本發(fā)明涉及一種用水培甘藍(lán)室內(nèi)大量飼養(yǎng)小菜蛾的方法。

二、

背景技術(shù)：

小菜蛾P(guān)lutella xylostella(L.)屬鱗翅目，菜蛾科，別名:小青蟲、兩頭尖、吊絲蟲，主要危害甘藍(lán)、青花菜、芥菜、花椰菜、白菜、油菜、蘿卜等40種十字花科作物，是世界性十字花科蔬菜的重要害蟲之一(馮夏等，2011)，具有遠(yuǎn)距離遷飛的能力(邢鯤等，2015)。小菜蛾分布廣，繁殖力高，生活周期短，世代重疊，抗藥性發(fā)展快(梁沛等，2001)等特點，成為昆蟲抗藥性、生理學(xué)、病理學(xué)、毒理學(xué)等領(lǐng)域重要的研究對象(楊峰山，2004),是實驗室昆蟲研究、生物農(nóng)藥毒力效價測試的標(biāo)準(zhǔn)蟲種(林坤，2011)。

小菜蛾P(guān)lutella xylostella L的室內(nèi)人工飼養(yǎng)是開展小菜蛾各項研究的基礎(chǔ)。目前，小菜蛾實驗室飼養(yǎng)常用的方法有柯禮道和方菊蓮(1981)用發(fā)芽菜籽法，劉傳秀等(1981)用蘿卜苗蛭石法，這兩種用幼苗飼養(yǎng)的方法，飼料容易獲取，但幼苗提供的食物量有限，難以大量飼養(yǎng)，且小菜蛾幼蟲生長發(fā)育過程中，轉(zhuǎn)接次數(shù)多，部分若蟲不能轉(zhuǎn)移，蟲量損失大，且容易染病，化蛹后蛹不便大批量收集和保存。陳宗麒等(2001)利用蓮花白作為小菜蛾的飼料，楊峰山等(2004)用甘藍(lán)苗飼養(yǎng)小菜蛾，都能得到大量發(fā)育整齊的供試蟲源，但寄主植物栽培期長，易受其它害蟲如菜青蟲、蚜蟲等蟲危害，管理困難，受氣候、土壤、場地等條件的限制，飼料不能及時供應(yīng)，培育成本高。許勤(2005)、莫美華(2007)用人工飼料飼養(yǎng)小菜蛾，需要特殊的配方，操作起來比較復(fù)雜，一般的實驗室使用有一定的局限性。林坤等(2011)用青菜蘿卜苗法，小菜蛾在青菜蘿卜苗上產(chǎn)卵，卵孵化后用市場上購回的甘藍(lán)葉飼養(yǎng)，需2d更換1次，保證菜葉的新鮮度困難，頻繁的轉(zhuǎn)接，對小菜蛾生長不利，且易感病。

三、

技術(shù)實現(xiàn)要素：

為了解決現(xiàn)有技術(shù)中飼養(yǎng)小菜蛾的各種問題，本發(fā)明在前人研究的基礎(chǔ)上，綜合上述飼養(yǎng)方法，探索出利用市場上購回的甘藍(lán)，對其進(jìn)行一系列處理后，用于小菜蛾飼養(yǎng)的方法。本文將為室內(nèi)大量繼代飼養(yǎng)小菜蛾提供一種低成本簡易的飼養(yǎng)方法。

具體的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是：

一種用水培甘藍(lán)室內(nèi)大量飼養(yǎng)小菜蛾的方法，所述方法包括以下步驟：

(1)培養(yǎng)寄主植物

選取生長健壯、結(jié)球平滑的甘藍(lán)，剝除殘葉，橫切除去葉球上部的三分之一，再切去底部的部分根莖，露出新鮮的根莖組織，將莖的底面切口用體積分?jǐn)?shù)75％的乙醇水溶液浸泡1分鐘后,取出放入無菌杯中,用質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.1％高錳酸鉀水溶液處理根莖切口10分鐘，再用無菌水沖洗2-3次后，再將莖的底面切口沾生長素溶液30秒，取出晾干，得到處理后的葉球；所述生長素溶液按以下方法配制：將萘乙酸溶于體積分?jǐn)?shù)95％的乙醇中配制得到1mg/ml濃度的母液，然后將母液用蒸餾水稀釋到濃度1000ppm；

將處理后的葉球放入裝有水或含飽和水的基質(zhì)的培養(yǎng)容器中，使莖的底面切口深入水面下0.5-1cm，所得水培甘藍(lán)即可用于小菜蛾飼養(yǎng)；所述基質(zhì)為蛭石或珍珠巖。

(2)飼養(yǎng)小菜蛾

將小菜蛾50～150頭蛹(優(yōu)選100頭蛹)放入產(chǎn)卵箱，在溫度24±1℃，相對濕度70％，光周期L:D＝18：8的條件下培養(yǎng)羽化，待50％以上成蟲羽化后，把步驟(1)的水培甘藍(lán)放入產(chǎn)卵箱中產(chǎn)卵24h，取出，接卵后的水培甘藍(lán)在人工氣候箱中，在溫度24℃，相對濕度70％、光周期L∶D＝16∶8、光照強(qiáng)度4000lx的條件下飼養(yǎng)小菜蛾至化蛹。

化蛹后的小菜蛾可重復(fù)操作步驟(2)，在產(chǎn)卵箱中培養(yǎng)至50％以上成蟲羽化后，再放入新鮮的水培甘藍(lán)進(jìn)行產(chǎn)卵、飼養(yǎng)，每個水培甘藍(lán)可用于200-300頭小菜蛾一個完整世代的飼養(yǎng)。

所述步驟(1)中，優(yōu)選將處理后的葉球放入裝水的培養(yǎng)容器中，使莖的底面切口深入水面下0.5-1cm，所得水培甘藍(lán)用于小菜蛾飼養(yǎng)。直接用水培養(yǎng)效果優(yōu)于基質(zhì)培養(yǎng)。

本發(fā)明所用的甘藍(lán)(Brassica oleracea L.)，可直接于市場購買獲得，一般為結(jié)球甘藍(lán)又稱包心菜、洋白菜、圓白菜等。

所述步驟(1)中，優(yōu)選每隔3天換1次水，進(jìn)一步，在水培甘藍(lán)開始長根后，每次換水時加入營養(yǎng)液，由營養(yǎng)液原液與水按照體積比1:1000混合配制得到。所述營養(yǎng)液原液可直接購買獲得，各類植物或果蔬營養(yǎng)液均可用于本發(fā)明，本發(fā)明實施例中使用的是施可得園藝產(chǎn)品公司生產(chǎn)的家庭園藝濃縮營養(yǎng)液。

本發(fā)明利用市場上購回的甘藍(lán)，對其進(jìn)行一系列處理培養(yǎng)后，得到水培甘藍(lán)用于飼養(yǎng)小菜蛾飼養(yǎng)，可取得較好的飼養(yǎng)結(jié)果，飼養(yǎng)的小菜蛾蛹重7.15mg，蛹的羽化率91.85％，單雌產(chǎn)卵86.70粒，卵的孵化率94.32％，與盆栽甘藍(lán)、蛭石蘿卜苗法飼養(yǎng)的小菜蛾有顯著差異。該方法操作簡單，成本低，栽培期短，飼料隨時供應(yīng)，方便了室內(nèi)小菜蛾的大量飼養(yǎng)。

本發(fā)明方法成本低廉，操作簡易，能夠保證小菜蛾的正常發(fā)育和繁殖，與普通盆栽植物培養(yǎng)相比省工、省時，栽培期短，培育成本低，不受氣候、土壤等條件限制，更加便捷。

四、附圖說明

圖1水培甘藍(lán)處理、飼養(yǎng)小菜蛾的過程圖，從左到右，分別為未處理的甘藍(lán)、切除葉球上部的三分之一和部分根莖的甘藍(lán)，24℃溫度下培養(yǎng)生根10天的甘藍(lán)、飼養(yǎng)小菜蛾的甘藍(lán)。

圖2不同溫度下水培甘藍(lán)根系生長20天后生根的對比圖。

圖3用不同飼養(yǎng)方法飼養(yǎng)小菜蛾實例圖。

五、具體實施方式

下面以具體實施例來對本發(fā)明的技術(shù)方案作進(jìn)一步說明，但本發(fā)明的保護(hù)范圍不限于此。

實施例1

1材料與方法

1.1材料與設(shè)備

甘藍(lán)(Brassica oleracea L.)，購買市場出售的結(jié)球甘藍(lán)(又稱包心菜、洋白菜、圓白菜等)；

營養(yǎng)液：家庭園藝濃縮營養(yǎng)液(施可得園藝產(chǎn)品公司)；

養(yǎng)蟲箱：45×45×45cm；

培養(yǎng)容器：高10-15cm，口徑6-10cm的玻璃容器；

指形管:直徑1.5cm，高6cm

RXZ-380B型智能人工氣候箱(寧波江南儀器有限公司)；

NAA(萘乙酸1-Naphthaleneacetic acid，陜西森郎生物化工有限公司)；

高錳酸鉀(Potassium Permanganate，鄭州帝科化工產(chǎn)品有限公司)。

1.2方法

1.2.1寄主植物的培養(yǎng)

生長素的配制：準(zhǔn)確稱取NAA原藥，以95％的酒精為溶劑，配成1mg/ml母液備用。取母液用蒸餾水稀釋成1000ppm的生長素溶液。

水培材料的切取與消毒：選取生長健壯，結(jié)球平滑的甘藍(lán)，首先剝除外殘葉2-3片，用利刀橫切除去葉球上部的三分之一，再用刀切去底部部分根莖，露出新鮮的根莖組織，莖的底面切口，用體積分?jǐn)?shù)75％的酒精浸泡1分鐘后,取出放入無菌杯中,用質(zhì)量濃度0.1％高錳酸鉀水溶液處理10分鐘,再用無菌水沖洗切口2-3次后，再將莖的底面切口沾配制好的生長素溶液30秒，取出晾干。將處理后葉球放入加有蒸餾水的培養(yǎng)容器(高10-15cm，口徑6-10cm)中，使莖的底面切口，深入水面0.5-1cm，即可作為飼養(yǎng)寄主備用。水培甘藍(lán)處理、飼養(yǎng)小菜蛾的過程圖如圖1所示。

1.2.2不同溫度對水培甘藍(lán)生根的影響

溫度設(shè)4個處理，分別為16、20、24、28℃，每處理4次重復(fù)，相對濕度70％、光周期L∶D＝16∶8、光照強(qiáng)度4000lx)，每隔3d換1次水，開始長根后，每次換水，加入營養(yǎng)液1:1000(營養(yǎng)液原液與蒸餾水體積比1:1000配制得到)，每天進(jìn)行觀察并記錄根的生長狀況。記錄每個處理開始生根的時間、根停止生長時間及側(cè)根開始生長時間，根停止生長測量根長，記錄側(cè)根數(shù)。

1.2.3不同基質(zhì)對甘藍(lán)生根的影響

基質(zhì)設(shè)3個處理，分別為自來水、含飽和水(飽和水，就是有充足的水份，又不出現(xiàn)明水)的蛭石和含飽和水的珍珠巖，每處理4次重復(fù)，在溫度24℃、相對濕度70％、光周期L∶D＝16∶8、光照強(qiáng)度4000lx條件下比較不同基質(zhì)對甘藍(lán)生根的影響，培養(yǎng)條件同1.2.2。

1.2.4不同飼養(yǎng)方法對小菜蛾繁殖率的影響

設(shè)3個處理，分別為盆栽甘藍(lán)、蛭石蘿卜苗和步驟1.2.1制備的水培甘藍(lán)，每處理4次重復(fù)。盆栽甘藍(lán)和蘿卜苗分別按照陳宗麒等(2001)“蓮花白培育法”、劉傳秀等(1981)“蘿卜苗蛭石法”準(zhǔn)備。

供試小菜蛾是室內(nèi)多代飼養(yǎng)的種群，把收集到的小菜蛾100頭蛹放到產(chǎn)卵箱(45×45×45cm),在(溫度24±1℃，RH 70％-75％，L:D＝16：8)的條件下培養(yǎng)羽化，50％以上成蟲羽化后，把不同的寄主植物分別放到不同產(chǎn)卵箱中產(chǎn)卵24h，取出，接卵后的寄主在溫度24℃，相對濕度70％、光周期L∶D＝16∶8、光照強(qiáng)度4000lx條件下飼養(yǎng)至化蛹。稱量20頭蛹重，并且將不同寄主飼養(yǎng)后的蛹分別放入產(chǎn)卵箱中培養(yǎng)羽化，在上述相同的條件下培養(yǎng)，羽化后，記錄羽化率，并把當(dāng)天羽化的成蟲配對置于指形管(直徑1.5cm，高6cm)內(nèi)，管口塞上棉花，管中放吸有15％蜂蜜水的棉花球，共配50對，記錄卵量，卵的孵化率、羽化率等繁殖數(shù)據(jù)。

1.2.5數(shù)據(jù)計算

用SPSS Duncan法進(jìn)行差異顯著性分析。

2結(jié)果與分析2.1不同處理下水培甘藍(lán)根系生長情況

圖2為不同溫度下水培甘藍(lán)根系生長20d后生根的對比圖。表1為不同溫度處理甘藍(lán)根系生長量的統(tǒng)計數(shù)據(jù)，從表1和圖2可以看出，16℃處理下，甘藍(lán)生根速度慢，且生根數(shù)量較少，根長勢也不好，處理30d后，根的生長量不大，誘導(dǎo)的新根上沒有側(cè)根產(chǎn)生；20℃處理下生根速度較慢，處理30d后，生根數(shù)量多，但根的生長量不大，根長36.20mm，誘導(dǎo)的新根上有側(cè)根產(chǎn)生；24、28℃處理下生根速度快，且生根數(shù)量較多，處理30d后，根的生長量大，根長達(dá)80mm，誘導(dǎo)的新根上側(cè)根旺盛，24℃開始生根的時間是第7天，生根所需時間為20d,28℃開始生根的時間是第6天，生根所需時間為12d。從圖2和表1可以看出，24℃和28℃水誘甘藍(lán)生根處理30d后，根系最長，且側(cè)根生長旺盛，與15℃、20℃處理間差異顯著。

表2為不同基質(zhì)處理甘藍(lán)根系生長量的統(tǒng)計數(shù)據(jù)，從表2可以看出，在24℃的條件下，水、蛭石和珍珠巖3種不同材料作為水培甘藍(lán)的基質(zhì)，對甘藍(lán)生根速度、根的生長量有顯著的影響，純碎采用水作為水培甘藍(lán)的基質(zhì)效果更佳。

表1不同溫度處理甘藍(lán)根系生長量

注：小寫字母不相同表示差異顯著(P＝0.05)。

表1中的根長為平均根長。

表2不同基質(zhì)處理甘藍(lán)根系生長量

注：小寫字母不相同表示差異顯著(P＝0.05)。

表2中的根長為平均根長。

2.2不同飼養(yǎng)方法對小菜蛾繁殖率的影響

用不同飼養(yǎng)方法飼養(yǎng)小菜蛾實例圖如圖3所示。表3為不同飼養(yǎng)方法對小菜蛾繁殖率的影響數(shù)據(jù)表，從表3的結(jié)果可以看出，用水培甘藍(lán)飼養(yǎng)的小菜蛾與盆栽甘藍(lán)、蛭石蘿卜苗法飼養(yǎng)的小菜蛾在蛹重、羽化率、單雌產(chǎn)卵量、孵化率上差異均顯著，說明室內(nèi)用水培甘藍(lán)苗飼養(yǎng)小菜蛾是可行的，是能夠保證小菜蛾的正常發(fā)育、繁殖的，而且效果要好于其他幾種條件的處理。并且本發(fā)明水培甘藍(lán)制作簡單，成本低，栽培期短，飼料隨時供應(yīng)，方便了室內(nèi)小菜蛾的大量飼養(yǎng)。與普通盆栽植物培養(yǎng)相比省工、省時，栽培期短，培育成本低，不受氣候、土壤等條件限制，更加便捷。

表3不同飼養(yǎng)方法對小菜蛾繁殖率的影響

注：小寫字母不相同表示差異顯著(P＝0.05)。