專利名稱：一種適合于普通小球藻高密度高品質(zhì)培養(yǎng)的培養(yǎng)基組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種適合用于普通小球藻高密度高品質(zhì)培養(yǎng)的培養(yǎng)基組合物和高密度高品質(zhì)培養(yǎng)普通小球藻的方法。
背景技術(shù)：
人們對(duì)小球藻的研究歷史較長(zhǎng)，其中普通小球藻(Chlorella vulgaris)是研究的較多的一個(gè)藻種，也是目前商業(yè)化生產(chǎn)普遍采用的藻種之一。
目前，小球藻常用的培養(yǎng)方式有兩種開放式戶外大池光自養(yǎng)培養(yǎng)和發(fā)酵罐異養(yǎng)培養(yǎng)。開放式戶外大池培養(yǎng)是目前商業(yè)化大規(guī)模生產(chǎn)常用的方法，雖然其成本低，但由于細(xì)胞密度低、易污染、占地面積大等缺點(diǎn)，使其發(fā)展受到很大限制。異養(yǎng)培養(yǎng)目前基本上處于實(shí)驗(yàn)室研發(fā)階段，其雖可較大幅度地提高藻細(xì)胞密度，但獲得的藻體與光自養(yǎng)培養(yǎng)相比其蛋白質(zhì)和色素的含量明顯下降，即品質(zhì)降低，不具有光自養(yǎng)培養(yǎng)的普通小球藻的應(yīng)用價(jià)值。Atev.A(1981)異養(yǎng)培養(yǎng)普通小球藻A2(Chlorella vulgaris A2)時(shí)發(fā)現(xiàn)胞內(nèi)葉綠素、蛋白質(zhì)、類胡蘿卜素、尼克酸的含量均比光自養(yǎng)生長(zhǎng)時(shí)要低，胞內(nèi)氨基酸除賴氨酸和酪氨酸含量高于光自養(yǎng)生長(zhǎng)，其它氨基酸含量均低于光自養(yǎng)培養(yǎng)(Atev A.，Manova A.Heterotrophic cultivation of Chlorella vulgaris A2.Dokl.Bolg.Akad.Nauk，(English)1981，34(5)687～690)。張大兵等(1996)發(fā)現(xiàn)從自養(yǎng)模式轉(zhuǎn)化為異養(yǎng)模式時(shí)蛋白核小球藻(Chlorella prototuecoides)細(xì)胞內(nèi)葉綠素消失，總蛋白含量減少，僅為光自養(yǎng)培養(yǎng)的1/5(張大兵，吳慶余.小球藻細(xì)胞的異養(yǎng)轉(zhuǎn)化.植物生理學(xué)通報(bào)，1996，32(2)140～144)。James.C.Ogbonna等(1997)異養(yǎng)培養(yǎng)蛋白核小球藻C-212(Chlorella pyrenoidosa C-212)也證實(shí)了類似的實(shí)驗(yàn)結(jié)果(Ogbonna J.C.，Masui.H.，Tanaka.H.Sequential heterotrophic/autotrophic cultivation-an efficient method ofproducing Chlorella biomass for health food and animal feed.J.Appl.Phycol.1997，9，359～366.)。潘欣等(2002)異養(yǎng)培養(yǎng)橢圓小球藻，也發(fā)現(xiàn)蛋白含量減少(潘欣，李建宏，戴傳超，等.小球藻異養(yǎng)培養(yǎng)的研究.食品科學(xué)，2002，23(4)28～33)。由上可見，對(duì)于小球藻屬中常用的三個(gè)種(即普通小球藻、蛋白核小球藻、橢圓小球藻)在異養(yǎng)培養(yǎng)時(shí)均存在品質(zhì)下降問(wèn)題。因此，在實(shí)現(xiàn)高密度培養(yǎng)時(shí)如何保持其高品質(zhì)，是小球藻培養(yǎng)技術(shù)中一個(gè)亟待解決的重要問(wèn)題。
James.C.Ogbonna等(1997)采用Endo培養(yǎng)基異養(yǎng)-光自養(yǎng)串聯(lián)培養(yǎng)蛋白核小球藻C-212(Chlorella pyrenoidosa C-212)可使藻體蛋白質(zhì)和葉綠素含量得到較大幅度的提高(Ogbonna J.C.，Masui.H.，Tanaka.H.Sequential heterotrophicautotrophiccultivation-an efficient method ofproducing Chlorella biomass for health food and animalfeed.J.Appl.Phycol.1997，9，359～366.)。有關(guān)普通小球藻的異養(yǎng)-光自養(yǎng)串聯(lián)培養(yǎng)文獻(xiàn)中未見報(bào)道，因此要開展這方面的研究首先必須解決培養(yǎng)基問(wèn)題。
本發(fā)明首先采用文獻(xiàn)中報(bào)道的蛋白核小球藻異養(yǎng)-光自養(yǎng)串聯(lián)培養(yǎng)的Endo培養(yǎng)基異養(yǎng)-光自養(yǎng)串聯(lián)培養(yǎng)普通小球藻，發(fā)現(xiàn)該培養(yǎng)基不適合普通小球藻生長(zhǎng)及藻體蛋白質(zhì)和葉綠素的累積；然后采用添加了葡萄糖的普通小球藻常用的Sorokin-Krauss培養(yǎng)基(以下簡(jiǎn)稱SK培養(yǎng)基)(1958)異養(yǎng)-光自養(yǎng)串聯(lián)培養(yǎng)普通小球藻，發(fā)現(xiàn)藻體蛋白質(zhì)和葉綠素含量并沒(méi)有明顯的提高。這說(shuō)明利用Endo培養(yǎng)基及添加了葡萄糖的SK培養(yǎng)基均不能實(shí)現(xiàn)該藻的高密度高品質(zhì)培養(yǎng)，因此，有必要解決普通小球藻高密度高品質(zhì)培養(yǎng)的培養(yǎng)基問(wèn)題。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種適用于普通小球藻高密度高品質(zhì)培養(yǎng)的培養(yǎng)基組合物。該培養(yǎng)基可使普通小球藻達(dá)到高密度培養(yǎng)的前提下，藻體品質(zhì)與異養(yǎng)培養(yǎng)相比有較大幅度提高，培養(yǎng)結(jié)束時(shí)達(dá)到光自養(yǎng)培養(yǎng)時(shí)的水平。
為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供了一種用于培養(yǎng)普通小球藻的培養(yǎng)基組合物，所述培養(yǎng)基基本上由KNO3、葡萄糖以及少量無(wú)機(jī)鹽、微量元素和水組成。
在一個(gè)較佳的實(shí)施方案中，所述微量元素選自H3BO3，ZnSO4·7H2O，MnCl2·H2O，(NH4)6Mo7O24·4H2O，CuSO4·5H2O，Co(NO3)2·6H2O中的一種或多種。
在一個(gè)特別佳的實(shí)施方案中，所述培養(yǎng)基基本上由以下成分組成或由以下成分組成KNO37～11克/升、葡萄糖25～35克/升、KH2PO40.6～0.8克/升、Na2HPO4·12H2O1.7～2.0克/升、MgSO4·7H2O 0.6～0.8克/升、CaCl20.1～0.2克/升、FeSO4·7H2O 0.01～0.03克/升；微量元素0.5～2ml，其中微量元素的組成為H3BO311～12克/升，ZnSO4·7H2O 8.5～9.5克/升，MnCl2·H2O 1.4～1.5克/升，(NH4)6Mo7O24·4H2O 0.8～0.9克/升，CuSO4·5H2O 1.5～1.6克/升，Co(NO3)2·6H2O 0.45～0.55克/升；水1000ml。
本發(fā)明另一方面涉及上述培養(yǎng)基組合物在用于培養(yǎng)普通小球藻中的用途。
本發(fā)明另一方面涉及一種培養(yǎng)普通小球藻的方法，該方法采用異養(yǎng)-光自養(yǎng)串聯(lián)培養(yǎng)普通小球藻，其特征在于，所述方法采用了本發(fā)明所述的培養(yǎng)基組合物。
本發(fā)明另一方面涉及一種用上述方法獲得的普通小球藻培養(yǎng)物。
本發(fā)明另一方面涉及一種含有上述方法獲得的普通小球藻培養(yǎng)物的組合物，如保健食品或飼料添加劑等。
本發(fā)明還有一個(gè)方面涉及用上述方法獲得的普通小球藻培養(yǎng)物在制備保健食品或飼料添加劑中的用途。
用本發(fā)明公開的培養(yǎng)基組合物來(lái)異養(yǎng)-光自養(yǎng)串聯(lián)培養(yǎng)普通小球藻，一方面可使普通小球藻在較短的培養(yǎng)周期里細(xì)胞密度達(dá)到高密度培養(yǎng)的水平，另一個(gè)更重要的方面在于其可使普通小球藻的品質(zhì)與異養(yǎng)培養(yǎng)相比有較大幅度提高，達(dá)到了光自養(yǎng)培養(yǎng)時(shí)的水平，從而實(shí)現(xiàn)了普通小球藻高密度高品質(zhì)的培養(yǎng)。
附圖簡(jiǎn)述


圖1顯示了用不同的培養(yǎng)基通過(guò)異養(yǎng)-光自養(yǎng)串聯(lián)培養(yǎng)普通小球藻所得到的結(jié)果，其中實(shí)心標(biāo)記表示用本發(fā)明的培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)后獲得的結(jié)果，空心標(biāo)記表示用作為對(duì)照的經(jīng)略加調(diào)整的SK培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)后獲得的結(jié)果。
圖2顯示了用作為對(duì)照的Endo培養(yǎng)基進(jìn)行異養(yǎng)-光自養(yǎng)串聯(lián)培養(yǎng)普通小球藻所得到的結(jié)果。
圖3顯示了以不同的碳氮比異養(yǎng)-光自養(yǎng)串聯(lián)培養(yǎng)普通小球藻時(shí)的細(xì)胞干重。
圖4顯示了在不同的碳氮比下異養(yǎng)-光自養(yǎng)串聯(lián)培養(yǎng)普通小球藻時(shí)的葉綠素含量和蛋白質(zhì)含量。
圖5顯示在5L生物反應(yīng)器/1L開放式平板光生物反應(yīng)器串聯(lián)系統(tǒng)中進(jìn)行培養(yǎng)的結(jié)果。
具體實(shí)施方案采用文獻(xiàn)中報(bào)道的蛋白核小球藻異養(yǎng)-光自養(yǎng)串聯(lián)培養(yǎng)的Endo培養(yǎng)基和略加調(diào)整后的SK培養(yǎng)基(主要考慮到原始的SK培養(yǎng)基為光自養(yǎng)培養(yǎng)基，不便于普通小球藻異養(yǎng)培養(yǎng)階段的生長(zhǎng))異養(yǎng)-光自養(yǎng)串聯(lián)培養(yǎng)普通小球藻，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在Endo培養(yǎng)基中藻細(xì)胞密度較低，蛋白質(zhì)和葉綠素含量也較低，而在SK培養(yǎng)基中藻細(xì)胞生長(zhǎng)雖較快，但培養(yǎng)結(jié)束時(shí)的藻體蛋白質(zhì)和葉綠素含量與異養(yǎng)培養(yǎng)相比并無(wú)明顯提高。這說(shuō)明Endo培養(yǎng)基和原始的SK培養(yǎng)基均不適合于以高密度高品質(zhì)為目的的普通小球藻異養(yǎng)-光自養(yǎng)串聯(lián)培養(yǎng)。
本發(fā)明者以SK培養(yǎng)基為基礎(chǔ)，通過(guò)在其中添加Na2HPO4·12H2O、改變其中碳氮比(C/N)、選擇特定的碳源和氮源、以及調(diào)整培養(yǎng)基中其它營(yíng)養(yǎng)成分的濃度，獲得了適用于普通小球藻異養(yǎng)-光自養(yǎng)串聯(lián)培養(yǎng)的培養(yǎng)基，使用該培養(yǎng)基可實(shí)現(xiàn)普通小球藻的高密度高品質(zhì)培養(yǎng)。
在本文中，所述藻體的品質(zhì)指標(biāo)為單位藻體蛋白質(zhì)和葉綠素含量。所述藻體的生物量指標(biāo)為單位培養(yǎng)液中藻體干重。本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠采用常規(guī)技術(shù)對(duì)所述單位藻體蛋白質(zhì)、葉綠素含量和進(jìn)行測(cè)定。具體而言，蛋白質(zhì)含量的測(cè)定采用凱氏定氮法(寧正祥.食品成分分析手冊(cè)[M].北京中國(guó)輕工業(yè)出版社，1998，76～78.)。葉綠素含量測(cè)定采用甲醇提取比色法(Ogbonna J.C.，Masui.H.，Tanaka.H.Sequential heterotrophicautotrophic cultivation-an efficient method ofproducing Chlorella biomass for health foodand animal feed.J.Appl.Phycol.1997，9，359～366.)。藻體干重測(cè)量時(shí)取培養(yǎng)過(guò)程中某一時(shí)刻的培養(yǎng)液V(ml)，7200r/min離心10min，將離心后的藻體用去離子水洗滌3次，轉(zhuǎn)移至稱量瓶(W1(g))中在80℃烘箱中烘干至恒重W2(g)。藻體干重CX可根據(jù)下式計(jì)算CX(g/L)＝(W2-W1)/V/1000。
本發(fā)明首先提供了一種用于培養(yǎng)普通小球藻的培養(yǎng)基組合物，所述培養(yǎng)基基本上由KNO3、葡萄糖以及少量無(wú)機(jī)鹽、微量元素和水組成。在所述技術(shù)方案中，所述微量元素宜選自H3BO3，ZnSO4·7H2O，MnCl2·H2O，(NH4)6Mo7O24·4H2O，CuSO4·5H2O，Co(NO3)2·6H2O中的一種或多種或全部。
本文所用的術(shù)語(yǔ)“基本上由……組成”表示本發(fā)明的組合物中除了含有主要組分KNO3、葡萄糖以及少量無(wú)機(jī)鹽、微量元素和水外，還可包含一些對(duì)于組合物的基本特性或新的特性(即可維持普通小球藻在較短的培養(yǎng)周期里細(xì)胞密度達(dá)到高密度培養(yǎng)的水平，同時(shí)葉綠素和蛋白質(zhì)水平與常規(guī)異養(yǎng)培養(yǎng)相比有較大幅度提高)沒(méi)有實(shí)質(zhì)上影響的組分。本文所用的術(shù)語(yǔ)“由……組成”表示本發(fā)明的組合物由所指出的具體組分組成，沒(méi)有其他組分，但是可以帶有含量在通常范圍內(nèi)的雜質(zhì)。
在該培養(yǎng)基中，培養(yǎng)基的各組分可在一定范圍內(nèi)變化而不會(huì)對(duì)普通小球藻細(xì)胞密度和品質(zhì)有很大影響。因此，這些組分的用量不應(yīng)受實(shí)施例的嚴(yán)格限制。如本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的，培養(yǎng)基中還應(yīng)加入少量無(wú)機(jī)鹽，例如硫酸鎂、氯化鈣、硫酸亞鐵和磷酸鹽等，以及少量微量元素如Mn、Zn、B、I、M、Cu、Co等。在本發(fā)明中，較佳的微量元素組分宜選自H3BO3，ZnSO4·7H2O，MnCl2·H2O，(NH4)6Mo7O24·4H2O，CuSO4·5H2O，Co(NO3)2·6H2O中的一種或多種。無(wú)機(jī)鹽和微量元素的用量可根據(jù)常規(guī)知識(shí)確定。
作為氮源的KNO3的范圍為7.0～11.0克/升，作為碳源和能源的葡萄糖可在25～35克/升之間。具體而言，KNO3的濃度可為7-10克/升，7-9克/升或大約8克/升。葡萄糖的濃度可為26-34克/升、27-33克/升、28-32克/升、29-31克/升或大約30克/升。KH2PO4的濃度可為0.65-0.75克/升或大約0.7克/升。Na2HPO4·12H2O的濃度可為1.75-1.95克/升、1.8-1.9克/升、1.83-1.85克/升或大約1.84克/升。MgSO4·7H2O的濃度可為0.65-0.75克/升或大約0.7克/升。CaCl2的濃度可為0.13-0.18克/升，0.14-0.15克/升，或大約0.142克/升。FeSO4·7H2O的濃度可為0.015-0.025克/升或大約0.02克/升。
對(duì)于微量元素，一個(gè)較佳的實(shí)施方案是在培養(yǎng)基組合物中加入0.5～2ml具有以下組成的微量元素母液H3BO311～12克/升，ZnSO4·7H2O 8.5～9.5克/升，MnCl2·H2O1.4～1.5克/升，(NH4)6Mo7O24·4H2O 0.8～0.9克/升，CuSO4·5H2O 1.5～1.6g，Co(NO3)2·6H2O0.45～0.55克/升。該微量元素母液可在配制本發(fā)明培養(yǎng)基組合物之前預(yù)先配制。微量元素母液的加入量可以為0.6、0.8、1、1.2、1.4、1.6、1.8和2毫升。
在一個(gè)尤其佳的實(shí)施方案中，本發(fā)明的培養(yǎng)基組合物宜由以下成分組成KNO37～11克/升、葡萄糖25～35克/升、KH2PO40.6～0.8克/升、Na2HPO4·12H2O 1.7～2.0克/升、MgSO4·7H2O 0.6～0.8克/升、CaCl20.1～0.2克/升、FeSO4·7H2O 0.01～0.03克/升；微量元素0.5～2ml，其中微量元素的組成為H3BO311～12克/升，ZnSO4·7H2O8.5～9.5克/升，MnCl2·H2O 1.4～1.5克/升，(NH4)6Mo7O24·4H2O 0.8～0.9克/升，CuSO45H2O1.5～1.6克/升，Co(NO3)2·6H2O 0.45～0.55克/升；水1000ml。
在配制成培養(yǎng)基組合物后，根據(jù)需要調(diào)節(jié)所述培養(yǎng)基的pH，例如調(diào)節(jié)為6.0～7.0(較佳為6.2-6.5)，并在115-120℃下滅菌15～20分鐘。
本發(fā)明另一方面涉及一種培養(yǎng)普通小球藻的方法，該方法采用異養(yǎng)-光自養(yǎng)串聯(lián)培養(yǎng)普通小球藻，所述方法采用上述培養(yǎng)基組合物。
普通小球藻的異養(yǎng)-光自養(yǎng)串聯(lián)培養(yǎng)在搖瓶或生物反應(yīng)器中進(jìn)行。在搖瓶或生物反應(yīng)器中進(jìn)行異養(yǎng)培養(yǎng)，待培養(yǎng)液中有機(jī)碳源葡萄糖消耗完后，將其轉(zhuǎn)入可光照的搖瓶或平板式光生物反應(yīng)器中進(jìn)行光自養(yǎng)培養(yǎng)。培養(yǎng)過(guò)程中采用不同的培養(yǎng)基或培養(yǎng)容器進(jìn)行培養(yǎng)時(shí)，由于普通小球藻在不同的培養(yǎng)基或培養(yǎng)容器中生長(zhǎng)速率存在差異性導(dǎo)致培養(yǎng)液中有機(jī)碳源葡萄糖消耗完的時(shí)間長(zhǎng)短不一致，因此轉(zhuǎn)入光自養(yǎng)培養(yǎng)的具體時(shí)間也不一致。在一個(gè)較佳的實(shí)施方案中，異養(yǎng)培養(yǎng)條件為接種量8-12％(較佳為10％)，溫度為28-32℃(較佳為29-31℃，更佳為30℃)；光自養(yǎng)培養(yǎng)條件為溫度為28-32℃(較佳為29-31℃，更佳為30℃)，外部光強(qiáng)7-10klx(較佳為8klx)。
因此，本發(fā)明另一方面還涉及將本發(fā)明的培養(yǎng)基組合物用于培養(yǎng)普通小球藻中的用途。
用本發(fā)明的方法不僅能夠使普通小球藻在較短的培養(yǎng)周期里細(xì)胞密度達(dá)到高密度培養(yǎng)的水平，另一個(gè)更重要的方面在于其可使普通小球藻的品質(zhì)與異養(yǎng)培養(yǎng)相比有較大幅度提高，達(dá)到了光自養(yǎng)培養(yǎng)時(shí)的水平，從而實(shí)現(xiàn)了普通小球藻高密度高品質(zhì)的培養(yǎng)。因此，本發(fā)明獲得的普通小球藻培養(yǎng)物能夠用于制備保健食品、飼料添加劑等諸多應(yīng)用。
以下將通過(guò)實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的有關(guān)內(nèi)容作進(jìn)一步的說(shuō)明。除非另有所述，培養(yǎng)基中各組分含量均用克/升(g/l)表示。本發(fā)明所采用的普通小球藻購(gòu)自中科院武漢水生生物研究所。
實(shí)施例1在250ml搖瓶中加入100ml如下所示的培養(yǎng)基，接種濃度為0.62g/L，異養(yǎng)培養(yǎng)(裝液量100mL，溫度30℃，搖床轉(zhuǎn)速150r/min)48小時(shí)，結(jié)果測(cè)得細(xì)胞密度()最大為13.17g/L，隨后進(jìn)行光自養(yǎng)培養(yǎng)(外部光強(qiáng)8klx)，培養(yǎng)結(jié)束時(shí)(96h)藻體蛋白質(zhì)()和葉綠素()含量達(dá)到最高，分別為49.75％和30.17mg/gDcw(見
圖1)。
KNO39.25葡萄糖30KH2PO40.7 Na2HPO4·12H2O1.84MgSO4·7H2O0.7 CaCl20.142FeSO4·7H2O0.02微量元素1ml；微量元素配方(g/L)H3BO311.42 ZnSO4·7H2O 8.82MnCl2·H2O 1.42 (NH4)6Mo7O24·4H2O 0.8707CuSO4·5H2O 1.57 Co(NO3)2·6H2O 0.49水1000ml采用與實(shí)施例1相同的方法，采用如下所示Endo培養(yǎng)基培養(yǎng)普通小球藻，最大細(xì)胞密度()僅為4.68g/L，經(jīng)過(guò)光照培養(yǎng)后藻體蛋白質(zhì)(○)和葉綠素()含量與異養(yǎng)培養(yǎng)相比無(wú)明顯變化，僅分別為23.34％和12.35mg/gDcw(細(xì)胞干重)(見圖2)。
葡萄糖28g/L尿素4.8g/LKH2PO41.2g/LMgSO4.7H2O1.2g/L
CaCl20.08g/L 檸檬酸三鈉0.2g/LFe-EDTA溶液0.64mL A5溶液3.2mL其中Fe-EDTA溶液配方為FeSO4·7H2O25g/L和EDTA33.5g/L；A5溶液配方H3BO32.86g/L，MnCl2.4H2O 1.81g/L，ZnSO4·7H2O 0.222g/L，CuSO4·5H2O 0.07g/L，Na2MoO40.021g/L。
采用與實(shí)施例1相同的方法，采用如下所示的略加調(diào)整后的SK培養(yǎng)基培養(yǎng)普通小球藻，培養(yǎng)60小時(shí)細(xì)胞密度()達(dá)到最高僅為5.61g/L，經(jīng)過(guò)36h光照培養(yǎng)后藻體蛋白質(zhì)(○)和葉綠素()含量分別僅為29.30％和17.88mg/gDcw。(見
圖1)。
KNO32 葡萄糖15KH2PO41.25MgSO4·7H2O1.0 CaCl20.083FeSO4·7H2O0.049微量元素1ml微量元素配方(g/L)H3BO311.42 ZnSO4·7H2O 8.82MnCl2·H2O 1.42 (NH4)6Mo7O24·4H2O 0.8707CuSO4·5H2O 1.57 Co(NO3)2·6H2O 0.49水1000ml根據(jù)上述結(jié)果可以得知，通過(guò)單單改變異養(yǎng)-光自養(yǎng)串聯(lián)培養(yǎng)所用的培養(yǎng)基，可以使普通小球藻的細(xì)胞密度、蛋白質(zhì)和葉綠素含量均達(dá)到較高的水平。
實(shí)施例2在250ml搖瓶中加入100ml如下所示的培養(yǎng)基，其中KNO3的初始濃度分別為3，5，7，9，11g/L，接種濃度為0.60g/L，培養(yǎng)82小時(shí)(其中異養(yǎng)培養(yǎng)45小時(shí)，其中裝液量100mL，溫度30℃，搖床轉(zhuǎn)速150r/min；光自養(yǎng)培養(yǎng)37小時(shí)，外部光強(qiáng)8klx)。結(jié)果測(cè)得KNO37～9g/L時(shí)(以C/N比計(jì)算為10.20～13.12)細(xì)胞密度最大為12.0g/L左右(見圖3)，藻體蛋白質(zhì)和葉綠素含量也達(dá)到最高，分別在50.0％和32.0mg/gDcw左右(見圖4)。
KNO33、5、7、9、11 葡萄糖30KH2PO40.7 Na2HPO4·12H2O1.84MgSO4·7H2O0.7 CaCl20.142FeSO4·7H2O0.02
微量元素1ml微量元素配方(g/L)H3BO311.42 ZnSO4·7H2O 8.82MnCl2·H2O 1.42 (NH4)6Mo7O24·4H2O 0.8707CuSO4·5H2O 1.57Co(NO3)2·6H2O 0.49水1000ml實(shí)施例3在5L生物反應(yīng)器/1L開放式平板光生物反應(yīng)器串聯(lián)系統(tǒng)中加入如下所示的培養(yǎng)基，裝液量75％，接種濃度為0.60g/L，培養(yǎng)65小時(shí)(其中5L生物反應(yīng)器中培養(yǎng)34小時(shí)，1L開放式平板光生物反應(yīng)器中培養(yǎng)31小時(shí))。結(jié)果測(cè)得培養(yǎng)34小時(shí)時(shí)細(xì)胞密度()達(dá)到最大為15.36g/L，培養(yǎng)65小時(shí)時(shí)藻體蛋白質(zhì)(○)和葉綠素()含量分別達(dá)到最高，分別為54.78％和31.23mg/gDcw(見圖5)。
KNO39.25 葡萄糖30KH2PO40.7 Na2HPO4·12H2O1.84MgSO4·7H2O0.7CaCl20.142FeSO4·7H2O0.02微量元素1ml微量元素配方(g/L)H3BO311.42ZnSO4·7H2O 8.82MnCl2·H2O 1.42 (NH4)6Mo7O24·4H2O 0.8707CuSO4·5H2O 1.57 Co(NO3)2·6H2O 0.49水1000ml盡管上面已經(jīng)描述了本發(fā)明的具體例子，但是有一點(diǎn)對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員來(lái)說(shuō)是明顯的，即在不脫離本發(fā)明的精神和范圍的前提下可對(duì)本發(fā)明作各種變化和改動(dòng)。因此，所附權(quán)利要求覆蓋了所有這些在本發(fā)明范圍內(nèi)的變動(dòng)。
權(quán)利要求
1.一種用于培養(yǎng)普通小球藻的培養(yǎng)基組合物，其特征在于，所述培養(yǎng)基基本上由KNO3、葡萄糖以及少量無(wú)機(jī)鹽、微量元素和水組成。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的培養(yǎng)基組合物，其特征在于，所述微量元素選自H3BO3，ZnSO4·7H2O，MnCl2·H2O，(NH4)6Mo7O24·4H2O，CuSO4·5H2O，Co(NO3)2·6H2O中的一種或多種。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的培養(yǎng)基組合物，其特征在于，所述培養(yǎng)基由以下成分組成KNO37～11克/升、葡萄糖25～35克/升、KH2PO40.6～0.8克/升、Na2HPO4·12H2O1.7～2.0克/升、MgSO4·7H2O 0.6～0.8克/升、CaCl20.1～0.2克/升、FeSO4·7H2O 0.01～0.03克/升；微量元素0.5～2ml，其中微量元素的組成為H3BO311～12克/升，ZnSO4·7H2O 8.5～9.5克/升，MnCl2·H2O 1.4～1.5克/升，(NH4)6Mo7O24·4H2O 0.8～0.9克/升，CuSO4·5H2O 1.5～1.6克/升，Co(NO3)2·6H2O 0.45～0.55克/升；水1000ml。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的培養(yǎng)基組合物，其特征在于，所述培養(yǎng)基的pH為6.0～7.0。
5.權(quán)利要求1所述的培養(yǎng)基組合物在用于培養(yǎng)普通小球藻中的用途。
6.一種培養(yǎng)普通小球藻的方法，該方法采用異養(yǎng)-光自養(yǎng)串聯(lián)培養(yǎng)普通小球藻，其特征在于，所述方法采用權(quán)利要求1所述的培養(yǎng)基組合物。
7.如權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，所述所述培養(yǎng)基由以下成分組成KNO37～11克/升、葡萄糖25～35克/升、KH2PO40.6～0.8克/升、Na2HPO4·12H2O1.7～2.0克/升、MgSO4·7H2O 0.6～0.8克/升、CaCl20.1～0.2克/升、FeSO4·7H2O 0.01～0.03克/升；微量元素0.5～2ml，其中微量元素的組成為H3BO311～12克/升，ZnSO4·7H2O 8.5～9.5克/升，MnCl2·H2O 1.4～1.5克/升，(NH4)6Mo7O24·4H2O 0.8～0.9克/升，CuSO4·5H2O 1.5～1.6克/升，Co(NO3)2·6H2O 0.45～0.55克/升；水1000ml。
8.一種用權(quán)利要求6所述的方法獲得的普通小球藻培養(yǎng)物。
9.一種組合物，其特征在于，它包含權(quán)利要求8所述的普通小球藻培養(yǎng)物。
10.用權(quán)利要求6所述的方法獲得的普通小球藻培養(yǎng)物在制備保健食品或飼料添加劑中的用途。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種適用于普通小球藻高密度高品質(zhì)培養(yǎng)的培養(yǎng)基組合物，所述培養(yǎng)基基本上由KNO
文檔編號(hào)A23K1/00GK1807572SQ20061002400
公開日2006年7月26日 申請(qǐng)日期2006年2月21日 優(yōu)先權(quán)日2006年2月21日
發(fā)明者李元廣, 李興武, 王偉, 沈國(guó)敏, 魏鴻剛, 安洋 申請(qǐng)人:華東理工大學(xué), 上海澤元海洋生物技術(shù)有限公司