專利名稱：大規(guī)模液體深層發(fā)酵生產(chǎn)亮菌菌絲體菌粉及其多糖工藝的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種大規(guī)模液體深層發(fā)酵生產(chǎn)亮菌菌絲體菌粉及其多糖工藝。
背景技術(shù)：
亮菌(Armillariella tabescens(Scop.Fr.)Sing)，英文名Ringles HoneyMushroom，又名發(fā)光小蜜環(huán)菌、易逝杯傘，屬蘑菇目，口蘑菌科，小蜜環(huán)菌屬。菌蓋扁半球形，后漸平展，中部下凹，直徑2-7厘米，表面蜜黃色至深蛋殼色，四周較中部色稍淺，有較密的淺朽葉色、黑褐色的毛狀小鱗片，邊緣完全，有不明顯的條紋；菌褶淡肉色，稍稀，長短不一，與菌柄近延生；菌肉白色至白黃色，中部厚，邊緣薄，味淡，可口。菌柄圓柱形，長5-12厘米，粗3-8毫米，基部淺棕灰色至深棕灰色，上部色稍淡呈蛋殼色，初時(shí)有細(xì)絨毛狀鱗片，老熟時(shí)變得光滑，纖維質(zhì)，內(nèi)部松軟；孢子廣橢圓形，無色，光滑，7.5-10微米×5.3-7.5微米，無擬淀粉性反應(yīng)，孢子印白色。菌絲能發(fā)淺藍(lán)色的熒光。該菌與小蜜環(huán)不同之處在于菌蓋不粘，無菌環(huán)，菌索扁平呈鹿角狀。夏秋季生于闊葉樹的樁上或樹干基部，導(dǎo)致根腐，叢生。在云南、四川、河南、福建、浙江、安徽、河北有分布。
據(jù)分析，該菌100克干品含蛋白質(zhì)18.3克，脂肪1.9克，碳水化合物58.9克，熱量329千卡，磷400毫克，核黃素3.96毫克。該菌的菌絲及菌素含有蜜環(huán)菌香豆素(即蜜環(huán)菌甲素)、麥角甾醇等，其發(fā)酵產(chǎn)物制劑有治療膽囊炎及傳染性肝炎的作用。
目前市場上的亮菌制劑是采用亮菌固體培養(yǎng)方式生產(chǎn)，存在生產(chǎn)周期長，生產(chǎn)效率低和容易染菌等缺點(diǎn)。采用三級液體發(fā)酵工藝可以快速、大量的生產(chǎn)亮菌菌絲體及其多糖，比固體發(fā)酵有較大優(yōu)勢。目前尚未見采用三級液體發(fā)酵工藝大規(guī)模生產(chǎn)亮菌菌絲體菌粉及其多糖的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是以生產(chǎn)亮菌菌絲體菌粉和多糖為目標(biāo)，發(fā)明一種廉價(jià)高效的亮菌菌絲體菌粉及其多糖的大規(guī)模液體深層發(fā)酵工藝，為今后的產(chǎn)業(yè)化應(yīng)用打下基礎(chǔ)。
實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的技術(shù)方案以亮菌真菌為出發(fā)菌株，采用斜面菌種進(jìn)行液體搖瓶培養(yǎng)、液體搖瓶擴(kuò)大培養(yǎng)、一級種子培養(yǎng)、二級種子培養(yǎng)和三級發(fā)酵培養(yǎng)。本菌株購自山東金鄉(xiāng)真菌研究所。
實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的具體步驟如下(1)取出斜面菌種接入配制的新鮮斜面培養(yǎng)基中，培養(yǎng)溫度28-30℃，培養(yǎng)150-180小時(shí)。
(2)將步驟1中的斜面菌種轉(zhuǎn)接入裝有搖瓶培養(yǎng)基的搖瓶中，28-30℃培養(yǎng)，轉(zhuǎn)速120-180rpm/min，培養(yǎng)96-120小時(shí)后進(jìn)行搖瓶的擴(kuò)大培養(yǎng)。
(3)將步驟2中的搖瓶菌種轉(zhuǎn)接入裝有搖瓶擴(kuò)大培養(yǎng)基的搖瓶再進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，28-30℃培養(yǎng)，轉(zhuǎn)速120-180rpm/min，培養(yǎng)30-60小時(shí)后接入一級種子罐進(jìn)行培養(yǎng)。
(4)將步驟3中的搖瓶菌種轉(zhuǎn)接入一個(gè)裝有一級種子培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中，接種量為4-10％，保持罐溫28-30℃，罐壓0.5-0.9kPa，攪拌速率80-150rpm/min，通氣量1∶0.3-0.5v/v.m，發(fā)酵90-150小時(shí)，然后轉(zhuǎn)接入二級種子培養(yǎng)罐發(fā)酵。
(5)將一級種子罐中的菌種轉(zhuǎn)接入一個(gè)裝有二級種子培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中，接種量為4-10％，保持罐溫28-30℃，罐壓0.5-0.9kPa，攪拌速率80-150rpm/min，通氣量1∶0.3-0.5v/v.m，發(fā)酵40-60小時(shí)，然后轉(zhuǎn)接入三級發(fā)酵罐發(fā)酵。
(6)將二級種子罐中的菌種轉(zhuǎn)接入一個(gè)裝有三級發(fā)酵培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中，接種量為4-10％，保持罐溫28-30℃，罐壓0.5-0.9kPa，攪拌速率80-150rpm/min，通氣量1∶0.3-0.5v/v.m，發(fā)酵100-150小時(shí)。在還原糖含量降低到1.0％以下時(shí)放罐。
如需獲得菌粉，則終了發(fā)酵液在發(fā)酵罐中以大于300rpm/min的轉(zhuǎn)速高速打碎1小時(shí)，然后將其濃縮，待固形物含量達(dá)15-20％后，于120℃滅菌20-30min，采用無菌噴霧干燥得菌粉。
如需獲取其多糖，則將終了發(fā)酵液溫度加熱到90-100℃，攪拌速度為200-250rpm/min，維持2-4小時(shí)，用泵將發(fā)酵液輸送到貯罐中，經(jīng)板框壓濾得到亮菌多糖。
本發(fā)明中斜面培養(yǎng)基的配方是(g/100ml)馬鈴薯10-30，葡萄糖1-3，瓊脂1.5-2.5，加水定容至所需體積，pH值自然。
本發(fā)明中搖瓶培養(yǎng)、搖瓶擴(kuò)大培養(yǎng)、一級種子培養(yǎng)和二級種子培養(yǎng)的培養(yǎng)基組成是(g/100ml)葡萄糖1-3，酵母膏0.3-0.7，蛋白胨0.1-0.3，NaCl 0.05-0.2，KH2PO40.05-0.2，MgSO40.03-0.1，加水定容至所需體積，pH值為4.5-5.0。
本發(fā)明中所述的三級發(fā)酵培養(yǎng)基組成是(g/100ml)葡萄糖2-4，酵母膏0.5-1.5，蛋白胨0.3-0.7，淀粉0.5-2，生長素0.3-0.7，NaCl 0.05-0.15，(NH4)2SO40.05-0.2，KH2PO40.1-0.4，MgSO40.05-0.15，加水定容至所需體積，pH值為4.5-5.0。
本發(fā)明步驟2和3中搖瓶培養(yǎng)基與搖瓶容積比為1∶5。
本發(fā)明步驟4中一級種子罐的容積為100-300L，在該一級種子罐中裝有的一級種子培養(yǎng)基相應(yīng)為50-180L；步驟5中二級種子罐的容積為1000-5000L，在該發(fā)酵罐中裝有的發(fā)酵培養(yǎng)基相應(yīng)為500-3000L；步驟6中三級發(fā)酵罐的容積為10000L-15000L，在該發(fā)酵罐中裝有的發(fā)酵培養(yǎng)基相應(yīng)為5000L-9000L。
本發(fā)明的放罐標(biāo)準(zhǔn)是發(fā)酵液開始變得粘稠，還原糖含量降低到1.0％以下，鏡檢發(fā)現(xiàn)菌絲體開始衰老。
菌絲體干重的測定采用烘干法，多糖提取采用乙醇沉淀法，采用文獻(xiàn)的方法；馮慧琴，楊慶堯，靡可，沈涌灰樹花液體培養(yǎng)菌絲產(chǎn)多糖的研究。食用菌學(xué)報(bào)，2000，7(2)5-10。
本發(fā)明的有益效果本發(fā)明適用于大規(guī)模液體深層發(fā)酵生產(chǎn)亮菌菌絲體菌粉及其多糖，解決了大規(guī)模生產(chǎn)培養(yǎng)放大的難題，對于今后的工業(yè)化生產(chǎn)和相關(guān)的應(yīng)用產(chǎn)業(yè)的發(fā)展具有重要意義。本發(fā)明在發(fā)酵結(jié)束后得到的發(fā)酵產(chǎn)物顏色呈褐色，具有近似蜂蜜的香味，干燥菌絲體粉末呈褐色。發(fā)酵液中菌絲體以干重計(jì)為2-3％。本發(fā)明所生產(chǎn)的菌粉可用做生產(chǎn)片劑、膠囊劑等的原料；所生產(chǎn)的多糖可用做生產(chǎn)各種液體制劑的原料，干燥后可用做生產(chǎn)片劑、膠囊劑等固體制劑的原料。
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合具體實(shí)施例對本發(fā)明做進(jìn)一步的詳細(xì)說明。
實(shí)施例1在斜面培養(yǎng)基中接種亮菌菌絲體，培養(yǎng)溫度28℃，培養(yǎng)時(shí)間180小時(shí)。將新鮮的斜面菌種接入裝有100ml培養(yǎng)基的500ml三角瓶中，28℃搖床培養(yǎng)100小時(shí)，搖床轉(zhuǎn)速150rpm/min。然后將所得搖瓶菌種轉(zhuǎn)接入裝有100ml培養(yǎng)基的500ml三角搖瓶中進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，28℃搖床培養(yǎng)48小時(shí)，搖床轉(zhuǎn)速150rpm/min。然后將三角瓶擴(kuò)大的菌種2200ml轉(zhuǎn)接入裝有50L種子培養(yǎng)基的100L一級種子罐中，保持罐溫28℃，罐壓0.7kPa，攪拌速率100rpm/min，通氣量1∶0.5v/v.m，發(fā)酵時(shí)間100小時(shí)。將一級種子罐菌種轉(zhuǎn)接入裝有800L種子培養(yǎng)基的1500L二級種子培養(yǎng)罐中，保持罐溫28℃，罐壓0.7kPa，攪拌速率100rpm/min，通氣量1∶0.5v/v.m，發(fā)酵時(shí)間50小時(shí)。將二級種子罐菌種轉(zhuǎn)接入裝有8000L發(fā)酵培養(yǎng)基的15000L三級發(fā)酵罐中，保持罐溫28℃，罐壓0.7kPa，攪拌速率100rpm/min，通氣量1∶0.5v/v.m，發(fā)酵時(shí)間150小時(shí)發(fā)酵液中菌絲體以干重計(jì)為2.5％，干菌粉中多糖含量為15％。
本實(shí)施例中斜面培養(yǎng)基組成是(g/100ml)馬鈴薯20，葡萄糖2，瓊脂2，加水定容至所需體積，pH值為自然。
本實(shí)施例中搖瓶培養(yǎng)、搖瓶擴(kuò)大培養(yǎng)、一級種子培養(yǎng)和二級種子培養(yǎng)的培養(yǎng)基組成是(g/100ml)葡萄糖2，酵母膏0.5，蛋白胨0.2，NaCl 0.1，KH2PO40.1，MgSO40.05，加水定容至所需體積，pH值為4.5-5.0。
本實(shí)施例中所述的三級發(fā)酵培養(yǎng)基組成是(g/100ml)葡萄糖3，酵母膏1.0，蛋白胨0.5，淀粉1，生長素0.5，NaCl 0.1，(NH4)2SO40.1，KH2PO40.2，MgSO40.1，加水定容至所需體積，pH值為4.5-5.0。
本實(shí)施例中發(fā)酵結(jié)束標(biāo)準(zhǔn)是發(fā)酵液開始變得粘稠，還原糖含量降低到1.0％以下，鏡檢發(fā)現(xiàn)菌絲體開始衰老。
獲取菌粉的方法是終了發(fā)酵液在發(fā)酵罐中以320rpm/min的轉(zhuǎn)速高速打碎1小時(shí)，然后將其濃縮，待固形物含量達(dá)18％后，于120℃滅菌30min，采用無菌噴霧干燥得菌粉。
獲取多糖的方法是在本發(fā)明所述的發(fā)酵終止后，將溫度加熱到90℃，攪拌速度為220rpm/min，維持3小時(shí)，用泵將發(fā)酵液輸送到貯罐中，經(jīng)板框壓濾，濾液經(jīng)濃縮，使最后體積為原液的1/5，加入適量乙醇使乙醇濃度達(dá)75％，醇析24小時(shí)，取沉淀用去離子水溶解，噴霧干燥得到亮菌多糖。
實(shí)施例2在斜面培養(yǎng)基中接種亮菌菌絲體，培養(yǎng)溫度28.5℃，培養(yǎng)時(shí)間168小時(shí)。將新鮮的斜面菌種接入裝有100ml培養(yǎng)基的500ml三角瓶中，28.5℃搖床培養(yǎng)96小時(shí)，搖床轉(zhuǎn)速150rpm/min。然后將所得搖瓶菌種轉(zhuǎn)接入裝有100ml培養(yǎng)基的500ml三角搖瓶中進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，28.5℃搖床培養(yǎng)56小時(shí)，搖床轉(zhuǎn)速150rpm/min。然后將三角瓶擴(kuò)大的菌種2500ml轉(zhuǎn)接入裝有60L種子培養(yǎng)基的100L一級種子罐中，保持罐溫28.5℃，罐壓0.7kPa，攪拌速率110rpm/min，通氣量1∶0.5v/v.m，發(fā)酵時(shí)間98小時(shí)。將一級種子罐菌種轉(zhuǎn)接入裝有800L發(fā)酵培養(yǎng)基的1500L二級種子培養(yǎng)罐中，保持罐溫28.5℃，罐壓0.7kPa，攪拌速率110rpm/min，通氣量1∶0.5v/v.m，發(fā)酵時(shí)間56小時(shí)。將二級種子罐菌種轉(zhuǎn)接入裝有9000L發(fā)酵培養(yǎng)基的15000L三級發(fā)酵罐中，保持罐溫28.5℃，罐壓0.7kPa，攪拌速率110rpm/min，通氣量1∶0.5v/v.m，發(fā)酵時(shí)間132小時(shí)發(fā)酵液中菌絲體以干重計(jì)為2.8％，干菌粉中多糖含量為17％。
本實(shí)施例中斜面培養(yǎng)基組成是(g/100ml)馬鈴薯20，葡萄糖2，瓊脂2，加水定容至所需體積，pH值為自然。
本實(shí)施例中搖瓶培養(yǎng)、搖瓶擴(kuò)大培養(yǎng)、一級種子培養(yǎng)和二級種子培養(yǎng)的培養(yǎng)基組成是(g/100ml)葡萄糖2，酵母膏0.5，蛋白胨0.2，NaCl 0.1，KH2PO40.1，MgSO40.05，加水定容至所需體積，pH值為4.5-5.0。
本實(shí)施例中所述的三級發(fā)酵培養(yǎng)基組成是(g/100ml)葡萄糖4，酵母膏1.5，蛋白胨0.5，淀粉1.5，生長素0.5，NaCl 0.1，(NH4)2SO40.1，KH2PO40.2，MgSO40.1，加水定容至所需體積，pH值為4.5-5.0。
本實(shí)施例中發(fā)酵結(jié)束標(biāo)準(zhǔn)是發(fā)酵液開始變得粘稠，還原糖含量降低到1.0％以下，鏡檢發(fā)現(xiàn)菌絲體開始衰老。
獲取菌粉的方法是終了發(fā)酵液在發(fā)酵罐中以320rpm/min的轉(zhuǎn)速高速打碎1小時(shí)，然后將其濃縮，待固形物含量達(dá)20％后，于120℃滅菌30min，采用無菌噴霧干燥得菌粉。
獲取多糖的方法是在本發(fā)明所述的發(fā)酵終止后，將溫度加熱到100℃，攪拌速度為220rpm/min，維持3小時(shí)，用泵將發(fā)酵液輸送到貯罐中，經(jīng)板框壓濾，濾液經(jīng)濃縮，使最后體積為原液的1/5，加入適量乙醇使乙醇濃度達(dá)75％，醇析24小時(shí)，取沉淀用去離子水溶解，噴霧干燥得到亮菌多糖。
實(shí)施例3在斜面培養(yǎng)基中接種亮菌菌絲體，培養(yǎng)溫度29℃，培養(yǎng)時(shí)間160小時(shí)。將新鮮的斜面菌種接入裝有100ml培養(yǎng)基的500ml三角瓶中，29℃搖床培養(yǎng)96小時(shí)，搖床轉(zhuǎn)速150rpm/min。然后將所得搖瓶菌種轉(zhuǎn)接入裝有100ml培養(yǎng)基的500ml三角搖瓶中進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，29℃搖床培養(yǎng)44小時(shí)，搖床轉(zhuǎn)速150rpm/min。然后將三角瓶擴(kuò)大的菌種2500ml轉(zhuǎn)接入裝有50L種子培養(yǎng)基的100L一級種子罐中，保持罐溫29℃，罐壓0.7kPa，攪拌速率100rpm/min，通氣量1∶0.5v/v.m，發(fā)酵時(shí)間96小時(shí)。將一級種子罐菌種轉(zhuǎn)接入裝有500L發(fā)酵培養(yǎng)基的1000L二級種子培養(yǎng)罐中，保持罐溫29℃，罐壓0.7kPa，攪拌速率100rpm/min，通氣量1∶0.5v/v.m，發(fā)酵時(shí)間40小時(shí)。將二級種子罐菌種轉(zhuǎn)接入裝有5000L發(fā)酵培養(yǎng)基的10000L三級發(fā)酵罐中，保持罐溫29℃，罐壓0.7kPa，攪拌速率100rpm/min，通氣量1∶0.5v/v.m，發(fā)酵時(shí)間120小時(shí)發(fā)酵液中菌絲體以干重計(jì)為2.5％，干菌粉中多糖含量為13％。
本實(shí)施例中斜面培養(yǎng)基組成是(g/100ml)馬鈴薯20，葡萄糖2，瓊脂2，加水定容至所需體積，pH值為自然。
本實(shí)施例中搖瓶培養(yǎng)、搖瓶擴(kuò)大培養(yǎng)、一級種子培養(yǎng)和二級種子培養(yǎng)的培養(yǎng)基組成是(g/100ml)葡萄糖2，酵母膏0.5，蛋白胨0.2，NaCl 0.1，KH2PO40.1，MgSO40.05，加水定容至所需體積，pH值為4.5-5.0。
本實(shí)施例中所述的三級發(fā)酵培養(yǎng)基組成是(g/100ml)葡萄糖3，酵母膏1.2，蛋白胨0.5，淀粉0.9，生長素0.4，NaCl 0.1，(NH4)2SO40.1，KH2PO40.2，MgSO40.1，加水定容至所需體積，pH值為4.5-5.0。
本實(shí)施例中發(fā)酵結(jié)束標(biāo)準(zhǔn)是發(fā)酵液開始變得粘稠，還原糖含量降低到1.0％以下，鏡檢發(fā)現(xiàn)菌絲體開始衰老。
獲取菌粉的方法是終了發(fā)酵液在發(fā)酵罐中以320rpm/min的轉(zhuǎn)速高速打碎1小時(shí)，然后將其濃縮，待固形物含量達(dá)16％后，于120℃滅菌30min，采用無菌噴霧干燥得菌粉。
獲取多糖的方法是在本發(fā)明所述的發(fā)酵終止后，將溫度加熱到100℃，攪拌速度為220rpm/min，維持3小時(shí)，用泵將發(fā)酵液輸送到貯罐中，經(jīng)板框壓濾，濾液經(jīng)濃縮，使最后體積為原液的1/5，加入適量乙醇使乙醇濃度達(dá)75％，醇析24小時(shí)，取沉淀用去離子水溶解，噴霧干燥得到亮菌多糖。
實(shí)施例4在斜面培養(yǎng)基中接種亮菌菌絲體，培養(yǎng)溫度30℃，培養(yǎng)時(shí)間150小時(shí)。將新鮮的斜面菌種接入裝有100ml培養(yǎng)基的500ml三角瓶中，30℃搖床培養(yǎng)94小時(shí)，搖床轉(zhuǎn)速150rpm/min。然后將所得搖瓶菌種轉(zhuǎn)接入裝有100ml培養(yǎng)基的500ml三角搖瓶中進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，30℃搖床培養(yǎng)44小時(shí)，搖床轉(zhuǎn)速150rpm/min。然后將三角瓶擴(kuò)大的菌種2600ml轉(zhuǎn)接入裝有50L種子培養(yǎng)基的100L一級種子罐中，保持罐溫30℃，罐壓0.7kPa，攪拌速率100rpm/min，通氣量1∶0.5v/v.m，發(fā)酵時(shí)間92小時(shí)。將一級種子罐菌種轉(zhuǎn)接入裝有500L發(fā)酵培養(yǎng)基的1000L二級種子培養(yǎng)罐中，保持罐溫30℃，罐壓0.7kPa，攪拌速率100rpm/min，通氣量1∶0.5v/v.m，發(fā)酵時(shí)間40小時(shí)。將二級種子罐菌種轉(zhuǎn)接入裝有5000L發(fā)酵培養(yǎng)基的10000L三級發(fā)酵罐中，保持罐溫30℃，罐壓0.7kPa，攪拌速率100rpm/min，通氣量1∶0.5v/v.m，發(fā)酵時(shí)間100小時(shí)發(fā)酵液中菌絲體以干重計(jì)為2.2％，干菌粉中多糖含量為12％。
本實(shí)施例中斜面培養(yǎng)基組成是(g/100ml)馬鈴薯20，葡萄糖2，瓊脂2，加水定容至所需體積，pH值為自然。
本實(shí)施例中搖瓶培養(yǎng)、搖瓶擴(kuò)大培養(yǎng)、一級種子培養(yǎng)和二級種子培養(yǎng)的培養(yǎng)基組成是(g/100ml)葡萄糖2，酵母膏0.5，蛋白胨0.2，NaCl 0.1，KH2PO40.1，MgSO40.05，加水定容至所需體積，pH值為4.5-5.0。
本實(shí)施例中所述的三級發(fā)酵培養(yǎng)基組成是(g/100ml)葡萄糖2.2，酵母膏1.4，蛋白胨0.5，淀粉0.9，生長素0.4，NaCl 0.1，(NH4)2SO40.1，KH2PO40.2，MgSO40.1，加水定容至所需體積，pH值為4.5-5.0。
本實(shí)施例中發(fā)酵結(jié)束標(biāo)準(zhǔn)是發(fā)酵液開始變得粘稠，還原糖含量降低到1.0％以下，鏡檢發(fā)現(xiàn)菌絲體開始衰老。
獲取菌粉的方法是終了發(fā)酵液在發(fā)酵罐中以320rpm/min的轉(zhuǎn)速高速打碎1小時(shí)，然后將其濃縮，待固形物含量達(dá)15％后，于120℃滅菌30min，采用無菌噴霧干燥得菌粉。
獲取多糖的方法是在本發(fā)明所述的發(fā)酵終止后，將溫度加熱到100℃，攪拌速度為220rpm/min，維持3小時(shí)，用泵將發(fā)酵液輸送到貯罐中，經(jīng)板框壓濾，濾液經(jīng)濃縮，使最后體積為原液的1/5，加入適量乙醇使乙醇濃度達(dá)75％，醇析24小時(shí)，取沉淀用去離子水溶解，噴霧干燥得到亮菌多糖。
權(quán)利要求
1.一種亮菌液體深層發(fā)酵生產(chǎn)工藝，其特征是以亮菌真菌為出發(fā)菌株，采用斜面菌種進(jìn)行液體搖瓶培養(yǎng)、液體搖瓶擴(kuò)大培養(yǎng)、一級種子培養(yǎng)、二級種子培養(yǎng)和三級發(fā)酵培養(yǎng)得亮菌菌絲體發(fā)酵液；如需獲取其菌粉，則將發(fā)酵液在發(fā)酵罐內(nèi)高速打碎，經(jīng)濃縮滅菌后，無菌噴霧干燥得菌粉；或發(fā)酵結(jié)束后將終了發(fā)酵液繼續(xù)加熱到一定溫度，攪拌維持一定時(shí)間，發(fā)酵液經(jīng)板框壓濾得到亮菌多糖；搖瓶培養(yǎng)、搖瓶擴(kuò)大培養(yǎng)、一級種子培養(yǎng)和二級種子培養(yǎng)的培養(yǎng)基組成以g/100ml計(jì)為葡萄糖1-3，酵母膏0.3-0.7，蛋白胨0.1-0.3，NaCl 0.05-0.2，KH2PO40.05-0.2，MgSO40.03-0.1，加水定容至所需體積，pH值為4.5-5.0；搖瓶培養(yǎng)的培養(yǎng)條件是培養(yǎng)溫度28-30℃，轉(zhuǎn)速120-180rpm/min，培養(yǎng)96-120小時(shí)，然后轉(zhuǎn)接入搖瓶進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)；搖瓶擴(kuò)大培養(yǎng)的培養(yǎng)條件是培養(yǎng)溫度28-30℃，轉(zhuǎn)速120-180rpm/min，培養(yǎng)30-60小時(shí)，然后轉(zhuǎn)接入一級種子罐培養(yǎng)，接種量為4-10％；一級種子培養(yǎng)的培養(yǎng)條件是培養(yǎng)溫度28-30℃，罐壓0.5-0.9kPa，攪拌速率80-150rpm/min，通氣量1∶0.3-0.5v/v.m，發(fā)酵90-150小時(shí)，然后轉(zhuǎn)接入二級種子罐培養(yǎng)，接種量為4-10％；二級種子培養(yǎng)的培養(yǎng)條件是培養(yǎng)溫度28-30℃，罐壓0.5-0.9kPa，攪拌速率80-150rpm/min，通氣量1∶0.3-0.5v/v.m，發(fā)酵40-60小時(shí)，然后轉(zhuǎn)接入三級發(fā)酵罐培養(yǎng)，接種量為4-10％；三級發(fā)酵培養(yǎng)基組成以g/100ml計(jì)為葡萄糖2-4，酵母膏0.5-1.5，蛋白胨0.3-0.7，淀粉0.5-2，生長素0.3-0.7，NaCl 0.05-0.15，(NH4)2SO40.05-0.2，KH2PO40.1-0.4，MgSO40.05-0.15，加水定容至所需體積，pH值為4.5-5.0；培養(yǎng)條件是培養(yǎng)溫度28-30℃，罐壓0.5-0.9kPa，攪拌速率80-150rpm/min，通氣量1∶0.3-0.5v/v.m，發(fā)酵100-150小時(shí)；三級發(fā)酵培養(yǎng)，可選擇10000L-15000L發(fā)酵罐進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的亮菌液體深層發(fā)酵生產(chǎn)工藝，其特征是以購自山東金鄉(xiāng)真菌研究所亮菌真菌為出發(fā)菌株。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的亮菌液體深層發(fā)酵生產(chǎn)工藝，其特征是如需獲得菌粉，則終了發(fā)酵液在發(fā)酵罐中以大于300rpm/min的轉(zhuǎn)速高速打碎1小時(shí)，然后將其濃縮，待固形物含量達(dá)15-20％后，于120℃滅菌20-30min，采用無菌噴霧干燥得菌粉。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的亮菌液體深層發(fā)酵生產(chǎn)工藝，其特征是如需獲取其多糖，則將終了發(fā)酵液溫度加熱到90-100℃，攪拌速度為200-250rpm/min，維持2-4小時(shí)，用泵將發(fā)酵液輸送到貯罐中，經(jīng)板框壓濾得到亮菌多糖。
全文摘要
大規(guī)模液體深層發(fā)酵生產(chǎn)亮菌菌絲體菌粉及其多糖工藝。本發(fā)明以大規(guī)模液體深層發(fā)酵生產(chǎn)亮菌菌絲體菌粉及其多糖為目標(biāo)，以山東金鄉(xiāng)真菌研究所亮菌真菌為出發(fā)菌株，采用斜面菌種進(jìn)行液體搖瓶培養(yǎng)、液體搖瓶擴(kuò)大培養(yǎng)、一級種子培養(yǎng)、二級種子培養(yǎng)和三級發(fā)酵培養(yǎng)，最終發(fā)酵罐體積達(dá)10000L－15000L。利用本發(fā)酵工藝，在10000L－15000L發(fā)酵罐中發(fā)酵，發(fā)酵液中菌絲體以干重計(jì)可達(dá)2－3％，干菌粉中多糖含量可達(dá)12－18％。如需獲取其菌粉，則將發(fā)酵液在發(fā)酵罐內(nèi)高速打碎，經(jīng)濃縮滅菌后，無菌噴霧干燥得菌粉。如需獲取其多糖，則將終了發(fā)酵液溫度加熱到90－100℃，攪拌速度為200－250rpm/min，維持2－4小時(shí)，用泵將發(fā)酵液輸送到貯罐中，經(jīng)板框壓濾得到亮菌多糖。
文檔編號A01G1/04GK1596585SQ20041004169
公開日2005年3月23日 申請日期2004年8月12日 優(yōu)先權(quán)日2004年8月12日
發(fā)明者敖宗華, 符慧子, 鄒錫良 申請人:敖宗華, 符慧子, 鄒錫良