專利名稱：一種快速繁殖咖啡椒草的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種觀賞水草的組織培養(yǎng)方法，更具體涉及咖啡椒草的一種快速繁殖方法，屬于生物技術(shù)在水簇箱觀賞水草種苗生產(chǎn)中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
咖啡椒草(Cryptocoryne petchii)屬天南星科隱棒花屬，以其葉色可依光線的強弱而在綠色、深橄欖色至咖啡色之間變化而得名?？Х冉凡莸娜~子呈披針形放射狀，葉緣有皺褶，在清水中似波浪狀搖曳，極富魅力，是水簇箱前景、中景草中的名貴品種。咖啡椒草原產(chǎn)于斯里蘭卡，自然繁殖系數(shù)低，常規(guī)方法(如利用匍匐莖生根的特性扦插)難以形成規(guī)?；a(chǎn)。目前國內(nèi)主要依靠進(jìn)口，價格昂貴，且常常供不應(yīng)求。
組織培養(yǎng)作為生物技術(shù)領(lǐng)域中的一種重要手段，利用植物細(xì)胞的全能性，如莖尖、嫩芽等組織，通過離體培養(yǎng)，產(chǎn)生愈傷組織、分化成苗、誘導(dǎo)生根，從而形成植物的無性系快速繁殖的植株。雖然組織培養(yǎng)是一種比較成熟的技術(shù)，其基本培養(yǎng)基一般采用MS，但對不同植物，從產(chǎn)生愈傷組織、分化成苗、誘導(dǎo)生根的不同生長階段需要不同的營養(yǎng)配置，以及不同的生長條件。因此對咖啡椒草的組織培養(yǎng)，也需要特殊的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是，提供一種快速繁殖咖啡椒草的方法，該方法利用組織培養(yǎng)技術(shù)，將咖啡椒草培養(yǎng)物經(jīng)消毒、誘導(dǎo)培養(yǎng)、分化與增殖及生根培養(yǎng)，可快速繁殖咖啡椒草，為水簇箱中前景、中景布置此水草提供大量的種苗。
為了達(dá)到上述目的，一種快速繁殖咖啡椒草的方法按下列步驟進(jìn)行(1)取長度為0.5～1.0厘米的咖啡椒草莖尖作為咖啡椒草培養(yǎng)物；(2)將咖啡椒草培養(yǎng)物用流水沖冼20～30分鐘，然后用0.1％的氯化汞浸泡6～8分鐘，無菌水沖洗8～10分鐘；(3)將經(jīng)步驟(2)處理的咖啡椒草培養(yǎng)物接入誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，培養(yǎng)22～28天；誘導(dǎo)培養(yǎng)基為每升MS基本培養(yǎng)基中加入0.08毫克KT(6-呋喃氨基嘌呤)、0.05毫克2，4-D(2，4-二氯苯氧乙酸)、30克蔗糖、6克瓊脂；其中每升MS基本培養(yǎng)基含NH4NO3(硝酸銨) 1650毫克KNO3(硝酸鉀) 1900毫克CaCl2·2H2O(二水氯化鈣) 440毫克MgSO4.7H2O(硫酸鎂) 370毫克KH2PO4(磷酸二氫鉀) 170毫克KI(碘化鉀) 0.83毫克
H3BO3(硼酸) 6.2毫克MnSO4·4H2O(硫酸錳) 22.3毫克ZnSO4·7H2O(硫酸鋅) 8.6毫克Na2MoO4·2H2O(鉬酸鈉) 0.25毫克CuSO4·5H2O(硫酸銅) 0.025毫克CoCl2·6H2O(氯化鈷) 0.025毫克FeSO4·7H2O(硫酸亞鐵) 27.8毫克乙二胺四乙酸二鈉 37.3毫克肌醇 100毫克煙酸 0.5毫克鹽酸吡哆醇 0.5毫克鹽酸硫胺素 0.1毫克甘氨酸 2毫克余者為水；(4)將經(jīng)步驟(3)培養(yǎng)的咖啡椒草培養(yǎng)物轉(zhuǎn)接于分化與增殖培養(yǎng)基，培養(yǎng)35～45天長出許多咖啡椒草芽；分化與增殖培養(yǎng)基為每升MS基本培養(yǎng)基中加入1毫克BA(6-芐基腺嘌呤)、0.2毫克IBA(吲哚丁酸)、30克蔗糖、6克瓊脂；(5)若將步驟(4)的咖啡椒草芽分株，可作為新的咖啡椒草培養(yǎng)物，重復(fù)步驟(4)可得到大量的咖啡椒草芽；(6)若將步驟(4)的咖啡椒草芽轉(zhuǎn)接于生根培養(yǎng)基中誘導(dǎo)生根，培養(yǎng)35～45天即得到咖啡椒草苗；生根培養(yǎng)基為每升MS基本培養(yǎng)基中加入1升蒸餾水、0.5毫克IBA(吲哚丁酸)、40克蔗糖、12克瓊脂。
本發(fā)明具有如下優(yōu)點本發(fā)明的誘導(dǎo)培養(yǎng)基、分化與增殖培養(yǎng)基及生根培養(yǎng)基是最適合咖啡椒草三個不同生長階段---誘導(dǎo)培養(yǎng)、分化與增殖及生根培養(yǎng)的最佳培養(yǎng)基配方，一個咖啡椒草莖尖經(jīng)反復(fù)增殖，一年可繁殖上萬株種苗，為水簇箱中前景、中景布置此水草提供大量的種苗。
具體實施例方式一種快速繁殖咖啡椒草的方法，該方法按下列步驟進(jìn)行(1)取長度為0.5～1.0厘米的咖啡椒草莖尖作為咖啡椒草培養(yǎng)物；(2)將咖啡椒草培養(yǎng)物用流水沖冼20～30分鐘，然后用0.1％的氯化汞浸泡6～8分鐘，無菌水沖洗8～10分鐘；(3)將經(jīng)步驟(2)處理的咖啡椒草培養(yǎng)物接入誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，培養(yǎng)22～28天，咖啡椒草培養(yǎng)物開始萌動、生長；誘導(dǎo)培養(yǎng)基為每升MS基本培養(yǎng)基中加入0.08毫克KT(6-呋喃氨基嘌呤)、0.05毫克2，4-D(2，4-二氯苯氧乙酸)、30克蔗糖、6克瓊脂；其中每升MS基本培養(yǎng)基含NH4NO3(硝酸銨) 1650毫克KNO3(硝酸鉀)1900毫克CaCl2·2H2O(二水氯化鈣)440毫克MgSO4.7H2O(硫酸鎂) 370毫克
KH2PO4(磷酸二氫鉀)170毫克KI(碘化鉀) 0.83毫克H3BO3(硼酸) 6.2毫克MnSO4·4H2O(硫酸錳) 22.3毫克ZnSO4·7H2O(硫酸鋅) 8.6毫克Na2MoO4·2H2O(鉬酸鈉)0.25毫克CuSO4·5H2O(硫酸銅) 0.025毫克CoCl2·6H2O(氯化鈷) 0.025毫克FeSO4·7H2O(硫酸亞鐵) 27.8毫克乙二胺四乙酸二鈉 37.3毫克肌醇 100毫克煙酸 0.5毫克鹽酸吡哆醇 0.5毫克鹽酸硫胺素 0.1毫克甘氨酸 2毫克余者為水；(4)將經(jīng)步驟(3)培養(yǎng)的咖啡椒草培養(yǎng)物轉(zhuǎn)接于分化與增殖培養(yǎng)基，培養(yǎng)35～45天長出許多咖啡椒草芽；分化與增殖培養(yǎng)基為每升MS基本培養(yǎng)基中加入1毫克BA(6-芐基腺嘌呤)、0.2毫克IBA(吲哚丁酸)、30克蔗糖、6克瓊脂；(5)若將步驟(4)的咖啡椒草芽分株，可作為新的咖啡椒草培養(yǎng)物，重復(fù)步驟(4)可得到大量的咖啡椒草芽；
(6)若將步驟(4)的咖啡椒草芽轉(zhuǎn)接于生根培養(yǎng)基中誘導(dǎo)生根，培養(yǎng)35～45天即得到咖啡椒草苗；生根培養(yǎng)基為每升MS基本培養(yǎng)基中加入1升蒸餾水、0.5毫克IBA(吲哚丁酸)、40克蔗糖、12克瓊脂。
實施本發(fā)明，可在短期內(nèi)得到大量的咖啡椒草試管苗。
權(quán)利要求
1.一種快速繁殖咖啡椒草的方法，其特征在于，該方法按下列步驟進(jìn)行(.1)取長度0.5～1.0厘米的咖啡椒草莖尖作為咖啡椒草培養(yǎng)物；(2)將咖啡椒草培養(yǎng)物用流水沖冼20～30分鐘，然后用0.1％的氯化汞浸泡6～8分鐘，無菌水沖洗8～10分鐘；(3)將經(jīng)步驟(2)處理的咖啡椒草培養(yǎng)物接入誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，培養(yǎng)22～28天；誘導(dǎo)培養(yǎng)基為每升MS基本培養(yǎng)基中加入0.08毫克6-呋喃氨基嘌呤、0.05毫克2，4-二氯苯氧乙酸、30克蔗糖、6克瓊脂；(4)將經(jīng)步驟(3)培養(yǎng)的咖啡椒草培養(yǎng)物轉(zhuǎn)接于分化與增殖培養(yǎng)基，培養(yǎng)35～45天長出許多咖啡椒草芽；分化與增殖培養(yǎng)基為每升MS基本培養(yǎng)基中加入1毫克6-芐基腺嘌呤、0.2毫克吲哚丁酸、30克蔗糖、6克瓊脂；(5)將步驟(4)的咖啡椒草芽分株，作為新的咖啡椒草培養(yǎng)物，重復(fù)步驟(4)可得到大量的咖啡椒草芽；(6)將步驟(4)的咖啡椒草芽轉(zhuǎn)接于生根培養(yǎng)基中誘導(dǎo)生根，培養(yǎng)35～45天即得到咖啡椒草苗；生根培養(yǎng)基為每升MS基本培養(yǎng)基中加入1升蒸餾水、0.5毫克吲哚丁酸、40克蔗糖、12克瓊脂。
全文摘要
本發(fā)明公開了咖啡椒草的一種快速繁殖方法，即以咖啡椒草的莖尖為培養(yǎng)物，培養(yǎng)在以MS為基本培養(yǎng)基、附加KT和2，4－D的誘導(dǎo)培養(yǎng)基中約3－4周，莖尖萌動、生長后再轉(zhuǎn)接于附加BA和NAA的分化、增殖培養(yǎng)基中誘導(dǎo)叢生苗，增殖系數(shù)可達(dá)4－5倍。而后每30天繼代培養(yǎng)一次，一年可繁殖上萬株咖啡椒草種苗，為水簇箱前景、中景布置此水草提供大量的種苗。
文檔編號A01H4/00GK1586172SQ20041006062
公開日2005年3月2日 申請日期2004年7月23日 優(yōu)先權(quán)日2004年7月23日
發(fā)明者劉艷玲, 徐立銘, 李洪林 申請人:中國科學(xué)院武漢植物園