專利名稱：白菜組培苗快速高效生根方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及白菜組培苗快速高效生根技術(shù)，具體是指一種白菜組培苗快速高效生根方法。
背景技術(shù)：
組織培養(yǎng)是擴(kuò)繁速度較快的繁殖方法，組培苗生根是組織培養(yǎng)的重要環(huán)節(jié)，組培苗生根數(shù)量和質(zhì)量是直接關(guān)系到組培苗移栽成活的關(guān)鍵；將組培苗從培養(yǎng)瓶中移出時，組培苗根部附著的含糖培養(yǎng)基質(zhì)能否在不傷根的前提下快速高效與根系分離是組培苗用于大量生產(chǎn)的重要條件。固化劑在培養(yǎng)基中起固定支撐作用，植物組培傳統(tǒng)上多以瓊脂作為固化劑，卡拉膠因具有良好的凝固性且價格相對便宜、配制出來的培養(yǎng)基比較透明、使用方法簡單等優(yōu)點(diǎn)，也廣泛應(yīng)用于植物組織培養(yǎng)，杜雪玲等(2006 )研究發(fā)現(xiàn)進(jìn)口植物凝膠(phytageI)是更好的固化劑，但價格昂貴。目前白菜組培苗的生根研究主要集中在激素種類組合篩選和濃度增減上，對生根培養(yǎng)基固化劑的篩選未見報導(dǎo)，都是以瓊脂、卡那膠等作為固化劑。以瓊脂等作為白菜生根培養(yǎng)基的固化劑時，由于固體瓊脂培養(yǎng)基很緊密地附著在組培苗根的表面，很難用水洗凈。如不將根上附著的培養(yǎng)基洗凈，則因培養(yǎng)基中含有蔗糖或白糖，很容易使根發(fā)霉腐爛，降低組培苗的成活率；要洗凈則又很容易損傷根系，也降低組培苗的成活率，且費(fèi)工費(fèi)時。生產(chǎn)上迫切需要一種既能對外植體起到支撐作用，利于生根，又容易洗脫的生根培養(yǎng)基。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供 一種白菜組培苗快速高效生根方法，與目前通用的方法相t匕，避免了生根中分枝根不多、附著在根上的培養(yǎng)基不易洗脫的弊端，利用珍珠巖和少量瓊脂作為培養(yǎng)基中的固體支撐物，生根質(zhì)量好、洗脫速度快，價格便宜，能節(jié)省大量人力物力；且確定了生根培養(yǎng)基中適宜的瓊脂濃度、珍珠巖的用量，以及激素的種類和濃度。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供的白菜組培苗快速高效生根方法，依次包括配制生根培養(yǎng)基、接種、培養(yǎng)和煉苗移栽的過程，其特征在于:(I)配制生根培養(yǎng)基:將常規(guī)MS培養(yǎng)基中的大量元素含量減半、微量元素及其他成份含量不變，作為基本培養(yǎng)基；向基本培養(yǎng)基中添加瓊脂、蔗糖、萘乙酸、吲哚乙酸和去離子水，混合配制成培養(yǎng)液；然后將培養(yǎng)液倒入盛裝有珍珠巖顆粒的培養(yǎng)瓶中，使珍珠巖顆粒能夠被培養(yǎng)液完全浸透而無過剩溶液溢出；再對其進(jìn)行濕熱滅菌處理，自然冷卻形成生根培養(yǎng)基，且在生根培養(yǎng)基中如下組份的質(zhì)量體積比控制在瓊脂f3g/L、蔗糖28 30g/L、萘乙酸0.05 0.15mg/L、吲哚乙酸0.θΓθ.05mg/L、珍珠巖顆粒80 120g/L ；(2)接種:在培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基上插出小洞，將白菜組培苗切下的帶有葉片的莖尖基部放入小洞中，用旁邊的培養(yǎng)基填實(shí)莖尖基部空隙；(3)培養(yǎng):將接種好的培養(yǎng)瓶放在培養(yǎng)室內(nèi)進(jìn)行生根培養(yǎng)；
(4)煉苗移栽:生根培養(yǎng)21±2天后，將培養(yǎng)瓶置于室內(nèi)靠窗處，于自然條件下煉苗，使白菜組培苗逐漸適應(yīng)外部環(huán)境，煉苗后將苗從瓶中取出.用流水沖洗凈根上的含糖培養(yǎng)基質(zhì)后定植。作為優(yōu)選方案，所述步驟(I)中，選用珍珠巖顆粒的粒徑為:T5mm;控制濕熱滅菌溫度為121°C、時間為15min。作為優(yōu)選方案，所述步驟(2)中，在培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基上插出2 3個小洞，其大小恰好能放進(jìn)白菜組培苗莖尖基部，白菜組培苗莖尖基部帶有2 3片葉。作為優(yōu)選方案，所述步驟(3)中，生根培養(yǎng)的條件為溫度(25±2) °C、光照強(qiáng)度(2500±150) Lx、光照時間(14±3)h。作為優(yōu)選方案，所述步驟(4)中，煉苗時間為不松膜煉苗2d、松膜煉苗2d，揭開封口膜煉苗3d。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于:其一，按步驟進(jìn)行生根的方法與傳統(tǒng)生根培養(yǎng)基相比，產(chǎn)生根的側(cè)根數(shù)量多，根的質(zhì)量較好。其二，確定了用珍珠巖和適當(dāng)濃度的瓊脂相配合作為外植體的支撐物，在移栽時培養(yǎng)基容易從根上洗脫，洗脫速度快，不損傷根系，提高了組培苗移栽成活率，用珍珠巖代替大部分瓊脂，清洗效率高，節(jié)省了大量人力物力，使培養(yǎng)成本降低。
具體實(shí)施例方式以下結(jié)合具體實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)描述。供試材料:供試的白菜為兔耳白白菜(為普通的青梗菜，市場有銷售，公眾可輕易獲得)、上海青小白菜和紅菜薹組培無根苗。生根培養(yǎng)基材料:瓊脂、蔗糖、1/2MS、珍珠巖(粒度3 5mm)、萘乙酸、B引哚乙酸、去離子水。1/2MS培養(yǎng)基就是大量元素母液減半，MS是我們常用的基本培養(yǎng)基，其無機(jī)鹽與離子的濃度較高，是較為穩(wěn)定的平衡培養(yǎng)液，但是硝酸鹽含量較高，被廣泛的用于器官、花藥、細(xì)胞核原生質(zhì)體培養(yǎng)。而1/2MS是將MS的大量元素減半其他不變而配置的培養(yǎng)基，這主要是降低無機(jī)鹽濃度，作用和MS大致相同，只是適合不同植物不同要求而已。萘乙酸英文通用名1-naphthlcetic acid,其他名稱a_萘乙酸。萘乙酸毒性對人畜低毒。大鼠急性口服LD50為1000-5900mg/kg，對皮膚和粘膜有刺激作用。萘乙酸是廣譜型植物生長調(diào)節(jié)劑，能促進(jìn)細(xì)胞分裂與擴(kuò)大，誘導(dǎo)不定根形成，增加坐果，防止落果，改變雌、雄花比率等?？山?jīng)葉片、樹枝的嫩表皮、種子進(jìn)入到植株內(nèi)，隨營養(yǎng)流輸導(dǎo)到全株。適用于谷類作物，增加分蘗，提高成穗率和千粒重；棉花減少蕾鈴脫落，增桃增重，提高質(zhì)量。果樹促開花，防落果、催熟增產(chǎn)。瓜果類蔬菜防止落花，形成小籽果實(shí)；促進(jìn)扦插枝條生根等。萘乙酸在植物組培中很是常用，用于誘導(dǎo)細(xì)胞分裂和根的分化。吲哚乙酸

又名卩引哚-3-乙酸,英文通用名indole-3-acetic acid,是一種能調(diào)節(jié)植物生長和發(fā)育的植物激素。吲哚乙酸是一種有機(jī)物。純品是無色葉狀晶體或結(jié)晶性粉末。遇光后變成玫瑰色。熔點(diǎn)165-166°C (168-170°C)。易溶于無水乙醇、醋酸乙酯、二氯乙烷，可溶于乙醚和丙酮，不溶于苯、甲苯、汽油及氯仿。不溶于水，其水溶液能被紫外光分解，但對可見光穩(wěn)定。其鈉鹽、鉀鹽比酸本身穩(wěn)定，極易溶于水。易脫羧成3-甲基吲哚(糞臭素)。在組織培養(yǎng)中，被用于誘導(dǎo)細(xì)胞的分裂和根的分化。實(shí)施例一:無根組培苗為 上海青白菜組培芽苗。以將MS培養(yǎng)基的大量元素減半的培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，添加:瓊脂lg/L、蔗糖28g/L、珍珠巖(粒度3mm)80g/L、萘乙酸0.05mg/L、吲哚乙酸0.01mg/L、去離子水。先在培養(yǎng)瓶中加入4g洗凈涼干的珍珠巖，然后添加50ml培養(yǎng)液，121 °C濕熱滅菌15分鐘，自然冷卻備用。先用鑷子在培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基上插出3個小洞，大小以放進(jìn)外植體莖尖基部為宜，將3個帶有2片葉的莖尖基部放入小洞中，用周邊的培養(yǎng)基填實(shí)莖尖基部空隙即可。然后將接種好的玻璃瓶放在培養(yǎng)室進(jìn)行生根培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為 溫度25°C、光照強(qiáng)度2500Lx、光照時間14小時。培養(yǎng)21天后統(tǒng)計根的數(shù)量和質(zhì)量。一級根數(shù)目為直接著生在組培苗基部的根的數(shù)量，二級根為一級根上長出根，三級根為二級根上著生的根，以根白色、根粗短且多為好，多、細(xì)為較好，顏色發(fā)暗、少、細(xì)且長的為差。生根培養(yǎng)后組培苗的一級根、二三級根數(shù)目分別為3.05和42.25條/株，根質(zhì)量好。組培苗根上的含糖培養(yǎng)基清洗速度為1.0株/分鐘，移栽成活率為99%。實(shí)施例二:無根組培苗為免耳白小白菜組培芽苗。以將MS培養(yǎng)基的大量元素減半的培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，添加:瓊脂2.0g/L、蔗糖29g/L、珍珠巖(粒度4mm)100g/L、萘乙酸0.lmg/L、吲哚乙酸0.03mg/L、去離子水。先在培養(yǎng)瓶中加入5g洗凈涼干的珍珠巖，然后添加50ml培養(yǎng)液，121°C濕熱滅菌15分鐘，自然冷卻備用。先用鑷子在培養(yǎng)基上插出2個小洞，大小以放進(jìn)外植體莖尖基部為宜，將2個帶有3片葉的莖尖基部放入小洞中，用周邊的培養(yǎng)基填實(shí)莖尖基部空隙即可。然后將接種好的玻璃瓶放在培養(yǎng)室進(jìn)行生根培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為:溫度25°C、光照強(qiáng)度2500Lx、光照時間14小時。培養(yǎng)22天后統(tǒng)計根的數(shù)量和質(zhì)量。一級根數(shù)目為直接著生在組培苗基部的根的數(shù)量，二級根為一級根上長出根，三級根為二級根上生的根，以根白色、根粗短且多為好，多、細(xì)為較好，顏色發(fā)暗、少、細(xì)且長的為差。生根培養(yǎng)后組培苗的一級根、二三級根數(shù)目分別為3.58和43.78條/株，一級根粗壯，二級、三級根多。組培苗根上的含糖培養(yǎng)基清洗速度為1.2株/分鐘，移栽成活率為99.2%。實(shí)施例三:無根組培苗為紅菜薹組培芽苗。以將MS培養(yǎng)基的大量元素減半的培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，添加:瓊脂3.0g/L、蔗糖30.0g/L、珍珠巖(粒度5mm) 120g/L、萘乙酸0.15mg/L、吲哚乙酸0.05mg/L、去離子水。先在培養(yǎng)瓶中加入6g洗凈涼干的珍珠巖，然后添加50ml培養(yǎng)液，121 °C濕熱滅菌15分鐘，自然冷卻備用。先用鑷子在培養(yǎng)基上插出3個小洞，大小以放進(jìn)外植體莖尖基部為宜，將3個帶有2片葉的莖尖基部放入小洞中，用周邊的培養(yǎng)基填實(shí)莖尖基部空隙即可。然后將接種好的玻璃瓶放在培養(yǎng)室進(jìn)行生根培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為:溫度25°C、光照強(qiáng)度2500Lx、光照時間14小時。培養(yǎng)23天后統(tǒng)計根的數(shù)量和質(zhì)量。一級根數(shù)目為直接著生在組培苗基部的根的數(shù)量，二級根為一級根上長出根，三級根為二級根上生的根，以根白色、根粗短且多為好，多、細(xì)為較好，顏色發(fā)暗、少、細(xì)且長的為差。以純瓊脂作為固化劑的普通培養(yǎng)基(MS培養(yǎng)基+瓊脂
7.5g/L、蔗糖27/L、萘乙酸0.03mg/L)為對照。數(shù)據(jù)處理:所有數(shù)據(jù)均采用SPSS11.5 (LSD，ρ〈0.05)進(jìn)行統(tǒng)計分析處理。結(jié)果與分析:不同培養(yǎng)基對生根數(shù)量和質(zhì)量的影響表一、不同生根培養(yǎng)基生根數(shù)量和質(zhì)量統(tǒng)計表
權(quán)利要求
1.一種白菜組培苗快速高效生根方法，依次包括配制生根培養(yǎng)基、接種、培養(yǎng)和煉苗移栽的過程，其特征在于: (1)配制生根培養(yǎng)基:將常規(guī)MS培養(yǎng)基中的大量元素含量減半、微量元素及其他成份含量不變，作為基本培養(yǎng)基；向基本培養(yǎng)基中添加瓊脂、蔗糖、萘乙酸、吲哚乙酸和去離子水，混合配制成培養(yǎng)液；然后將培養(yǎng)液倒入盛裝有珍珠巖顆粒的培養(yǎng)瓶中，使珍珠巖顆粒能夠被培養(yǎng)液完全浸透而無過剩溶液溢出；再對其進(jìn)行濕熱滅菌處理，自然冷卻形成生根培養(yǎng)基，且在生根培養(yǎng)基中如下組份的質(zhì)量體積比控制在瓊脂f3g/L、蔗糖28 30g/L、萘乙酸0.05 0.15mg/L、吲哚乙酸0.θΓθ.05mg/L、珍珠巖顆粒80 120g/L ； (2)接種:在培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基上插出小洞，將白菜組培苗切下的帶有葉片的莖尖基部放入小洞中，用旁邊的培養(yǎng)基填實(shí)莖尖基部空隙； (3)培養(yǎng):將接種好的培養(yǎng)瓶放在培養(yǎng)室內(nèi)進(jìn)行生根培養(yǎng)； (4)煉苗移栽:生根培養(yǎng)21±2天后，將培養(yǎng)瓶置于室內(nèi)靠窗處，于自然條件下煉苗，使白菜組培苗逐漸適應(yīng)外部環(huán)境，煉苗后將苗從瓶中取出.用流水沖洗凈根上的含糖培養(yǎng)基質(zhì)后定植。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的白菜組培苗快速高效生根方法，其特征在于:所述步驟(I)中，選用珍珠巖顆粒的粒徑為3 5mm ;控制濕熱滅菌溫度為121°C、時間為15min。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的白菜組培苗快速高效生根方法，其特征在于:所述步驟(2)中，在培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基上插出有2 3個小洞，其大小恰好能放進(jìn)白菜組培苗莖尖基部，白菜組培苗莖尖基部帶有2 3片葉。`
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的白菜組培苗快速高效生根方法，其特征在于:所述步驟(3)中，生根培養(yǎng)的條件為溫度(25 ± 2 ) °C、光照強(qiáng)度(2500 ± 150 ) Lx、光照時間(14 ± 3 ) h。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的白菜組培苗快速高效生根方法，其特征在于:所述步驟(4)中，煉苗時間為不松膜煉苗2d、松膜煉苗2d，揭開封口膜煉苗3d。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種白菜組培苗快速高效生根方法，它包含以下步驟(1)配制適宜的生根培養(yǎng)基；(2)接種；(3)培養(yǎng)；(4)煉苗移栽。本發(fā)明確定了快速高效生根的培養(yǎng)基成分及其濃度，該方法通過選擇合適的生根培養(yǎng)基，建立了一種高效的白菜組培苗的生根體系，具有操作簡單、成本低廉、穩(wěn)定高效，大大提高組培苗的成活率等優(yōu)點(diǎn)。
文檔編號A01H4/00GK103202226SQ20131009010
公開日2013年7月17日 申請日期2013年3月20日 優(yōu)先權(quán)日2013年3月20日
發(fā)明者鄧曉輝, 邱正明, 聶啟軍, 朱鳳娟, 姚明華, 戴照義, 吳金平, 郭鳳領(lǐng), 李金泉, 王飛, 王運(yùn)強(qiáng), 李寧 申請人:湖北省農(nóng)業(yè)科學(xué)院經(jīng)濟(jì)作物研究所