藥方案對MV4;11腫瘤的效能的影響。以30mg/kg的劑量每天(隱)、隔日/q.o.d.("或周期性進(jìn)行7天給藥/7天停藥(X)口服施用化合物l。(圖15)化合物1引起大MV4;11腫瘤消退。MV4;ll皮下肺瘤(i^l0只小鼠/組)在300(A)、500(—或1000("mmS進(jìn)行分類。測得用載體("處置的腫瘤的最大腫瘤體積為2000mm3(在圖16中僅顯示至1000mm3)。以30mg/kg/日的劑量口服施用化合物l(第一個(gè)周期)。50天后停止給藥，此后監(jiān)測響應(yīng)的耐久性。(圖16)將用30mg/kg/日x50天預(yù)處置后復(fù)發(fā)的MV4;ll肺瘤用30mg/kg/曰的劑量再次進(jìn)行處置(第二個(gè)周期)。AD組，數(shù)據(jù)被表示為平均腫瘤體積士SE(11=10只小鼠/組)，E組說明了各小鼠的肺瘤體積(11=10)。圖17-19表明了在用30mg/kg4-氨基-5-氟-3-6-(4-甲基哌噪-l-基)-lH-苯并咪唑-2_基]喹啉-2(111)-酮(化合物1)處置的SCID-NOD小鼠中MV4;11或RS4;ll腫瘤的肺瘤細(xì)胞凋亡/壞死和其細(xì)胞增殖的抑制。(圖17)早期的MV4;ll腫瘤對30mg/kg化合物l處置有響應(yīng)。將皮下帶有MV4;11腫瘤的SCID-NOD小鼠(n-3-5只/組)用載體(a-e)或30mg/kg/日的化合物l(f-j)處置5天。在第2-5天將腫瘤切除。將石蠟包埋的腫瘤用蘇木精和伊紅(a，f-第l天)染色或者用Ki67(b，g-第5天)、pERK(c,h第5天)、被切割的胱天蛋白酶-3(d，i-第5天)或PARP(e,j-第5天)(含蘇木精復(fù)染劑)進(jìn)行免疫染色。圖17說明了來自11=3個(gè)經(jīng)處置腫瘤各自的代表性切片。(圖18)用30mg/kg化合物l處置后的RS4;11腫瘤的免疫組織化學(xué)。將RS4;ll腫瘤(n-3-5只/組)用載體(a-c)或30mg/kg/日的化合物l(d-f)處置。在第9天將腫瘤切除。將石蠟包埋的肺瘤用蘇木精和4尹紅(a,d)染色或者用Ki67(b，e)或pERK(c，f)進(jìn)行免疫染色。圖18說明了來自11=3個(gè)經(jīng)處置腫瘤各自的代表性切片。(圖19)將皮下帶有MV4;ll胂瘤的SCID-NOD小鼠(n-3-5只/組)用載體或30mg/kg/日的化合物l處置。在第15天^1夸用載體處置的腫瘤切除，在第89天將用化合物1處置的腫瘤切除(50天給予日劑量的化合物l+39天不進(jìn)行處置)。將石蠟包埋的腫瘤用蘇木精和伊紅染色或者用Ki67(含蘇木精復(fù)染劑)進(jìn)行免疫染色。(a)載體(H&E,第15天)；(b)載體(Ki67，第15天)；(c)化合物l，部分響應(yīng)(H&E，第89天)；(d)化合物l，部分響應(yīng)(Ki67,第M天)和(e)化合物l，完全響應(yīng)(H&E,第89天)。c、d中的箭頭指向分散在壞死/瘢痕組織中的活細(xì)胞區(qū)域。圖19說明了來自n-3-5個(gè)經(jīng)處置腫瘤的代表性切片。所采用的圖像的放大倍數(shù)#_標(biāo)明在圖上。圖加和!21表明，4-絲-5國氟-3-[6-(4畫甲基哌漆-1-基)-111-苯并咪唑國2-基]喹啉-2(lH)-酮(化合物l)可延長帶有靜脈內(nèi)MV4;ll細(xì)胞的SCID-NOD小鼠的存活。將MV4;11(lxl(^個(gè)細(xì)胞，靜脈內(nèi))靜脈內(nèi)植入到受照射的SCID-NOD小鼠中。在第23天開始處置，包括從第23-98天口服栽體0)或者每天(A)或按照預(yù)定的7天給藥〃天停藥(B)給予Mmg/kg的化合物l。將產(chǎn)生后肢麻痹或健康狀況差的早期體征的小鼠處以安樂死。圖20說明了Kaplan-Meier存活百分率對時(shí)間的圖(11=10-12只小鼠/組)。(圖21)靜脈內(nèi)接種MV4;11細(xì)胞后BM的流式細(xì)胞評價(jià)或組織病理學(xué)評價(jià)。處置包括載體(a-c)或20mg/kg/日的化合物l(d-f;第23-98天)。在第51天(a-d)或第167天(e，f)收集股骨，分離BM，使用流式細(xì)胞儀分析人MV4;ll細(xì)胞。/i(a，d)。將BM細(xì)胞用抗人HLAA、B，C-FITC(將人MHC-I上的表位染色，實(shí)線)或同型-對照抗體(虛線)染色。進(jìn)行適宜的門控(gating)和抗人HLA-A，B，C(標(biāo)記)正染色后，鑒別了植入細(xì)胞百分率。將用載體處置(第51天)或化合物1處置(第167天)的小鼠的BM標(biāo)本用H&E(b，e)進(jìn)^f亍組織化學(xué)染色，或者用可將小鼠BM中人MV4;ll細(xì)胞染色的抗人線粒體抗體(c，f)進(jìn)行免疫染色。放大倍數(shù)為400x;箭頭指向被鑒別的MV4;ll細(xì)胞(b，e)。圖22顯示了本發(fā)明的化合物是如何選擇性地抑制III、IV和V類受體酪氨酸激酶的(還參見4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌，秦-l-基)-lH-苯并咪唑-2-基J喹啉-2(1H)-酮對抗多種RTKs的活性的表)。圖23a和23b是將腫瘤體積作為用載體和用4-氨基-5-氟-3-[6-(4-曱基派嗪-l-基)-lH-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(lH)-酮處置的天數(shù)的函數(shù)而制得的圖。這些圖表明，用化合物1進(jìn)行的處置可在90-100%具有大的已確定的結(jié)腸異種移植物的動(dòng)物中引起消退和/或疾病穂、定(當(dāng)腫瘤達(dá)到500mm3(23a)或lOOOmm3(23b)時(shí)，每天用化合物l對棵小鼠中的KM12L4A人結(jié)腸腫瘤異種移植物進(jìn)行給藥)。圖24是用化合物1(CHIR258)處置的患有對伊馬替尼有抗性的GIST的人類女性患者的掃描PET-CT圖。圖25a和25b是平均Cmax(ng/mL)對劑量和平均AUC(0,t最后(ngl/mL))的圖，這些圖表明，當(dāng)施用化合物l時(shí)，血漿暴露(plasmaexposure)按比例增力口。圖26是蛋白質(zhì)印跡的掃描圖，該圖表明，4-氨基-5-氟-3-[6-(4-曱基哌溱-1-基)-111-苯并咪唑-2-基喹啉-2(111)-酮可抑制外周血白細(xì)胞(PBL)中的基礎(chǔ)ERK磷酸化。陽性對照樣品是來自正常供體的血細(xì)胞，處置與臨床樣品相同。發(fā)明詳述本發(fā)明提供了治療癌癥的方法、治療對藥物有抗性的癌癥的方法以及用于在受治療者如患有對藥物有抗性的癌癥的那些受治療者中治療癌癥的藥盒和治療組合物。這些化合物可用作受體酪氨酸激酶的拮抗劑，更特別地，可用作PDGFR(x和PDGFRIi、bFGF和/或VEGF-RTK功能的抑制劑。這些化合物還對其它酪氨酸激酶以及多種絲氨酸/蘇氨酸激酶具有有效的活性。本文提供的化合物可以被配制成可用于例如如下用途的藥物制劑治療需要VEGF-RTK抑制劑的患者，尤其是用于減少毛細(xì)血管增殖的組合物和方法，以及治療癌癥、特別是對藥物有抗性的癌癥。在本申請通篇使用了以下縮寫和定義"AML，，是代表急性髓性白血病的縮寫。"ALS"是代表肌萎縮性側(cè)索硬化的縮寫。"AD"是代表阿爾茨海默病的縮寫。"APF，是代表淀粉樣前體蛋白的縮寫。"ASCT，，是代表自體干細(xì)胞移植的縮寫。"BM，，是代表骨髄的縮寫。"bFGF，，是代表堿性成纖維細(xì)胞生長因子的縮寫。"FGFR1",還稱為bFGFR，是代表與成纖維細(xì)胞生長因子FGF相互作用的酪氨酸激酶的縮寫。"Cdc2"是代表細(xì)胞分裂周期2的縮寫。"Cdk2"是4、表細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶2的縮寫。Cdk4"是代表細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶4的縮寫。Chkl"是代表限制點(diǎn)激酶l(checkpointkinasel)的縮寫。CKle"是代表酪蛋白激酶l(s)的絲氨^/蘇氨酸激酶。c-ABL，，是代表最初從埃布爾森(Abelson)白血病病毒中分離的癌基因"C-Kit"還稱為干細(xì)胞因子受體或肥大細(xì)胞生長因子受體。"FGF，是代表與FGFR1相互作用的成纖維細(xì)胞生長因子的縮寫。"FGFR3"是代表通常在多發(fā)性骨髓瘤型癌癥中表達(dá)的酪氨酸激酶成纖維細(xì)胞生長因子受體3的縮寫。"Flk-l"是代表胎兒肝臟酪氨酸激酶l的縮寫，其還稱為激酶-嵌入結(jié)構(gòu)域酪氨酸激酶或KDR(人)，還稱為血管內(nèi)皮生長因子受體-2或VEGFR2(KDR(人)，F(xiàn)lk-l(小鼠))。"FLT-l，，是代表fms樣酪氨酸激酶-l的縮寫，其還稱為血管內(nèi)皮生長因子受體-l或VEGFRl。"FLT-3"是代表fms樣酪氨酸激酶-3的縮寫，其還稱為干細(xì)胞酪氨酸激酶I(STK1)。"FLT-4"是代表fms樣酪氨酸激酶-4的縮寫，其還稱為VEGFR3。"Fyn，，是代表與SRC、FGR、YES有關(guān)的FYN癌基因激酶的縮寫。"GSK-3"是代表糖原合成酶激酶3的縮寫。"PAR-l，，是代表還稱為散亂聯(lián)合激酶(disheveledassociatedkinase)的激酶的縮寫，其還稱為HDAK。"Lck"是代表淋巴細(xì)胞特異性蛋白酪氨酸激酶的縮寫。"MEKl，，是代表在由Raf-MEKl-ERK組成的組件中、在MAPK(促分裂原活化蛋白激酶)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中的絲氨酸蘇氨酸激酶的縮寫。MEK1可使ERK(細(xì)胞外調(diào)節(jié)激酶)磷酸化。"MM"是代表多發(fā)性骨髓瘤的縮寫。"NEK-2"是代表NIM-A相關(guān)性激酶的縮寫。"NIM-A"是代表有絲分裂中的never的縮寫。"PDGF，，是代表血小板衍生生長因子的縮寫。PDGF可與酪氨酸激酶PDGFRa和PDGFRp相互作用。"Rsk2"是代表核糖體S6激酶2的縮寫。"Raf，是MAPK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中的絲氨l蘇氨酸激酶。"RTK，，是代表受體酪氨酸激酶的縮寫。"Tie-2"是代表具有Ig和EGF同源結(jié)構(gòu)域的酪氨酸激酶的縮寫。"VEGF"是代表血管內(nèi)皮生長因子的縮寫。"VEGF-RTK，，是代表血管內(nèi)皮生長因子受體酪氨酸激酶的縮寫。通常，某種元素如氫或H的稱謂意欲包括該元素的所有同位素。例如，如果R基團(tuán)被定義為包括氫或H,則其還包括氖和氮。短語"未取代的烷基"指不含雜原子的烷基。因此，該短語包括直鏈烷基，例如甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、庚基、辛基、壬基、癸基、十一烷基、十二烷基等。該短語還包括直鏈烷基的支鏈異構(gòu)體，包括但不限于以舉例方式提供的以下基團(tuán)-CH(CH3)2、-CH(CH3)(CH2CH3)、-CH(CH2CH3)2、-C(CH如-C(CH2CH3)3、-CH2CH(CH3)2、-CH2CH(CH3)(CH2CH3)、-CH2CH(CH2CH3)2、-CH2C(CH3)3、-CH2C(CH2CH3)3、-CH(CH3)CH(CH3)(CH2CH3)、CH2CH2CH(CH3)2、-CH2CH2CH(CH3)(CH2CH3)、-CH2CH2CH(CH2CH3)2、-CH2CH2C(CH3)3、-CH2CH2C(CH2CH3)3、CH(CH3)CH2CH(CH3)2、-CH(CH3)CH(CH3)CH(CH3)2、CH(CH2CH3)CH(CH3)CH(CH3)(CH2CH;3)及其它。該短語還包括環(huán)狀烷基，例如環(huán)烷基，如環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán)庚基和環(huán)辛基，并且這些環(huán)可被如上定義的直鏈和支鏈烷基取代。該短語還包括多環(huán)烷基，例如但不限于金剛烷基、降水片基(norbornyl)和二環(huán)[2.2.21辛基，并且這些環(huán)可被如上定義的直鏈和支鏈烷基取代。因此，短語未取代的烷基包括伯烷基、仲烷基和叔烷基。未取代的烷基可以與母體化合物中的一個(gè)或多個(gè)碳原子、氧原子、氮原子和/或硫原子鍵合。優(yōu)選的未取代的烷基包括具有1至20個(gè)碳原子的直鏈和支鏈烷基以及環(huán)狀烷基。更優(yōu)選的這類未取代的烷基具有1至10個(gè)碳原子，而甚至更優(yōu)選的這類基團(tuán)具有1至5個(gè)碳原子。最優(yōu)選的未取代的烷基包括具有1至4個(gè)或1至3個(gè)碳原子的直鏈和支鏈烷基，并且包括甲基、乙基、丙基和-CH(CH3)2。短語"取代的烷基"指其中一條或多條與碳或氫連接的鍵被與非氫和非碳原子連接的鍵所替換的如上定義的未取代的烷基，所述的非氫和非碳原子例如但不限于卣化物中的離素原子，如F、Cl、Br和I;基團(tuán)如羥基、烷氧基、芳氧基和酯基團(tuán)中的氧原子；基團(tuán)如巰基、烷基和芳基疏醚基、磺基、磺?；蛠嗧炕械牧蛟樱换鶊F(tuán)如胺、酰胺、烷基胺、二烷基胺、芳基胺、烷基芳基胺、二芳基胺、N-氧化物、二酰亞胺和烯胺中的氮原子；基團(tuán)如三烷基甲硅烷基、二烷基芳基甲硅烷基、烷基二芳基曱珪烷基和三芳基曱硅烷基中的硅原子；以及多種其它基團(tuán)中的其它雜原子。取代的烷基還包括其中一條或多條與碳或氫原子連接的鍵被與雜原子連接的鍵所替換的基團(tuán)，所述的雜原子例如有羰基、氛基、和酯基中的氧；基團(tuán)如亞胺、肟、腙和腈中的氮。除了其它之外，優(yōu)選的取代的烷基包括其中一條或多條與碳或氫原子連接的鍵被一條或多條與氟原子連接的鍵所替換的烷基。取代的烷基的一個(gè)實(shí)例是三氟甲基和含有三氟甲基的其它烷基。其它烷基包括其中一條或多條與碳或氫原子連接的鍵被與氧原子連接的鍵所替換的那些，由此取代的烷基含有羥基、烷氧基、芳氧基或雜環(huán)基氧基。其它烷基還包括具有胺基、烷基胺基、二烷基胺基、芳基胺基、(烷基)(芳基)胺基、二芳基胺基、雜環(huán)基胺基、(烷基)(雜環(huán)基)胺基、(芳基)(雜環(huán)基)胺基或二雜環(huán)基胺基的烷基。短語"未取代的芳基"指不含雜原子的芳基。因此，通過舉例的方式，該短語包括但不限于諸如苯基、聯(lián)苯基、蒽基和萘基的基團(tuán)。盡管短語"未取代的芳基，，包括含有稠環(huán)的基團(tuán)如萘，但是其不包括具有與環(huán)成員之一鍵合的其它基團(tuán)、例如烷基或鹵代基的芳基，因?yàn)橹T如曱苯基的芳基在本文中被認(rèn)為是如下所述的取代的芳基。優(yōu)選的未取代的芳基是苯基。在一些實(shí)施方案中，未取代的芳基具有6至14個(gè)碳原子。未取代的芳基可以與母體化合物中的一個(gè)或多個(gè)^p灰原子、氧原子、氮原子和/或^l原子鍵合。短語"取代的芳基"相對于未取代的芳基所具有的含義與取代的烷勤目對于未取代的烷基所具有的含義相同。但是，取代的芳基還包括其中芳香碳之一與上述的非碳或非氫原子之一鍵合的芳基，并且還包括其中芳基的一個(gè)或多個(gè)芳香碳與如本文定義的取代或未取代的烷基、鏈烯基或炔基鍵合的芳基。這包括其中芳基的兩個(gè)碳原子與烷基、鏈烯基或炔基的兩個(gè)原子鍵合以限定稠環(huán)系統(tǒng)(例如二氫萘基或四氫萘基)的成鍵排列。因此，短語"取代的芳基"包括但不限于例如曱苯基和羥基苯基等等的基團(tuán)。短語"未取代的鏈烯基，，指直鏈和支鏈以及環(huán)狀基團(tuán)，例如對于如上定義的未取代的烷基所述的那些，除了在兩個(gè)碳原子之間存在至少一條雙鍵。實(shí)例包括但不限于乙烯基、-CH=C(H)(CH3)、-CH=C(CH3)2、-C(CH3)=C(H)2、-C(CH3)=C(H)(CH3)、-C(CH2CH3)=CH2、環(huán)己烯基、環(huán)戊烯基、環(huán)己二烯基、丁二烯基、戊二烯基和己二烯基等等。在一些實(shí)施方案中，未取代的鏈烯基具有2至8個(gè)碳原子。短語"取代的鏈烯基"相對于未取代的鏈烯基所具有的含義與取代的烷基相對于未取代的烷基所具有的含義相同。取代的鏈烯基包括其中非碳或非氫原子與和另一個(gè)碳雙鍵鍵合的碳所鍵合的鏈烯基以及其中非碳或非氬原子之一與不參與和另一個(gè)碳連接的雙鍵的碳所鍵合的那些。短語"未取代的炔基"指直鏈和支鏈基團(tuán)，例如對于如上定義的未取代的烷基所述的那些，除了在兩個(gè)碳原子之間存在至少一條三鍵。實(shí)例包括但不限于-OC(H)、-OC(CH3)、-OC(CH2CH3)、-C(H2)C=C(H)、-C(H)20C(CH3)和-C(H)20C(CH2CH3)等等。在一些實(shí)施方案中，未取代的炔基具有2至8個(gè)碳原子。短語"取代的炔基"相對于未取代的炔基所具有的含義與取代的烷基相對于未取代的烷基所具有的含義相同。取代的炔基包括其中非碳或非氬原子與和另一個(gè)碳三鍵鍵合的碳所鍵合的炔基以及其中非碳或非氬原子與不參與和另一個(gè)碳連接的三鍵的碳所鍵合的那些。短語"未取代的雜環(huán)基"既指芳香族又指非芳香族環(huán)化合物，包括含有3個(gè)或更多個(gè)環(huán)成員的單環(huán)、二環(huán)和多環(huán)化合物，其中一個(gè)或多個(gè)環(huán)成員是雜原子、例如但不限于N、O和S，例如但不限于奎寧環(huán)基(quinuclidyl)。盡管短語"未取代的雜環(huán)基"包括稠合雜環(huán)、例如苯并咪唑基，但是其不包括具有與環(huán)成員之一鍵合的其它基團(tuán)、例如烷基或卣代基的雜環(huán)基，因?yàn)橹T如2-曱基苯并咪唑基的化合物是取代的雜環(huán)基。雜環(huán)基的實(shí)例包括但不限于含有1至4個(gè)氮原子的不飽和3至8元環(huán)，例如但不限于吡咯基、吡咯啉基、咪唑基、吡唑基、吡咬基、二氬他咬基、嘧咬基、吡療基、峻溱基、三唑基(例如4H-l,2，4-三喳基、1H-l，2，3-三唑基、2H-l，2，3-三唑基等)、四峻基(例如lH-四唑基、2H四唑基等)；含有1至4個(gè)氮原子的飽和3至8元環(huán)，例如但不限于吡咯烷基、咪唑烷基、哌咬基、p/艮溱基；含有1至4個(gè)氮原子的稠合不飽和雜環(huán)基團(tuán)，例如但不限于吲咮基、異吲咮基、二氫吲咮基、丐l"秦基、苯并咪唑基、喹啉基、異會(huì)啉基、吲唑基、苯并三唑基；含有1至2個(gè)氧原子和1至3個(gè)氮原子的不飽和3至8元環(huán)，例如但不限于嚅唑基、異嗜唑基、P惡二唑基(例如l，2,4-嚅二唑基、1，3，4-喵二唑基、1，2，5-哺二唑基等)；含有1至2個(gè)氧原子和1至3個(gè)氮原子的飽和3至8元環(huán)，例如但不限于嗎啉基；含有1至2個(gè)氧原子和1至3個(gè)氮原子的不飽和稠合雜環(huán)基團(tuán)，例如苯并嗜唑基、苯并^二唑基、苯并嗜、嗪基(例如2H-l，4-苯并嚅溱基等)；含有1至3個(gè)疏原子和1至3個(gè)氮原子的不飽和3至8元環(huán)，例如但不限于瘞唑基、異塞唑基、噢二唑基(例如l，2，3-瘞二唑基、1，2，4-蓉二哇基、1,3,4-蓬二哇基、1，2，5國塞二唑基等)；含有1至2個(gè)硫原子和1至3個(gè)氮原子的飽和3至8元環(huán)，例如但不限于thiazolodinyl;含有1至2個(gè)石充原子的飽和和不飽和3至8元環(huán)，例如但不限于漆汾基、dihydrodithiinyl(二氬二硫雜環(huán)己二烯基)、dihydrodithionyl、四氫漆吩、四氫瘞喃；含有l(wèi)至2個(gè)硫原子和l至3個(gè)氮原子的不飽和稠合雜環(huán)，例如但不限于苯并漆唑基、苯并塞二唑基、苯并塞漆基(例如2H-1，4-苯并噻"秦基等)、二氫苯并瘞"秦基(例如2H-3，4-二氫苯并噻嗪基等)；含有氧原子的不飽和3至8元環(huán)，例如但不限于呋喃基；含有1至2個(gè)氧原子的不飽和稠合雜環(huán)，例如苯并二氧雜環(huán)戊烯基(例如l，3-苯并二氧雜環(huán)戊烯基等)；含有氧原子和1至2個(gè)石充原子的不飽和3至8元環(huán)，例如但不限于dihydrooxathiinyl(二氫氧雜硫雜環(huán)己二烯基)；含有1至2個(gè)氧原子和1至2個(gè)硫原子的飽和3至8元環(huán)，例如l,4-氧硫雜環(huán)己烷；含有1至2個(gè)疏原子的不飽和稠環(huán)，例如苯并蓉喻基、benzodithiinyl(苯并二硫雜環(huán)己二烯基)；以及含有氧原子和1至2個(gè)氧原子的不飽和稠合雜環(huán)，例如benzoxathiinyl(苯并氧雜;5泉雜環(huán)己二烯基)。雜環(huán)基還包括其中環(huán)中一個(gè)或多個(gè)S原子與一個(gè)或兩個(gè)氧原子雙鍵鍵合的上述的那些(亞砜和砜)。例如，雜環(huán)基包括四氬瘞呤氧化物和四氫噻吩l，l-二氧化物。優(yōu)選的雜環(huán)基含有5或6個(gè)環(huán)成員。更優(yōu)選的雜環(huán)基包括嗎啉、p底，秦、派咬、吡咯烷、咪唑、吡哇、1，2，3-三哇、1，2，4-三唑、四唑、噻吩、硫嗎淋、其中硫嗎啉的S原子與一個(gè)或多個(gè)O原子鍵合的疏嗎啉、吡咯、高派嗪、，惡峻烷-2-酮、吡咯烷-2-酮、嚅唑、奎寧環(huán)、噻唑、異喝唑、呋喃和四氬吹喃。短語"取代的雜環(huán)基"指其中一個(gè)或多個(gè)環(huán)成員與非氫原子^^合的如上定義的未取代的雜環(huán)基，所述的非氫原子例如以上對取代的烷基和取代的芳基中所述。實(shí)例包括但不限于2-曱基苯并咪唑基、5-曱基苯并咪唑基、5-氯苯并噻唑基、N-烷基p底噪基如l-甲基哌溱基、p底溱-N-氧化物、N-烷基哌"秦N-氧化物、2-苯氧基-噻吩和2-氯吡咬基等等。此外，取代的雜環(huán)基還包括其中與非氫原子連接的鍵是與碳原子連接的鍵的雜環(huán)基，所述的碳原子是取代和未取代的芳基、取代和未取代的芳烷基或未取代的雜環(huán)基的一部分。實(shí)例包括但不限于l-爺基哌淀基、3-苯基硫代嗎啉基、3-(吡咯烷-1-基)-吡咯烷基和4-(哌咬-l-基)-哌咬基。諸如N-烷基取代的哌，秦基團(tuán)如N-甲基哌溱、取代的嗎啉基團(tuán)以及派溱N-氧化物基團(tuán)如p底溱N-氧化物和N-烷基哌溱N-氧化物的基團(tuán)是一些取代的雜環(huán)基的實(shí)例。諸如取代的哌溱基團(tuán)、例如N-烷基取代的p底溱基團(tuán)如N-甲基哌溱等、取代的嗎啉基團(tuán)、哌嗪N-氧化物基團(tuán)和N-烷基p/艮，秦N-氧化物基團(tuán)的基團(tuán)是尤其適合作為議6或117基團(tuán)的一些取代的雜環(huán)基的實(shí)例。短語"未取代的雜環(huán)基烷基"指其中未取代烷基的與氫連接的鍵或與碳連接的鍵被與如上定義的雜環(huán)基連接的鍵所替換的如上定義的未取代的烷基。例如，曱基(-CH3)是未取代的烷基。如果甲基的氫原子被與雜環(huán)基連接的鍵所替換，例如如果曱基的碳與吡啶的碳2(與吡啶的N鍵合的碳之一)或者與吡啶的碳3或4鍵合，則該化合物是未取代的雜環(huán)基烷基。短語"取代的雜環(huán)基烷基"相對于未取代的雜環(huán)基烷基所具有的含義與取代的芳烷基相對于未取代的芳烷基所具有的含義相同。但是，取代的雜環(huán)基烷基還包括其中非氫原子與雜環(huán)基烷基的雜環(huán)基中的雜原子鍵合的基團(tuán)，所述的雜原子例如但不限于派"定基烷基的哌。定環(huán)中的氮原子。此外，取代的雜環(huán)基烷基還包括其中該基團(tuán)的烷基部分的與碳連接的鍵或與氬連接的鍵被與取代和未取代的芳基或取代和未取代的芳烷基連接的鍵所替換的基團(tuán)。實(shí)例包括但不限于苯基-(派咬-l-基)-甲基和苯基-(嗎啉-4-基)-曱基。短語"未取代的烷氧基"指其中與氳原子連接的鍵^L與另外如上定義的未取代的烷基的碳原子連接的鍵所替換的羥基(-OH)。短語"取代的烷氧基"指其中與氫原子連接的鍵被與另外如上定義的取代的烷基的碳原子連接的鍵所替換的羥基(-OH)。短語"未取代的雜環(huán)基氧基"指其中與氫原子連接的鍵被與另外如上定義的未取代的雜環(huán)基的環(huán)原子連接的鍵所替換的羥基(-OH)。短語"取代的雜環(huán)基氧基"指其中與氫原子連接的鍵被與另外如上定義的取代的雜環(huán)基的環(huán)原子連接的鍵所替換的羥基(-OH)。短語"未取代的芳氧基烷基"指其中與碳連接的鍵或與氫連接的鍵被與氧原子(與如上定義的未取代的芳基鍵合)連接的鍵所替換的如上定義的未取代的烷基。短語"取代的芳氧基烷基"指這樣的如上定義的未取代的芳氧基烷基其中與芳氧基烷基的烷基的碳或氬基團(tuán)連接的鍵與如上對于取代的烷基所述的非碳和非氫原子鍵合，或者其中芳氧基烷基的芳基是如上定義的取代的芳基。短語"未取代的雜環(huán)基氧基烷基"指其中與碳連接的鍵或與氫連接的鍵被與氧原子(與如上定義的未取代的雜環(huán)基鍵合)連接的鍵所替換的如上定義的未取代的烷基。短語"取代的雜環(huán)基氧基烷基"指這樣的如上定義的未取代的雜環(huán)基氧基烷基其中與雜環(huán)基氧基烷基的烷基的碳或氫基團(tuán)連接的鍵與如上對于取代的烷基所述的非碳和非氫原子鍵合，或者其中雜環(huán)基氧基烷基的雜環(huán)基是如上定義的取代的雜環(huán)基。短語"未取代的雜環(huán)基烷氧基"指這樣的如上定義的未取代的烷基其中與碳連接的鍵或與氫連接的鍵被與氧原子(其與母體化合物鍵合)連接的鍵所替換以及其中未取代的烷基的另一條與碳連接的鍵或與氫連接的鍵與如上定義的未取代的雜環(huán)基鍵合。短語"取代的雜環(huán)基烷氧基"指這樣的如上定義的未取代的雜環(huán)基烷氧基其中與雜環(huán)基烷氧基的烷基的碳或氫基團(tuán)連接的鍵與如上對于取代的烷基所述的非碳和非氫原子鍵合，或者其中雜環(huán)基烷氧基的雜環(huán)基是如上定義的取代的雜環(huán)基。此外，取代的雜環(huán)基烷氧基還包括其中與該基團(tuán)的烷基部分連接的碳鍵或氫鍵(即與氫連接的鍵)可以被一個(gè)或多個(gè)另外的取代和未取代的雜環(huán)所取代的基團(tuán)。實(shí)例包括但不限于吡啶-2-基嗎啉-4-基甲基和2-吡啶-3-基-2-嗎啉-4-基乙基。短語"未取代的烷氧基烷基，，指其中與碳連接的鍵或與氫連接的鍵被與氧原子(其與如上定義的未取代的烷基鍵合)連接的鍵所替換的如上定義的未取代的烷基。短語"取代的烷氧基垸基"指其中與烷氧基烷基的烷基和/或烷氧基的碳或氬基團(tuán)連接的鍵與如上對于取代的烷基所述的非碳和非氫原子鍵合的如上定義的未取代的烷氧基烷基。對于鞋基、胺基和巰基而言，術(shù)語"被保護(hù)"指采用保護(hù)基團(tuán)進(jìn)行保護(hù)以避免發(fā)生不希望的反應(yīng)的這些官能團(tuán)的形式，所述的保護(hù)基團(tuán)是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的，例如在"有機(jī)合成中的保護(hù)基團(tuán)"(尸ratecriveOow/w/"S戸^ws)(Greene,T.W.;Wuts，P.G.M.，JohnWiley&Sons,NewYork,NY，(第3版，1999))中提出的那些，并且可以使用其中提出的方法來加入或除去。被保護(hù)的羥基的實(shí)例包括但不限于甲硅烷基醚，例如通過使羥基與試劑、例如但不限于叔丁基二甲基-氯硅烷、三甲基氯硅烷、三異丙基氯硅烷、三乙基氯硅烷進(jìn)行反應(yīng)而得到的那些；取代的甲基醚和乙基醚，例如但不限于曱氧基甲基醚、甲硫甲基醚、千氧基曱基醚、叔丁氧基曱基醚、2-甲氧基乙氧基甲基醚、四氫吡喃基醚、1-乙氧基乙基醚、烯丙基醚、卡基醚；酯，例如但不限于苯甲?；姿狨?、甲酸酯、乙酸酯、三氯乙酸酯和三氟乙酸酯。被保護(hù)的胺基的實(shí)例包括但不限于酰胺，例如甲酰胺、乙酰胺、三氟乙酰胺和苯甲酰胺；二酰亞胺，例如笨鄰二曱酰亞胺和二疏代琥珀酰亞胺；及其它。被保護(hù)的巰基的實(shí)例包括但不限于硫醚，例如S-千基硫醚和S-4-吡啶甲基硫醚；取代的S-甲基衍生物，例如半硫代、二硫代和氨基疏代縮醛；及其它。"可藥用鹽"包括與無機(jī)堿、有機(jī)堿、無機(jī)酸、有機(jī)酸或者堿性或酸性氨基酸形成的鹽。作為無機(jī)堿的鹽，本發(fā)明例如包括堿金屬，例如鈉或鉀；堿土金屬，例如鈣和鎂或鋁；以及氨。作為有機(jī)堿的鹽，本發(fā)明例如包括三曱胺、三乙胺、吡啶、甲基吡、定、乙醇胺、二乙醇胺和三乙醇胺。作為無機(jī)酸的鹽，本發(fā)明例如包括鹽酸、硼酸、硝酸、硫酸和磷酸。作為有機(jī)酸的鹽，本發(fā)明例如包括甲酸、乙酸、三氟乙酸、富馬酸、草酸、酒石酸、馬來酸、乳酸、枸櫞酸、琥珀酸、蘋果酸、曱磺酸、苯磺酸和對曱苯磺酸。作為堿性氨基酸的鹽，本發(fā)明例如包括精氨酸、賴氨酸和鳥氨酸。酸性氨基酸例如包括門冬氨酸和谷氨酸。一方面，本發(fā)明提供了治療對藥物有抗性的癌癥的方法。該方法包括給需要其的受治療者施用式i化合物、該化合物的互變異構(gòu)體、該化合物的鹽、互變異構(gòu)體的鹽、其混合物或者包含該化合物、該化合物的互變異構(gòu)體、鹽、互變異構(gòu)體的鹽或其混合物的藥物組合物。在這類方法中，受治療者是患有對藥物有抗性的癌癥的癌癥患者，并且式i化合物具有下式結(jié)構(gòu)r1、r2、r3和r4可以相同或不同并且獨(dú)立地逸自H、Cl、Br、F、i、-or10基團(tuán)、-nr"RU基團(tuán)、取代或未取代的伯-、仲-或叔-烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的鏈烯基、取代或未取代的炔基、取代或未取代的雜環(huán)基或者取代或未取代的雜環(huán)基烷基；r5、r6、r7和r8可以相同或不同并且獨(dú)立地逸自H、Cl、Br、F、i、-or13基團(tuán)、-nr"r"基團(tuán)、41116基團(tuán)、取代或未取代的伯-、仲-或叔-烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的鏈烯基、取代或未取代的炔基、取代或未取代的雜環(huán)基、取代或未取代的雜環(huán)基烷基、取代或未取代的烷氧基其中:烷基、取代或未取代的芳氧基烷基或者取代或未取代的雜環(huán)基氧基烷基；R"和R^可以相同或不同并且獨(dú)立地選自取代或未取代的烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的雜環(huán)基、取代或未取代的雜環(huán)基烷基、取代或未取代的烷氧基烷基、取代或未取代的芳氧基烷基或者取代或未取代的雜環(huán)基氧基烷基；R"和R"可以相同或不同并且獨(dú)立地選自取代或未取代的烷基、取代或未取代的芳基或者取代或未取代的雜環(huán)基；RU和R"可以相同或不同并且獨(dú)立地選自取代或未取代的烷基、取代或未取代的芳基或者取代或未取代的雜環(huán)基；并且R"選自取代或未取代的烷基、取代或未取代的芳基或者取代或未取代的雜環(huán)基。在治療對藥物有抗性的癌癥的方法的一些實(shí)施方案中，給受治療者施用式II化合物、該化合物的互變異構(gòu)體、該化合物的鹽、互變異構(gòu)體的鹽、其混合物或者包含該化合物、該化合物的互變異構(gòu)體、鹽、互變異構(gòu)體的鹽或其混合物的藥物組合物，其中式II化合物具有下式結(jié)構(gòu)并且R"是取代或未取代的雜環(huán)基II在一些這類實(shí)施方案中，R"是選自取代或未取代的哌咬基、旅溱基或嗎啉基的取代或未取代的雜環(huán)基。在這些實(shí)施方案中的一些中，R"是取代或未取代的N-烷基p底"秦基。在一些這類實(shí)施方案中，R"是取代或未取代的N-烷基旅，秦基并且N-烷基哌溱基的烷基包含l至4個(gè)碳原子。在治療對藥物有抗性的癌癥的方法的一些實(shí)施方案中，給受治療者施用式III化合物、該化合物的互變異構(gòu)體、該化合物的鹽、互變異構(gòu)體的鹽、其混合物或者包含該化合物、該化合物的互變異構(gòu)體、鹽、互變異構(gòu)體的鹽或其混合物的藥物組合物，其中式III化合物具有下式結(jié)構(gòu)本發(fā)明還提供了治療癌癥的方法。該方法包括給需要其的受治療者施用選自Gleevec、BAY43-9006、Brostallicin、來那度胺(Revlimid)、沙利度胺(Thalomid)、多西他賽(Taxotere)、埃羅替尼(Tarceva)、vatalinib(PTK-787)、VEGF-trap、fenretidine、bortezomib、貝伐單抗(Avastin)、pertuzumab和/或利妥昔單抗的抗癌藥以及式I化合物、該化合物的互變異構(gòu)體、該化合物的鹽、互變異構(gòu)體的鹽、其混合物或者包含該化合物、該化合物的互變異構(gòu)體、鹽、互變異構(gòu)體的鹽或其混合物的藥物組合物，其中式I化合物具有以上對治療對藥物有抗性的癌癥的方法所表明的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)。式I、II和III的化合物可用于治療難以用一種或多種這些抗癌藥治療的癌癥患者。式I、II和III的化合物可用于治療患有難以用一種或多種這些抗癌藥治療或者對它們有抗性的癌癥的癌癥患者。在治療癌癥的方法的一項(xiàng)實(shí)施方案中，給受治療者施用式II化合物、該化合物的互變異構(gòu)體、該化合物的鹽、互變異構(gòu)體的鹽、其混合物或者包含該化合物、該化合物的互變異構(gòu)體、鹽、互變異構(gòu)體的鹽或其混合物的藥物組合物，其中式II化合物具有以上所示的式的結(jié)構(gòu)并且117是取代或未取代的雜環(huán)基。在一些這類實(shí)施方案中，W是選自取代或未取代的哌咬基、哌，秦基或嗎啉基的取代或未取代的雜環(huán)基。在這些實(shí)施方案中的一些中，R"是取代或未取代的N-烷基P底溱基。在一些這類實(shí)施方案中，W是取代或未取代的N-烷基派，秦基并且N-烷基p底溱基的烷基包含l至4個(gè)碳原子。在治療癌癥的方法的一項(xiàng)實(shí)施方案中，給受治療者施用式III化合物、該化合物的互變異構(gòu)體、該化合物的鹽、互變異構(gòu)體的鹽、其混合物或者包含該化合物、該化合物的互變異構(gòu)體、鹽、互變異構(gòu)體的鹽或其混合物的藥物組合物，其中式ni化合物具有以上所示的式的結(jié)構(gòu)。在治療癌癥的方法的一些實(shí)施方案中，在已經(jīng)將抗癌藥施用于受治療者之后，將化合物、該化合物的互變異構(gòu)體、鹽、互變異構(gòu)體的鹽、其混合物或藥物組合物施用于該受治療者。在其它實(shí)施方案中，在已經(jīng)將抗癌藥施用于受治療者之前，將化合物、該化合物的互變異構(gòu)體、鹽、互變異構(gòu)體的鹽、其混合物或藥物組合物施用于該受治療者。在其它實(shí)施方案中，在將至少某種抗癌藥施用于受治療者的同時(shí)，將化合物、該化合物的互變異構(gòu)體、鹽、互變異構(gòu)體的鹽、其混合物或藥物組合物施用于該受治療者。在一些實(shí)施方案中，在施用化合物、該化合物的互變異構(gòu)體、鹽、互變異構(gòu)體的鹽、其混合物或藥物組合物之后，在該受治療者中可獲得穩(wěn)定的疾病狀態(tài)和/或出現(xiàn)腫瘤尺寸減小。另一方面，本發(fā)明提供了治療組合物和藥盒。這類組合物和藥盒包括抗癌藥和式i化合物、該化合物的互變異構(gòu)體、該化合物的鹽、互變異構(gòu)體的鹽或其混合物。這類治療組合物和藥盒可以包括作為組合制劑用于同時(shí)、分別或依次使用來治療患有對藥物有抗性的癌癥的受治療者的組分。式i具有與以上對治療對藥物有抗性的癌癥的方法中所勤目同的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)。在一些實(shí)施方案中，藥盒和治療組合物中包括的抗癌藥是除癌癥對其有抗性的藥物以外的抗癌藥。在其它實(shí)施方案中，藥盒和治療組合物中包括的抗癌藥是癌癥對其有抗性的抗癌藥。例如，如果患者對Gleevec耐藥，則除了抗癌藥如Iressa外，藥盒或組合物還可以包括一種或多種式I、11和/或111的化合物?；蛘?，如果患者對Gleevec耐藥，則藥盒或組合物可以包括一種或多種式I、n和/或III的化合物以及Gleevec。包括Gleevec的目的是直到將藥物施用于患者時(shí)才可以知道患者中的耐藥性。此外，在治療過程中還可以發(fā)生對某種藥物的耐藥性。除了本發(fā)明的化合物外，藥盒還可以包括一種、兩種、三種或更多種不同的抗癌藥。在藥盒和治療組合物的一些實(shí)施方案中，式I化合物、該化合物的互變異構(gòu)體、該化合物的鹽、互變異構(gòu)體的鹽或其混合物是式II化合物、式II化合物的互變異構(gòu)體、式II化合物的鹽、式II化合物的互變異構(gòu)體的鹽或其混合物，其中式II化合物具有以上所示的式的結(jié)構(gòu)并且W是取代或未取代的雜環(huán)基。在一些這類實(shí)施方案中，W是選自取代或未取代的哌咬基、哌。秦基或嗎啉基的取代或未取代的雜環(huán)基。在這些實(shí)施方案中的一些中，R7是取代或未取代的N-烷基哌"秦基。在一些這類實(shí)施方案中，W是取代或未取代的N-烷基哌漆基并且N-烷基哌"秦基的烷基包含l至4個(gè)碳原子。在藥盒和治療組合物的一些實(shí)施方案中，式I化合物、該化合物的互變異構(gòu)體、該化合物的鹽、互變異構(gòu)體的鹽或其混合物是式III化合物、式III化合物的互變異構(gòu)體、式III化合物的鹽、式III化合物的互變異構(gòu)體的鹽或其混合物，其中式III化合物具有以上所示的式的結(jié)構(gòu)。在治療組合物和藥盒的一些實(shí)施方案中，抗癌藥和化合物、該化合物的互變異構(gòu)體、鹽、互變異構(gòu)體的鹽、其混合物或藥物組合物作為單一的組合物而被提供。在其它實(shí)施方案中，抗癌藥和化合物、該化合物的互變異構(gòu)體、鹽、互變異構(gòu)體的鹽、其混合物或藥物組合物作為藥盒的各部分而被單獨(dú)提供。本發(fā)明還提供了在受治療者中抑制激酶的方法。該方法包括給需要其的受治療者施用式I化合物、該化合物的互變異構(gòu)體、該化合物的鹽、互變異構(gòu)體的鹽、其混合物或者包含該化合物、該化合物的互變異構(gòu)體、鹽、互變異構(gòu)體的鹽或其混合物的藥物組合物，其中受治療者是癌癥患者并且激酶包含突變的看門殘基，其中式I化合物具有以上對治療對藥物有抗性的癌癥的方法所表明的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)。在抑制激酶的方法的一項(xiàng)實(shí)施方案中，給受治療者施用式II化合物、該化合物的互變異構(gòu)體、該化合物的鹽、互變異構(gòu)體的鹽、其混合物或者包含該化合物、該化合物的互變異構(gòu)體、鹽、互變異構(gòu)體的鹽或其混合物的藥物組合物，其中式II化合物具有以上所示的式的結(jié)構(gòu)并且W是取代或未取代的雜環(huán)基。在一些這類實(shí)施方案中，R"是選自取代或未取代的哌啶基、哌溱基或嗎啉基的取代或未取代的雜環(huán)基。在這些實(shí)施方案中的一些中，if是取代或未取代的N-烷基哌溱基。在一些這類實(shí)施方案中，R"是取代或未取代的N-烷基p底喚基并且N-烷基哌，秦基的烷基包含l至4個(gè)碳原子。在抑制激酶的方法的一項(xiàng)實(shí)施方案中，給受治療者施用式III化合物、該化合物的互變異構(gòu)體、該化合物的鹽、互變異構(gòu)體的鹽、其混合物或者包含該化合物、該化合物的互變異構(gòu)體、鹽、互變異構(gòu)體的鹽或其混合物的藥物組合物，其中式III化合物具有以上所示的式的結(jié)構(gòu)。在抑制激酶的方法的一項(xiàng)實(shí)施方案中，激酶是胞質(zhì)酪氨酸激酶(cytoplasmictyrosinekinase)或者是受體酪氛酸激酶。在一些實(shí)施方案中,激酶選自ABL、KIT、PDGFRa、EGFR或FLT3。在一些這類實(shí)施方案中，激酶是ABL(T3151)。在其它這類實(shí)施方案中，激酶是FLT3(D835Y)。在其它這類實(shí)施方案中，激酶是EGFR。在抑制激酶的方法的一些實(shí)施方案中，癌癥對曱磺酸伊馬替尼(Gleevec)、BAY43-9006、Brostallicin、來那度胺(Revlimid)、沙利度胺(Thalomid)、多西他賽(Taxotere)、埃羅替尼(Tarceva)、吉非替尼(gefitinib)(Iressa)、vatalinib(PTK-787)、VEGF-trap、fenretidine、bortezomib或一般的單克隆抗體有抗性。在一些實(shí)施方案中，癌癥患者的癌癥選自胃腸道間質(zhì)瘤、急性髓性白血病、慢性髓性白血病、多發(fā)性骨髓瘤、腎細(xì)胞癌、非小細(xì)胞肺癌或嗜酸細(xì)胞過多綜合征(HES)。本發(fā)明還提供了治療患有與pERK過表達(dá)有關(guān)的癌癥的受治療者的方法。該方法包括測定患者中的內(nèi)源性pERK水平和給患者施用式I化合物、該化合物的互變異構(gòu)體、該化合物的鹽、互變異構(gòu)體的鹽、其混合物或者包含該化合物、該化合物的互變異構(gòu)體、鹽、互變異構(gòu)體的鹽或其混合物的藥物組合物。在一些這類實(shí)施方案中，內(nèi)源性pERK水平的測定在施用之前進(jìn)行。在這類實(shí)施方案中，可以進(jìn)行該測定以確定需要該化合物、該化合物的互變異構(gòu)體、鹽、互變異構(gòu)體的鹽、其混合物或藥物組合物的患者。在其它實(shí)施方案中，內(nèi)源性pERK水平的測定在施用之后進(jìn)行。在這類實(shí)施方案中，可以進(jìn)行該測定以確定在患者中施用該化合物、該化合物的互變異構(gòu)體、鹽、互變異構(gòu)體的鹽、其混合物或藥物組合物的效能。在一些實(shí)施方案中，式I化合物是式II化合物或式III化合物、其鹽、其互變異構(gòu)體的鹽、其混合物或包含這些中一種的藥物組合物。在治療患有與pERK過表達(dá)有關(guān)的癌癥的受治療者的方法的一些實(shí)施方案中，患者中內(nèi)源性pERK水平的測定包括萃取含有外周血白細(xì)胞的血液和通過蛋白質(zhì)印跡法和/或流式細(xì)胞測定法來測定內(nèi)源性pERK水平。在一些實(shí)施方案中，受治療者中的pERK水平升高。在其它這類實(shí)施方案中，受治療者中的pERK水平祐:穩(wěn)定或降低。在一些實(shí)施方案中，Ri選自H、Cl、Br、F或I。在一些這類實(shí)施方案中，W是F。在一些實(shí)施方案中，R2、rS和R"均是H。在一些這類實(shí)施方案中，W是F并且R2、RS和R"各自是H。在其它實(shí)施方案中，116或117中至少一個(gè)是取代或未取代的雜環(huán)基。在一些這類實(shí)施方案中，！^或R"中之一是雜環(huán)基，且I^或R"中另一個(gè)是H。在一些實(shí)施方案中，R"或R"中之一是選自取代或未取代的派咬基、派"秦基或嗎啉基的雜環(huán)基。在一些這類實(shí)施方案中，！^或R"中之一是N-烷基派溱基、例如N-甲基派噪基等，在一些這類實(shí)施方案中，W或R"中另一個(gè)是H。在多項(xiàng)實(shí)施方案中，化合物的乳酸鹽被施用于受治療者或者被包括在本發(fā)明的藥盒或治療組合物中。在多項(xiàng)實(shí)施方案中，癌癥對Gleevec有抗性。在其它實(shí)施方案中，在已經(jīng)將Gleevec施用于受治療者并且已經(jīng)發(fā)現(xiàn)該受治療者中的癌癥對Gleevec有抗性之后，將化合物、該化合物的互變異構(gòu)體、鹽、互變異構(gòu)體的鹽、其混合物或藥物組合物施用于該受治療者。在多項(xiàng)實(shí)施方案中，癌癥對BAY43-9006有抗性。在其它實(shí)施方案中，在已經(jīng)將BAY43-9006施用于受治療者并且已經(jīng)發(fā)現(xiàn)該受治療者中的癌癥對BAY43-9006有抗性之后，將化合物、該化合物的互變異構(gòu)體、鹽、互變異構(gòu)體的鹽、其混合物或藥物組合物施用于該受治療者。在多項(xiàng)實(shí)施方案中，癌癥對Brostallicin有抗性。在其它實(shí)施方案中，在已經(jīng)將Brostallicin施用于受治療者并且已經(jīng)發(fā)現(xiàn)該受治療者中的癌癥對Brostallicin有抗性之后，將化合物、該化合物的互變異構(gòu)體、鹽、互變異構(gòu)體的鹽、其混合物或藥物組合物施用于該受治療者。在多項(xiàng)實(shí)施方案中，癌癥對以下抗癌藥之一有抗性，或者本發(fā)明的化合物、鹽、互變異構(gòu)體、混合物或藥物組合物與以下抗癌藥之一組合使用，這些抗癌藥各自單獨(dú)是優(yōu)選的來那度胺(Revlimid)、沙利度胺(Thalomid)、多西他賽(Taxotere)、埃羅替尼(Tarceva)、吉非替尼(Iressa)、vatalinibfenretidine、bortezomib或一般的單克隆抗體(mAb)、例如但不限于貝伐單抗(Avastin)、pertuzumab或利妥昔單抗。曲妥單抗(Herceptin)也可以與本發(fā)明的化合物組合使用?？梢杂帽景l(fā)明的方法、組合物和藥盒來治療多種癌癥。在一些實(shí)施方案中，癌癥是實(shí)體癌、例如實(shí)體腫瘤，其在一些實(shí)施方案中是耐藥的。在其它實(shí)施方案中，癌癥是"液體"癌或血液癌。在其它實(shí)施方案中，癌癥是胃腸道間質(zhì)瘤(GIST)。在其它實(shí)施方案中，癌癥是急性髓性白血病。在其它實(shí)施方案中，癌癥是慢性髓性白血病、多發(fā)性骨髓瘤或腎細(xì)胞癌。在其它實(shí)施方案中，癌癥選自前列腺癌、腎癌、胃腸道間質(zhì)瘤、肉瘤、結(jié)腸直腸癌、乳腺癌、腮腺癌、胃癌、黑素瘤、食管癌、NET(鼻竇(-sinonasal))癌、結(jié)腸癌、卵巢癌或肝癌，其在一些實(shí)施方案中是耐藥的。可以根據(jù)本發(fā)明治療的其它癌癥的名單包括但不限于胃腸道間質(zhì)瘤、急性髓性白血病、慢性髓性白血病、多發(fā)性骨髓瘤、腎細(xì)胞癌、非小細(xì)胞肺癌或嗜酸細(xì)胞過多綜合征(HES)。在包括雜環(huán)基在內(nèi)的多種基團(tuán)中，雜環(huán)基可以以多種方式連接。例如，在-OCH2(CH2)q(雜環(huán)基)基團(tuán)(其中q選自0、1、2、3或4)中，雜環(huán)基可以通過不同環(huán)成員與-OCH2(CH2)q(雜環(huán)基)的-OCH2(CH2)q基團(tuán)的亞甲基與碳連接的鍵合。以其中q是l且雜環(huán)基是四氫呋喃的非限制性實(shí)例進(jìn)行舉例，基團(tuán)可以通過對應(yīng)于以下兩種結(jié)構(gòu)的式-OCH2CH2(四氫呋喃基)來表示IVV其中結(jié)構(gòu)IV表示可以稱為-OCH2CH2(2-四氫呋喃基)基團(tuán)的基團(tuán)，結(jié)構(gòu)V表示可以稱為-OCH2CH2(3-四氫呋喃基)基團(tuán)的基團(tuán)。當(dāng)雜環(huán)基是含N雜環(huán)、例如但不限于p底，定、p底，秦、嗎啉或吡咯烷時(shí)，該雜環(huán)可以通過含N雜環(huán)的環(huán)中的環(huán)碳原子或氮原子與亞曱基與碳連接的鍵合。這兩種情況均是優(yōu)選的。對于-OCH2(CH2)q(雜環(huán)基)基團(tuán)，當(dāng)雜環(huán)基是哌啶且q是2時(shí)，以下結(jié)構(gòu)是可能的并且是優(yōu)選的<formula>formulaseeoriginaldocumentpage41</formula>VIII<formula>formulaseeoriginaldocumentpage41</formula>IX結(jié)構(gòu)VI是-0(CH2)3(N-哌P絲)或-0(CH2)3(l-哌。絲)基團(tuán)的實(shí)例。結(jié)構(gòu)VII是-0(CH2)3-(2-哌P絲)基團(tuán)的實(shí)例。結(jié)構(gòu)VIII是-0(CH2)3(3-哌P絲)基團(tuán)的實(shí)例。結(jié)構(gòu)IX是-0(CH2)3(4-哌。定基)基團(tuán)的實(shí)例。對于-OCH2(CH2)q(雜環(huán)基)基團(tuán)，當(dāng)雜環(huán)基是哌"秦且q是l時(shí)，以下結(jié)構(gòu)是可能的并且是優(yōu)選的<formula>formulaseeoriginaldocumentpage41</formula>X<formula>formulaseeoriginaldocumentpage41</formula>XI結(jié)構(gòu)X是-0(CH2)2(2-哌，秦基)基團(tuán)的實(shí)例，結(jié)構(gòu)XI是-0(CH2)2(l-旅。秦基)或-0(CH2)2(N-哌噪基)基團(tuán)的實(shí)例。對于-OCH2(CH2)q(雜環(huán)基)基團(tuán)，當(dāng)雜環(huán)基是嗎啉且q是l時(shí)，以下結(jié)構(gòu)是可能的并且是優(yōu)選的<formula>formulaseeoriginaldocumentpage41</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage41</formula>XII<formula>formulaseeoriginaldocumentpage41</formula>xni結(jié)構(gòu)XII是-0(CH2)2(3-嗎啉基)基團(tuán)的實(shí)例，結(jié)構(gòu)XIII是-0(CH2)2(4-嗎啉基)或-0(CH2)2(N-嗎啉基)基團(tuán)的實(shí)例，結(jié)構(gòu)XIV是-0(CH2)2(2-嗎啉基)基團(tuán)的實(shí)例。應(yīng)當(dāng)觀察到，當(dāng)基團(tuán)是吡咯烷且q是l時(shí)，可得到的結(jié)構(gòu)包括-0(012)2(1-吡咯烷基)或-0(012)2(]\-吡咯烷基)、-0(<:112)2(2-吡咯烷基)和-0(CH2)2(3-吡咯烷基)。流程圖l描述了合成苯并咪唑基壹啉酮化合物的一種示例性合成途徑，并且不應(yīng)當(dāng)理解為以任意方式限制本發(fā)明。流程圖l<formula>formulaseeoriginaldocumentpage42</formula>流程圖2描述了合成本發(fā)明的化合物的另一種方法，并且不以任何方式限制本發(fā)明。本領(lǐng)域技術(shù)人員將理解，選擇取代或未取代的二氨基苯和取代或未取代的氨基笨甲腈可合成各種不同的化合物。本領(lǐng)域技術(shù)人員還將知道，對于最后的環(huán)化反應(yīng)，某些基團(tuán)可能需要采用標(biāo)準(zhǔn)保護(hù)基團(tuán)進(jìn)行保護(hù)。這種非常通用的合成途徑可使具有式in的多種化合物通過高度匯聚的和有效的合成途徑而易于制備。流程圖2采用隨后的實(shí)施例部分所述的和以下文獻(xiàn)中公開的方法易于合成結(jié)構(gòu)I的化合物美國專利6，605，617、7>開的美國專利申請2004/0092535、美國專利申請10/983，174、-^開的美國專利申請2004/0220196、美國專利申請10/982，757和美國專利申請10/982，543，這些文獻(xiàn)各自整體引入本文作為參考并用于所有目的，如同本文闡述了其全文一樣。結(jié)構(gòu)I的化合物、這些化合物的互變異構(gòu)體、這些化合物的可藥用鹽、互變異構(gòu)體的可藥用鹽及其混合物可以用于制備可以用于本文所述的目的的藥物，并且可以用于治療如本文所述的多種生物學(xué)病癥。本發(fā)明的化合物、其鹽、互變異構(gòu)體、互變異構(gòu)體的鹽及其混合物可特別用于治療患有對一種或多種其它抗癌藥如Gleevec、BAY43-卯06和Brostallicin有抗性的癌癥的患者。藥物制劑可以包括任意上述實(shí)施方案的任意化合物、互變異構(gòu)體或鹽以及可藥用的載體如本文所述的那些。這類制劑還可以包括不同的抗癌藥、例如^f旦不限于Gleevec、BAY43-9006或Brostallicin。本發(fā)明還提供了可以通過將本發(fā)明的一種或多種化合物或其可藥用的鹽、互變異構(gòu)體或其混合物與可藥用的載體、賦形劑、粘合劑、稀釋劑等混合來制備的組合物，以治療或改善與轉(zhuǎn)移(metastacized)瘤有關(guān)的紊亂。本發(fā)明的組合物可以用于制備用于治療如本文所述的轉(zhuǎn)移瘤的制劑。這類組合物可以是例如顆粒劑、粉末、片劑、膠嚢劑、糖漿劑、栓劑、注射劑、乳劑、酏劑、混懸劑或溶液劑的形式。本組合物可以;陂配制以用于多種施用途徑，例如通過口服施用、通過鼻施用、通過直腸施用、皮下注射、靜Ji^內(nèi)注射、肌內(nèi)注射或腹膜內(nèi)注射。以下劑型以舉例的方式給出，并且不應(yīng)當(dāng)理解為限制本發(fā)明。對于口服、口腔和舌下施用而言，粉末、混懸劑、顆粒劑、片劑、丸劑、膠嚢劑、軟膠嚢和膠嚢形片劑作為固體劑型是可接受的。這些劑型可以例如通過將本發(fā)明的一種或多種化合物、其可藥用的鹽、互變異構(gòu)體或其混合物與至少一種添加劑如淀粉或其它添加劑混合來制備。適宜的添加劑有蔗糖、乳糖、纖維素糖、甘露醇、麥芽糖醇、右旋糖酐、淀粉、瓊脂、藻酸鹽、殼多糖、殼聚糖、果膠、西黃蓍膠、阿拉伯膠、明膠、膠原、酪蛋白、白蛋白、合成或半合成的聚合物或者甘油酯。口服劑型可以任選含有幫助施用的其它成分，例如惰性稀釋劑，或潤滑劑如硬脂酸鎂，或防腐劑如尼泊金或山梨酸，或抗氧化劑如維生素C、維生素E或半胱氨酸，崩解劑，粘合劑，增稠劑，緩沖劑，甜味劑，矯味劑或芳香劑。可以用本領(lǐng)域已知的適宜的包衣材料將片劑和丸劑進(jìn)行進(jìn)一步處理。用于口服施用的液體劑型可以是可以含有惰性稀釋劑如水的可藥用的乳劑、糖漿劑、酏劑、混懸劑和溶液劑的形式?？梢允褂脽o菌液體、例如但不限于油、水、醇和這些的組合將藥物制劑和藥物制備成液體混懸劑或溶液劑?？梢约尤朐谒帉W(xué)上適于口服或胃腸道外施用的表面活性劑、助懸劑、乳化劑。如上提到的，混懸劑可以包括油。這類油包括但不限于花生油、芝麻油、棉子油、玉米油和橄欖油?；鞈覄┻€可以含有脂肪酸酯，例如油酸乙酯、十四酸異丙酯、脂肪酸甘油酯和乙?；舅岣视王??；鞈抑苿┛梢园ù?，例如但不限于乙醇、異丙醇、十六醇、甘油和丙二醇。在混懸制劑中還可以^使用醚、例如但不限于聚(乙二醇)、石油碳?xì)浠衔锶绲V物油和凡士f木以及水。對于鼻施用，藥物制劑和藥物可以是含有適宜的溶劑和任選的其它化合物、例如但不限于穩(wěn)定劑、抗微生物劑、抗氧化劑、pH調(diào)節(jié)劑、表面活性劑、生物利用度調(diào)節(jié)劑和這些的組合的噴霧劑或氣霧劑。氣霧劑的拋射劑可以包括壓縮空氣、氮?dú)?、二氧化碳或基于碳?xì)浠衔锏牡头悬c(diǎn)溶劑。可注射的劑型通常包括可以使用適宜的分散劑或潤濕劑和助懸劑來制備的水性混懸液和油性混懸液。可注射的形式可以是溶液相或者是用溶劑或稀釋劑制備的混懸液的形式?？山邮艿娜軇┗蛉苊桨缇?、林格氏溶液或等張鹽水溶液?；蛘?，可以采用無菌油作為溶劑或助懸劑。優(yōu)選油或脂肪酸是非揮發(fā)性的，包括天然或合成的油、脂肪酸、甘油一酯、二酯或三酯。對于注射，藥物制劑和/或藥物可以是適于用如上所述的適當(dāng)溶液重構(gòu)的粉末。這些的實(shí)例包括但不限于冷凍干燥、旋轉(zhuǎn)干燥或噴霧干燥的粉末、無定形粉末、顆粒、沉淀物或微粒。對于注射，制劑可以任選含有穩(wěn)定劑、pH調(diào)節(jié)劑、表面活性劑、生物利用度調(diào)節(jié)劑和這些的組合。對于直腸施用，藥物制劑和藥物可以是在腸、乙狀結(jié)腸曲和/或直腸中釋放化合物的栓劑、軟膏劑、灌腸劑、片劑或乳膏劑的形式。直腸栓劑可通過將本發(fā)明的一種或多種化合物或者該化合物的可藥用的鹽或互變異構(gòu)體與可接受的載體如可可脂或聚乙二醇混合來制備，所迷的載體在通常的貯存溫度下以固相存在，而在適于在體內(nèi)、例如在直腸內(nèi)釋放藥物的那些溫度下以液相存在。在制備軟明膠型和栓劑制劑中還可以采用油。在制備混懸劑中可以采用水、鹽水、葡萄糖水溶液和有關(guān)的糖水溶液以及甘油，所述的混懸劑還可以含有助懸劑，例如果膠、卡波姆、甲基纖維素、羥丙基纖維素或羧甲基纖維素以及緩沖劑和防腐劑。除了上述的那些代表性的劑型外，可藥用的賦形劑和載體通常也是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的，因此它們被包括在本發(fā)明中。這類賦形劑和載體例j口在"RemingtonsPharmaceuticalSciences"(Mack出版乂〉司，新澤西(1991))中有描逸，該參考文獻(xiàn)整體-皮引入本文作為參考并用于所有目的，如同本文闡述了其全文一樣。本發(fā)明的制劑可以被設(shè)計(jì)成如下所述的短效、速釋、長效和緩釋制劑。因此，藥物制劑還可以被配制成用于控釋或緩釋的制劑。本組合物還可以例如包含膠束或脂質(zhì)體或者一些其它被包嚢的形式，此，藥物制劑和藥物可以被壓制成小丸或圓柱體，并且可以作為貯庫注射劑或作為植入劑如支架通過肌內(nèi)或皮下植入。這些植入劑可以采用已知的惰性材料，例如硅酮和生物可降解的聚合物?？梢圆鹏迵?jù)疾病的狀態(tài)、受治療者的年齡、體重、一般健康狀況、性別和飲食、劑量間隔、施用途徑、排泄速率和藥物的組合來調(diào)整特定的劑量。任意含有有效量的以上劑型完全在常規(guī)實(shí)驗(yàn)的范圍之內(nèi)，因此它們完全在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。治療有效劑量可以根據(jù)施用途徑和劑型而改變。本發(fā)明的優(yōu)選的化合物是顯示出高治療指數(shù)的制劑。治療指數(shù)是毒性作用和治療作用之間的劑量比，其可以表示為LDso和ED5o之間的比。LDso是致50。/。群體死亡的劑量，ED5。是在50。/。群體中治療有效的劑量。LDso和ED5Q可通過標(biāo)準(zhǔn)的藥學(xué)方法在動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)物或?qū)嶒?yàn)動(dòng)物中進(jìn)行測定。在本發(fā)明的上下文中的"治療"表示減輕與紊亂或疾病有關(guān)的癥狀或者使那些癥狀的進(jìn)一步發(fā)展或惡化停止或者阻止或預(yù)防疾病或紊亂。例如，在治療患有轉(zhuǎn)移的血液腫瘤的患者的背景下，成功的治療可以包括減少供養(yǎng)腫瘤或病變組織的毛細(xì)血管的增殖、減輕與癌性生長或腫瘤、毛細(xì)血管增殖或病變組織有關(guān)的癥狀、使毛細(xì)血管的增殖停止或者使疾病如癌癥的發(fā)展或癌性細(xì)胞的生長停止。治療還可以包括與其它治療組合施用本發(fā)明的藥物制劑。例如，本發(fā)明的化合物和藥物制劑可以在手術(shù)操作和/或放射治療之前、期間或之后施用。本發(fā)明的化合物還可以與其它抗癌藥、例如但不限于Gleevec、BAY43-9006和Brostallicin以及用于反義和基因治療的藥物聯(lián)合施用。適宜的組合可以由肺瘤學(xué)和醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的技術(shù)人員來確定。如在癌癥治療中所用的"穩(wěn)定的疾病狀態(tài)，，表示癌癥的生長停止。這通?？梢允褂脪呙璺?、例如如附圖中所示的正電子發(fā)射斷層掃描(PET)而看到。根據(jù)本發(fā)明的藥物制劑和藥物包括結(jié)構(gòu)I的化合物或者其互變異構(gòu)體、鹽或其混合物以及可藥用的載體。因此，本發(fā)明的化合物可以用于制備藥物和藥物制劑。這類藥物和藥物制劑可以用于本文所述的治療方法。本發(fā)明的化合物和制劑特別適用于組合治療，因?yàn)楫?dāng)與抗癌藥、例如但不限于喜樹堿、多柔比星、順鉑、伊立替康(CPT-ll)、烷化劑、拓樸異構(gòu)酶i和n抑制劑以;^i文射治療組合使用時(shí)，它們已經(jīng)表明顯示出了協(xié)同作用。此外，本發(fā)明的化合物還可以與抗癌藥如Gleevec、BAY43-卯06和Brostallicin組合使用，并且可以在患有對這些抗癌藥有抗性的癌癥的癌癥患者中發(fā)現(xiàn)特別的用途。因此，本發(fā)明提供了包括結(jié)構(gòu)I的化合物和其互變異構(gòu)體、鹽和/或其混合物以及抗癌藥的藥物制劑。本發(fā)明還提供了化合物、互變異構(gòu)體、鹽和/或混合物在制備這類制劑和藥物中的用途以及化合物在治療癌癥患者中的用途。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了治療組合物，其包含抗癌藥和本發(fā)明的任意實(shí)施方案的化合物、該化合物的互變異構(gòu)體、鹽、互變異構(gòu)體的鹽或其混合物，作為組合制劑用于同時(shí)、分別或依次使用來治療患者如癌癥患者。在一些這類實(shí)施方案中，患者是對至少一種抗癌藥如Gleevec、BAY43-9006或Brostallicin耐藥的癌癥患者。在一些這類實(shí)施方案中，抗癌藥和化合物、該化合物的互變異構(gòu)體、鹽、互變異構(gòu)體的鹽或其混合物作為單一的組合物#皮提供。在其它這類實(shí)施方案中，抗癌藥和化合物、該化合物的互變異構(gòu)體、鹽、互變異構(gòu)體的鹽或其混合物作為藥盒的各部分被單獨(dú)提供。這類藥盒還可以包括使用說明書。本發(fā)明的化合物可以用于治療多種受治療者。適宜的受治療者包括動(dòng)物，例如哺乳動(dòng)物和人。適宜的哺乳動(dòng)物包括但不限于靈長類，例如但不限于狐猴、猿和猴；嚙齒類，例如大鼠、小鼠和豚鼠；家兔和野兔；牛；馬；豬；山羊；綿羊；有袋動(dòng)物；和肉食動(dòng)物，例如貓科、犬科和熊科。在一些實(shí)施方案中，受治療者或患者是人。在其它實(shí)施方案中，受治療者或患者是嚙齒動(dòng)物，例如小鼠或大鼠。在一些實(shí)施方案中，受治療者或患者是除人以外的動(dòng)物，在一些這類實(shí)施方案中，受治療者或患者是除人以外的哺乳動(dòng)物。實(shí)施例在實(shí)施例中使用以下縮寫EtOH:乙醇H20:水HC1:鹽酸HPLC:高效液相色譜法KHMDS:雙(三曱基曱硅烷基)氨基鉀L沮MDS:雙(三曱基曱硅烷基)氨基鋰Na匪DS:雙(三甲基甲硅烷基)氨基鈉NaOH:氬氧化鈉N2:氮?dú)釺BME:叔丁基甲基醚THF:四氫呋喃使用ACDName5.07版軟件(2001年11月14日)(可由AdvancedChemistryDevelopment公司4尋到)、ChemlnnovationNamExpert+NomenclatorTM商標(biāo)軟件(可由ChemlnnovationSoftware公司得到)以及可在ChemOffice⑧Ultra軟件包7.0版(可由CambridgeSoft公司(劍橋,MA)得到)中得到的AutoN。m2,2版提供了實(shí)施例化合物的命名。使用標(biāo)準(zhǔn)IUPAC命名法命名了一些化合物和原料。各種原料可以由商業(yè)來源獲得，并且可以通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法來制備。實(shí)施例l5-(4-甲基-哌嗪-l-基)-2-硝基苯胺的合成方法A將5-氯-2-硝基苯胺(500g，2.898mol)和l-甲基派噪(871g,8.693mol)置于裝配有冷凝器并用N2清洗的M00mL燒瓶中。將該燒瓶置于100。C的油浴中，加熱直至如通過HPLC測得5-氯-2-硝基苯胺完全反應(yīng)(一般過夜)。在HPLC確定了5-氯-2-硝基苯胺消失后，在機(jī)械攪拌下將反應(yīng)混合物直接倒入(仍然溫?zé)?2500mL室溫水中。將所得混合物攪拌直至其達(dá)到室溫，然后將其過濾。將由此得到的黃色固體加入到1000mL水中，攪拌30分鐘。將所得混合物過濾，將所得固體用TBME(500mL，2x)洗滌，然后使用橡皮障(rubberdam)將其真空干燥l小時(shí)。將所得固體轉(zhuǎn)移到干燥盤中，在真空干燥箱中于5(TC干燥至恒重，得到670g(97.8%)黃色粉末狀的標(biāo)題化合物。方法B將5-氯-2-硝基笨胺(308.2g，1.79mol)加入到裝配有頂部攪拌器、冷凝器、氣體入口、加料漏斗和溫度計(jì)探針的4頸5000mL圓底燒瓶中。然后將該燒瓶用N2清洗。在攪拌下將l-甲基旅漆(758.1g,840mL,7.57mol)和200標(biāo)準(zhǔn)強(qiáng)度(proof)的乙醇(SOSmL)加入到該反應(yīng)燒瓶中。將該燒瓶再次用1\2清洗，將反應(yīng)物保持在Nz下。將該燒瓶在加熱套中加熱至內(nèi)部溫度為97。C(+/-5°C),在該溫度下保持直至如通過HPLC測得反應(yīng)完全(一般約40小時(shí))。反應(yīng)完全后，停止加熱，在攪拌下將反應(yīng)物冷卻至內(nèi)部溫度為約20'C至25。C,將反應(yīng)物攪拌2至3小時(shí)。將5-(4-甲基-哌嗪-l-基)-2-硝基苯胺的晶種(0.20g，0.85mmol)加入到該反應(yīng)混合物中，除非沉淀已經(jīng)發(fā)生。歷經(jīng)約l小時(shí)將水(2，450mL)加入到該攪拌的反應(yīng)混合物中，同時(shí)內(nèi)部溫度保持在約20。C至30。C的溫度范圍內(nèi)。水加入完成后，于20"C至30。C將所得混合物攪拌約l小時(shí)。然后將所得混合物過濾，將燒瓶和濾餅用水(3x2.56L)洗滌。在真空干燥箱中于約50'C將金黃色固態(tài)產(chǎn)物真空干燥至恒重，得到416g(產(chǎn)率98.6%)。方法C將5-氯-2-硝基苯胺(401g,2.32mol)加入到裝配有頂部攪拌器、冷凝器、氣體入口、加料漏斗和溫度計(jì)探針的4頸12L圓底燒瓶中。然后將該燒瓶用]\2清洗。在攪拌下將l-曱基派"秦(977g，1.08L，9.75mol)和1000/。乙醇(650mL)加入到該反應(yīng)燒瓶中。將該燒瓶再次用N2清洗，將反應(yīng)物保持在N2下。將該燒瓶在加熱套中加熱至內(nèi)部溫度為97。C(+/-5°C),在該溫度下保持直至如通過HPLC測得反應(yīng)完全(一般約40小時(shí))。反應(yīng)完全后，停止加熱，在攪拌下將反應(yīng)物冷卻至內(nèi)部溫度為約80。C，歷經(jīng)l小時(shí)通過加料漏斗將水(3.15L)加入到該混合物中，同時(shí)內(nèi)部溫度保持在82。C(+/-3°C)。水加入完成后，停止加熱，歷經(jīng)不少于4小時(shí)的時(shí)間使反應(yīng)混合物冷卻至內(nèi)部溫度為20-25°C。然后在20-30。C的內(nèi)部溫度下將反應(yīng)混合物另外攪拌l小時(shí)。然后將所得混合物過濾，將燒瓶和濾餅用水(lxlL)、50。/。乙醇(lxlL)和95o/o乙醇(lxlL)洗滌。將金黃色固態(tài)產(chǎn)物置于干燥盤中，在真空干燥箱中于約50。C將其真空干燥至恒重，得到546g(產(chǎn)率99。/0)。實(shí)施例2[6-(4-甲基-哌"秦-1-基)-111-苯并咪唑-2-基-乙酸乙酯的合成方法A將5000mL、4頸燒瓶裝配上攪拌器、溫度計(jì)、冷凝器和氣體入口/出口。向裝配的燒瓶中加入265.^(1.l:2mo1.l.O當(dāng)量)5-(4-甲基-哌"秦-1-基)-2-硝基苯胺和2125mL200標(biāo)準(zhǔn)強(qiáng)度的EtOH。將所得溶液用]\2清洗15分鐘。然后，加入20.0g5%Pd/C(50%H20w/w)。于40-50。C(內(nèi)部溫度)將反應(yīng)物劇烈攪拌，同時(shí)將H2通入該混合物中。通過朋1^每小時(shí)監(jiān)測一次反應(yīng)物中5-(4-甲基-哌溱-l-基)-2-硝基苯胺是否消失。一般的反應(yīng)時(shí)間為6小時(shí)。在所有的5-(4-甲基-哌"秦-l-基)-2-硝基苯胺已經(jīng)從反應(yīng)物中消失后，將溶液用]\2清洗15分鐘。然后，加入440.(^(2.2511101)作為固體的3-乙|^-3-亞氨基丙酸乙酯鹽酸鹽。于40-50。C(內(nèi)部溫度)將反應(yīng)物攪拌直至反應(yīng)完全。通過HPLC跟蹤監(jiān)測反應(yīng)物中二氨基化合物是否消失。一般的反應(yīng)時(shí)間為l-2小時(shí)。反應(yīng)完全后，將其冷卻至室溫，通過硅藻土過濾材料的墊過濾。將珪藻土過濾材料用無水EtOH(2x250mL)洗滌，在減壓下將濾液濃縮，得到稠厚的褐色/橙色油狀物。將所得油狀物加入到850mL0.37%HC1溶液中。然后一次加入固體NaOH(25g)，形成沉淀物。將所得混合物攪拌l小時(shí)，然后過濾。將固體用1120(2x400mL)洗滌，在真空干燥箱中于50。C干燥，得到251.7g(74.1。/。)淡黃色粉末狀的[6-(4-甲基-P底"秦-l-基)-lH-苯并咪唑-2-基-乙酸乙酯。方法B將5000mL、4頸套層燒瓶裝配上機(jī)械攪拌器、冷凝器、溫度計(jì)探針、氣體入口和油鼓泡器(bubbler)。向裝配的燒瓶中加入300g(1.27mol)5-(4畫曱基-p底，秦-l-基)-2-硝基苯胺和2400mL200標(biāo)準(zhǔn)強(qiáng)度的EtOH(反應(yīng)可以并且已經(jīng)用95。/。乙醇進(jìn)行，對于該反應(yīng)不是必須使用200標(biāo)準(zhǔn)強(qiáng)度的乙醇)。將所得溶液攪拌，用N2清洗15分鐘。然后，將22.7g5%Pd/C(50%H20w/w)加入到該反應(yīng)燒瓶中。將反應(yīng)容器用N2清洗15分鐘。用N2清洗后，通過使H2保持緩慢而恒定的流速通過燒瓶，而將反應(yīng)容器用H2清洗。于45-55。C(內(nèi)部溫度)將反應(yīng)物攪拌，同時(shí)將H2通入混合物直至如通過HPLC測得5-(4-甲基-哌溱-;U基)-2-硝基苯胺被消耗完全。一般的反應(yīng)時(shí)間為6小時(shí)。在所有的5-(4-甲基-P底"秦-l-基)-2-硝基苯胺已經(jīng)從反應(yīng)物中消失后，將溶液用N2清洗15分鐘。二胺中間體對空氣敏感，因此小心避免與空氣接觸。歷經(jīng)約30分鐘將500g(2.56mol)3-乙氧基-3-亞氨基丙酸乙酯鹽酸鹽加入到該反應(yīng)混合物中。于45-55。C(內(nèi)部溫度)在N2下將反應(yīng)物攪拌直至如通過HPLC測得二胺被消耗完全。一般的反應(yīng)時(shí)間為約2小時(shí)。反應(yīng)完全后，將反應(yīng)物通過硅藻土墊趁溫過濾。然后將反應(yīng)燒瓶和硅藻土用200標(biāo)準(zhǔn)強(qiáng)度的EtOH(3x285mL)洗滌。在5000mL燒瓶中合并濾液，在真空下除去約3300mL乙醇，得到橙色油狀物。將水(530mL)、然后將1MHCL(350mL)加入到所得油狀物中，將所得混合物攪拌。將所得溶液劇烈攪拌，同時(shí)在將內(nèi)部溫度保持在約25-30。C下歷經(jīng)約20分鐘加入30。/。NaOH(200mL)，期間使pH在9至10之間。將所得混懸液攪拌約4小時(shí)，同時(shí)內(nèi)部溫度保持在約20-25。C。將所得混合物過濾，將濾餅用H2O(3x300mL)洗滌。在真空干燥箱中于50'C將收集的固體真空干燥至恒重，得到345.9g(90.1%)淡黃色粉末狀的[6-(4-甲基-哌"秦-1-基)-111-苯并咪唑-2-基-乙酸乙酯。在供選的后處理操作中，合并濾液，在真空下除去乙醇直至至少約90%已經(jīng)被除去。然后將pH為中性的水加入到所得油狀物中，將溶液冷卻至約0。C。然后在迅速攪拌下緩慢加入20%NaOH水溶液，使pH達(dá)到9.2(用pH計(jì)讀數(shù))。然后按照上述的方法^1奪所得混合物過濾和干燥。這種供選的后處理^作得到了淺褐色至淺黃色產(chǎn)物，其產(chǎn)率高達(dá)97%。實(shí)施例3減少[6-(4-甲基-哌"秦-1-基)-111-苯并咪唑-2-基-乙酸乙酯的水含量的方法將先前已經(jīng)進(jìn)行后處理并干燥至水含量為約8-9%1120的[6-(4-曱基-哌噪-1-基)-111-苯并咪唑-2-基1-乙酸乙酯(120.7克)置于2000mL圓底燒瓶中，將其溶解于無水乙醇(500mL)中。使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器在加熱下將該琥珀色溶液濃縮至稠厚的油狀物，直至除去所有溶劑。將該操作重復(fù)2次。將由此得到的稠厚的油狀物放置在燒瓶中，置于真空干燥箱中，于50。C加熱過夜。KarlFisher分析結(jié)果表明水含量為5.25。/。。通過該方法所得的降低的水含量使實(shí)施例4的操作中的產(chǎn)率增加。其它溶劑如甲苯和THF可以代替乙醇用于該干燥處理。實(shí)施例44-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基-哌溱-l-基)-lH-苯并咪唑-2-基I-lH-喹啉-2-酮的合成方法A在裝配有冷凝器、機(jī)械攪拌器、溫度計(jì)探針并用氬氣清洗的5000mL燒瓶中，將[6-(4-甲基-哌嗪-l-基)-lH-苯并咪唑-2-基-乙酸乙酯(250g,820mmol)(按照上述方法用乙醇干燥)溶解于THF(3S00mL)中。將2-氨基-6-氟-節(jié)腈(95.3&700mmol)加入到該溶液中，將內(nèi)部溫度升至40。C。當(dāng)所有固體已經(jīng)溶解并且溶液溫度已經(jīng)達(dá)到40。C時(shí)，歷經(jīng)5分鐘加入固體KHMDS(376.2g，1890mmo1)。當(dāng)鉀堿加入完成時(shí)，得到非均質(zhì)的黃色溶液，內(nèi)部溫度已經(jīng)升至62'C。60分鐘后，內(nèi)部溫度降回至40。C，通過HPLC測得反應(yīng)完全(沒有原料或未環(huán)化的中間體存在)。然后通過將其倒入1120(6000mL)中并將所得混合物攪拌直至其已經(jīng)達(dá)到室溫而將稠厚的反應(yīng)混合物淬滅。然后將混合物過濾，將濾墊用水(1000mL2x)洗滌。將鮮黃色固體置于干燥盤中，在真空干燥箱中于50。C干燥過夜，得到155.3經(jīng)(47.9%)所需的4誦氨基國5漏氟-3-[6-(4誦甲基國口底溱-1-基)畫^1-苯并咪唑-2畫基-111-會(huì)啉誦2-酮。方法B將5000mL、4頸套層燒瓶裝配上蒸餾器、溫度探針、^氣入口、加料漏斗和機(jī)械攪拌器。將[6-(4-甲基-派，秦-l-基)-lH-苯并咪唑-2-基-乙酸乙酯(173.0g，570inmol)加入到該反應(yīng)器中，將該反應(yīng)器用N2清洗15分鐘。然后在攪拌下將無水THF(2600mL)加入到該燒瓶中。在所有固體已經(jīng)溶解后，通過蒸餾(真空或大氣壓，較高的溫度有助于除去水)除去溶劑，必要時(shí)可加熱。在1000mL溶劑已經(jīng)被除去后，停止蒸餾，將反應(yīng)物用N2清洗。然后將1000mL無水THF加入到該反應(yīng)容器中，當(dāng)所有固體溶解時(shí)，再次進(jìn)行蒸餾(真空或大氣壓)直至另外1000mL溶劑已經(jīng)4皮除去。將加入無水THF和除去溶劑的過程重復(fù)至少4次(在第4次蒸餾時(shí)，60%溶劑被除去，而不是如在前3次蒸餾中的僅40%),然后取出lmL樣品用于KarlFischer分析，以測定水含量。如果分析表明樣品含有少于0.20%的水，則按照下一段中所述的方法繼續(xù)反應(yīng)。但是，如果分析表明樣品含有多于0.20%的水，則繼續(xù)上述的干燥過程直至水含量低于0.20%。在使用上一段中所述的方法使水含量低于或等于約0.20。/。后，將蒸餾器用回流冷凝器替換，向反應(yīng)物中加入2-氨基-6-氟-節(jié)腈(66.2&470mmo1)(在一些方法中4吏用0.95當(dāng)量)。然后將反應(yīng)物加熱至內(nèi)部溫度為38-42。C。當(dāng)內(nèi)部溫度已經(jīng)達(dá)到38-42。C時(shí)，歷經(jīng)5分鐘通過加料漏斗將KHMDS溶液(1313g，1.32mol，20%KHMDS,在THF中)加入到該反應(yīng)物中，在加入過程中將內(nèi)部溫度保持在約38-50。C。當(dāng)鉀堿加入完成時(shí)，將反應(yīng)物攪拌3.5至4.5小時(shí)(在一些實(shí)施例中，將其攪拌30至60分鐘，在該時(shí)間內(nèi)反應(yīng)可以完全)，同時(shí)內(nèi)部溫度保持在38-42。C。然后取出反應(yīng)物樣品，通過HPLC進(jìn)行分析。如果反應(yīng)不完全，則歷經(jīng)5分鐘將另外的KHMDS溶液加入到燒瓶中，于38-42。C將反應(yīng)物攪拌45-60分鐘(如下確定KHMDS溶液的加入量如果IPC比〈3.50,則加入125mL;如果10.0^IPC比^3.50,則加入56mL;如果20.0^IPC比^10,則加入30mL)。1<:比等于對應(yīng)于4-#^畫5-氟-3國[6-(4-甲基-腺"秦-l-基)-lH-苯并咪唑-2-基-lH-喹啉-2-酮)的面積除以對應(yīng)于未環(huán)化中間體的面積。反應(yīng)完全(IPC比〉20)后，將反應(yīng)器冷卻至內(nèi)部溫度為25-30°C,歷經(jīng)15分鐘將水(350mL)加入到該反應(yīng)器中，同時(shí)內(nèi)部溫度保持在25-35。C(在另一種供選方法中，反應(yīng)在40。C下進(jìn)行，在5分鐘內(nèi)加入水。較快的淬滅可降低隨時(shí)間形成的雜質(zhì)的量)。然后將回流冷凝器用蒸餾器替換，通過蒸餾(真空或大氣壓)除去溶劑，必要時(shí)可加熱。在1500mL溶劑已經(jīng)萍皮除去后，停止蒸餾，將反應(yīng)物用N;j清洗。然后將水(1660mL)加入到該反應(yīng)燒瓶中，同時(shí)內(nèi)部溫度保持在20-30r:。然后于20-30。C將該反應(yīng)混合物攪拌30分鐘，然后將其冷卻至內(nèi)部溫度為5-10。C，然后攪拌l小時(shí)。將所得混懸液過濾，將燒瓶和濾餅用水(3x650mL)洗滌。在真空干燥箱中于50。C將由此得到的固體真空干燥至恒重，得到103.9g(產(chǎn)率42.6。/。)黃色粉末狀的4-氨基-5-氟-3-[6-(4-曱基-哌嗪-l-基)-lH-苯并咪唑-2-基]-lH-喹啉-2-酮。方法C將[6-(4-甲基-哌噪-l-基)-lH-苯并咪唑-2-基l-乙酸乙酯(608g，2.01mol)(干燥品)和2-氨基-6-氟-芐腈(274g，2.01mol)加入到裝在加熱套上并裝配有冷凝器、機(jī)械攪拌器、氣體入口和溫度探針的4頸12L燒瓶中。將該反應(yīng)容器用N2清洗，將甲苯(7.7L)加入到該反應(yīng)混合物中，同時(shí)將其攪拌。將該反應(yīng)容器再次用N2清洗，并保持在N2下。將該混合物的內(nèi)部溫度升高直至溫度達(dá)到63。C(+/-3°C)。將該混合物的內(nèi)部溫度保持在63。C(+/-3°C)，同時(shí)在減壓(380+A10托(toir)，蒸餾頭t-40。C(+/-10°(:))下將約2.61^甲苯從燒瓶中蒸溜出(使用KarlFischer分析檢測混合物中的水含量。如果水含量高于0.03%，則另外加入2.6L曱苯，重復(fù)蒸溜。重復(fù)該過程直至水含量低于0.03%)。在水含量低于0.03%后，停止加熱，在N2下將反應(yīng)物冷卻至內(nèi)部溫度為17-19°C。然后在N2下以使該反應(yīng)物的內(nèi)部溫度保持在20。C以下的速度將在THF中的叔丁醇鉀(20。/。，在THF中；3.39kg，6.04moles叔丁醇鉀)加入到該反應(yīng)物中。叔丁醇鉀加入完成后，在低于20。C的內(nèi)部溫度下將反應(yīng)物攪拌30分鐘。然后將溫度升至25'C，將反應(yīng)物攪拌至少l小時(shí)。然后將溫度升至30'C,將反應(yīng)物攪拌至少30分鐘。然后使用HPLC檢測原料的消耗以監(jiān)測反應(yīng)(一般在2-3小時(shí)內(nèi)，兩種原料均被消耗完全(面積％HPLC小于0.5%))。如果2小時(shí)后反應(yīng)不完全，則另外每次加入0.05當(dāng)量叔丁醇鉀，直至HPLC表明反應(yīng)完全時(shí)該過程方完成。反應(yīng)完全后，將650mL水加入到該攪拌的反應(yīng)混合物中。然后將反應(yīng)物溫?zé)嶂羶?nèi)部溫度為50。C,在減壓下將THF從反應(yīng)混合物中蒸餾掉(約3L體積)。然后使用加料漏斗將水(2.6L)逐滴加入到反應(yīng)混合物中。然后將該混合物冷卻至室溫，攪拌至少l小時(shí)。然后將該混合物過濾，將濾餅用水(L2L)、70。/o乙醇(1.2L)和95。/o乙醇(1.2L)洗滌。將鮮黃色固體置于干燥盤中，在真空干燥箱中于50。C干燥至恒重，得到674g(85.4%)所需的4-氨基-5-氟-3-[6-(4-曱基-P底"秦-l-基)-lH-苯并咪哇-2-基-lH-喹啉-2-酮。實(shí)施例54-氨基-5-氟-3-l6-(4-曱基-P底，秦-l-基)-lH-苯并咪唑-2-基-lH-喹啉-2-酮的純化將裝配有冷凝器、溫度探針、N2氣入口和機(jī)械攪拌器的3000mL4頸燒瓶置于加熱套中。然后向該燒瓶中加入4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基-哌"秦-1-基)-lH-苯并咪唑-2-基卜lH-奮啉-2-酮(101.0g，0.26mol)，將黃色固體混懸于95V。乙醇(1000mL)中，攪拌。在一些情況下，使用8:1的溶劑比。然后在攪拌下歷經(jīng)約1小時(shí)將該混懸液加熱至輕微回流(溫度為約76。C)。然后將該反應(yīng)物攪拌45-75分鐘，同時(shí)回流。這時(shí)，從燒瓶移去熱源，使混懸液冷卻至溫度為25-30。C。然后將該混懸液過濾，將濾墊用水(2x500mL)洗滌。然后將黃色固體置于干燥盤中，在真空干燥箱中于50'C干燥至恒重(一般為16小時(shí))，得到97.2g(96.2%)黃色粉末狀的純化產(chǎn)物。實(shí)施例64-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基-派，秦-l-基)-lH-苯并咪唑-2-基l-lH-喹啉-2-酮乳酸鹽的制備將3000mL、4頸套層燒瓶裝配上冷凝器、溫度探針、Nz氣入口和機(jī)械攪拌器。將該反應(yīng)容器用N2清洗至少15分鐘，然后加入4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基-哌嗪-l-基)-lH-苯并咪唑-2-基]-lH-喹啉-2-酮(484g，1.23mol)。制備D，L-乳酸(243,3g，1.72mol單體-見下一段)、水(339mL)和乙醇(1211mL)的溶液，然后將其加入到反應(yīng)燒瓶中。以中等速度開始攪拌，將反應(yīng)物加熱至內(nèi)部溫度為68-72。C。于68-72。C將反應(yīng)物的內(nèi)部溫度保持15-45分鐘，然后停止加熱。將所得混合物通過10-20微米玻璃料(frit)過濾，在12L燒瓶中收集濾液。將該12L燒瓶裝配上內(nèi)部溫度探針、回流冷凝器、加料漏斗、氣體入口出口和頂部攪拌器。然后將濾液以中等速度攪拌，加熱回流(內(nèi)部溫度為約78。C)。在^f呆持輕^:回流的同時(shí)，歷經(jīng)約20分鐘將乙醇(3,596mL)加入到該燒瓶中。然后在15-25分鐘內(nèi)將該反應(yīng)燒瓶冷卻至內(nèi)部溫度范圍為約64-70'C，將該溫度保持約30分鐘。檢查反應(yīng)器內(nèi)是否有晶體。如果沒有晶體，則將4-氨基-5國氟扁3-[6畫(4畫甲基匪派"秦-l-基)嗎lH-苯并咪唑-2畫基HH畫喹啉-2-酮乳酸鹽的晶體(484mg，O.lmole。/。)加入到燒瓶中，于64-70。C將該反應(yīng)物攪拌30分鐘，然后再次檢查燒瓶內(nèi)是否有晶體。一:s^在晶體，則將攪拌降低至低速，于64-70"C將該反應(yīng)物另外攪拌卯分鐘。然后歷經(jīng)約2小時(shí)將該反應(yīng)物冷卻至約OTC，將所得混合物通過25-50樣iL米燒結(jié)(fritted)濾器過濾。將反應(yīng)器用乙醇(484mL)洗滌，攪拌直至內(nèi)部溫度為約O'C。使用冷乙醇洗滌濾餅，將該步驟重復(fù)2次。在真空干燥箱中于50C將收集的固體真空干燥至恒重，得到510.7g(85.7%)晶狀的黃色4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基-哌"秦-1-基)-111-苯并咪唑-2-基1-111-會(huì)啉-2-酮乳酸鹽。在過濾過程中一般使用橡皮障或惰性條件。雖然干燥的固體沒有顯示出非常強(qiáng)的吸濕性，但是濕濾餅易于吸水而變粘。注意避免濕濾餅與大氣長時(shí)間接觸。市售的乳酸通常含有約8-12%w/w的水，并且除了單體乳酸外還含有二聚體和三聚體。乳酸二聚體與單體的摩爾比通常為約1.0:4.7。商品級乳酸可以用于前段中所述的方法，因?yàn)閱稳樗猁}優(yōu)先從反應(yīng)混合物中沉淀出。代謝物的鑒別4-氨基-5-氟-3-6-(4-甲基-哌溱-l-基)-lH-苯并咪唑-2-基-lH-喹啉-2-酮(化合物l)的兩種代謝物已經(jīng)在來自如本文引用的文獻(xiàn)中所述的2周毒理學(xué)研究的匯合(pooled)大鼠血漿中被鑒別和表征。兩種被鑒別的代謝物是以下所示的P底，秦N-氧化物化合物(化合物2)和N-脫曱基化化合物(化合物3)。化合物2<formula>formulaseeoriginaldocumentpage58</formula>化合物3<formula>formulaseeoriginaldocumentpage58</formula>化合物l-3的ICso使用以下對化合物l-3提出的方法測定了多種蛋白酪氨酸激酶的激酶活性，從而提供了下表所示的ICso值。表.化合物l-3的ICso<table>tableseeoriginaldocumentpage59</column></row><table>4-氨基-5-氟-3-6-(4-甲基-4-氧化哌嗪-1-基)-111-笨并咪唑-2-基]喹啉-2(111)-酮(化合物2)和4-氨基-5-氟-3-(6-哌溱-1-基-111-苯并咪唑-2-基)喹啉-2(111)-酮(化合物3)的合成為了證實(shí)鑒別的化合物1的代謝物的結(jié)構(gòu)，獨(dú)立地合成了代謝物。按照以下流程圖中所示的方法合成了化合物2(化合物1的N-氧化物代謝物)。將化合物l在乙醇、二曱基乙酰胺和過氧化氫的混合物中加熱。反應(yīng)完成后，過濾分離化合物2，用乙醇洗滌。如果需要的話，可以通過柱色譜法將產(chǎn)物進(jìn)一步純化。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage59</formula>按照以下流程圖中所示的方法合成了化合物3(化合物1的N-脫甲基化代謝物)。將5-氯-2-硝基苯胺用p底溱處理，得到4,隨后用丁氧羰基(Boc)基團(tuán)將其保護(hù)，得到5。將硝基還原，然后與3-乙氧基-3-亞氨基丙酸乙酯縮合，得到6。使用六曱基二硅基胺基鉀作為堿，使6與6-氟氨基苯曱腈縮合，得到7。將7粗品用HC1水溶液處理，純化后得到所需的黃色/褐色固態(tài)代謝物。測定方法絲氨酸/蘇氨酸激酶通過提供用于磷酸化的ATP和含有絲氨酸或蘇氨酸氨基酸殘基的適宜的肽或蛋白以及測定磷酸酯部分向絲氨酸或蘇氨酸殘基的轉(zhuǎn)移，從而測定了多種蛋白絲氨酸/蘇氨酸激酶的激酶活性。以下文獻(xiàn)公開了多種式i、n和ni的化合物的合成和測定活性美國專利6，605，617、公開的美國專利申請2004/0092535、于2004年11月5日提交美國專利申請10/983，174和公開的美國專利申請2004/0220196，這些文獻(xiàn)全部整體引入本文作為參考并用于所有目的，如同本文具體闡述了其一樣。使用桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)(InVitrogen)在Sf9昆蟲細(xì)胞中表達(dá)含有GSK-3、RSK-2、PAR-1、NEK-2和CHK1酶的激酶結(jié)構(gòu)域的重組蛋白，通過Glu抗體相互作用(對于Glu-表位標(biāo)記的構(gòu)建物)或通過金屬離子色鐠法(對于His6(SEQIDNO:l)標(biāo)記的構(gòu)建物)對其進(jìn)行純化。使用桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)將Cdc2(GST融合構(gòu)建物)和細(xì)胞周期蛋白B在Sf9昆蟲細(xì)胞中進(jìn)行共表達(dá)。重組的活性Cdk2/細(xì)胞周期蛋白A可市售得到，其購自UpstateBiotechnology。市售得到了用于測定的純化的Cdc2酶，其可以購自NewEnglandBioLabs。對于各測定，將受試化合物在DMSO中進(jìn)行系列稀釋，然后與適宜的激酶反應(yīng)緩沖液+5-10nM33P"標(biāo)記的ATP混合。加入激酶蛋白和適宜的生物素化肽底物，產(chǎn)生150pL的終體積。于室溫將反應(yīng)物孵育3-4小時(shí)，然后通過轉(zhuǎn)移到含有100fiL終止反應(yīng)緩沖液的鏈霉抗生物素覆蓋的白色微量滴定板(ThermoLabsystems)中使其終止。終止反應(yīng)緩沖液包括50mM未標(biāo)記的ATP和30mMEDTA。孵育1小時(shí)后，將鏈霉抗生物素板用PBS洗滌，向每孔中加入200nLMicroscint20閃爍液。將板密封，使用TopCount計(jì)數(shù)。采用非線性回歸、使用XLFit數(shù)據(jù)分析軟件計(jì)算了50%抑制的各化合物的濃度(ICso)。反應(yīng)緩沖液含有30mMTris-HCl2pH7.5、10mMMgCl2、2mMDTT、4mMEDTA、25mM卩-磷酸甘油、5mMMnCl2、0.01%BSA7PBS、0.5pM肽底物和l)iM未標(biāo)記的ATP。使用了27nM的GSK-3酶、5nM的CHKl、lnM的Cdc2、5nM的Cdk2和0.044單位/mL的Rsk2。對于GSK-3測定，使用了生物素-CREB肽(生物素-SGSGKRREILSRRP(pS)YR-NH2(SEQIDNO:4))。對于CHK1測定，使用了生物素-Cdc25c肽(生物素-[AHXlSGSGSGLYRSPSMPENLNRPR[CONH2(SEQIDNO:5))。對于Cdc2和Cdk2測定，使用了生物素-組蛋白Hl肽(lc生物素GGGGPKTPKKAKKL[CONH2(SEQIDNO:6))。在Rsk2測定中，使用了生物素-p70肽、15mMMgCl2、lmMDTT、5mMEDTA、2.7nMPKC抑制劑肽和2.7pMPKA抑制劑肽。通過提供用于磷酸化的ATP和含有酪氨酸氨基酸殘基的適宜的肽或蛋白以及測定磷酸酯部分向酪氨酸殘基的轉(zhuǎn)移，從而測定了多種蛋白酪氨酸激酶的激酶活性。使用桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)(InVitrogen)在Sf9昆蟲細(xì)胞中表達(dá)了對應(yīng)于FLT-1(VEGFR1)、VEGFR2、VEGFR3、Tie-2、PDGFRa、PDGFRp和FGFRl受體的胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域的重組蛋白，可以通過Glu抗體相互作用(對于Glu-表位標(biāo)記的構(gòu)建物)或通過金屬離子色譜法(對于His6(SEQIDNO:l)標(biāo)記的構(gòu)建物)對其進(jìn)行純化。對于各測定，將受試化合物在DMSO中進(jìn)行系列稀釋，然后與適宜的激酶反酶蛋白和適宜的生物素化肽底物，產(chǎn)生50-100nL的終體積，于室溫將反應(yīng)物孵育l-3小時(shí)，然后通過加入25-50^iL45mMEDTA、50mMH印espH7.5使其終止。將終止的反應(yīng)混合物(75inL)轉(zhuǎn)移到鏈霉抗生物素覆蓋的微量滴定板(BoehringerMaimheim)中，孵育1小時(shí)。用DELFIA時(shí)間分辨熒光系統(tǒng)(Wallac或PEBiosciences)、使用銪標(biāo)記的抗磷酸酪氨酸抗體PT66(進(jìn)行了如下更改DELFIA測定緩沖液補(bǔ)充有l(wèi)mMMgCb以用于稀釋抗體)測定了磷酸化肽產(chǎn)物。在Wallac1232DELFIA焚光計(jì)或PEVictorII多重信號讀數(shù)器上讀取時(shí)間分辨熒光。采用非線性回歸、使用XLFit數(shù)據(jù)分析軟件計(jì)算了50%抑制的各化合物的濃度(ICso)。在50mMHepespH7.0、2mMMgCl2、10mMMnCl2、lmMNaF、lmMDTT、lmg/mLBSA、2pMATP和0.20-0.50iiM相應(yīng)的生物素化肽底物中測定了FLT-1、VEGFR2、VEGFR3、FGFR3、Tie-2和FGFR1激酶。分別以0.1ng/mL、0.05pg/mL或0.1^ig/mL加入FLT-l、VEGFR2、VEGFR3、Tie-2和FGFR1激酶。對于PDGFR激酶測定，除了將ATP和肽底物的濃度替換為1.4pMATP和0.25pM生物素-GGLFDDPSYVNVQNL-NH2(SEQIDNO:2)肽底物外，使用了具有與上述相同的緩沖液條件的120/ig/mL酶。重組和活性酪氨酸激酶Fyn和Lck可市售得到，其購自UpstateBiotechnology。對于各測定，將受試化合物在DMSO中進(jìn)行系列稀釋，然后與適宜的激酶反應(yīng)緩沖液+10nM33P標(biāo)記的ATP混合。加入激酶蛋白和適宜的生物素化肽底物，產(chǎn)生150pL的終體積。于室溫將反應(yīng)物孵育3-4小時(shí)，然后通過轉(zhuǎn)移到含有100iiL終止反應(yīng)緩沖液的鏈霉抗生物素覆蓋的白色微量滴定板(ThermoLabsystems)中使其終止，終止反應(yīng)緩沖液包括100mMEDTA和50faM未標(biāo)記的ATP。孵育l小時(shí)后，將鏈霉抗生物素板用PBS洗滌，向每孔中加入200iiLMicroscint20閃爍液。將板密封，使用TopCount計(jì)數(shù)。采用非線性回歸、使用XLFit數(shù)據(jù)分析軟件計(jì)算了50。/o抑制的各化合物的濃度(ICso)。用于Fyn、Lck和c-ABL的激酶反應(yīng)緩沖液含有50mMTris-HClpH7.5、15mMMgCl2、30mMMnCl2、2mMDTT、2mMEDTA、25mM卩-磷酸甘油、0.01%BSA/PBS、0.5iLiM適宜的肽底物(用于Fyn和Lck的生物素化Src肽底物生物素-GGGGKVEKIGEGTYGVVYK-NH2(SEQIDNO:3))、lpM未標(biāo)記的ATP和lnM激酶。通過提供用于磷酸化的ATP和含有酪氨酸氨基酸殘基的肽或蛋白以及測定磷酸酯部分向酪氨酸殘基的轉(zhuǎn)移，從而測定了c-Kit和FLT-3的激酶活性。購得對應(yīng)于c-Kit和FLT-3受體的胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域的重組蛋白(Proquinase)。對于測定，將示例性化合物、例如4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌溱-l-基)-lH-苯并咪唑-2-基喹啉-2(lH)-酮在DMSO中稀釋，然后與下述的激酶反應(yīng)緩沖液+ATP混合。加入激酶蛋白(c-Kit或FLT-3)和生物素化肽底物(生物素-GGLFDDPSYVNVQNL-NH2(SEQIDNO:2))，產(chǎn)生100pL的終體積。于室溫將這些反應(yīng)物孵育2小時(shí)，然后通過加入50^L45mMEDTA、50mMHEPESpH7.5使其終止。將終止的反應(yīng)混合物(75^iL)轉(zhuǎn)移到鏈霉抗生物素覆蓋的孩i:量滴定板(BoehringerMaimhdm)中，孵育1小時(shí)。用DELPHIA時(shí)間分辨熒光系統(tǒng)(Wallac或PEBiosciences),4吏用銪標(biāo)記的抗磷酸酪氨酸抗體PT66(進(jìn)行了如下更改DELFIA測定緩沖液補(bǔ)充有l(wèi)mMMgCl2以用于稀釋抗體)測定了磷酸化肽產(chǎn)物。在Wallac1232DELFIA熒光計(jì)或PEVictorII多重信號讀數(shù)器上測定了時(shí)間分辨焚光值。采用非線性回歸、使用XLFit數(shù)據(jù)分析軟件計(jì)算了50%抑制的各化合物的濃度(ICso)。在50mMHepespH7.5、lmMNaF、2mMMgCl2、lOmMMnCl2和lmg/mLBSA、8|nMATP和1jiM相應(yīng)的生物素化肽底物(生物素-GGLFDDPSYVNVQNL-NH2(SEQIDNO:2))中測定了FLT-3和c-Kit激酶。以2nM測定了FLT-3和c-Kit激酶的濃度。4-氨基-5-氟-3-6-(4-曱基哌嗪-l-基)-lH-苯并咪唑-2-基l喹啉-2(lHV酮在臨床前多發(fā)性骨髓瘤模型中的效能的實(shí)時(shí)和全面成像評價(jià)多發(fā)性骨髓瘤(MM)為特征是造血骨髓中的漿細(xì)胞克隆擴(kuò)充的B-細(xì)胞瘤，盡管采用了常規(guī)的高劑量化學(xué)治療，但是由于內(nèi)在的和后天獲得的耐藥性的發(fā)展，其仍然是致命的血液惡性病。已經(jīng)表明，其中MM細(xì)胞優(yōu)先歸巢和生長的骨髓微環(huán)境在發(fā)展MM對常規(guī)和新的治療的耐藥性方面起著決定性作用。因此，不僅靶向于MM細(xì)胞而且還靶向于MM細(xì)胞-骨髓微環(huán)境相互作用的分子靶向物質(zhì)為治療MM提供了可能的機(jī)會(huì)。在理解MM的分子病理學(xué)方面的近期進(jìn)展已經(jīng)為治療這種疾病提供了新的治療靼標(biāo)。異位表達(dá)和失控的FGFR-3在約15。/。由t(4;14)染色體易位引起的MM患者中發(fā)生并且可導(dǎo)致顯著的臨床預(yù)后不良，其已經(jīng)成為MM的引人注目的治療乾標(biāo)。4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-l-基)-lH-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(lH)-酮(化合物l)是耙向于包括VEGFR-2和PDGFR(在激酶測定中，1<:50為20nM)以及FGFR-3(在激酶測定中，ICso為5nM)在內(nèi)的多種受體酪氨酸激酶的小分子抑制劑。已經(jīng)表明，4-氨基-5-氟-3-[6-(4-曱基哌嗪-l-基)-lH-苯并咪唑-2-基喹啉-2(lH)-酮可在體外在FGFR-3突變的MM細(xì)胞中抑制FGFR-3自磷酸化和細(xì)胞增殖(S.Trudel等人；Blood;印刷中)。為了評價(jià)4-氨基-5-氟_3-[6-(4-甲基哌嗪-l-基)-lH-苯并咪唑-2-基喹啉-2(lH)-酮的抗骨髓瘤效能，開發(fā)了體內(nèi)臨床前MM模型，其中，在尾靜脈內(nèi)注射表達(dá)用熒光素酶構(gòu)建物穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的突變FGFR-3(Y373C)的人KMS-ll-luc細(xì)胞后發(fā)展了多器官M(fèi)M損害。采用生物發(fā)光成像(BLI)非侵襲性地監(jiān)測了KMS-ll-lucMM肺瘤在體內(nèi)的生長和轉(zhuǎn)移。通過BLI、采用該模型，成功地獲得了轉(zhuǎn)移病灶的早期檢測和連續(xù)全面監(jiān)測生長。早在第26天時(shí)就發(fā)現(xiàn)幾乎所有注射了KMS-ll-luc腫瘤細(xì)胞的動(dòng)物發(fā)生了MM損害，其主要位于脊柱、顱骨和骨盆中，導(dǎo)致在該模型中頻繁發(fā)生麻痹。研究了4-氨基-5-氟-3-6-(4-曱基哌嗪-l-基)-lH-苯并咪唑-2-基l喹啉-2(lH)-酮在這種靜脈內(nèi)注射的體內(nèi)KMS-ll-lucMM模型中的抗骨髓瘤效能，發(fā)現(xiàn)以20mg/kg劑量(被證明體內(nèi)抑制KMS-ll-luc腫瘤中的ERK磷酸化的劑量)每天口服施用4-氨基-5-氟-3-[6-(4-曱基哌"秦-1-基)-lH-苯并咪唑-2-基1喹啉-2(1H)-酮顯箸抑制KMS-11腫瘤的生長，如通過連續(xù)BLI成像所檢測的那樣。此外，與載體處置相比，4-氨基_5-氟斗[6_(4-曱基哌溱-1-基)-111-苯并咪唑-2-基1喹啉-2(111)-酮的抗腫瘤生長活性還導(dǎo)致動(dòng)物存活率的顯著提高。這些研究為4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌喚-l-基)-lH-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(lH)-酮在MM患者中的臨床試驗(yàn)提供了進(jìn)一步的臨床前基礎(chǔ)，并且保證了4-氨基-5-氟-3-6-(4-曱基旅溱-l-基)-lH-苯并咪唑-2-基l喹啉-2(lH)-酮在與常規(guī)或其它分子靼向物質(zhì)的組合治療中在這種KMS-ll-luc體內(nèi)模型中的進(jìn)一步評價(jià)。方法從Jackson實(shí)驗(yàn)室(BarHarbor,ME)獲得一群共18只雌性(約8周齡)免疫缺陷的SCID-beige小鼠，將其在隔離設(shè)施中在無菌濾蓋籠中團(tuán)養(yǎng)，具有12小時(shí)光照/黑暗循環(huán)。所有實(shí)驗(yàn)均在國際實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理評估和認(rèn)證協(xié)會(huì)/rt&ra"ftVm"/)i人證的設(shè)施中并按照機(jī)構(gòu)動(dòng)物管理與使用委員會(huì)(/rtS故MftVma/4m'附fl/Owef/seG7附/m"ee)以及"實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理與使用才旨南，，/irC/seLfl6ora/ofjJw/wm&)(國家研究委員會(huì))的所有指導(dǎo)進(jìn)行。將帶有FGFR-3突變體(Y373C)的KMS-ll-lucMM細(xì)胞在Iscove氏培養(yǎng)基+10。/。FBS+L-谷氨酰胺中培養(yǎng)，在1:2至1:4的范圍內(nèi)每周傳過2次。通過靜脈內(nèi)注射入尾靜脈以10xl(^個(gè)細(xì)胞/100pLHBSS/小鼠將細(xì)胞植入。在細(xì)胞植入的當(dāng)天以3GY(3.2分鐘)照射小鼠。在注射KOM11-luc細(xì)胞后站小時(shí)，動(dòng)物開始接受20mg/kg4-氨基-5-氟-3-[6-(4-曱基哌溱-l-基)-lH-苯并咪唑-2-基喹啉-2(lH)-酮或載體(每組n-9)的每日口服處置。使用包括安裝在不漏光相機(jī)盒中的高敏感度冷(cooled)CCD照相機(jī)的IVIS成像系統(tǒng)(Xenogen)得到生物發(fā)光圖像(BLI)。在第8天和其后每周一次獲得如通過光子/秒定量的生物發(fā)光信號的圖像和測定。每周監(jiān)測兩次動(dòng)物體重，每天記錄臨床觀察。按照動(dòng)物管理規(guī)則和指南(fl附'附fl/carer化M/W/ora"m/g肌Wd7iay),如果小鼠麻痹或其生活質(zhì)量受到嚴(yán)重?fù)p害，則通過吸入C02處死這些小鼠。結(jié)果在將KMS-ll-Iuc細(xì)胞靜脈內(nèi)注射入SCID-beige小鼠后第8天，全身成像表明細(xì)胞生長的發(fā)展和可能的MM損害主要位于骨骼外區(qū)域，包括肺、肝和脾。在第41天和第48天之間，在大多數(shù)小鼠中清楚地觀察到了典型的彌漫性多骨骼損害、包括顱骨、骨盆和脊柱，如在圖1的BLI圖像中所看到的那樣，這與導(dǎo)致按照方案處死小鼠的后肢麻痹有關(guān)。在這種體內(nèi)才莫型中，在KMS-ll-luc中檢測了4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-l-基)-lH-苯并咪唑-:2-基喹啉-2(lH)-酮的抗骨髓瘤效能。在注射KMS-ll-luc細(xì)胞后48小時(shí)，小鼠開始以20mg/kg接受58的每天口服處置。按照每周基本方案在各動(dòng)物中對光子計(jì)數(shù)進(jìn)行了全面和連續(xù)的監(jiān)測。4-氨基-5-氟-3-[6-(4-曱基p底噪-l-基)-lH-苯并咪唑-2-基l喹啉-2(lH)-酮處置組中的平均光子計(jì)數(shù)被證明顯著低于載體處置組，如圖2所示。這可以通過比較來自用載體處置的注射了KMS-ll-luc的小鼠和用4-氨基-5-氟-3-6-(4-甲基哌噪-l-基)-lH-苯并咪唑-2-基喹啉-2(lH)-酮處置的注射了KMS-ll-luc的小鼠的全身BLI圖像而容易地觀察到，如圖3所示。與用載體處置的小鼠相比存活時(shí)間的顯著增加很好地反映了在用4-氨基_5-氟-3-6-(4-甲基哌嗪-l-基)-lH-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(lH)-酮處置的小鼠中光子計(jì)數(shù)的減少。在第91天，在用4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲_|^底溱-1-基)-lH-苯并咪唑-2-基j喹啉-2(lH)-酮處置的那些小鼠中，9只動(dòng)物中有5只仍然存活并具有全面健康的狀況。相比而言，在第50天左右，載體處置組中的大部分動(dòng)物被處死。此外，對于該研究的長期進(jìn)行，用4-氨基-5-氟一3一[6-(4-甲基哌嗪-l-基)-lH-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(lH)-酮處置的小鼠對這種處置的耐受良好。由于用4-氨基-5-氟-3-[6-(4-曱基派溱-l-基)-lH-苯并咪唑-2-基喹啉-2(lH)-酮處置的小鼠的存活時(shí)間有明顯提高，所以出于實(shí)際考慮，在第91天停止了研究。在公開的美國專利申請2004/0092535以及美國專利申請10/983，174、美國專利申請2004/0220196和美國專利6,605,617中提出了關(guān)于用4-氨基-5-氟-3-[6-(4-曱基哌溱-l-基)-lH-苯并咪唑-2-基l會(huì)啉-2(lH)-酮來抑制激酶、通常是抑制FGFR3和治療包括多發(fā)性骨髓瘤在內(nèi)的癌癥的多項(xiàng)研究。因此，這些文獻(xiàn)各自整體引入本文作為參考并用于所有目的，如同本文闡述了其全文一樣。4-氨基-5-氟-3-6-(4-甲基哌噢-l-基VlH-笨并咪唑-2-基l喹啉-2(lHV酮(化合物1)在人AML的實(shí)驗(yàn)?zāi)[瘤異種移植物模型中的活性4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基旅溱-l-基)-lH-苯并咪唑-2-基I喹啉-2(lH)-酉同《匕合物l)是新的口服有活性的多靶向小分子，其顯示出對抗參與內(nèi)皮和腫瘤細(xì)胞增殖的FLT3激酶以及ni、IV和V類RTKs的有效活性。考慮到FLT3突變在急性髓性白血病(AML)中的關(guān)聯(lián)，將化合物l對具有不同F(xiàn)LT3突變狀態(tài)的兩種人白血病細(xì)胞系(MV4;11FLT3ITD對比于RS4;11FLT3WT)進(jìn)行了測定?；衔?對抗MV4;11的抗增殖活性比對抗RS4;11的抗增殖活性高24倍，表明其可更有效地抑制組成性激活的FLT3.化合物1對MV4;11細(xì)胞中受體磷酸化和下游信號傳導(dǎo)(STAT5和ERK/MAPK)的劑量依賴性的調(diào)節(jié)證實(shí)了分子作用機(jī)制。在化合物l的生物學(xué)活性劑量時(shí)實(shí)現(xiàn)了MV4;ll腫瘤中pFLT3、pERK的靶調(diào)節(jié)。在皮下和BM移植物移入白血病異種移植物模型中證明了腫瘤消退和AML細(xì)胞從骨髓(BM)中根除。肺瘤響應(yīng)的特征為細(xì)胞增殖減少以及活性胱天蛋白酶-3和被切割的PARP的免疫組織化學(xué)染色呈陽性，其表明細(xì)胞死亡是通過細(xì)胞凋亡介導(dǎo)的。這些數(shù)據(jù)支持了化合物1在AML中的臨床評價(jià)。細(xì)胞系人MV4;11(FLT3ITD)和RS4;11(FLT3WT)白血病細(xì)胞由美國組織培養(yǎng)物寸呆藏中心(AmericanTissueCultureCollection)(Rockville，MD)24-26獲得。將MV4;11細(xì)胞在補(bǔ)充有10。/。胎牛血清(FBS，GibcoLifeTechnologies,Gaithersburg，MD)的Iscoves改良的Dulbecco培養(yǎng)基(IMBM)中培育，所述的培養(yǎng)基含有4mML-谷氨酰胺、5ng/ml粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF,R&DSystems,Minneapolis,MN)以及l(fā)Vo青霉素和鏈霉素。將RS4;11在含有10。/。FBS、lmM丙酮酸鈉和10mMHEPES(pH7.4)的RPMI-1640培養(yǎng)基中培育。將細(xì)胞作為混懸培養(yǎng)物進(jìn)行培育，在37。C和5%0)2的潮濕氛圍中維持。激酶測定在8jnMATP和化合物1的系列稀釋液的存在下，用2nMFLT3酶(UpstateBiotechnology,Charlottesville,VA)進(jìn)4亍了體外FLT3激酶測定。將終濃度為1]LiM的磷酸化肽底物與銪標(biāo)記的抗磷酸酪氨酸抗體(PT66)(PerkinElmerLifeSciences,Boston,MA)孵育。使用時(shí)間分辨熒光檢測銪。使用非線性回歸計(jì)算了ICso。增殖測定將細(xì)胞鋪在96孔微量滴定板中(10，000個(gè)細(xì)胞/孔)，加入化合物l的系列稀釋液。將RS4;ll細(xì)胞用FLT3配體(100ng/ml，R&DSystems,Minneapolis,MN)刺激。在孵育期(72小時(shí)，于37。C)結(jié)束時(shí)，通過MTS測定法(Promega，Madison，WI)測定了細(xì)胞成活力。使用非線性回歸計(jì)算了ECso值，并將其定義為經(jīng)處置的細(xì)胞對比于未經(jīng)處置的對照細(xì)胞的吸光度減少50%所需的濃度。免疫沉淀和蛋白質(zhì)印跡分析對于體外實(shí)驗(yàn)，將MV4;11和RS4;11細(xì)胞用化合物1處置3小時(shí)。與化合物1孵育后，將RS4;ll細(xì)胞用FLT3配體(100ng/mL)刺激15分鐘。與藥物孵育后，收集細(xì)胞，用水冷的PBS洗滌，用含有蛋白酶抑制劑(RocheMolecularBiochemicals，Indianapolis,IN)和褲酸酵4中制劑(Sigma，St.Louis，MO)的RIPA緩沖液(l。/oNonidetP畫40、0.5%去氧膽酸鈉、0.1%十二烷基硫酸鈉，在^磷酸鹽緩沖鹽水117.2中)溶解。對于體內(nèi)粑標(biāo)調(diào)節(jié)分析，將切除的腫瘤快速冷凍，粉碎，于-70'C保存，然后用150mMNaCl、1.5mMMgCl2、50mMHepespH7.5、10%甘油、1.0%TritonX100、lmMEGTA、50mMNaF、lmMNa3V04、2mMPefabloc(Roche)和完全蛋白酶抑制劑合劑(Roche)溶解。使用BCA測定法(Bio-Rad，Hercules,CA)測定了溶解產(chǎn)物的蛋白含量。用針對pERK的小鼠抗體(1:1000，CellSignaling,Beverly,MA)對pERK進(jìn)行蛋白質(zhì)印跡分析，于4。C孵育過夜。通過用抗總ERK的抗體(CellSignaling)再次探測而評價(jià)了總ERK水平。然后于室溫將膜與1:5000辣才艮過氧化物酶結(jié)合的抗兔IgG(JacksonImmunoresearch，WestGrove,PA)孵育1小時(shí)。對于檢測FLT3的免疫沉淀，于4。C將等量的蛋白(對于STAT5為500照；對于FLT3為1000將)與抗人FLT3或STAT5的抗體(SantaCruzBiotechnology,SantaCmz，CA)將育過夜，于4。C與蛋白A-瓊脂糖醉育2小時(shí)。通過用抗磷酸酪氨酸抗體(抗pFLT3抗體來自CellSignaling,抗pSTAT5抗體來自Upstate)探測而測定了FLT3或STAT5的磷酸化。使用增強(qiáng)型化學(xué)發(fā)光(ECL;AmershamBiosciences,Buckinghamshire,英格蘭)檢測了蛋白，在暴露于柯達(dá)膠片后進(jìn)行了顯像。進(jìn)行了掃描密度測定法以定量帶強(qiáng)度。為了^Hi負(fù)荷相同，將印跡剝下，用針對抗FLT3(SantaCruzBiotechnology)或抗STAT5(BDBiosciences)的抗體分別再次4冢測，以測定總FLT3或STAT5蛋白。將pFLT3、pERK或pSTAT5的量對總FLT3、ERK或STAT5蛋白水平進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化，并與載體或未經(jīng)處置的對照進(jìn)行了比較。流式細(xì)力包測定物1處置3小時(shí)。為了檢測pSTAT5，將細(xì)胞用1%甲醛固定，用90%冰冷的甲醇透化。將透化的細(xì)胞(0.5-lxl()6個(gè))與抗pSTAT5抗體(Ce11Signaling)孵育30分鐘。相同濃度的純化的兔IgG(Oncogene,SanDiego，CA)用作同型對照。二級抗體為結(jié)合有PE的羊F(ab，)2抗兔IgG(JacksonImmunoresearch)。于4。C在暗處保存樣品，然后使用FACScan流式細(xì)胞儀(BectonDickinson,SanJose,CA)進(jìn)行了分析。使用CellQuest軟件(BectonDickinson)對pSTAT5染色測定了平均焚光強(qiáng)度(MFI)，特異性MFI是與同型對照抗體的MFI的差值。為了處置來自小鼠MV4;11移植物移入模型的骨髓(BM)細(xì)胞，將股骨用冷鹽水清洗，將紅血細(xì)胞用FACS溶解緩沖液(BectoiiDickinson)溶解。通過用抗人HLA-A，B，C-FITC(對比于同型匹配的抗體-FITC對照)(BDPharmingen)染色測定了小鼠BM中人白血病細(xì)胞的移植物移入百分率。VEGFELISA將MV4;11細(xì)胞在含有10。/。FBS的具有各濃度(0-1^M)化合物1的培養(yǎng)基中培養(yǎng)48小時(shí)。離心后收集上層液，通過ELISA(R&DSystems,Minneapolis,MN)測定了VEGF水平。使用BIO-RAD蛋白測定法(Hercules，CA)測定了蛋白濃度，并將結(jié)果對蛋白濃度進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化。體內(nèi)效能研究雌性SCID-NOD小鼠(4誦6周齡，18-22g)由CharlesRiver(Wilmington,MA)獲得，在研究開始之前使其在無病原體的室中適應(yīng)l周。動(dòng)物隨意接受無菌的嚙齒動(dòng)物食物和水，并在具有12小時(shí)光照/黑暗循環(huán)的無菌濾蓋籠中圍養(yǎng)。所有實(shí)驗(yàn)均在國際實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理評估和認(rèn)證協(xié)會(huì)的指導(dǎo)下進(jìn)行。皮下模型將MV4;ll和RS4;ll細(xì)胞由SCID-NOD小鼠中的皮下(s.c)肺瘤進(jìn)行傳代。將細(xì)胞(5><106個(gè)細(xì)胞/小鼠)用50%Matrigel(BectonDickinson)重構(gòu)，將其皮下植入到SCID-NOD小鼠的右脅腹中。當(dāng)腫瘤為200-1000mn^時(shí)，按照具體的研究設(shè)計(jì)中描述的方法開始處置。將小鼠隨意分組(對于效能研究一般為10只小鼠/組，對于藥效動(dòng)力學(xué)(PD)研究一般為3-5只小鼠/組)。通過口服管飼以溶液施用化合物l。每周評價(jià)腫瘤體積和體重2-3次。使用下式將腫瘤的測徑器測定轉(zhuǎn)化為平均腫瘤體積1/2(長度x[寬度2)。將腫瘤生長抑制(TGI)百分率與用栽體處置的小鼠進(jìn)行比較。響應(yīng)率,皮定義為與處置開始時(shí)的腫瘤體積相比的完全響應(yīng)CR(沒有可觸摸的腫瘤)或部分響應(yīng)PR(縮減50-99%)。靜脈內(nèi)骨髓(BM)移植物移入模型將SCID-NOD小鼠照射(3Gy)，然后尾靜脈注射在0.2mL鹽水中的lxl07個(gè)MV4;11細(xì)胞。在細(xì)胞接種后3周，開始化合物l或載體處置。每天監(jiān)測小鼠，當(dāng)小鼠瀕死或有后肢活動(dòng)性喪失的早期征兆時(shí)，將其處以安樂死。將經(jīng)處置小鼠的生存期增加(ILS)計(jì)算為對比于經(jīng)載體處置的小鼠，中數(shù)存活時(shí)間(MST)的增加的百分率。體內(nèi)靶標(biāo)調(diào)節(jié)SCID-NOD小鼠(11=3只小鼠/組)中的MV4;ll皮下腫瘤達(dá)到300mm3,以10mg/kg口服施用包括載體或化合物l的處置，共計(jì)5天。為了表征化合物l的PD性質(zhì)，在化合物l給藥后的不同時(shí)間(N-3只小鼠/時(shí)間點(diǎn))收集腫瘤樣口口e免疫組織化學(xué)于室溫將切除的腫瘤置于10。/。中性緩沖福爾馬林中過夜，將其轉(zhuǎn)移到70%乙醇中，使用ThermoElectronExcelsior組織處理機(jī)(Pittsburgh，PA)進(jìn)行處理以用于石蠟包埋。將骨(股骨)樣品脫鈣(ProtocolTM，F(xiàn)isherDiagnostics,Middletown，VA)。將石蠟塊切成4pm厚度，置于帶正電荷的載玻片上。<吏用Discovery自動(dòng)3皮片才幾(VentanaMedicalSystems,Tucson,AZ)將組織染色。在加壓蒸汽器中將載玻片用枸櫞酸鹽緩沖液(pH6.0)處理，以重新獲得抗原用于Ki-67、pERK和PARP染色，通過Ventana試劑CCl重新獲得了胱天蛋白酶-3。所用的一級抗體為Ki-67(l:750稀釋，NovoCastraLaboratories,UK)、pERK(1:100稀釋，Biosource，Camarillo，CA)、抗人線粒體(1:200，Chemicon，Temecula，CA)、切割的胱天蛋白酶畫3(1:200，CellSignaling)和切割的PARP(1:100，Biosource)。二級抗體為1:100稀釋的羊抗兔F(ab')2生物素化抗體(JacksonImmunoResearch)。將載玻片用蘇木精復(fù)染，蓋上蓋玻片。還使用蘇木精和伊紅染色評價(jià)了一般組織形態(tài)學(xué)。統(tǒng)計(jì)分析<吏用MicrosoftExcel(Redmond,WA)進(jìn)4亍了線性回歸。4吏用Student氏t-檢驗(yàn)測定了兩個(gè)處置組間的統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性。使用單向方差分析法(ANOVA)進(jìn)行了多重比較，使用Student-NewmanKeul氏檢驗(yàn)(SigmaStat,SanRafael,CA)進(jìn)行了比較不同處置平均值的后檢驗(yàn)(post-tests)。對于存活研究，使用指數(shù)系列檢定測定了不同治療組對比載體組的存活曲線之間的顯著性(Prism，SanDiego,CA)。在研究結(jié)束時(shí)具有正常健康狀況的、被處死的小鼠被認(rèn)為是長期存活者，并在該分析中刪除。在p〈0.05時(shí)，差異被認(rèn)為在統(tǒng)計(jì)學(xué)上是顯著的。結(jié)果化合物l顯示出對FLT3激酶活性的有效抑制使用具有如上所述的純化酶的ATP-竟?fàn)幮越Y(jié)合測定法測定了化合物1對抗不同組RTKs的特異性。發(fā)現(xiàn)化合物l以納摩爾活性而高度有效地對抗FLT3(lnM)、對抗c醫(yī)KIT(2nM)、VEGFR1/2/3(10nM)、FGFR1/3(8nM)、PDGFRB(27nM)和CSF-lR(36nM)(見下表)。為了證實(shí)對抗III、IV和V類RTKs的選擇性，將化合物l對抗PI3K/Akt和MAPK(K)途徑中的其它激酶進(jìn)行了測定，發(fā)現(xiàn)化合物l具有可忽略不計(jì)的活性(ICso>10pM)(見下表)。表.4-氨基-5-氟-3-[6-(4-曱基派溱-1-基)-111-苯并咪唑-2-基]會(huì)啉-2(111)-酮對多種RTKs的活性<table>tableseeoriginaldocumentpage72</column></row><table>在如上所迷的純化酶和ATP的存在下，用化合物l的多種稀釋液進(jìn)行了用于制定上表的體外RTK測定。將磷酸化的肽底物(lnM)與銪標(biāo)記的抗磷酸特異性抗體孵育，使用時(shí)間分辨熒光檢測了銪?；衔?對MV4;11(FLT3ITD)細(xì)胞的有效的抗增殖作用為了確定FLT3的抑制是否在體外轉(zhuǎn)化為了生長抑制，使用MTS測定法測定了化合物1對抗MV4;11和RS4;11細(xì)胞的活性(圖5)?；衔飈以劑量依賴性方式有效地抑制了MV4;11細(xì)胞的增殖，其ECso-13nM。盡管使用RS4;11細(xì)胞觀察到了對增殖的類似的濃度依賴性作用，但是它們對化合物l的敏感性降低了約24倍(ECsQ=315nM)。還測定了化合物1對FLT3ITD突變細(xì)胞MOLM13和MOLM14的抗增殖作用，其ECso濃度與使用MV4;ll所觀察到的那些類似(EC50~6nM)(數(shù)據(jù)未顯示)。這些數(shù)據(jù)表明化合物l對FLT3ITD和WT白血病細(xì)胞均具有活性，并且組成性活性受體對抑制更敏感(圖5)。化合物1對白血病細(xì)胞中FLT3介導(dǎo)的信號傳導(dǎo)的體外作用活性，同時(shí)對比了FLT3突變狀態(tài)(使用RT-PCR進(jìn)行了證實(shí)，數(shù)據(jù)未顯示)。MV4;11細(xì)胞在FLT3受體中具有內(nèi)部銜接重復(fù)突變(ITD)，導(dǎo)致FLT3被組成性激活。LevisM.等人，萬/oW，99:3885-3891(2002);O'FarrellA.M.等人，5/卯</，101:3597-3605(2003)。這種激活導(dǎo)致FLT3在無外源性配體刺激時(shí)自磷酸化(圖6，泳道l)。將除去血清的MV4;11細(xì)胞用化合物1處置3小時(shí)，通過分析其磷酸化狀態(tài)測定了對FLT3受體激活的直接作用。MV4;11細(xì)胞與濃度增加的化合物l的接觸以劑量依賴性方式有效地抑制了pFLT3，其ECso為l-10nM(圖6)。雖然FLT3ITDs普遍存在于約20。/。AML患者的母細(xì)胞中，但是大部分急性白血病表達(dá)WTFLT3。還研究了在外源性FLT3配體(100ng/ml，15分鐘)激活FLT3受體磷酸化(圖7，泳道1對比于2)后化合物1對白血病RS4;11細(xì)胞的作用(FLT3WT)(圖7)?；衔飈降低了RS4;ll細(xì)胞中的pFLT3水平(圖7)。但是，比較而言，調(diào)節(jié)WTFLT3比調(diào)節(jié)ITD需要更高的濃度。在濃度X).印M時(shí)獲得了完全抑制(圖6和7)?；衔飈調(diào)節(jié)ERK和STAT5——FLT3抑制的下游靶標(biāo)為了進(jìn)一步表征化合物1對FLT3抑制的作用，研究了FLT3的下游把標(biāo)、即STAT5和ERK的調(diào)節(jié)，這些下游靶標(biāo)是細(xì)胞存活和增殖中的關(guān)鍵蛋白。將MV4;11細(xì)胞用濃度增加的化合物1處置3小時(shí)，通過流式細(xì)胞術(shù)和蛋白質(zhì)印跡處理，以檢測pERK和p-STAT5(圖8和9)。在MV4;11細(xì)胞中，由于有活性的FLT3信號傳導(dǎo)，因此細(xì)胞具有高基線水平的pERK和pSTAT5(圖8和9)。化合物1以劑量依賴性方式抑制了ERK(圖8)和STAT5(圖9)的磷酸化。在濃度X).lnM時(shí)觀察到了pERK和pSTAT5的顯著抑制(^0。/。)(流式細(xì)胞術(shù)和蛋白質(zhì)印跡)。與FLT3配體刺激的RS4;11細(xì)胞相比，化合物l對pERK和pSTAT5的抑制作用在MV4;11中更有效(數(shù)據(jù)未顯示)?；衔?在體外抑制MC4;11細(xì)胞中自分泌VEGF產(chǎn)生為了說明化合物1在體外對VEGF產(chǎn)生的作用，對MV4;11培養(yǎng)物上層液進(jìn)行了ELISA(圖IO)。在這些實(shí)驗(yàn)中，將MV4;ll細(xì)胞在含有10。/fFBS的具有濃度增加(O-lnM)的化合物l的培養(yǎng)基中培養(yǎng)48小時(shí)。在沒有藥物處置時(shí)，MV4;11細(xì)胞可分泌大量的VEGF(180pg/ml)，而化合物l以劑量依賴性方式抑制了VEGF的產(chǎn)生，其ECso在0.001和O.OlpM之間，在濃度X).5nM時(shí)可完全抑制(圖10)。化合物l在體內(nèi)調(diào)節(jié)FLT3信號傳導(dǎo)為了研究在體內(nèi)的靶標(biāo)調(diào)節(jié)，給帶有MV4;11腫瘤的小鼠(達(dá)到300-500mmS)施用化合物l(10mg/kg/日)或載體，共計(jì)5天。在所選的時(shí)間點(diǎn)后收集腫瘤，將其勻化，通過IP/蛋白質(zhì)印跡對pFLT3和pSTAT5水平進(jìn)行分析。早在用單劑量(數(shù)據(jù)未顯示)或多劑量的化合物1給藥后4小時(shí)就觀察到了pFLT3和pSTAT5水平有顯著降低(圖11)，而對總FLT3或STAT5蛋白沒有影響(圖ll)。相對于基線，F(xiàn)LT3和STAT5的磷酸化均有降低，在給藥后8小時(shí)達(dá)到了~卯％的最大抑制，并保持被抑制24小時(shí)(~85%抑制)。在給藥后48小時(shí)，磷酸-FLT3返回靠近基線水平，而p-STAT5仍然被抑制(600/0抑制)(圖4)。還觀察到了pERK水平的降低，表明阻斷了下游FLT3信號傳導(dǎo)(數(shù)據(jù)未顯示)。體內(nèi)效能研究化合物l在體內(nèi)對MC4;11和RS4;11腫瘤的劑量響應(yīng)作用為了確定化合物l的體外作用是否與體內(nèi)腫瘤生長抑制有關(guān)，研究了化合物l在SCID-NOD小鼠中對抗MV4;ll或RS4;ll胂瘤異種移植物的效能。將胂瘤細(xì)胞皮下植入到小鼠中，當(dāng)腫瘤為200-300mi^時(shí)開始化合物l處置。在劑量-響應(yīng)效能研究中，對于MV4;11腫瘤，以l-30mg/kg/日的劑量范圍口服施用化合物l,對于RS4;11腫瘤，以10-150mg/kg/日的劑量范圍口服施用化合物l?；衔?高度有效地對抗MV4;11腫瘤，顯示出了良好的劑量-響應(yīng)作用，在劑量^mg/kg/日時(shí)顯著抑制腫瘤生長(圖12)。30mg/kg/日的劑量引起了腫瘤消退(9/10腫瘤有響應(yīng))，該腫瘤消退既包括部分響應(yīng)又包括完全響應(yīng)(1個(gè)CR，8個(gè)PR)。以lmg/kg/日的劑量給藥2周后觀察到了中度的肺瘤生長抑制(23%)，其在該模型中被鑒別為最小統(tǒng)計(jì)學(xué)有效劑量(pO.Ol，對比于載體)。在帶有RS4;11腫瘤的小鼠中，用化合物l進(jìn)行的處置引起了腫瘤生長抑制，但是沒有觀察到消退(圖13)。與RS4;11腫瘤相比，化合物l對MV4;11腫瘤的抑制作用更強(qiáng)，這可以通過各模型中各自的最小有效劑量來表明(第8天100mg/kg/日，48%TGI,pO.Ol,對抗RS4;11腫瘤；對比于lmg/kg/日，23%TGI，pO.Ol,對抗MV4;11腫瘤)。化合物1的交替給藥方案同樣有效還研究了化合物l的間斷和周期給藥對MV4;11異種移植物肺瘤的作用(圖14)。以30mg/kg每天、隔日(q.o.d,)或周期性地7天給藥、然后7天停藥共計(jì)2個(gè)周期口服施用化合物1(圖14)。與每天給藥類似，在藥物處置時(shí)期內(nèi)，間斷給藥方案引起了顯著的腫瘤消退(>94%TGI)。所有三種方案引起了相同的抗腫瘤活性(第29天，p>0.05),使用q.o.d.(6個(gè)PR)和7天給藥/7天停藥(9個(gè)PR)所觀察到的響應(yīng)數(shù)目與使用每天處置(1個(gè)CR，9個(gè)PR)所觀察到的那些類似?；衔?有效地對抗大MV4;11肺瘤還研究了化合物l對不同尺寸300、500或1000mmS的大MV4;ll肺瘤的作用。用化合物l(30mg/kg/日)進(jìn)行的處置在所有MV4;ll腫瘤中均引起了顯著的消退，這與在處置開始時(shí)的初始腫瘤大小無關(guān)(圖15)。在藥物治療的3-5天內(nèi)，胂瘤消退是明顯的。所有被治療的腫瘤均有響應(yīng)(n-27)，其中，15%完全響應(yīng)，70%部分響應(yīng)。剩余的15。/。為輕微響應(yīng)或保持穩(wěn)定。50天后停止給藥。在50天的處置過程中，腫瘤沒有再生長，表明沒有發(fā)生對化合物l的耐藥性。還研究了響應(yīng)在治療停止后的耐久性。在化合物l給藥停止后，一個(gè)CR和約500/。PRs可持續(xù)40天。在研究的第90天(在給藥停止后40天)，開始用30mg/kg/日的化合物l對10個(gè)再生長(至600-2000mm3)的腫瘤再次進(jìn)^f亍處置，繼續(xù)60天。所有腫瘤對化合物l的第二個(gè)周期均有響應(yīng)(2個(gè)CR，8個(gè)PR)，這清楚地表明肺瘤對化合物1沒有耐藥性(圖16)。體內(nèi)生物學(xué)活性的組織學(xué)評價(jià)除了腫瘤體積和靶標(biāo)調(diào)節(jié)終點(diǎn)外，還使用了免疫組織化學(xué)讀數(shù)作為藥物活性的指示(圖17-19)。在1或5個(gè)劑量后在MV4;11腫瘤中研究了化合物1施用(;30mg/kg/日)的短暫作用(圖17)。使用H&E染色進(jìn)行的形態(tài)學(xué)評價(jià)表明用載體處置的腫瘤包含MV4;11腫瘤細(xì)胞，具有顯著的細(xì)胞過多，表明有髓樣增生(圖17-a)。用Ki67強(qiáng)烈染色的腫瘤細(xì)胞表明腫瘤由高度增殖的細(xì)胞組成(圖17-b)。通過給藥后24小時(shí)，用化合物l處置的腫瘤表明致密濃集的細(xì)胞減少了，并且包含凋亡/壞死細(xì)胞的稀疏區(qū)域(第l天，圖17-a對比于f)。在5個(gè)劑量后，細(xì)胞凋亡/壞死的區(qū)域更顯著，并且無活力肺瘤的區(qū)域顯著，這與Ki67染色減少一致(圖17-g)。由pERK的免疫組織化學(xué)染色證實(shí)了在體內(nèi)的靶標(biāo)調(diào)節(jié)。在5天給藥期間，在用化合物1處置的腫瘤中磷酸化ERK被顯著降低了，這證實(shí)了腫瘤中pERK的蛋白質(zhì)印跡分析(圖17-c對比于h)。化合物l1起了細(xì)胞凋亡，這可由與用載體處置的對照相比在第5天時(shí)腫瘤中激活的胱天蛋白酶-3(圖17-d對比于i)和被切割的PARP(圖17-e對比于j)的染色增加得以證實(shí)。在用化合物l(30mg/kg/日)處置的RS4;11腫瘤中細(xì)胞和增殖減少以及pERK減少的類似作用是明顯的(圖18)。還研究了被定義為部分響應(yīng)(圖19-c,d)或完全響應(yīng)(圖19-e)的腫瘤的組織學(xué)。完全響應(yīng)者完全沒有MV4;11腫瘤細(xì)胞，表明僅有壞死和/或瘢痕組織的殘余物(圖19-e)。在部分響應(yīng)中，在腫瘤的周圍觀察到了Ki67-陽性增殖肺瘤細(xì)胞袋(圖19-a，c對比于b，d)?；衔飈延長帶有播散性人白血病細(xì)胞的小鼠的存活時(shí)間在MV4;11白血病模型中測定了化合物l的效能，在該模型中將細(xì)胞接種到受照射的SCID-NOD小鼠的尾靜脈中(圖20)。在該模型中，MV4;11細(xì)胞播散到骨髓(BM)中，在病理學(xué)上模擬與人白血病類似的疾病型式。在第1天將MV4;11細(xì)胞注射到小鼠中，在MV4;11細(xì)胞植入BM中后第23天開始化合物l的處置pOmg/kg，每天或7天給藥/7天停藥，n-10-12只/組)。由于腫瘤細(xì)胞浸潤到BM中，因此對照(用載體處置的)小鼠一般可發(fā)生后肢麻痹，中位存活時(shí)間(MST)為S1天(圖20)。在存活研究中，與用載體處置的對照(MST=51天)相比，每天用化合物1處置(第23-100天)顯著延緩了疾病發(fā)展的時(shí)間(MST=134天)(p<0.0001)，表明生存期增加(ILS)為163。/o(圖20)。引人注目的是,在每天用化合物l處置下，4只小鼠為長期存活者(MST>160天)。使用組織學(xué)分析和流式細(xì)胞術(shù)定量了在BM中MV4;11細(xì)胞的移植物移入％(圖21)。在流式細(xì)胞分析中，使用在人MHCI上與表位結(jié)合的抗人HLA-A，B,C抗體在小鼠BM中鑒別了人MV4;11細(xì)胞。在用載體處置的小鼠中，約2-19。/。的總的被分離BM細(xì)胞由^tl^的MV4;ll細(xì)胞組成(第51天，圖21-a)。使用抗人線粒體的抗體進(jìn)行的免疫組織化學(xué)也證實(shí)了這一點(diǎn)，該抗體可將MV4;11細(xì)胞染色，從而鑒別小鼠BM基質(zhì)中的人細(xì)胞(圖21-b，c)。與載體處置相比，經(jīng)25天每天給予化合物1(20mg/kg)顯著減少了白血病負(fù)荷(<1%MV4;11細(xì)胞，在BM中)(圖21-a對比于d)。有趣的是，在用化合物l處置后，存活的小鼠在免疫組織化學(xué)上表明在BM中沒有腫瘤細(xì)胞的跡象(如在第167天沒有抗人線粒體陽性的細(xì)胞)，這些存活的小鼠被定義為"治愈"(圖21-e，f)。周期性給予化合物l(7天給藥/7天停藥，5個(gè)周期)也顯著增加了存活時(shí)間(MST-118天，131%ILS對比于載體，p=0.0001),但是不象每天方案那樣有效(p-0.007，圖20和21)。討論靶向于參與腫瘤細(xì)胞增殖的異常細(xì)胞內(nèi)激酶信號傳導(dǎo)途徑可以阻斷細(xì)胞過程并抑制腫瘤生長。這已經(jīng)通過批準(zhǔn)了兩種小分子靶向劑進(jìn)行了舉例用于CML(Bcr-Abl)和胃腸道間質(zhì)瘤(c-KIT)的伊馬替尼(Gleevec)和用于耐藥的晚期或轉(zhuǎn)移性非小細(xì)胞肺癌(EGFR)的吉非替尼(Irressa)。DrukerB.J.Owcog麼，21:8541-8546(2002);GiacconeG.C7/"10:4233S-4237S(2004)。兩種化合物均乾向于腫瘤細(xì)胞中的特異性分子缺陷，該成功已經(jīng)推動(dòng)了對包括FLT315，20-23在內(nèi)的其它致癌激酶的分子扭向治療研究。FLT3基因中的突變是AML中最常見的基因改變，其中近35%的患者具有激活突變。已經(jīng)表明FLT3突變可引起臨床預(yù)后不良，由此提示FLT3可作為AML的治療耙標(biāo)。ThiedeC.等人，jB/m《99:4326-4335(2002);SchnittgerS，等人，B/"(^，2002;100:59-66(2002)。化合物l是以納摩爾效力對抗參與腫瘤增殖和血管生成的III、IV和V類RTKs的多靶激酶抑制劑。生物化學(xué)激酶測定表明化合物1具有對抗FLT3的有效活性(ICso為lnM)。化合物l在兩種白血病細(xì)胞系中的活性通過對比FLT3狀態(tài)MV4;11(FLT3ITD)和RS4;11(FLT3WT)進(jìn)行了表征?；衔飈表明可以以劑量依賴性方式減少FLT3磷酸化，從而證實(shí)了在細(xì)胞中的分子活性?；衔?在體外阻斷了促有絲分裂的MAPK和STAT5途徑中隨后的下游信號分子，這兩種途徑均是細(xì)胞增殖途徑中的關(guān)鍵調(diào)節(jié)者。有趣的是，在MV4;11中對FLT3靶標(biāo)調(diào)節(jié)的活性比在RS4;11細(xì)胞中更顯著，如同化合物l在細(xì)月包毒性/增殖測定中的作用那樣。對于其它FLT3抑制劑，已經(jīng)報(bào)道了對抗FLT3-ITD和野生型FLT3的類似的差異作用?？梢酝茢啵現(xiàn)LT3ITDMV4;ll細(xì)胞具有促進(jìn)細(xì)胞增殖的組成性活性信號(Ras，STAT5),并且與FLT3WT(RS4;11)細(xì)胞不同，后者可以不依賴于FLT3激活而維持生長和/或可以依賴其它致癌途徑。MinamiY.等人，102:2969-2975(2003);KiyoiH.等人，O/icogewe,21:2555-2563(2002);SpiekermamiK.等人，C7/CV/臟ri^.9:2140-2150(2003)。來自體內(nèi)研究的結(jié)果已經(jīng)表明，化合物l具有對抗實(shí)體瘤和白血病播散性BM模型的有效活性。使用PD終點(diǎn)描述了化合物l在臨床前模型中的分子活性，以研究靶標(biāo)調(diào)節(jié)的程度和持續(xù)時(shí)間?；衔飈表明可顯著地向下調(diào)節(jié)MV4;11腫瘤中的pFLT3和pERK。在單劑量或多劑量施用化合物1后4小時(shí)觀察到了靶標(biāo)調(diào)節(jié)(pFLT3)，并且其可在肺瘤中持續(xù)達(dá)24小時(shí)。生物效應(yīng)由腫瘤組織病理學(xué)也是明顯的，在腫瘤組織病理學(xué)中，在藥物治療的l-2天內(nèi)觀察到了腫瘤中pERK、增殖和細(xì)胞凋亡響應(yīng)的減少。在MV4;11的實(shí)體瘤異種移植物中，在藥物治療期間腫瘤消退也是明顯的。有可能化合物l在MV4;11模型中的有效抑制作用可以由直接抑制FLT3以及抑制其它RTKs所引起。數(shù)據(jù)(RT-PCR，未顯示)表明，MV4;11細(xì)胞還表達(dá)VEGFR1、cKIT、PDGFRP、FGFR1、CSF-1R32，所有RTKs均被化合物l有效抑制。化合物l具有對抗VEGFl/2/3激酶的〈10nM的活性，數(shù)據(jù)清楚地表明化合物1可以在MV4;11體外培養(yǎng)物中抑制自分泌VEGF水平。在體內(nèi)由肺瘤細(xì)胞或腫瘤基質(zhì)細(xì)胞(包括內(nèi)皮細(xì)胞)分泌的VEGF或FGF的自分泌或旁分泌抑制可以抑制這些細(xì)胞的增殖和存活。FerraraN.等人，7VWMW.，9:669-676(2O03);CompagniA.等人，60:7163-7169(2000);CarmelietP.A^MM.，9:653-660(2003)?；衔飈在實(shí)體瘤中的另外的活性可以由其對抗PDGFRp的有效作用、通過影響血管生成過程中周細(xì)胞募集和血管成熟所引起。CarmelietP.7VW^f^/.9:653-660(2003);OstmanA.Q;toA:Zrte及ev.，15:275-286(2004)。在AMLBM才莫型中，我們證明了化合物l提高了小鼠的存活并且在一些小鼠中根除了疾病。這代表了化合物l通過直接的抗增殖作用或?qū)梢栽谀讣?xì)胞存活中發(fā)揮作用的骨髓血管生成的調(diào)節(jié)來根除循環(huán)母細(xì)胞和BM疾病兩者的潛能。CarowC.E.等人，Blood，87:1089-1096(1996);DrexlerH.G.Leukemia,10:588-599(1996)。根據(jù)化合物l的藥理學(xué)和靶標(biāo)抑制，研究了化合物l的間斷和周期性給藥方案。化合物l的交替給藥方案表明其具有與化合物l的每天給藥相似的活性，這表明在臨床中可能采取靈活的給藥方案?；衔飈的多劑量能夠持續(xù)抑制腫瘤的生長，并且發(fā)現(xiàn)在治療停止后任意復(fù)發(fā)的腫瘤對用藥物再治療同樣敏感。如果在臨床環(huán)境中轉(zhuǎn)化，則這些發(fā)現(xiàn)是相關(guān)的，因?yàn)楸M管繼續(xù)治療，但一些AML患者已經(jīng)顯示對用激酶抑制劑進(jìn)行的治療會(huì)復(fù)發(fā)。FiedlerW.等人，i/wfif,(2004);CoolsJ.等人，Owic^及m.64:6385-6389(2004)。多種機(jī)制，包括代謝或細(xì)胞外流(通過表達(dá)藥物轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白如P-糖蛋白)或者在酶活性部位的ATP結(jié)合結(jié)構(gòu)域中發(fā)生突變(干擾藥物結(jié)合)，已經(jīng)表明與對激酶抑制劑的耐藥性有關(guān)。BagrintsevaK.等人，5fooJ，103:2266-2275(2004);GrundlerR.等人,102:646-651(2003)。化合物l不是P-GP底物，在藥物治療的整個(gè)過程中持久的響應(yīng)可以提示可用化合物l來避免耐藥性的發(fā)生。用于AML的FLT3抑制劑(SU11248PKC412、CEP-701、MLN518)的臨床研究仍然處于早期。O'FarrellA.M.等人，C7/w.及m.9:5465-5476(2003);FiedlerW,等人，必/oW，(2004);StoneR.M.等人，jw/i〃e附"似/.83Suppll:S89-90(2004);SmithB.D.等人，必/ood，103:3669-3676(2004);DeAngeloD.J.等人，5/卯rf，102:65a(2003)。選擇單一藥物治療還沒有產(chǎn)生顯著的響應(yīng)，F(xiàn)LT3抑制劑在AML中的未來臨床研究可取決于將這些物質(zhì)與細(xì)胞毒藥物或其它分子耙向物質(zhì)組合。此處對化合物l(對已知在報(bào)道的數(shù)據(jù)保證了其臨床評價(jià)。在患者中對抗對藥物有抗性的癌癥的活性式I、II和III的化合物、例如4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基-哌溱-l-基)-lH-苯并咪唑-:2-基-lH-喹啉-2-酮(化合物l)具有對抗腫瘤細(xì)胞以及供應(yīng)腫瘤的血管的形成和維持的直接活性。這些化合物還已經(jīng)在多種血管生成腫瘤和轉(zhuǎn)移瘤動(dòng)物才莫型中顯示出了口服活性。如圖22中所示，化合物l可選擇性抑制III、IV和V類RTKs(還可見具有ICso值的表)。將化合物l施用于具有大的已建立的KMUL4A人結(jié)腸腫瘤異種移植物的棵小鼠在90-100%所治療的動(dòng)物中提供了消退和/或疾病穩(wěn)定(見圖23)。進(jìn)行了I期劑量遞增的多中心開放標(biāo)記研究，以評價(jià)化合物l在患有晚期實(shí)體惡性病的受治療者中的安全性、藥代動(dòng)力學(xué)和藥效動(dòng)力學(xué)。這些研究的另外的主要目的包括provil在患有晚期實(shí)體瘤的受治療者中，1)確定最大耐受劑量(MTD);2)確認(rèn)劑量限制性毒性(DLT);和3)評價(jià)安全性。研究的次要目的包括在血漿、外周血淋巴細(xì)胞、尿和胂瘤細(xì)胞中l(wèi))評價(jià)藥4戈動(dòng)力學(xué)；2)評價(jià)藥效動(dòng)力學(xué)；3)為未來研究推薦劑量和方案；和4)確定抗胂瘤活性的證據(jù)(RECIST)。以下提出了關(guān)于該研究的詳情給藥方案包括-單次每天給藥，7天給藥/7天停藥，重復(fù)(劑量25-100mg)-劑量^L00mg,—個(gè)周期的7天給藥/7天停藥，然后繼續(xù)每天給藥劑量遞增-每組3-4名患者，劑量加倍直至>2級毒性；然后修改Fibonacci方案納入標(biāo)準(zhǔn)*組織學(xué)上或細(xì)胞學(xué)上被證實(shí)的實(shí)體瘤，其對標(biāo)準(zhǔn)治療有抗性或者對這些實(shí)體瘤不存在治愈性的標(biāo)準(zhǔn)治療年齡>18歲攀ECOG體力狀態(tài)0-1血紅蛋白>8.0gm/dL;嗜中性粒細(xì)胞>1，500/mm3;血小板>75，000/mm3參肌酐《1.5x正常值的上限(ULN);膽紅素《1.5xULN;堿性磷酸酶<5xULN;天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)<2.5xULN(肝AST《5xULN除夕卜)；淀粉酶《ULN*簽署知情同意書*上次給予抗瘤治療(激素治療除外)>21天排除標(biāo)準(zhǔn)顱內(nèi)水腫、顱內(nèi)轉(zhuǎn)移或硬膜外疾病參臨床上顯著的心臟病(NYHAIII或IV類)先前存在心律失常；充血性心力衰竭；心肌?。籕Tc間隔〉450msec(男性)和〉470msec(女性)或者〉G2LVEF(通過MUGA或超聲心動(dòng)圖)具有臨床上顯著的外周血管病征兆的糖尿病(需要長期給藥)參既往心包炎；在先前12個(gè)月內(nèi)有臨床上顯著的胸腔積液，或需要>2次干預(yù)/月的復(fù)發(fā)性腹水^吸收不良綜合征或未被控制的GI毒性^G2的惡心、腹瀉、嘔吐)。任意病因的既往急性或慢性胰腺炎*在先前12個(gè)月內(nèi)有既往肝內(nèi)或肝外膽管梗阻，或需要膽管支架的惡性梗阻病史，除非沒有既往的支架梗阻或阻斷而被穩(wěn)定治療DLT/MTD的定義G4中性白細(xì)胞減少癥<5天或發(fā)熱性中性白細(xì)胞減少癥；G4血小板減少參G4疲勞，或在ECOG體力狀態(tài)中二點(diǎn)下降參G3或更高級別的惡心和/或嘔吐，盡管使用了足夠/最大的醫(yī)學(xué)干預(yù)和/或預(yù)防G3或更高級別的非血液毒性(疲勞除外)G2或更高級別的臨床上顯著的心臟毒性(例如，靜息EF降至400/。《50%或短軸縮短率降至150/0<24%;心肌肌4丐蛋白T/1>0.05ng/Ml)MTD:在其之下〉2/6的患者發(fā)生DLT的劑量水平患者特征患者特征受治療者數(shù)目(05年4月22曰)25年齡中值(范圍)57(30-72)性別男性14女性11ECOGPS:01217以前的化學(xué)治療方案(數(shù)目)0-384-64>62腫瘤類型前列腺腫瘤腎臟腫瘤3GIST2肉瘤2結(jié)腸直腸腫瘤1腮腺腫瘤胃肺瘤黑素瘤食管腫瘤NET(鼻竇)腫瘤結(jié)腸腫瘤卵巢腫瘤肝臟腫瘤劑量水平劑量水平患者數(shù)目DLT(在第1個(gè)周期內(nèi)發(fā)生)25mg3050mg4075mg40100mgP天給藥〃天停藥)40100mg(繼續(xù))61(G3高血壓)125mg(繼續(xù))A40*招收進(jìn)行中122大于或等于G2的與藥物有關(guān)的臨床不良事件:AE255075100100cont.總數(shù)疲勞31115貧血3(2G3)14(2G3)N&V/腹竭1(1G3)2(2G3)227(3G3)頭痛3(1G3)14(1G3)厭食22UVEF減少112高血壓**2(1G3)2(1G3)**DLT已經(jīng)觀察到了化合物l的抗腫瘤活性的證據(jù)，因?yàn)?/22(32%)患者在其首次評價(jià)中具有穩(wěn)定的疾病(SD)。此外，還已經(jīng)報(bào)道了4名患者的SD長于4個(gè)月，這4名患者包括患有腮腺肺瘤的患者(長于7個(gè)月)和對Gleevec有耐受性的GIST患者(長于6個(gè)月)。圖24是患有對Gleevec有抗性的GIST的患者的掃描PET-CT圖，該圖表明，與停藥治療相比，在用化合物l治療期間攝取顯著減少，這提示了化合物l具有治療作用。以下提出了關(guān)于該患者和治療方案的進(jìn)一步信息女性惠者，被診斷為患有胃腸道間質(zhì)瘤(GIST)?；颊呦惹耙呀?jīng)進(jìn)行了如下治療藥物劑量注釋Gleevec總每日劑量為200至800mgBAY43-9006400mg，每天2次進(jìn)行性疾病Brostallicin18mg，每天l次Gleevec100mg，隔曰對藥物有抗性的Brostallicin12.8mg，每天l次根據(jù)如上提出的2004年6月2日方案的納入和排除標(biāo)準(zhǔn)，該患者被招收入本研究?；衔飈的治療記錄劑量頻率方案75mg每天l次治療7天進(jìn)行/7天停止100mg每天l次治療7天進(jìn)行/7天停止該患者接受了9，625mg的總劑量(見附表)。當(dāng)用化合物l治療(完成了8個(gè)周期)時(shí)，該患者達(dá)到了穩(wěn)定的疾病(SD)。如圖25中所示，在患者中，血漿暴露(plasmaexposure)隨化合物l的劑量而按比例增加。100mg劑量組中的血漿暴露接近臨床前效能已經(jīng)被指明的范圍。使用外周血白細(xì)胞(PDL)作為替代組織在實(shí)體瘤患者中進(jìn)行了確定化合物1的生物學(xué)活性的藥效動(dòng)力學(xué)(PD)標(biāo)記物的研究，在實(shí)體瘤患者中，耙組織的達(dá)到受到限制。原理和測定法研究ERK磷酸化是被很好描述的RTK激活的下游作用，化合物l調(diào)節(jié)腫瘤和內(nèi)皮細(xì)胞中的ERK磷酸化。為了確定化合物1是否影響PBL中ERK的激活，將來自正常供者的血液在活體外用化合物l進(jìn)行處置。沒有加入具有PMA或PHA的外源性刺激。在將PBL與化合物1孵育后，通過蛋白質(zhì)印跡和流式細(xì)胞測定法觀察到了內(nèi)源性pERK的劑量依賴性抑制(見圖26)，提示該測定法可以用于臨床試驗(yàn)以表明化合物l正在調(diào)節(jié)其靶標(biāo)。將化合物l對包括已經(jīng)發(fā)現(xiàn)對Gleevec和其它激酶抑制劑耐藥的ABL(T315I)的突變形式在內(nèi)的一組激酶進(jìn)行了測定。參見Shah，N.P.Sdewce，305，第399頁(2004)和LaRosse，Omcer及^.67，第7149-7153頁(2002)。ABL中的T315殘基稱為"看門殘基"，其位于ABL結(jié)構(gòu)中的疏水口袋內(nèi)。在已經(jīng)對某些激酶抑制劑復(fù)發(fā)的患者、例如已經(jīng)變得對某些化學(xué)治療劑如Gleevec、Iressa、Tarceva和其它化學(xué)治療劑有耐藥性的患者中常發(fā)現(xiàn)該殘基以及該殘基在其它激酶、例如^f旦不限于Flt-3、KIT、PDGFRa、EGFR等中的類似位置。因此，對于已經(jīng)變得對這些藥物有耐藥性的這些患者而言，在醫(yī)學(xué)上需要供選的治療策略。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)化合物1可抑制ABL的T3151突變體，其ICso值為0.0184微摩爾，相比而言，Gleevec的ICso值〉10微摩爾，SU11248的IC5o值為0,371微摩爾。ABL是胞質(zhì)酪氨酸激酶。因此，本發(fā)明的化合物具有抑制突變的激酶、包括受體酪氨酸激酶和胞質(zhì)酪氨酸激酶的能力。式I、II和III的化合物可以作為供選的治療或與其它抗癌藥的共同治療用于在ABL中具有這種突變的患者。還已經(jīng)測定了化合物1對抗FLT3(D835Y)的突變形式。該殘基常在患有血液惡性病的患者中進(jìn)行突變。參見Yamamoto，Y.5tood，97，2434(2001)。因此，式I、II和III的化合物如化合物l還可以用于治療具有這種突變的患者。近來，已經(jīng)報(bào)道了EGFR中的看門殘基在用吉非替尼(Iressa)治療的肺癌患者中發(fā)生了突變。參見PaoW.，尸i^sAf^.2(3):e73(2005)。將化合物l對抗"看門殘基"中發(fā)生突變的其它激酶進(jìn)行了測定。化合物l可用于治療具有這些突變的癌癥患者。下表顯示了與Gleevec和SUl1248相比較的化合物1的IC5Ji。<table>tableseeoriginaldocumentpage86</column></row><table>使用以下方法完成了測定ABL(T315I)的ICso的試驗(yàn)。在25^L的終反應(yīng)體積中，將Abl(T315I)(h)(5國10mU)與8mMMOPSpH7.0、0.2mMEDTA、50jtMEAIYAAPFAKKK(SEQIDNO:7)、10mM乙酸鎂和33p，標(biāo)記的ATP(比活性約為500cpm/pmo1，酌情濃縮)孵育。通過加入MgATP混合物引發(fā)反應(yīng)。于室溫孵育40分鐘后，通過加入5jiL3。/。磷酸溶液終止反應(yīng)。然后將10fiL反應(yīng)物在P30濾墊上點(diǎn)樣，在75mM磷酸中洗滌3次達(dá)5分鐘，在甲醇中洗滌l次，然后干燥，進(jìn)行閃爍計(jì)數(shù)。按照以上和本文引用的參考文獻(xiàn)中所述的方法制得其它式I化合物，例如式II和式ni的化合物。使用以上對4-氨基-5-氟-3-[6-(4-曱基哌"秦-1-基)-lH-苯并咪唑-2-基會(huì)啉-2(lH)-酮所述的方法學(xué)進(jìn)行了使用這些化合物的研究。這些研究將表明，這些化合物還可用于在小鼠、人和其它哺乳動(dòng)物受治療者中治療包括對藥物有抗性的癌癥在內(nèi)的癌癥，并且可以用于與本文所述的抗癌藥組合。應(yīng)當(dāng)理解，根據(jù)本發(fā)明的有機(jī)化合物可以顯示出互變異構(gòu)現(xiàn)象。盡管本說明書內(nèi)的化學(xué)結(jié)構(gòu)一次僅可以表示一種可能的互變異構(gòu)形式，但是應(yīng)當(dāng)理解，本發(fā)明嚢括了所繪結(jié)構(gòu)的任意互變異構(gòu)形式。例如，具有式IIIB的化合物與一種互變異構(gòu)體(互變異構(gòu)體IIIBa)顯示如下IIIIBe)顯示如下:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage88</formula>互變異構(gòu)體miBb<formula>formulaseeoriginaldocumentpage88</formula>互變異構(gòu)體miBc以上引用的專利、專利申請和期刊文章的內(nèi)容各自整體引入本文作為參考并用于所有目的，如同本文闡述了其全文一樣?？梢岳斫?，本發(fā)明并不受限于用于說明的本文提出的實(shí)施方案，而包括如在以下權(quán)利要求的范圍之內(nèi)的其所有這些形式。權(quán)利要求1.治療對藥物有抗性的癌癥的方法，該方法包括給需要其的受治療者施用式I化合物、該化合物的互變異構(gòu)體、該化合物的鹽、互變異構(gòu)體的鹽、其混合物或者包含該化合物、該化合物的互變異構(gòu)體、鹽、互變異構(gòu)體的鹽或其混合物的藥物組合物，其中受治療者是患有對藥物有抗性的癌癥的癌癥患者并且式I化合物具有下式結(jié)構(gòu)其中R1、R2、R3和R4可以相同或不同并且獨(dú)立地選自H、Cl、Br、F、I、-OR10基團(tuán)、-NR11R12基團(tuán)、取代或未取代的伯-、仲-或叔-烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的鏈烯基、取代或未取代的炔基、取代或未取代的雜環(huán)基或者取代或未取代的雜環(huán)基烷基；R5、R6、R7和R8可以相同或不同并且獨(dú)立地選自H、Cl、Br、F、I、-OR13基團(tuán)、-NR14R15基團(tuán)、-SR16基團(tuán)、取代或未取代的伯-、仲-或叔-烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的鏈烯基、取代或未取代的炔基、取代或未取代的雜環(huán)基、取代或未取代的雜環(huán)基烷基、取代或未取代的烷氧基烷基、取代或未取代的芳氧基烷基或者取代或未取代的雜環(huán)基氧基烷基；R10和R13可以相同或不同并且獨(dú)立地選自取代或未取代的烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的雜環(huán)基、取代或未取代的雜環(huán)基烷基、取代或未取代的烷氧基烷基、取代或未取代的芳氧基烷基或者取代或未取代的雜環(huán)基氧基烷基；R11和R14可以相同或不同并且獨(dú)立地選自取代或未取代的烷基、取代或未取代的芳基或者取代或未取代的雜環(huán)基；R12和R15可以相同或不同并且獨(dú)立地選自取代或未取代的烷基、取代或未取代的芳基或者取代或未取代的雜環(huán)基；并且R16選自取代或未取代的烷基、取代或未取代的芳基或者取代或未取代的雜環(huán)基。2.權(quán)利要求l的方法，其中給受治療者施用式II化合物、該化合物的互變異構(gòu)體、該化合物的鹽、互變異構(gòu)體的鹽、其混合物或者包含該化合物、該化合物的互變異構(gòu)體、鹽、互變異構(gòu)體的鹽或其混合物的藥物組合物，其中式11化合物具有下式結(jié)構(gòu)并且117是取代或未取代的雜環(huán)基3.權(quán)利要求2的方法，其中W是選自取代或未取代的哌咬基、派"秦基或嗎啉基的取代或未取代的雜環(huán)基。4.權(quán)利要求3的方法，其中R"是取代或未取代的N-烷基派，秦基。5.權(quán)利要求3的方法，其中R"是取代或未取代的N-烷基哌"秦基并且N-烷基哌、秦基的烷基包含l至4個(gè)碳原子。6.權(quán)利要求l的方法，其中給受治療者施用式III化合物、該化合物的互變異構(gòu)體、該化合物的鹽、互變異構(gòu)體的鹽、其混合物或者包含該化合物、該化合物的互變異構(gòu)體、鹽、互變異構(gòu)體的鹽或其混合物的藥物組合物，其中式III化合物具有下式結(jié)構(gòu)7.^5L利要求l-6中任一項(xiàng)的方法，其中將化合物的乳酸鹽施用于受治療者。8.權(quán)利要求1-7中任一項(xiàng)的方法，其中癌癥對甲磺酸伊馬替尼(Gleevec)有抗性。9.權(quán)利要求l-7中任一項(xiàng)的方法，其中在已經(jīng)將甲磺酸伊馬替尼(Gleevec)施用于受治療者并且已經(jīng)發(fā)現(xiàn)該受治療者中的癌癥對曱磺酸伊馬替尼(Gleevec)有抗性之后，將化合物、該化合物的互變異構(gòu)體、鹽、互變異構(gòu)體的鹽、其混合物或藥物組合物施用于該受治療者。10.權(quán)利要求l-7中任一項(xiàng)的方法，其中癌癥對BAY43-9006有抗性。11權(quán)利要求l-7中任一項(xiàng)的方法，其中在已經(jīng)將BAY43-9006施用于受治療者并且已經(jīng)發(fā)現(xiàn)該受治療者中的癌癥對BAY43-9006有抗性之后，將化合物、該化合物的互變異構(gòu)體、鹽、互變異構(gòu)體的鹽、其混合物或藥物組合物施用于該受治療者。12.權(quán)利要求l-7中任一項(xiàng)的方法，其中癌癥對Brostallicin有抗性。13.權(quán)利要求l-7中任一項(xiàng)的方法，其中在已經(jīng)將Brostalliein施用于受治療者并且已經(jīng)發(fā)現(xiàn)該受治療者中的癌癥對Brostallicin有抗性之后，將化合物、該化合物的互變異構(gòu)體、鹽、互變異構(gòu)體的鹽、其混合物或藥物組合物施用于該受治療者。14.權(quán)利要求1-13中任一項(xiàng)的方法，其中癌癥是胃腸道間質(zhì)瘤(GIST)。15.權(quán)利要求1-13中任一項(xiàng)的方法，其中癌癥是急性髓性白血病。16.權(quán)利要求1-13中任一項(xiàng)的方法，其中癌癥選自慢性髓性白血病、多發(fā)性骨髓瘤或腎細(xì)胞癌。17.治療癌癥的方法，該方法包括給需要其的受治療者施用選自曱磺酸伊馬替尼(Gleevec)、BAY43-卯06、Brostallicin、來那度胺(Revlimid)、沙利度胺(Thalomid)、多西他賽(Taxotere)、埃羅替尼(Tarceva)、vatalinib(PTK-787)、VEGF-trap、fenretidine、bortezomib、貝伐單抗(Avastin)、pertuzumab和/或利妥昔單抗的抗癌藥以及式I化合物、該化合物的互變異構(gòu)體、該化合物的鹽、互變異構(gòu)體的鹽、其混合物或者包含該化合物、該化合物的互變異構(gòu)體、鹽、互變異構(gòu)體的鹽或其混合物的藥物組合物，其中式I化合物具有下式結(jié)構(gòu)r1、r2、r3和r4可以相同或不同并且獨(dú)立地逸自H、Cl、Br、F、I、-or10基團(tuán)、^11111112基團(tuán)、取代或未取代的伯-、仲-或叔-烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的鏈烯基、取代或未取代的炔基、取代或未取代的雜環(huán)基或者取代或未取代的雜環(huán)基烷基；Rs、R6、R7和R8可以相同或不同并且獨(dú)立地選自H、Cl、Br、F、I、-OR13基團(tuán)、^11141115基團(tuán)、-81116基團(tuán)、取代或未取代的伯-、仲-或叔-烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的鏈烯基、取代或未取代的炔基、取代或未取代的雜環(huán)基、取代或未取代的雜環(huán)基烷基、取代或未取代的烷lu4烷基、取代或未取代的芳氧基烷基或者取代或未取代的雜環(huán)基氧基烷基；r"和r"可以相同或不同并且獨(dú)立地選自取代或未取代的烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的雜環(huán)基、取代或未取代的雜環(huán)基烷基、取代或未取代的烷氧基烷基、取代或未取代的芳氧基烷基或者取代或未取代的雜環(huán)基氧基烷基；其中:R"和R"可以相同或不同并且獨(dú)立地選自取代或未取代的烷基、取代或未取代的芳基或者取代或未取代的雜環(huán)基；RU和R"可以相同或不同并且獨(dú)立地選自取代或未取代的烷基、取代或未取代的芳基或者取代或未取代的雜環(huán)基；并且R"選自取代或未取代的烷基、取代或未取代的芳基或者取代或未取代的雜環(huán)基。18.權(quán)利要求17的方法，其中給受治療者施用式II化合物、該化合物的互變異構(gòu)體、該化合物的鹽、互變異構(gòu)體的鹽、其混合物或者包含該化合物、該化合物的互變異構(gòu)體、鹽、互變異構(gòu)體的鹽或其混合物的藥物組合物，其中式II化合物具有下式結(jié)構(gòu)并且117是取代或未取代的雜環(huán)基H<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>19.權(quán)利要求18的方法，其中I^是選自取代或未取代的哌哌溱基或嗎啉基的取代或未取代的雜環(huán)基。20.權(quán)利要求19的方法，其中R卩是取代或未取代的N-烷基哌嗪基。21.權(quán)利要求19的方法，其中W是取代或未取代的N-烷基哌溱基并且N-烷基哌溱基的烷基包含l至4個(gè)碳原子。22.權(quán)利要求17的方法，其中給受治療者施用式III化合物、該化合物的互變異構(gòu)體、該化合物的鹽、互變異構(gòu)體的鹽、其混合物或者包含該化合物、該化合物的互變異構(gòu)體、鹽、互變異構(gòu)體的鹽或其混合物的藥物組合物，其中式III化合物具有下式結(jié)構(gòu)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>23.權(quán)利要求17-22中任一項(xiàng)的方法，其中將化合物的乳酸鹽施用于受治療者。24.權(quán)利要求17-23中任一項(xiàng)的方法，其中在已經(jīng)將抗癌藥施用于受治療者之后，將化合物、該化合物的互變異構(gòu)體、鹽、互變異構(gòu)體的鹽、其混合物或藥物組合物施用于該受治療者。25.權(quán)利要求17-23中任一項(xiàng)的方法，其中在已經(jīng)將抗癌藥施用于受治療者之前，將化合物、該化合物的互變異構(gòu)體、鹽、互變異構(gòu)體的鹽、其混合物或藥物組合物施用于該受治療者。26.權(quán)利要求17-23中任一項(xiàng)的方法，其中在將至少某種抗癌藥施用于受治療者的同時(shí)，將化合物、該化合物的互變異構(gòu)體、鹽、互變異構(gòu)體的鹽、其混合物或藥物組合物施用于該受治療者。27.權(quán)利要求17-26中任一項(xiàng)的方法，其中抗癌藥是曱磺酸伊馬替尼(Gleevec)。28.權(quán)利要求17-26中任一項(xiàng)的方法，其中抗癌藥是BAY43-卯06。29.權(quán)利要求17-26中任一項(xiàng)的方法，其中抗癌藥是Brostallicin。30.權(quán)利要求17-29中任一項(xiàng)的方法，其中癌癥是胃腸道間質(zhì)瘤(GIST)。31.權(quán)利要求17-29中任一項(xiàng)的方法，其中癌癥是急性髓性白血病。32.權(quán)利要求17-29中任一項(xiàng)的方法，其中癌癥選自慢性髓性白血病、多發(fā)性骨髓瘤或腎細(xì)胞癌。33.權(quán)利要求l-32中任一項(xiàng)的方法，其中在施用化合物、該化合物的互變異構(gòu)體、鹽、互變異構(gòu)體的鹽、其混合物或藥物組合物之后，在受治療者中獲得穩(wěn)定的疾病狀態(tài)或肺瘤尺寸減小。34.治療組合物，該治療組合物包舍作為組合制劑用于同時(shí)、分別或依次使用來治療患有對藥物有抗性的癌癥的受治療者的抗癌藥和式I化合物、該化合物的互變異構(gòu)體、該化合物的鹽、互變異構(gòu)體的鹽或其混合物，其中式I化合物具有下式結(jié)構(gòu)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage8</formula>其中R1、R2、R3和R4可以相同或不同并且獨(dú)立地選自H、Cl、Br、F、I、-OR10基團(tuán)、^11111112基團(tuán)、取代或未取代的伯-、仲-或叔-烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的鏈烯基、取代或未取代的炔基、取代或未取代的雜環(huán)基或者取代或未取代的雜環(huán)基烷基；R5、R6、R7和R8可以相同或不同并且獨(dú)立地選自H、Cl、Br、F、I、-OR13基團(tuán)、^11141115基團(tuán)、-SR"基團(tuán)、取代或未取代的伯-、仲-或叔-烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的鏈烯基、取代或未取代的炔基、取代或未取代的雜環(huán)基、取代或未取代的雜環(huán)基烷基、取代或未取代的烷氧基烷基、取代或未取代的芳氧基烷基或者取代或未取代的雜環(huán)基氧基烷基；R"和RU可以相同或不同并且獨(dú)立地選自取代或未取代的烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的雜環(huán)基、取代或未取代的雜環(huán)基烷基、取代或未取代的烷氧基烷基、取代或未取代的芳氧基烷基或者取代或未取代的雜環(huán)基氧基烷基；R11和R"可以相同或不同并且獨(dú)立地選自取代或未取代的烷基、取代或未取代的芳基或者取代或未取代的雜環(huán)基；ru和r"可以相同或不同并且獨(dú)立地選自取代或未取代的烷基、取代或未取代的芳基或者取代或未取代的雜環(huán)基；并且r"選自取代或未取代的烷基、取代或未取代的芳基或者取代或未取代的雜環(huán)基。35.權(quán)利要求34的治療組合物，其中式i化合物、該化合物的互變異構(gòu)體、該化合物的鹽、互變異構(gòu)體的鹽或其混合物是式ii化合物、式ii化合物的互變異構(gòu)體、式ii化合物的鹽、式ii化合物的互變異構(gòu)體的鹽或其混合物，其中式ii化合物具有下式結(jié)構(gòu)并且i^是取代或未取代的雜環(huán)基36.權(quán)利要求35的治療組合物，其中議7是選自取代或未取代的派咬基、哌喚基或嗎啉基的取代或未取代的雜環(huán)基。37.權(quán)利要求36的治療組合物，其中r"是取代或未取代的N-烷基派噪基。38.權(quán)利要求36的治療組合物，其中W是取代或未取代的N-烷基哌噪基并且N-烷基派嗪基的烷基包含l至4個(gè)碳原子。39.權(quán)利要求34的治療組合物，其中式i化合物、該化合物的互變異構(gòu)體、該化合物的鹽、互變異構(gòu)體的鹽或其混合物是式iii化合物、式iii化合物的互變異構(gòu)體、式iii化合物的鹽、式iii化合物的互變異構(gòu)體的鹽或其混合物，其中式iii化合物具有下式結(jié)構(gòu)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage10</formula>40.權(quán)利要求34-39中任一項(xiàng)的治療組合物，其中治療組合物包含化合物的乳酸鹽。41.權(quán)利要求34-40中任一項(xiàng)的治療組合物，其中抗癌藥和化合物、該化合物的互變異構(gòu)體、鹽、互變異構(gòu)體的鹽、其混合物或藥物組合物作為單一的組合物凈皮提供。42.權(quán)利要求34-40中任一項(xiàng)的治療組合物，其中抗癌藥和化合物、該化合物的互變異構(gòu)體、鹽、互變異構(gòu)體的鹽、其混合物或藥物組合物作為藥盒的各部分被單獨(dú)提供。43.權(quán)利要求34-42中任一項(xiàng)的治療組合物，其中抗癌藥是甲磺酸伊馬替尼(Gleevec)。44.權(quán)利要求34-42中任一項(xiàng)的治療組合物，其中抗癌藥是BAY43-9006。45.權(quán)利要求34-42中任一項(xiàng)的治療組合物，其中抗癌藥是Brostallicin。46.權(quán)利要求34-45中任一項(xiàng)的治療組合物，其中對藥物有抗性的癌癥是胃腸道間質(zhì)瘤(GIST)。47.權(quán)利要求34-45中任一項(xiàng)的治療組合物，其中對藥物有抗性的癌癥是急性髓性白血病。48.權(quán)利要求34-45中任一項(xiàng)的治療組合物，其中對藥物有抗性的癌癥選自慢性髓性白血病、多發(fā)性骨髓瘤或腎細(xì)胞癌。49.權(quán)利要求l-13或17-29中任一項(xiàng)的方法或者權(quán)利要求34-45中任一項(xiàng)的治療組合物，其中對藥物有抗性的癌癥是實(shí)體癌。項(xiàng)的治療組合物，其中對藥物有抗性的癌癥選自前列腺癌、腎癌、胃腸道間質(zhì)瘤、肉瘤、結(jié)腸直腸癌、乳腺癌、腮腺癌、胃癌、黑素瘤、食管癌、NET(鼻竇)癌、結(jié)腸癌、卵巢癌或肝癌。50.權(quán)利要求1-33中任一項(xiàng)的方法或者權(quán)利要求34-49中任一項(xiàng)的治療組合物，其中受治療者是人類癌癥患者。51.權(quán)利要求l-7中任一項(xiàng)的方法，其中癌癥對來那度胺(Revlimid)、沙利度胺(Thalomid)、多西他賽(Taxotere)、埃羅替尼(Tarceva)、吉非替尼(Iressa)、vatalinib(PTK-787)、VEGF-trap、fenretidine、bortezomib或一般的單克隆抗體有抗性。52.斥又利要求l-7中任一項(xiàng)的方法，其中癌癥對貝伐單抗(Avastin)、pertuzumab或利妥昔單抗有抗性。53.權(quán)利要求l-7中任一項(xiàng)的方法，其中在已經(jīng)將來那度胺(Revlimid)、沙利度胺(Thalomid)、多西他賽(Taxotere)、埃羅替尼(Tarceva)、吉非替尼(Iressa)、vatalinib(PTK曙787)、VEGF-trap、fenretidine、bortezomib或一般的單克隆抗體施用于受治療者并且已經(jīng)發(fā)現(xiàn)該受治療者中的癌癥對來那度胺(Revlimid)、沙利度胺(Thalomid)、多西他賽(Taxotere)、埃羅替尼(Tarceva)、吉非替尼(Iressa)、vatalinib(PTK畫787)、VEGF-trap、fenretidine、bortezomib或一般的單克隆抗體有抗性之后，將化合物、該化合物的互變異構(gòu)體、鹽、互變異構(gòu)體的鹽、其混合物或藥物組合物施用于該受治療者。54.權(quán)利要求l-7中任一項(xiàng)的方法，其中在已經(jīng)將貝伐單抗(Avastin)、pertuzumab或利妥昔單抗施用于受治療者并且已經(jīng)發(fā)現(xiàn)該受治療者中的癌癥對貝伐單抗(Avastin)、pertuzumab或利妥昔單抗有抗性之后，將化合物、該化合物的互變異構(gòu)體、鹽、互變異構(gòu)體的鹽、其混合物或藥物組合物施用于該受治療者。55.沖又利要求17-26中任一項(xiàng)的方法，其中抗癌藥選自來那度胺(Revlimid)、沙利度胺(Thalomid)、多西他賽(Taxotere)、埃羅替尼(Tarceva)、吉非替尼(Iressa)、vatalinib(PTK-787)、VEGF-trap、fenretidine、bortezomib、貝4戈單抗(Avastin)、pertuzumab或利妥昔單抗。56.權(quán)利要求34-42中任一項(xiàng)的治療組合物，其中抗癌藥選自來那度胺(Revlimid)、沙利度胺(Thalomid)、多西他賽(Taxotere)、埃羅替尼(Tarceva)、vatalinib(PTK國787)、VEGF國trap、fenretidine、bortezomib或一般的單克隆抗體。57.權(quán)利要求34-42中任一項(xiàng)的治療組合物，其中抗癌藥選自貝伐單抗(Avastin)、pertuzumab或利妥昔單抗。58.在受治療者中抑制激酶的方法，該方法包括給需要其的受治療者施用式i化合物、該化合物的互變異構(gòu)體、該化合物的鹽、互變異構(gòu)體的鹽、其混合物或者包含該化合物、該化合物的互變異構(gòu)體、鹽、互變異構(gòu)體的鹽或其混合物的藥物組合物，其中受治療者是癌癥患者且激酶包含突變的看門殘基，并且式i化合物具有下式結(jié)構(gòu)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage12</formula>R1、R2、R3和R4可以相同或不同并且獨(dú)立地選自H、Cl、Br、F、i、-OR10基團(tuán)、-貝1^1112基團(tuán)、取代或未取代的伯-、仲-或叔-烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的鏈烯基、取代或未取代的炔基、取代或未取代的雜環(huán)基或者取代或未取代的雜環(huán)基烷基；r5、r6、r7和r8可以相同或不同并且獨(dú)立地逸自H、Cl、Br、F、i、-or13基團(tuán)、-11141115基團(tuán)、-SR"基團(tuán)、取代或未取代的伯-、仲-或叔-烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的鏈烯基、取代或未取代的炔基、取代或未取代的雜環(huán)基、取代或未取代的雜環(huán)基烷基、取代或未取代的烷氧基烷基、取代或未取代的芳氧基烷基或者取代或未取代的雜環(huán)基氧基烷基；R"和R"可以相同或不同并且獨(dú)立地選自取代或未取代的烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的雜環(huán)基、取代或未取代的雜環(huán)基烷基、其中:取代或未取代的烷氧基烷基、取代或未取代的芳氧基烷基或者取代或未取代的雜環(huán)基氧基烷基；rh和r"可以相同或不同并且獨(dú)立地選自取代或未取代的烷基、取代或未取代的芳基或者取代或未取代的雜環(huán)基；ru和rw可以相同或不同并且獨(dú)立地選自取代或未取代的烷基、取代或未取代的芳基或者取代或未取代的雜環(huán)基；并且R"選自取代或未取代的烷基、取代或未取代的芳基或者取代或未取代的雜環(huán)基。59.權(quán)利要求58的方法，其中給受治療者施用式n化合物、該化合物的互變異構(gòu)體、該化合物的鹽、互變異構(gòu)體的鹽、其混合物或者包含該化合物、該化合物的互變異構(gòu)體、鹽、互變異構(gòu)體的鹽或其混合物的藥物組合物，其中式II化合物具有下式結(jié)構(gòu)并且I^是取代或未取代的雜環(huán)基60.權(quán)利要求59的方法，其中117是選自取代或未取代的哌"定基、p/艮溱基或嗎啉基的取代或未取代的雜環(huán)基。61.權(quán)利要求60的方法，其中R"是取代或未取代的N-烷基派，秦基。62.權(quán)利要求60的方法，其中R"是取代或未取代的N-烷基哌溱基并且N-烷基哌溱基的烷基包含1至4個(gè)碳原子。63.權(quán)利要求58的方法，其中給受治療者施用式III化合物、該化合物的互變異構(gòu)體、該化合物的鹽、互變異構(gòu)體的鹽、其混合物或者包含該化合物、該化合物的互變異構(gòu)體、鹽、互變異構(gòu)體的鹽或其混合物的藥物組合物，其中式III化合物具有下式結(jié)構(gòu)64.權(quán)利要求58-63中任一項(xiàng)的方法，其中將化合物的乳酸鹽施用于受治療者。65.權(quán)利要求58-64中任一項(xiàng)的方法，其中激酶是胞質(zhì)酪氨酸激酶或者是受體酪氨酸激酶。66.權(quán)利要求58-65中任一項(xiàng)的方法，其中激酶是ABL、KIT、PDGFRa、EGFR或FLT3。67.權(quán)利要求66中任一項(xiàng)的方法，其中激酶是ABL(T3151)。68.權(quán)利要求66中任一項(xiàng)的方法，其中激酶是FLT3(D835Y)。69.權(quán)利要求66中任一項(xiàng)的方法，其中激酶是EGFR。70.權(quán)利要求58-69中任一項(xiàng)的方法，其中癌癥對曱磺酸伊馬替尼(Gleevee)、BAY43-9006、Brostallicin、來那度胺(Revlimid)、沙利度胺(Thalomid)、多西他賽(Taxotere)、埃羅替尼(Tarceva)、吉非替尼(Iressa)、vatalinib(PTK-787)、VEGF-trap、fenretidine、bortezomib或一般的單克隆抗體有抗性。71.權(quán)利要求58-70中任一項(xiàng)的方法，其中癌癥選自胃腸道間質(zhì)瘤、急性髓性白血病、慢性髓性白血病、多發(fā)性骨髓瘤、腎細(xì)胞癌、非小細(xì)胞肺癌或嗜酸細(xì)胞過多綜合征(HES)。全文摘要治療對藥物有抗性的癌癥的方法，該方法包括給需要其的患者施用式I化合物、該化合物的互變異構(gòu)體、該化合物的鹽、互變異構(gòu)體的鹽、其混合物或者包含該化合物、該化合物的互變異構(gòu)體、鹽、互變異構(gòu)體的鹽或其混合物的藥物組合物，其中患者是患有對藥物有抗性的癌癥的癌癥患者，其中式I化合物如本申請中所定義。文檔編號A01N65/00GK101222850SQ200680025645公開日2008年7月16日申請日期2006年5月10日優(yōu)先權(quán)日2005年5月13日發(fā)明者C·C·海澤,G·C·米切爾森,M·維斯曼,T·D·達(dá)維斯,V·W·單申請人:諾瓦提斯公司