專利名稱：叢生竹組培快繁的生根方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種叢生竹子的生根方法，尤其涉及一種利用組織培養(yǎng)進(jìn)行快速繁殖的生根方法。
背景技術(shù)：
竹子是重要的森林資源，再生能力強、生長迅速、成材期短、產(chǎn)量高，具有一次造林可“永久”利用的特點，被譽為“砍不敗的產(chǎn)業(yè)”。其竹材具有縱向強度好、彈性大、耐磨損、耐腐蝕、抗彎曲、能防蛀、能阻燃等特點，與木材相比具有硬度強、穩(wěn)定性高、膠合度好、外觀美麗等優(yōu)點。全世界年產(chǎn)竹材約1600多萬噸，除傳統(tǒng)的用于建房、制作家具和工藝品外，主要用于制作竹質(zhì)人造板和高級竹制紙，其需求量與日俱增；竹的幼芽——竹筍，清脆爽口，營養(yǎng)豐富，其富含18種氨基酸和多種人體必須的微量元素，是天然的保健食品，已發(fā)展成為鮮筍、筍干、筍罐頭等系列產(chǎn)品，也已成為竹資源開發(fā)利用的一大支柱產(chǎn)品；竹子還是一個四季長青的常綠物種，其縱橫交錯的地下竹鞭系統(tǒng)(散生竹)或竹蔸和須根發(fā)達(dá)的根莖系統(tǒng)(叢生竹)具有強大的固土保水功能，其地上部分年年抽筍，盡管每年擇伐老齡竹稈和挖取鮮筍，也能保持較為穩(wěn)定的林相結(jié)構(gòu)，因此竹林在保持水土、涵養(yǎng)水源、調(diào)節(jié)氣候、凈化空氣和美化環(huán)境等方面還具有一般林木無可比擬的優(yōu)點。因此對優(yōu)良竹種進(jìn)行快速繁殖對開發(fā)和利用寶貴的竹資源具有重要的意義。
關(guān)于竹子的組織培養(yǎng)，自1982年Metha等首先用印度剌竹種子合子胚誘導(dǎo)愈傷組織，形成胚芽和再生植株以來，國內(nèi)外在這方面進(jìn)行了一些研究，主要是采用種子、種胚、花序、花藥、葉片、嫩莖尖、幼根、成熟竹幼枝節(jié)段等材料作為外植體，通過愈傷組織途徑和腋芽萌生途徑獲得再生植株，但組培苗的生根效果不很理想。
巨龍竹和龍竹是世界上最大的兩種叢生竹，其桿高可達(dá)20～30m，莖粗15～30cm，桿基部的壁厚可以達(dá)到3～4cm，節(jié)間長30～40cm，竹材產(chǎn)量是毛竹的5～8倍，其筍又適合加工筍干，他們是很有發(fā)展前途的兩個竹種。該竹種僅在中國云南省局部地區(qū)有零星分布，且其竹節(jié)育苗生根十分困難，采用傳統(tǒng)方法無法大批量培育種苗。研究利用組織培養(yǎng)的方法獲得大量的優(yōu)質(zhì)種苗是發(fā)展龍竹及其產(chǎn)業(yè)的關(guān)鍵，但其組培苗生根極為困難，用常規(guī)的組織培養(yǎng)生根方法和培養(yǎng)基達(dá)不到效果，滿足不了需求。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種叢生竹組培快繁的生根方法。
本發(fā)明所設(shè)計的叢生竹組培快繁的生根方法包括無菌株系的建立過程、繼代增殖培養(yǎng)過程、誘導(dǎo)生根過程、試管苗的移栽過程。所述無菌株系的建立過程是將竹子的幼枝節(jié)段做為外植體，先用乙醇進(jìn)行表面消毒，然后再浸入氯化汞溶液中消毒，接著取出用無菌水進(jìn)行清洗，并用無菌濾紙吸干水分后接種于芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上進(jìn)行避光培養(yǎng)，再轉(zhuǎn)入自然光下培養(yǎng)，以誘導(dǎo)幼枝腋芽的萌發(fā)。所述繼代增殖培養(yǎng)過程是把在誘導(dǎo)培養(yǎng)階段所形成的芽切割后接種于增殖培養(yǎng)基上，并在光照條件下培養(yǎng)，以誘導(dǎo)形成叢生芽，接著將形成的叢生芽再分割成芽叢接種于相同的培養(yǎng)基上進(jìn)行繼代增殖。所述誘導(dǎo)生根過程是將叢生芽分切成數(shù)個芽為單叢接種到第一生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)后，再轉(zhuǎn)接到第二生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)，以促進(jìn)其長出完裝的根系。所述試管苗的移栽過程是把生根的瓶苗移到自然室溫下煉苗，取出小苗清洗培養(yǎng)基后移栽在“椰糠+河砂+少許泥土”基質(zhì)上，并保持濕潤，待小苗長到一定高度時，可移入二級苗圃培植成商品苗。以上所說的各個培養(yǎng)基都是以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，并添加有其他組分，以滿足各個過程的需要。
本發(fā)明所提供的叢生竹組培快繁的生根方法解決了竹子組培苗難于生根的難題，為優(yōu)良竹種的快速繁殖提供了技術(shù)保證，將對竹資源的開發(fā)和利用起到積極的推動作用，具有重要的經(jīng)濟和社會效益。
具體實施例方式
下面結(jié)合實施例對本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說明。
本發(fā)明所設(shè)計的叢生竹組培快繁的生根方法包括無菌株系的建立過程、繼代增殖培養(yǎng)過程、誘導(dǎo)生根過程、試管苗的移栽過程。
1、無菌株系的建立過程 取經(jīng)過精選的竹子幼枝條小心地去除葉片，經(jīng)洗潔精溶液浸泡后用自來水沖洗干凈，將枝條切成帶節(jié)的小段，在無菌條件下用70％-80％的乙醇進(jìn)行表面消毒，再把節(jié)段取出投入氯化汞水溶液中進(jìn)行消毒處理，期間不斷地進(jìn)行搖動，使竹節(jié)段始終浸泡在氯化汞水溶液中；取出節(jié)段用無菌水沖洗，接著用無菌濾紙吸干水分；正向?qū)⒐?jié)段接種到預(yù)備好的誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，先避光培養(yǎng)6-8天，再轉(zhuǎn)入自然光下培養(yǎng)，以誘導(dǎo)幼枝腋芽的萌發(fā)。所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基是以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，然后按比例添加有6BA 1.8～2.2mg.L-1、NAA0.1～0.3mg.L-1、PVP200～280mg.L-1、蔗糖20～40g.L-1、卡拉膠6～8g.L-1。
2、繼代增殖培養(yǎng)過程 把在誘導(dǎo)培養(yǎng)階段所形成的芽切割后接種于增殖培養(yǎng)基上，先于自然光散射光下或800～1200Lx的光照條件下培養(yǎng)18-20天，以誘導(dǎo)形成叢生芽，形成的叢生芽再分割成帶2～3個芽的芽叢接種于相同的增殖培養(yǎng)基上進(jìn)行繼代增殖。所述增殖培養(yǎng)基是以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，然后按比例添加有6BA 1.8～2.2mg.L-1、KT0.3～0.6mg.L-1、椰子水80～150ml.L-1、蔗糖20～40g.L-1、卡拉膠6～8g.-1。
3、誘導(dǎo)生根過程 將叢生芽分切成2～3個芽為1叢接種到第一生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)15～20天，再轉(zhuǎn)接到第二生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)20～25天便可長出完整的根系，生根率達(dá)95％。所述第一生根培養(yǎng)基是以1/2MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，然后按比例添加有2，4-D 0.1～2.0mg.L-1+NAA1.8～2.2mg.L-1+IAA1.8～2.2mg.L-1、蔗糖20～40g.L-1、卡拉膠6～8g.L-1。所述第二生根培養(yǎng)基是以1/2MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，然后按比例添加有NAA1.8～2.2mg.L-1+IAA1.8～2.2mg.L-1、蔗糖20～40g.-1、卡拉膠6～8g.L-1。
4、試管苗的移栽過程 把生根的瓶苗移到自然室溫下煉苗5～7天，取出小苗并清洗培養(yǎng)基后用1000倍的70％甲基托布津或1000倍多菌靈液浸泡，再移栽在遮光度約70-90％左右的“椰糠+河砂+少許泥土”基質(zhì)上，并保持濕潤，移栽成活率達(dá)98％以上。待小苗長到16-25cm時，可移入二級苗圃培植成商品苗。
權(quán)利要求
1.一種叢生竹組培快繁的生根方法，它包括無菌株系的建立過程、繼代增殖培養(yǎng)過程、誘導(dǎo)生根過程、試管苗的移栽過程，其特征在于(1)、無菌株系的建立過程取經(jīng)過精選的竹子幼枝條小心地去除葉片，經(jīng)洗潔精溶液浸泡后用自來水沖洗干凈，將枝條切成帶節(jié)的小段，在無菌條件下用70％-80％的乙醇進(jìn)行表面消毒，再把節(jié)段取出投入氯化汞水溶液中進(jìn)行消毒處理，期間不斷地進(jìn)行搖動，使竹節(jié)段始終浸泡在氯化汞水溶液中；取出節(jié)段用無菌水沖洗，接著用無菌濾紙吸干水分；正向?qū)⒐?jié)段接種到預(yù)備好的誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，先避光培養(yǎng)6-8天，再轉(zhuǎn)入自然光下培養(yǎng)，以誘導(dǎo)幼枝腋芽的萌發(fā)。所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基是以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，然后按比例添加有6BA 1.8～2.2mg.L-1、NAA0.1～0.3mg.L-1、PVP200～280mg.L-1、蔗糖20～40g.L-1、卡拉膠6～8g.L-1。(2)、繼代增殖培養(yǎng)過程 把在誘導(dǎo)培養(yǎng)階段所形成的芽切割后接種于增殖培養(yǎng)基上，先于自然光散射光下或800～1200Lx的光照條件下培養(yǎng)18-20天，以誘導(dǎo)形成叢生芽，形成的叢生芽再分割成帶2～3個芽的芽叢接種于相同的增殖培養(yǎng)基上進(jìn)行繼代增殖。所述增殖培養(yǎng)基是以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，然后按比例添加有6BA1.8～2.2mg.L-1、KT 0.3～0.6mg.L-1、椰子水80～150ml.L-1、蔗糖20～40g.L-1、卡拉膠6～8g.L-1。(3)、誘導(dǎo)生根過程 將叢生芽分切成2～3個芽為1叢接種到第一生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)15～20天，再轉(zhuǎn)接到第二生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)20～25天便可長出完整的根系，生根率達(dá)95％。所述第一生根培養(yǎng)基是以1/2MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，然后按比例添加有2，4-D 0.1～2.0mg.L-1+NAA1.8～2.2mg.L-1+IAA1.8～2.2mg.L-1、蔗糖20～40g.L-1、卡拉膠6～8g.L-1。所述第二生根培養(yǎng)基是以1/2MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，然后按比例添加有NAA1.8～2.2mg.L-1+IAA1.8～2.2mg.L-1、蔗糖20～40g.L-1、卡拉膠6～8g.L-1。(4)、試管苗的移栽過程 把生根的瓶苗移到自然室溫下煉苗5～7天，取出小苗并清洗培養(yǎng)基后用1000倍的70％甲基托布津或1000倍多菌靈液浸泡，再移栽在遮光度約70-90％左右的“椰糠+河砂+少許泥土”基質(zhì)上，并保持濕潤，移栽成活率達(dá)98％以上。待小苗長到16-25cm時，可移入二級苗圃培植成商品苗。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種叢生竹組培快繁的生根方法，它是以竹子的幼枝為外植體，在芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上培養(yǎng)建立了無菌株系，無菌苗又在增殖培養(yǎng)基上通過叢生芽快速繁殖途徑形成大量的幼芽，幼芽再經(jīng)分株壯苗后依次接種于第一生根培養(yǎng)基和第二生根培養(yǎng)基上培養(yǎng)誘導(dǎo)出完整的根系。本發(fā)明所提供的叢生竹組培快繁的生根方法解決了竹子組培苗難于生根的難題，為優(yōu)良竹種的快速繁殖提供了技術(shù)保證，將對竹資源的開發(fā)和利用起到積極的推動作用，具有重要的經(jīng)濟和社會效益。
文檔編號A01H4/00GK1640244SQ20041009771
公開日2005年7月20日 申請日期2004年11月24日 優(yōu)先權(quán)日2004年11月24日
發(fā)明者楊本鵬, 張樹珍, 昝麗梅 申請人:中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院熱帶生物技術(shù)研究所, 中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院熱帶作物生物技術(shù)國家重點實驗室