專利名稱：防治蔬菜疫病的菌藥合劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬化學(xué)、生物土壤處理劑及其制備方法領(lǐng)域，特別涉及一種對(duì)蔬菜疫病具有預(yù)防及控制作用的菌藥合劑及其制備方法領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
疫病是蔬菜生產(chǎn)上的一類重大病害，常見的疫病主要有辣椒疫病、番茄晚疫病和黃瓜疫病等。在我國，辣椒疫病的發(fā)生最為嚴(yán)重。近年來，由于品種、栽培制度、肥水條件的改變，病害逐年加重，病區(qū)由南向北逐年擴(kuò)展，重病區(qū)的枯死率可達(dá)到80％以上，產(chǎn)量損失十分顯著。辣椒疫病在辣椒的整個(gè)生育期均可發(fā)生，尤其在辣椒現(xiàn)蕾和坐果時(shí)發(fā)生嚴(yán)重。在氣候條件適宜的情況下，此病可危害根、莖稈、枝條、果實(shí)和葉片，嚴(yán)重時(shí)可造成死秧、爛果，減產(chǎn)甚至絕產(chǎn)。
生產(chǎn)實(shí)踐中，疫病的綜合治理主要是依靠選用抗病品種、合理輪作和使用內(nèi)吸性殺菌劑。但目前生產(chǎn)上可應(yīng)用的抗疫病的蔬菜品種有限，同時(shí)因?yàn)橐卟〔≡鸀橥寥懒?xí)居菌，輪作也難以有效地控制該病。因此較長時(shí)期以來化學(xué)防治一直使該病最有效的的防治手段之一，生產(chǎn)上主要以藥劑噴霧和灌根來防治辣椒疫病?，F(xiàn)有防治疫病的主要藥劑甲霜靈、霜脲氰、乙磷鋁等內(nèi)吸性殺菌劑，這類殺菌劑屬于特異性位點(diǎn)抑制劑，對(duì)病原菌的作用位點(diǎn)單一，只對(duì)病原菌的單一代謝環(huán)節(jié)起作用，一旦此位點(diǎn)發(fā)生突變，藥劑即不能與其產(chǎn)生作用，從而導(dǎo)致病菌產(chǎn)生抗藥性，使藥劑防治病害的效果降低。隨著社會(huì)經(jīng)濟(jì)發(fā)展和人民物質(zhì)生活水平的迅速提高，“綠色蔬菜”和“無公害蔬菜”需求量也越來越大，作物安全生產(chǎn)和農(nóng)產(chǎn)品安全倍受重視。因此，單一利用化學(xué)農(nóng)藥防治疫病的策略和實(shí)踐受到了挑戰(zhàn)，探索新的防治途徑是目前蔬菜疫病防治必須解決的重要問題。發(fā)展生物防治技術(shù)來防治植物病害越來越受到各國政府、科技工作者和民眾的關(guān)注，據(jù)申請(qǐng)人所知，國內(nèi)外研究生物措施防治疫霉病害已有許多報(bào)道。但由于單一的生防因子難以在不同環(huán)境條件下取得與使用化學(xué)殺菌劑相匹配的防效；而且生防因子對(duì)土壤或作物根圍環(huán)境條件的波動(dòng)比較敏感，在田間存在病原菌的生態(tài)條件下，生防因子的定殖能力有很大差異。生物防治控制蔬菜疫病的研究目前多在實(shí)驗(yàn)室和溫室條件下進(jìn)行，尚未大面積用于生產(chǎn)實(shí)踐中。
在化學(xué)防治受到越來越多的質(zhì)疑，生物防治體系還不完善的條件下，發(fā)展生物-化學(xué)協(xié)同控制蔬菜疫病的策略逐漸引起各國政府和科研人員的重視。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種高效、低毒，與環(huán)境相容并對(duì)蔬菜疫病具有預(yù)防及控制作用的生物-化學(xué)協(xié)同控制的菌藥合劑及其制備方法。
本發(fā)明的目的是這樣實(shí)現(xiàn)的提供一種防治蔬菜疫病菌藥合劑含有生防菌劑和殺菌劑，所述生防菌劑與殺菌劑按質(zhì)量計(jì)用量比為1∶1。優(yōu)選的殺菌劑選自阿米西達(dá)、百菌清、代森錳鋅、甲霜靈、綠帝、氟嗎啉、烯酰嗎啉、乙磷鋁、銀泰中的一種或多種。進(jìn)一步優(yōu)選殺菌劑為烯酰嗎啉，更進(jìn)一步優(yōu)選烯酰嗎啉有效成分含量25％-90％的可濕性粉劑，最優(yōu)選50％安克可濕性粉劑(烯酰嗎啉制劑)。優(yōu)選的生防菌劑中含有的生防菌株選自枯草芽孢桿菌BS、枯草芽孢桿菌GF1、熒光假單胞菌LX1、熒光假單胞菌BCA1中的一種或多種。進(jìn)一步優(yōu)選的生防菌劑中含有的生防菌株為枯草芽孢桿菌BS。
本發(fā)明還提供一種制備上述防治蔬菜疫病菌藥合劑的方法，它包括如下步驟a)將對(duì)蔬菜疫病病菌具有拮抗作用的生防菌株進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，再將發(fā)酵液離心獲得的菌體沉淀按1∶1的質(zhì)量比與微粉碳酸鈣混合制得生防菌劑；優(yōu)選的生防菌株選自枯草芽孢桿菌BS、枯草芽孢桿菌GF1、熒光假單胞菌LX1、熒光假單胞菌BCA1中的一種或多種。進(jìn)一步優(yōu)選的生防菌株為枯草芽孢桿菌BS。
b)將步驟a形成的生防菌劑與殺菌劑按1∶1的質(zhì)量比復(fù)配。
優(yōu)選的殺菌劑為有效成分含量25％-90％的制劑，進(jìn)一步優(yōu)選的殺菌劑為有效成分含量50％的制劑。
優(yōu)選的殺菌劑選自阿米西達(dá)、百菌清、代森錳鋅、甲霜靈、綠帝、氟嗎啉、烯酰嗎啉、乙磷鋁、銀泰中的一種或多種。進(jìn)一步優(yōu)選殺菌劑為烯酰嗎啉，更進(jìn)一步優(yōu)選烯酰嗎啉有效成分含量25％-90％的可濕性粉劑，最優(yōu)選50％安克可濕性粉劑(烯酰嗎啉制劑)。
本發(fā)明基于生物-化學(xué)協(xié)同控制原理的菌藥合劑，通過生物因子和化學(xué)因子的協(xié)同增效作用，可以在設(shè)施蔬菜上減少化學(xué)農(nóng)藥施用量50％以上，完全替代傳統(tǒng)的高毒、高殘留農(nóng)藥，確保蔬菜的農(nóng)藥殘留量在允許標(biāo)準(zhǔn)以下，符合無公害蔬菜生產(chǎn)要求。從而節(jié)約生產(chǎn)成本并改善了蔬菜品質(zhì)。


圖1為本發(fā)明的工藝流程框圖。
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合附圖所描述的實(shí)施方式對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)說明。
防治蔬菜疫病菌藥合劑，它含有生防菌劑和50％安克可濕性粉劑；所述生防菌劑與50％安克可濕性粉劑的質(zhì)量比為1∶1。
如圖所示，防治蔬菜疫病菌藥合劑制備方法，可按如下步驟依次進(jìn)行a)將對(duì)辣椒疫病病菌具有拮抗作用的生防菌株枯草芽孢桿菌BS進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，再將發(fā)酵液離心獲得的菌體沉淀按1∶1的質(zhì)量比與微粉碳酸鈣混合制得生防菌劑；
b)將步驟a形成的生防菌劑與有效成分含量為50％的安克可濕性粉劑按1∶1的質(zhì)量比復(fù)配。
本發(fā)明立足于已經(jīng)獲得的幾種拮抗微生物、已經(jīng)登記的生物防治菌株和國內(nèi)外生產(chǎn)上防治疫病常用的幾種殺菌劑，以辣椒疫病病菌為靶標(biāo)菌，通過離體和活體篩選，分別獲得一株對(duì)辣椒疫霉具有較強(qiáng)拮抗作用的生防菌株和一種高效、低毒、環(huán)境友好的化學(xué)農(nóng)藥，通過離體和活體試驗(yàn)測(cè)定生物農(nóng)藥和化學(xué)農(nóng)藥毒力系數(shù)，明確生物因子與化學(xué)藥劑之間?；禺愋缘脑鲂ё饔茫Y選高效廣譜生物殺菌劑的增效組合，研制成菌藥合劑，并對(duì)其施用方式進(jìn)行了研究。
本發(fā)明的具體操作步驟如下(1)拮抗微生物的的篩選在初步篩選的基礎(chǔ)上，選擇枯草芽孢桿菌BS、熒光假單胞菌LX1、枯草芽孢桿菌GF1、熒光假單胞菌BCA1四株生防菌株分別進(jìn)行了離體抑菌實(shí)驗(yàn)和活體植株篩選，發(fā)現(xiàn)枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)BS對(duì)辣椒疫病病菌具有較強(qiáng)的拮抗作用，溫室防病實(shí)驗(yàn)中具有較高的防效。具體的數(shù)據(jù)見表1和表2。因此選擇枯草芽孢桿菌BS作為研制菌藥合劑的生物組分。
(2)殺菌劑的篩選采用生產(chǎn)中常用的9種不同類型的殺菌劑，分別測(cè)定了對(duì)辣椒疫病病菌不同菌體形態(tài)的抑制作用，結(jié)果如表3所示，烯酰嗎啉和氟嗎啉兩種殺菌劑對(duì)所測(cè)定的各種菌體形態(tài)都有顯著的抑制作用。在離體篩選的基礎(chǔ)上，又以防治疫病的典型藥劑甲霜靈為對(duì)照，進(jìn)行了烯酰嗎啉和氟嗎啉的溫室防病實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)烯酰嗎啉的防治效果要優(yōu)于氟嗎啉(見表4)。因此選擇烯酰嗎啉作為構(gòu)建菌藥合劑的化學(xué)組分。
(3)菌藥合劑的研制 將枯草芽孢桿菌BS發(fā)酵培養(yǎng)，再將發(fā)酵液離心獲得的菌體沉淀按1∶1的質(zhì)量比與微粉碳酸鈣混合制得生防菌劑，其菌量大于108cfu/g。然后與50％安克可濕性粉劑(烯酰嗎啉制劑)按1∶1的質(zhì)量比復(fù)配獲得本發(fā)明防治蔬菜疫病的菌藥合劑。
(4)菌藥合劑質(zhì)量指標(biāo)的檢測(cè) 烯酰嗎啉和枯草芽孢桿菌BS的含量指標(biāo)是菌藥合劑的基本質(zhì)量指標(biāo)，烯酰嗎啉含量的測(cè)定采用高效液相色譜進(jìn)行(≥25％)，枯草芽孢桿菌的菌數(shù)采用稀釋平板法進(jìn)行測(cè)定(活菌落數(shù)量≥107cfu/mL)。經(jīng)熱貯實(shí)驗(yàn)表明，枯草芽孢桿菌對(duì)烯酰嗎啉沒有代謝作用，烯酰嗎啉對(duì)枯草芽孢桿菌的菌落數(shù)形成也沒有干擾作用。
實(shí)施例1采用北京地區(qū)主栽辣椒品種京研辣椒3號(hào)，模擬自然條件下辣椒疫病的侵染方式，分別采用灌根法和噴霧法接種病菌的方式建立致病體系，研究了不同的施藥方式對(duì)菌藥合劑DMBS防治辣椒疫病效果的影響。結(jié)果如表5、表6所示，在不同的致病體系下，菌藥合劑的防治效果與藥劑的使用方式有關(guān)，灌根法施藥對(duì)于防治地下部的病害擴(kuò)展效果較好，噴霧法施藥對(duì)于防治地上部病菌的傳播效果較好。但無論采用哪種接菌方式都可以發(fā)現(xiàn)，在供試的殺菌劑單劑、生防菌單劑和菌藥合劑三種處理中，單一的生防制劑防效表現(xiàn)欠穩(wěn)定，而菌藥合劑則表現(xiàn)出與單一殺菌劑相同的趨勢(shì)，隨藥劑濃度的升高，防治效果提高；更重要的是，減少了一半劑量的菌藥合劑的防治效果與同濃度的單一殺菌劑可以取得大致相當(dāng)?shù)姆乐涡Ч趥€(gè)別濃度下，甚至高于殺菌劑處理。
實(shí)施例2采用辣椒疫病的通用感病品種茄門甜椒，模擬自然條件下辣椒疫病的侵染方式，分別采用灌根法和噴霧法接種病菌的方式建立致病體系，研究了不同的施藥方式對(duì)菌藥合劑DMBS防治辣椒疫病效果的影響。結(jié)果如表7、表8所示，其規(guī)律與京研辣椒3號(hào)相似。
表1、4株生防菌株對(duì)7株辣椒疫病病菌的抑菌作用測(cè)定

表2、生防因子防治辣椒疫病溫室試驗(yàn)

表3、9種殺菌劑對(duì)辣椒疫病病菌不同菌體形態(tài)的抑制作用

表4、殺菌劑防治辣椒疫病溫室試驗(yàn)

表5、本發(fā)明菌藥合劑對(duì)京研辣椒3號(hào)灌根法接種辣椒疫病病菌的防治效果

注DMM為烯酰嗎啉，BS為枯草芽孢桿菌，DMBS為菌藥合劑。下同。
表6、本發(fā)明菌藥合劑對(duì)京研辣椒3號(hào)噴霧法接種辣椒疫病病菌的防治效果

表7、本發(fā)明菌藥合劑對(duì)茄門甜椒灌根法接種辣椒疫病病菌的防治效果

表8、本發(fā)明菌藥合劑對(duì)茄門甜椒噴霧法接種辣椒疫病病菌的防治效果

權(quán)利要求
1.一種防治蔬菜疫病菌藥合劑，它含有生防菌劑和殺菌劑，所述的生防菌劑與殺菌劑按質(zhì)量計(jì)用量比為1∶1。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的防治蔬菜疫病菌藥合劑，其特征在于，所述殺菌劑選自阿米西達(dá)、百菌清、代森錳鋅、甲霜靈、綠帝、氟嗎啉、烯酰嗎啉、乙磷鋁、銀泰中的一種或多種。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述防治蔬菜疫病菌藥合劑，其特征在于，所述生防菌劑中含有的生防菌株選自枯草芽孢桿菌BS、枯草芽孢桿菌GF1、熒光假單胞菌LX1、熒光假單胞菌BCA1中的一種或多種。
4.一種制備權(quán)利要求1所述防治蔬菜疫病菌藥合劑的方法，它包括如下步驟a)將對(duì)蔬菜疫病病菌具有拮抗作用的生防菌株進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，再將發(fā)酵液離心獲得的菌體沉淀按1∶1的質(zhì)量比與微粉碳酸鈣混合制得生防菌劑；b)將步驟a形成的生防菌劑與殺菌劑按1∶1的質(zhì)量比復(fù)配。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備防治蔬菜疫病菌藥合劑的方法，其特征在于，所述生防菌株選自枯草芽孢桿菌BS、枯草芽孢桿菌GF1、熒光假單胞菌LX1、熒光假單胞菌BCA1中的一種或多種。
6.根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的制備防治蔬菜疫病菌藥合劑的方法，其特征在于，所述殺菌劑選自阿米西達(dá)、百菌清、代森錳鋅、甲霜靈、綠帝、氟嗎啉、烯酰嗎啉、乙磷鋁、銀泰中的一種或多種。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的制備防治蔬菜疫病菌藥合劑的方法，其特征在于，所述殺菌劑為烯酰嗎啉。
全文摘要
本發(fā)明屬化學(xué)、生物土壤處理劑及其制備方法領(lǐng)域，特別涉及一種對(duì)蔬菜疫病具有預(yù)防及控制作用的菌藥合劑及其制備方法領(lǐng)域，該方法可按如下步驟依次進(jìn)行a)將對(duì)蔬菜疫病病菌具有拮抗作用的生防菌株進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，再將發(fā)酵液離心獲得的菌體沉淀按1∶1的質(zhì)量比與微粉碳酸鈣混合制得生防菌劑；b)將步驟a形成的生防菌劑與有效成分含量為50％的殺菌劑按1∶1的質(zhì)量比復(fù)配。本發(fā)明可以在設(shè)施蔬菜上減少化學(xué)農(nóng)藥施用量50％以上，部分或全部替代傳統(tǒng)的高毒、高殘留農(nóng)藥，確保蔬菜農(nóng)藥殘留量在允許標(biāo)準(zhǔn)以下，符合無公害蔬菜生產(chǎn)要求。
文檔編號(hào)A01N63/02GK1695457SQ200510011438
公開日2005年11月16日 申請(qǐng)日期2005年3月17日 優(yōu)先權(quán)日2005年3月17日
發(fā)明者李健強(qiáng), 尹敬芳, 劉西莉, 吳學(xué)宏, 劉鵬飛, 張文華 申請(qǐng)人:中國農(nóng)業(yè)大學(xué)