選擇用于局部施用組合物的抗氧化劑的方法本申請是國際申請日為2009年1月21日、國際申請?zhí)枮镻CT/US2009/031538、進入國家階段的申請?zhí)枮椤?00980103035.5”、發(fā)明名稱為“選擇用于局部施用組合物的抗氧化劑的方法”的PCT申請的分案申請。技術領域本發(fā)明涉及局部施用到皮膚和頭發(fā)上用于防紫外線輻射的組合物。本發(fā)明還涉及選擇這種組合物中所含的抗氧化劑的方法。本申請要求2008年1月25日提交的美國臨時申請61/023713和2008年11月14日提交的美國臨時申請61/114758的優(yōu)先權。

背景技術：
皮膚暴露于紫外線輻射(UVR)會引起統(tǒng)稱為活性氧(reactiveoxygenspecies，ROS)的自由基和氧化劑(單態(tài)氧、羥基自由基、過氧化氫、過氧化亞硝酸鹽、過氧化物陰離子等)的形成(HansonKM，CleggRM.PhotochemistryandPhotobiology，2002，76(1)：57-63；BlackHS.Photochem，Photobioi.1987，46，213-221)。UV引起的ROS的形成導致對脂質、蛋白質和DNA的氧化破壞(VileGFandTyrrellRM.FreeRadic.Biol.Med，1995，18，721-722；ChenQ等，Proc.Natl.Acad.Sd.USA，1995，92，4337-4341)。在正常情況下，低濃度的ROS被構成皮膚的抗氧化劑屏障所中和。但是，研究表明，即使低紅疹(suberythermal)劑量的URV也會產(chǎn)生皮膚自身抗氧化劑屏障受不了的大量ROS，導致可隨意引起氧化的ROS的積聚，這造成皮膚損害的急性(免疫抑制和光敏性疾病)和慢性(光老化和皮膚癌)形式(ThieleJJ等，J.Invest.Dermatol，1998，110(5)，756-761；SanderC.S.等，J.Invest.Dermatol，2002，118(4)，618-625；ThieleJ.J：SkinPharmacol.Appl.SkinPhysiol，2001，14(suppl.1)，87-91；SanderCS等，InternationalSoc，Dermatol，2004，43，326-335)。EP1591104(STADAPharmaceuticalsAG)描述了抗氧化劑在防紅外線輻射的藥物制劑中的應用?？寡趸瘎?Aox)起中和ROS的作用。如果在正形成ROS的皮膚內存在適宜的類型和水平，Aox應能在ROS攻擊和氧化其它生物分子前中和ROS。因此，具有確定何種局部施用抗氧化劑在皮膚內中和UVR引起的活性氧(ROS)時非常有效的方法將是有用的。此外，具有區(qū)分只在溶液中能有效清除自由基的化合物和在皮膚暴露于UVR時為對其非常有效的抗氧化劑的化合物的方法將是有用的。此外，具有確定防曬產(chǎn)品中抗氧化劑適宜選擇和使用水平以提供對UVR引起的ROS導致的皮膚損傷額外防護的方法是有用的。另外，具有能在皮膚表面和表皮深處例如遠至基底層處都提供對UVR引起的ROS的防護的組合物是有用的。這些和其它目標通過本文描述的發(fā)明來實現(xiàn)。因此，本文描述的發(fā)明尤其提供一種方法，其包括二種獨特的評估局部施用的Aox在皮膚外層內對UVR引起的ROS形成提供防護的能力的體外方法。第一種方法使用顯微鏡例如熒光顯微鏡通過成像人皮膚的切片來對表皮內層例如直到基底層(basallayer)中的ROS形成進行成像和定量。第二種方法對含Aox的組合物抑制皮膚外層中脂質過氧化的程度進行量化。本說明書還證實，測量溶液中抗氧化劑清除自由基的效力的常用實驗室試驗不是Aox對更復雜的生物基質如暴露于UVR的皮膚有效作用的能力的指示。因此，本發(fā)明提供超過選擇防曬劑產(chǎn)品中所用Aox的現(xiàn)有技術方法的優(yōu)點以確保它們提供保護益處。本文列舉的所有專利和非專利參考文獻全文被引入到本說明書中作為其參考。這節(jié)或本說明書任何部分中任何參考文獻的標識或討論不應被認為是承認這類參考文獻作為本申請的現(xiàn)有技術可用。發(fā)明概述本發(fā)明提供一種確認用于給皮膚局部施用而配制的組合物的抗氧化劑活性的方法，該方法包括測試組合物抑制紫外線輻射引起的皮膚上脂質過氧化和紫外線輻射引起的整個表皮內活性氧形成的能力。本發(fā)明還提供一種篩選在被局部施用到皮膚的組合物中起抗氧化劑作用的化合物的方法，該篩選方法包括測定化合物抑制紫外線輻射引起的皮膚脂質氫過氧化物形成和紫外線輻射引起的整個表皮內活性氧形成的能力。本發(fā)明還提供一種用于施用到對象皮膚或頭發(fā)上的組合物，該組合物包含抗氧化劑化合物或多種抗氧化劑化合物的組合，其中抗氧化劑化合物或多種抗氧化劑化合物的組合充分抑制紫外線輻射引起的皮膚脂質過氧化和紫外線輻射引起的整個表皮內活性氧形成。本發(fā)明還提供用于局部施用的組合物，該組合物包含至少一種能充分抑制紫外線輻射引起的表皮上層中活性氧形成的抗氧化劑化合物和至少一種能充分抑制紫外線輻射引起的表皮下層中活性氧形成的抗氧化劑化合物。附圖簡述圖1-顯示了在不同類型和水平的Aox存在下，體外(exvivo)使用帶條(tapestrip)收集人皮膚脂質時抗氧化劑(Aox)抑制UVR引起的脂質氫過氧化物(LOOH)形成的程度。圖2-顯示了防曬劑中加入抗氧化劑大大減少了UV引起的角質層內ROS形成。相對于對照，SPF30防曬劑配方減少ROS39％，而具有0.5％維生素E和0.1％Emblica作為抗氧化劑的SPF30配方減少ROS73％。賦予ROS形成程度顏色代碼，藍色代表低ROS水平，橙色或紅色代表高ROS水平。圖3-顯示了皮膚層上的雙光子熒光顯微檢測(twophotonfluorescencemicroscopy)來證實維生素E和Emblica抗氧化劑減少UV引起的表皮內ROS形成的能力。包含0.5％維生素E和0.1％Emblica的組合物對表皮下面(基底)層中自由基形成防護很少。圖4-顯示了皮膚層上的雙光子熒光顯微檢測來證實各種已知抗氧化劑減少UV引起的表皮內ROS形成的效果。當暴露于UVR時，被檢測的抗氧化劑提取物實際增加而不是減少了自由基。圖5-顯示了皮膚層上的雙光子熒光顯微檢測來證實1MED的UVR后各種已知抗氧化劑減少UV引起的表皮內ROS形成的效果。包含0.5％維生素E和0.9％OxynexST的組合物顯示為抑制下面表皮層內的ROS形成。圖6-顯示了皮膚層上的雙光子熒光顯微檢測來證實4MED的UVR后各種已知抗氧化劑減少UV引起的表皮內ROS形成的效果。包含0.5％維生素E和0.9％OxynexST的組合物顯示為抑制下面表皮層內的ROS形成。詳細描述本發(fā)明提供一種確認用于給皮膚局部施用而配制的組合物的抗氧化劑活性的方法，該方法包括測試組合物抑制紫外線輻射引起的皮膚上脂質過氧化和紫外線輻射引起的整個表皮內活性氧形成的能力。本發(fā)明還提供一種篩選在被局部施用到皮膚的組合物中起抗氧化劑作用的化合物的方法，該篩選方法包括測定化合物抑制紫外線輻射引起的皮膚脂質氫過氧化物形成和紫外線輻射引起的整個表皮內活性氧形成的能力。在本發(fā)明的方法的一些實施方案中，測定紫外線輻射引起的皮膚中活性氧形成的抑制包括使用雙光子熒光強度成像(two-photonfluorescenceintensityimaging)對整個表皮向下直到基底層的皮膚成像。在本發(fā)明的方法的一些實施方案中，測定UVR引起的皮膚脂質氫過氧化物形成的抑制包括測定化合物與空白對照劑相比的脂質氫過氧化物抑制百分比。在一些實施方案中，本發(fā)明的方法包括下述步驟：將包含抗氧化劑的組合物和空白對照劑組合物施用到對象皮膚的不同區(qū)域以產(chǎn)生包含抗氧化劑和皮膚脂質的抗氧化劑皮膚部位和包含空白對照劑和皮膚脂質的空白對照劑皮膚部位；在抗氧化劑皮膚部位和空白對照劑皮膚部位施加條(strip)以產(chǎn)生包含抗氧化劑和皮膚脂質的抗氧化劑條樣品和包含空白對照劑和皮膚脂質的空白對照劑條樣品；從皮膚上取下所述條樣品并將所述條樣品暴露在UVR中以在抗氧化劑條樣品上形成UVR引起的抗氧化劑/脂質反應產(chǎn)物和在空白對照劑條樣品上形成UVR引起的空白對照劑/脂質反應產(chǎn)物；分別使抗氧化劑條樣品和空白對照劑條樣品接觸溶劑來制備包含UVR引起的抗氧化劑/脂質反應產(chǎn)物的第一提取物和包含UVR引起的空白對照劑/脂質反應產(chǎn)物的第二提取物；分析所述第一和第二提取物中每種提取物的脂質氫過氧化物含量；和比較第一提取物的脂質氫過氧化物含量和第二提取物的脂質氫過氧化物含量。在一些實施方案中，本發(fā)明的方法還包括步驟：在對象皮膚的二個不同部位施用空白對照劑到；由每個部位產(chǎn)生條樣品；使來自二個空白對照劑部位中僅僅一個的條樣品經(jīng)受UVR以產(chǎn)生受輻射空白對照劑條樣品的子組和未受輻射的空白對照劑條樣品的子組(subset)；單獨使未受輻射空白對照劑條樣品接觸溶劑來制備包含空白對照劑和皮膚脂質的第三提取物；和分析所述第三提取物的脂質氫過氧化物含量確定基礎(background)脂質氫過氧化物形成。在一些實施方案中，本發(fā)明的方法包括比較第一提取物的脂質氫過氧化物含量與第二提取物的脂質氫過氧化物含量，這種比較包括利用下式計算脂質氫過氧化物形成百分比：其中％LF為脂質氫過氧化物形成百分比，LOOH1為第一提取物的脂質氫過氧化物含量，LOOH2為第二提取物的脂質氫過氧化物含量，LOOH3為第三提取物的脂質氫過氧化物含量?，F(xiàn)有技術認識到具有抗氧化劑性質的大量化合物。本文使用的術語“抗氧化劑”指通過本發(fā)明的方法測定具有小于100％的％LF的化合物或化合物的組合。本文使用的術語“助氧化劑”指具有大于100％的％LF的化合物或化合物的組合。如本文所確認，現(xiàn)有技術中稱為抗氧化劑的某些化合物在根據(jù)本發(fā)明的方法測試時實際具有助氧化劑性質，這使得它們不適合作為用于局部施用的組合物尤其是防曬劑中的成分，除非如本文中所述以組合形式存在。包含適宜Aox的本發(fā)明的組合物可包括化妝品組合物制備領域中普通技術人員容易得知的任何形式。這類形式的例子包括但不限于非離子氣泡分散體、乳液、膏劑、乳劑、凝膠、膏凝膠、軟膏、混懸液、分散體、粉劑、固體劑、粘性物、泡沫或噴霧劑。在某些優(yōu)選實施方案中，組合物可包括無水或含水固體或糊、乳液、混懸液或分散體。組合物的優(yōu)選形式包括水包油乳液、油包水乳液、醇溶液或氣溶膠制劑。因此，本發(fā)明還提供用于局部施用到人皮膚和/或頭發(fā)的化妝品組合物，其包括適宜的Aox和按本文描述的方法確定的Aox量。這類化妝品組合物的非限制性例子可包括這類產(chǎn)品作為增濕劑、清潔劑、調理劑、洗發(fā)劑、沐浴液、發(fā)膠/洗液、眼霜和眼線筆、腮紅、睫毛油、打底霜、指甲油、洗甲水、眼影膏、口紅、潤唇膏、唇線筆、唇膏、卸妝液、指甲護理劑、腳護理組合物、粉刺處理劑、紅斑/酒糟鼻處理劑、靜脈曲張/蜘蛛靜脈治療劑、抗老化組合物、免曬助黑組合物、曬后用組合物、遮瑕膏、頭發(fā)著色和脫色組合物、皮膚褪色/光亮劑、緊膚霜、剃須膏、須后水、卷發(fā)矯直劑、止汗劑和除臭劑、去角質劑、洗劑、洗手液、泡沫劑、疼痛和傷口處理組合物、殺蟲劑、止癢和皮疹膏、定型摩絲和泡沫、香味劑、潤滑劑、身體護理油、身體噴霧劑、嬰兒潤膚露、護臀霜、嬰兒香皂、嬰兒洗發(fā)劑、嬰兒潤膚油、嬰兒濕巾、脫發(fā)治療劑、發(fā)膠、脫毛劑、毛發(fā)生長抑制劑、脫毛蠟、個人潔膚品、科隆香水、控油劑和手用消毒劑?？捎迷诒景l(fā)明組合物中的抗氧化劑的例子包括但不限于亞丁香基丙二酸二乙基己酯(diethylhexylsyringylidenemalonate)、維生素E、亞香草醛基(vanillidene)丙二酸二異丙酯(也稱為DIPVM)和相關的化合物(公開在美國專利6602515、6831191、6936735、7150876和7166273中)、四氫姜黃素(tetrahydrocurcumenoid)、大豆zymbiozome酵母、紅三葉草(Redclover)提取物、葡萄(Vitisvinifera，葡萄)籽提取物/BrandB、綠茶提取物、羅布斯塔紅藻(Pikearobusta)提取物、生育酚(和)葡萄(葡萄)籽提取物、葡萄(葡萄)籽提取物/BrandA、余甘子果(Phylanthusemblicafruit)提取物和它們的組合。加入到本發(fā)明組合物中的抗氧化劑的量通常在約0.01wt％至約10.0wt％之間，優(yōu)選約0.1wt％至約5.0wt％之間。本領域普通技術人員根據(jù)本文描述的測試方法可確定提取物的量。在一些實施方案中，本發(fā)明的組合物可單獨包含數(shù)量大于約0.05wt％、數(shù)量為約0.1wt％或更大、數(shù)量為約0.25wt％或更大和數(shù)量為約0.5wt％或更大的維生素E作為抗氧化劑。在一些實施方案中，本發(fā)明的組合物可包含維生素E作為抗氧化劑和至少一種其它抗氧化劑化合物。在一些實施方案中，本發(fā)明的組合物可包含維生素E以及按本發(fā)明的方法確定的助氧化劑化合物，其中這些實施方案中維生素E的存在將抵消這些化合物的助氧化劑效應形成抗氧化劑組合。在這種組合物的一些實施方案中，維生素E以大于約0.05wt％的量、約0.1wt％或更大的量、約0.25wt％或更大的量和約0.5wt％或更大的量存在。能用在包含維生素E的本發(fā)明組合物中的這類助氧化劑化合物的例子包括但不限于迷迭香油樹脂(Rosemaryofficinalisoleoresin)、法國薔薇(RosaGallica)提取物、來自綠色植物的生物活性光合成復合物、嗜熱棲熱菌酶(ThermusThermophillusferment)、ergothiotaine和它們的組合。加入到本發(fā)明組合物中的助氧化劑的量通常在約0.01wt％至約10.0wt％之間，優(yōu)選約0.1wt％至約5.0wt％之間。本領域普通技術人員可按照本文描述的測試方法確定提取物的量。在本發(fā)明一種實施方案中，組合物可為氣溶膠形式，其中該組合物可與至少一種推進劑組合，推進劑可為能在噴霧給藥罐內被壓縮或液化并在暴露于環(huán)境溫度和壓力條件下膨脹或蒸發(fā)成以氣溶膠形式輸送組合物的任何合適氣體。合適的推進劑包括具有1至5個碳原子的烴，包括但不限于甲烷、乙烷、丙烷、異丙烷、丁烷、異丁烷、丁烯、戊烷、異戊烷、新戊烷、戊烯、氫氟烴(HFCs)、氯氟烴(CFCs)、氮氣、醚包括二甲醚和它們的任意混合物。本領域普通技術人員能認識到，在封閉容器如鋁罐或玻璃瓶中，推進劑如二甲醚在環(huán)境溫度下冷凝成液態(tài)。因此，氣溶膠容器中的組合物為可包含溶解的推進劑、未溶解的液態(tài)推進劑和氣態(tài)推進劑的液體制劑。所有這些由于推進劑的蒸氣壓而都處于壓力下。實施本發(fā)明時，基于氣溶膠組合物的總重量，可存在數(shù)量不超過約90wt％、優(yōu)選約2wt％至約50wt％、更優(yōu)選約5wt％至約40wt％、最優(yōu)選30wt％的推進劑。本發(fā)明的組合物還可包括氣溶膠泡沫或通常所說的摩絲組合物。例如，美國專利6627585描述了一種摩絲成形清潔用洗發(fā)劑組合物，其包括：包含至少一種表面活性劑、水不溶性調理劑分散顆粒、水性載體的可起泡濃縮物；和氣溶膠推進劑。美國專利6264964描述了一種化妝品組合物，其包括交聯(lián)的非乳化聚硅氧烷彈性體和在加壓系統(tǒng)中以氣溶膠泡沫形式存在的羧基乙烯基聚合物?？赏ㄟ^使用標準氣溶膠分配器例如噴霧罐組在填充時將推進劑引入到摩絲組合物中。本發(fā)明考慮在防曬和防曬產(chǎn)品和任何其它局部施用組合物中引入Aox以及防曬活性劑，此時防曬活性劑和/或Aox的加入不能消弱產(chǎn)品的效力也不能影響防曬活性劑的防曬能力。本發(fā)明的組合物可包含各種其它的在本文中被稱為“化妝品組分”的任選組分，但其也可包括通常稱為藥物活性劑的組分。CTFACosmeticIngredientHandbook1997年第七版和2000年第八版描述了各種常用在皮膚護理組合物中的化妝品和藥物成分，本文全文引入作為參考，它們適合用于本發(fā)明的組合物中。這篇參考文獻中公開的這些功能類別的例子包括：吸收劑、研磨劑、防結塊劑、消泡劑、抗氧化劑、粘合劑、生物添加劑、緩沖劑、填充劑、螯合劑、化學添加劑、著色劑、化妝品收斂劑、化妝品殺生物劑、變性劑、藥物收斂劑、外用止痛劑、薄膜形成劑、香料組分、潤濕劑、遮光劑、pH調節(jié)劑、增塑劑、還原劑、皮膚增白劑、皮膚調理劑(潤膚劑、潤濕劑、混雜劑、和閉合劑)、皮膚保護劑、溶劑、發(fā)泡劑、水溶助長劑、增溶劑、懸浮劑(非表面活性劑)、防曬劑、紫外光吸收劑、SPF促進劑、防水劑和增粘劑(水性和非水性的)。在本發(fā)明的實施中，組合物可包含一種或多種防曬活性劑。對于本發(fā)明，“防曬活性劑”或“防曬活性物質”應包括所有基于其吸收UV輻射的能力被視為可允許用作活性防曬成分的這些材料，單獨或組合地。這類化合物一般被描述為UV-A、UV-B或UV-A/UV-B活性劑。管理機構的許可通常要求在打算人用的制劑中包括活性劑。在美國已經(jīng)或現(xiàn)在被批準用于防曬用途的這些活性劑包括有機和無機物質，包括但不限于對氨基苯甲酸、阿伏苯宗(avobenzone)、西諾沙酯(cinoxate)、二羥苯酮、原膜散酯(homosalate)、鄰氨基苯甲酸薄荷酯、水楊酸辛酯、羥苯甲酮、帕地馬酯O(padimateO)、苯基苯并咪唑磺酸、磺異苯酮(sulisobenzone)、水楊酸三乙硝胺(trolaminesalicylate)、二氧化鈦、氧化鋅、二乙醇胺甲氧基肉桂酸鹽、三油酸二沒食子?；?digalloytrioleate)、乙基二羥基丙基PABA、氨基苯甲酸甘油酯、具有二羥基丙酮的2-羥基萘醌(lawsonewithdihydroxyacetone)、紅凡士林。未在US批準但在US外出售的制劑中允許的其它防曬活性劑的例子包括乙基己基三嗪酮、二辛基丁酰胺基三嗪酮、丙二酸亞芐酯聚硅氧烷、對苯二亞甲基二樟腦磺酸、苯基二苯并咪唑四磺酸二鈉、二乙基氨基羥基苯甲酰己基苯甲酸酯、雙二乙基氨基羥基苯甲?；郊姿狨ァ㈦p苯并唑基苯基乙基己基亞氨基三嗪、甲酚曲唑三硅氧烷(drometrizoletrisiloxane)、亞甲基雙苯并三唑基四甲基丁基苯酚和雙乙基己氧基苯酚甲氧基苯基三嗪、4-甲基亞芐基樟腦和4-甲氧基肉桂酸異戊酯。但是，由于被批準防曬劑的目錄目前正擴大，普通技術人員能認識到本發(fā)明不限于目前被批準用于人用的防曬活性劑，而是容易地適用于可在未來被許可的那些。在本發(fā)明的一種實施方案中，其它的防曬活性劑包括光保護有效量的至少一種無機顏料或納米顏料的顆粒，非限制性例子包括二氧化鈦、氧化鋅、氧化鐵、氧化鋯、氧化鈰或它們的混合物。本發(fā)明的組合物還可包括還能通過UV輻射散射和分散一類的機理增加最終組合物的SPF的材料。這類材料在本文中被稱為“UV輻射散射劑”并包括表現(xiàn)出UV吸收活性或未表現(xiàn)出UV吸收活性的材料。這類UV輻射散射劑的例子包括聚合材料，例如稱為SunSpheresTM(RohmandHaas；Philadelphia，PA)的產(chǎn)品，其被它們的制造商描述為通過乳液聚合制造的中空苯乙烯/丙烯酸酯共聚物球。聚合物球被認為通過在表面如人皮膚上存在的防曬膜上分散和/或散射入射的UV輻射在UVA和UVB區(qū)域上增加SPF值。認為球通過使輻射改變方向而朝向防曬制劑中的UV吸收防曬活性劑來使較少的UV輻射滲透到皮膚內，此時輻射與防曬活性劑分子反應并且能量作為熱被散出。本文使用的術語“球”或“散射劑”不受化學組成或形狀限制，而是包括能產(chǎn)生延長入射的UV輻射的路徑、增加輻射接觸防曬活性劑分子即UV吸收活性劑的統(tǒng)計可能性的效果的任何試劑。這些材料還可包括同樣表現(xiàn)出散射性質的UV吸收材料如ZnO(例子包括可從BASF得到的Z-CoteTM產(chǎn)品)、TiO2(例子包括可從Uniqema(NewCastle、DE、USA)得到的SolaveilTM產(chǎn)品)、化合物如亞甲基雙苯并三唑基四甲基丁基苯酚(可從CibaSpecialtyChemicals，Inc.(Basel，Switzerland)得到的“TinasorbTMM″)。制劑中一般存在數(shù)量不超過約10wt％、優(yōu)選在約0.5wt％至約7.0wt％范圍內、尤其優(yōu)選3％至約5wt％范圍內的UV輻射散射劑)。本文使用的術語“無日照曬黑劑”或“自曬黑組合物”是指當施用到人皮膚時賦予皮膚類似于暴露皮膚到自然或人工日光時獲得外觀的外觀的組合物。無日照曬黑活性劑的例子描述在美國專利6482397、6261541和6231837中。除了人工變黑有效量的自曬黑劑外，這類無日照曬黑組合物一般包括有效量的組合物著色劑和化妝品可接受的適合局部施用到人皮膚的載體。自曬黑劑還可包括本領域中通常接受的用于施用到人皮膚的那些組合物，并且當施用時，它們在其中與氨基酸反應以便形成有顏色的產(chǎn)物。這類反應賦予皮膚類似于暴露于日光足以使皮膚變黑的時間時所得顏色的褐色外觀。合適的自曬黑劑包括但不限于α-羥基醛和酮、甘油醛和相關的醇醛、各種吲哚、咪唑和它們的衍生物、和各種批準的染色劑。本文中作為自曬黑劑優(yōu)選為α-羥基醛和酮。最優(yōu)選地，自曬黑劑為二羥基丙酮(“DHA”)。其它合適的自曬黑劑包括但不限于甲基乙二醛、甘油醛、赤蘚酮糖、阿脲、2，3-二羥基丁二醛、2，3-二甲氧基丁二醛、2-氨基-3-羥基-丁二醛和2-芐基氨基-3-羥基丁二醛。合適的潤滑劑或表面活性劑包括藥物可接受的非毒性的非離子、陰離子和陽離子表面活性劑。合適的非離子表面活性劑的例子包括甘油脂肪酸酯如單硬脂酸甘油酯、二醇脂肪酸酯如單硬脂酸丙二醇酯、多元醇脂肪酸酯如單油酸聚乙二醇(400)酯、聚氧乙烯脂肪酸酯如聚氧乙烯(40)硬脂酸酯、聚氧乙烯脂肪醇醚和如聚氧乙烯(20)硬脂基醚、聚氧乙烯脫水山梨糖醇脂肪酸酯如聚氧乙烯脫水山梨糖醇單硬脂酸酯、脫水山梨糖醇酯如脫水山梨糖醇單硬脂酸酯、烷基葡糖苷如十六/十八烷基葡糖苷、脂肪酸乙醇酰胺和它們的衍生物如硬脂酸二乙醇酰胺等。合適的陰離子表面活性劑的例子為肥皂，包括堿性皂，如脂肪族羧酸通常是脂肪酸的鈉、鉀和銨鹽，如硬脂酸鈉。有機胺皂包括脂肪族羧酸通常是脂肪酸的有機胺鹽，如硬脂酸三乙醇胺。金屬皂包括多價金屬和脂肪族羧酸通常是脂肪酸的鹽，如硬脂酸鋁。其它類別的合適陰離子表面活性劑包括硫酸化脂肪酸醇如十二烷基硫酸鈉、磺化油如蓖麻油酸二鈉鹽的硫酸酯、和磺化化合物如烷基磺酸酯包括十六烷磺酸鈉、氨基磺酸鹽如N-甲基-N-油基月桂酸鈉、磺化二元酸酯如二辛基磺基丁二酸鈉、烷基芳基磺酸鹽如十二烷基苯磺酸鈉、烷基萘磺酸鹽如異丙基萘磺酸鈉、石油磺酸鹽如具有烷基取代基的芳基萘。合適的陽離子表面活性劑的例子包括胺鹽如十八烷基氯化銨、季銨化合物如苯扎氯銨。潤膚劑為有助于平滑和軟化皮膚并還可降低皮膚粗糙度、破裂或刺激的含油或油性物質。典型的合適潤膚劑包括粘度在50-500厘泊(cps)范圍內的礦物油、羊毛脂、椰子油、可可油、橄欖油、杏仁油、澳洲堅果油、蘆薈提取物如蘆薈lipoquinone、合成霍霍巴油、天然地蛇屬(sonara)霍霍巴油、紅花油、玉米油、液體羊毛脂、棉籽油和花生油。優(yōu)選地，潤膚劑為可可甘油酯，其為可可油的單、二和三甘油酯的混合物，以商標名Myritol331由HenkelKGaA出售，或DicaprylylEther，以商標名CetiolOE由HenkelKGaA出售，或C12-C15烷基苯甲酸酯，以商標名FinsolvTN由Finetex出售?？纱嬖跀?shù)量為約1wt％至約10wt％、優(yōu)選約5wt％的一種或多種潤膚劑。另一種合適的潤膚劑為DC200Fluid350，一種硅酮流體，可從DowCorningCorp得到。其它合適的潤膚劑包括角鯊烷、蓖麻油、聚丁烯、甜味杏仁油、鱷梨油、美珊瑚油、蓖麻蛋白油、醋酸維生素E、橄欖油、硅油如二甲基聚硅氧烷(dimethylopolysiloxane)和環(huán)聚二甲基硅氧烷、亞麻醇、油醇、谷物芽油如小麥芽油、棕櫚酸異丙酯、棕櫚酸辛酯、肉豆蔻酸異丙酯、硬脂酸十六烷基酯、硬脂酸丁酯、油酸癸酯、乙?；视王?、(C12-C15)醇的辛酸酯和苯甲酸酯、醇和多元醇的辛酸酯和癸酸酯如二醇和三醇的辛酸酯和癸酸酯、蓖麻醇酸酯如己二酸異丙酯、月桂酸己酯和十二烷酸辛酯、馬來酸二癸酯、氫化植物油、苯基聚三甲基硅氧烷、霍霍巴油和蘆薈提取物。可使用在環(huán)境溫度下為固體或半固體的其它合適潤膚劑。這類固體或半固體化妝品潤膚劑包括二月桂酸甘油酯、氫化羊毛脂、羥基化羊毛脂、乙酰基化羊毛脂、凡士林、羊毛酸異丙酯、肉豆蔻酸丁酯、肉豆蔻酸鯨蠟酯、肉豆蔻酸肉豆蔻酯、乳酸肉豆蔻酯、鯨蠟醇、異硬脂醇和羊毛酸異鯨蠟酯。配方中可任選地包含一種或多種潤膚劑。潤濕劑為由于其吸濕性而促進水保留的保濕劑。合適的潤濕劑包括甘油、聚合醇如聚乙二醇和聚丙二醇、甘露醇和山梨醇。優(yōu)選地，潤濕劑為山梨醇、70％USP或聚乙二醇400NF。配方中可任選地包含數(shù)量為約1wt％至約10wt％、優(yōu)選約5wt％的一種或多種潤濕劑。干燥感調節(jié)劑為當加入到乳液中時在乳液干燥時賦予皮膚“干燥感”的試劑。干燥感調節(jié)劑可包括滑石、高嶺土、白堊、氧化鋅、硅酮流體、無機鹽如硫酸鋇、表面處理的二氧化硅、沉淀二氧化硅、火成二氧化硅如可從NewYork，N.Y.U.S.A.的DegussaInc.得到的Aerosil。另一種干燥感改性劑為在美國專利6488916中公開類型的表氯醇交聯(lián)的甘油淀粉。引入另外的增稠劑如可從NoveonCo得到的各種Carbopols是有利的。尤其優(yōu)選的為不會破壞最終產(chǎn)品制劑中薄層狀結構的那些試劑，如非離子增稠劑。另外的增稠劑的選擇在本領域內是眾所周知的。還可向本發(fā)明的組合物中添加另外的天然或合成物質以免受或延緩由于空氣中氧氣作用(氧化)引起的變質。它們還可減少皮膚組織中的氧化反應。這類物質能防止可能引起腐臭和非酶褐變反應產(chǎn)物的產(chǎn)生的氧化變質。典型的合適物質包括沒食子酸的丙基酯、辛基酯和十二烷基酯、丁基化羥基苯甲醚(BHA，通常以鄰位和間位異構體的混合物形式購買)、丁基化羥基甲苯(BHT)、綠茶提取物、尿酸、半胱氨酸、丙酮酸鹽(或)酯、去甲二氫愈創(chuàng)木酸、維生素A、維生素E和維生素C和它們的衍生物?？稍诮M合物中任選地包括數(shù)量為約0.001wt％至約5wt％、優(yōu)選約0.01wt％至0.5wt％的一種或多種這類物質。螯合劑為用于螯合或結合金屬離子如具有雜環(huán)結構從而離子被每個構成環(huán)的化學鍵固定的物質。合適的螯合劑包括乙二胺四乙酸(EDTA)、EDTA二鈉、乙二胺四乙酸二鈉鈣、EDTA三鈉、白蛋白、轉鐵蛋白、去鐵敏、甲磺酸去鐵敏(desferal)、甲磺酸去鐵敏(desferoxaminemesylate)、EDTA四鈉和EDTA二鉀或這些物質的任意組合。芳香劑為能賦予防曬組合物美學上令人愉悅的香味的芳香物質。典型的芳香劑包括從植物源(例如玫瑰花瓣、梔子花、茉莉花等)提取的芳族物質，它們可單獨或以任意的組合形式使用來形成香精油?；蛘?，可制備醇提取物用于混合芳香劑。但是，由于由天然物質獲取芳香劑的較高成本，現(xiàn)代的趨勢是使用合成制備的芳香劑，尤其在大量生產(chǎn)制品中。防曬組合物中可任選地包含數(shù)量為約0.001wt％至約5wt％、優(yōu)選約0.01wt％至約0.5wt％的一種或多種芳香劑。如果需要，還可使用另外的防腐劑，其包括眾所周知的防腐劑組合物，例如尤其是芐醇、苯基乙基醇和苯甲酸、二偶氮烷基(diazolydinyl)、脲、氯苯甘油醚(chlorphenesin)、丙炔基碘和丁基氨基甲酸酯。本發(fā)明的組合物還可包括皮膚保護活性劑。合適的例子包括(優(yōu)選重量百分比范圍)尿囊素(0.5-2％)、氫氧化鋁凝膠(0.15-5％)、菱鋅礦(1-25％)、可可油(大于50)、鱈魚肝油(5-14％)、膠體燕麥(Colloidaloatmeal)、聚二甲基硅氧烷(1-30％)、甘油(20-45％)、硬化脂(大于50)、高嶺土(4-20％)、羊毛脂(12.5-50％)、礦物油(大于50％)、凡士林(大于30％)、碳酸氫鈉、局部淀粉(topicalstarch)(10-98％)、白凡士林(大于30％)、醋酸鋅(0.1-2％)、碳酸鋅(0.2-2％)和氧化鋅(1-25％)。本發(fā)明的組合物還可包括驅蟲組分。用于個人護理產(chǎn)品的最常用的驅蟲活性劑為N，N-二乙基-間-甲苯甲酰胺，通常稱為“DEET”，并可以以包含至少約95％DEET的濃縮物的形式得到。其它合成的化學驅蟲劑包括丁基乙酰基氨基丙酸乙酯(也稱為IR3535)、鄰苯二甲酸二甲酯、乙基己二醇、避蟲酮、二-正-丙基isocinchoronate、雙環(huán)庚烯、二羧酰亞胺和四氫糠醛。某些源于植物的物質也具有驅蟲活性，包括香茅油和其它香茅油源(包括檸檬草油)、苧烯、迷迭香油和桉葉油。引入到防曬乳液內的驅蟲劑的選擇經(jīng)常受驅蟲劑氣味影響。使用的驅蟲劑的量將取決于試劑的選擇；DEET在高濃度下是有用的，如最高約15％或更高，而一些植物衍生的物質一般使用少得多的量，如0.1％或以下。局部施用本文描述的本發(fā)明組合物到人頭發(fā)或皮膚能提供對紫外線輻射(UVR)有害效應的增強防護。因此，本發(fā)明進一步提供一種保護人皮膚和/或頭發(fā)免受太陽輻射更具體地說是UVR的有害效應的方法，該方法包括向其局部施用有效量的如本文描述的包含防曬劑和一種或多種抗氧化劑的組合物。暴露皮膚到UVR(即從280nm至400nm的光輻射波長)的美學有益結果是促進人表皮的變黑。日照的另一個益處來自于皮膚內維生素D的產(chǎn)生。UVR一般被分成UV-A(320-400nm的光波長)和UV-B(280-320nm的波長)區(qū)域。過度暴露于UV-B輻射通常被認為導致皮膚灼傷和紅斑。另外，過度暴露于UV-A輻射可能導致皮膚彈性喪失和皺紋出現(xiàn)，加快過早的皮膚老化。這類輻射促進紅疹反應的觸發(fā)或在某些個體中放大了這種反應，并甚至是光毒性或光過敏反應的來源。越來越多的人認為，過度暴露于UV-A還可能導致黑色素瘤。因此，施用本發(fā)明的組合物到個體的皮膚和/或頭發(fā)將提供對個體皮膚和/或頭發(fā)的增強UVR光保護(UV-A和/或UV-B)。本發(fā)明還提供一種通過施用本發(fā)明的組合物到將要或已經(jīng)暴露于UVR的皮膚來治療和/或逆轉皮膚光損傷的方法。術語“治療和/或逆轉光損傷”旨在指皮膚狀態(tài)的一個或多個屬性如干燥度、肌理、彈性/結實性/張弛性、皺褶/皺紋、皮膚色調/透明度、色素沉著均勻性和/或因暴露于UVR而被惡化的紅斑得到改善。本發(fā)明的包含防曬劑的組合物旨在提供級別為至少2的防曬因子(SPF)，另外優(yōu)選的實施方案具有至少5、至少10、至少15、至少20、至少25、至少30、至少35、至少40、至少45、至少50、至少55、至少60、至少65、至少70、至少75、至少80、至少85、至少90、至少95和至少100的防曬因子。本發(fā)明的含防曬劑的組合物還旨在提供至少一星、至少二星、至少三星和直到四星的U.S.FDAUV-B“星級”。將借助下面的實施例進一步描述本發(fā)明，這些實施例不打算以任何方式限制由所附的權利要求限定的本發(fā)明。實驗DPPH(α，α-二苯基-β-苦基偕腙肼基)自由基試驗DPPH為當溶解在溶液中時形成強紫色的穩(wěn)定自由基。當被抗氧化劑還原時，紫色逐漸消失直到當DPPH被完全還原時其最終消失。可容易地測量顏色逐漸消失的程度并用于將被認為具有抗氧化劑性質的不同材料的相對效力進行分級。在簡單甲醇溶液中記錄抗氧化劑原料的測量值。通過在甲醇中以不同濃度溶解抗氧化劑制備樣品。在樣品制備后，將125μl樣品或作為對照的純甲醇移液到樣品測試管內，然后加2ml甲醇并旋轉。然后將2mlDPPH儲備溶液(在甲醇中0.25mM)加入到每個管(每個樣品達到4.125ml的總體積)中并旋轉。在加入DPPH后，立即蓋住測試管并放到30℃水浴中保持20分鐘。在溫育20分鐘后，使用PerkinElmerLambda40分光光度計在517nm處記錄每個樣品的吸光度。所有樣品均制備一式三份，并使用它們的平均吸光度值通過使用下面的公式以抗氧化劑還原單位(ARU)計來表示各種濃度下抗氧化劑的效力：ARU＝(甲醇對照吸光度-樣品吸光度)×10ARU值具有0到約15的大小，0代表“無”效力，15代表具有高抗氧化劑效力的原料。被認為具有抗氧化劑性質的各種油和水溶性原料的抗氧化劑效力列在表1中。原料除了包括眾所周知的植物提取物如綠茶、玫瑰、葡萄和蘑菇外，還包括大家熟知的抗氧化劑如維生素E。效力被表示為抗氧化劑還原單位(ARU)，其范圍從無效力的0值到具有還原DPPH基的高效力的抗氧化劑的12。油和水溶性抗氧化劑的例子覆蓋這個范圍。表1與維生素E相比，部分物質明顯具有較低(ARU＜6.5)而另外一些具有較高(＞6.5)的抗氧化劑效力。單獨基于ARU值，期望ARU＞6.5的抗氧化劑在中和UVR引起的皮膚內ROS形成的能力方面超過維生素E。但是，認識到ROS涵蓋了各種反應性化合物，包括自由基以及其它氧化劑如過氧化氫、單態(tài)氧或過氧化亞硝酸鹽，因此DPPH自由基試驗的結果可能不能充分預測在暴露于UVR的皮膚上的抗氧化劑效力。因此，我們從表1中選擇涵蓋一系列ARU值的幾種抗氧化劑(用*指示)在更嚴密地模擬暴露于UVR的完整人皮膚的模型系統(tǒng)中進行測試，以理解通過DPPH自由基測試測量的溶液中Aox效力能否轉化成皮膚上類似的效力水平。評價抗氧化劑抑制脂質過氧化能力的體外帶剝離法(ExVivoTapeStripMethod)為了確定抗氧化劑(Aox)能否在UVR存在下在皮膚上保持其效力，我們設計了利用人皮膚脂質作為UVR引起的過氧化的底物的新的更相關模型。將在寬帶片上從皮膚取下的脂質作為隨后暴露于UVR的底物。通過在帶剝離前施用有或沒有Aox的標準洗液到皮膚上，可在有或沒有Aox的條件下在帶剝離物上收集皮膚脂質，所述Aox基本保持脂質和Aox在皮膚上所具有的接近性。在UVR暴露后，可測量Aox的存在保護脂質免受ROS過氧化相對于抗氧化劑不存在時脂質的程度。征募人志愿者進行試驗并要求他們在試驗前至少2天不要施用任何產(chǎn)品到其手臂。在任何產(chǎn)品處理前，用異丙醇潤濕的KimwipeTM擦拭對象左和右前臂內側以除去可能存在于皮膚表面上的任何殘余物。施用輕微壓力擦拭手臂僅僅一次，然后在處理前使其干燥至少10分鐘。將模板(90mm×50mm)定位在每個內前臂上使得能清楚描繪二個區(qū)域。使用尖超細的SharpieTM筆，在模板的每個角處做標記以勾勒出每個施用部位，每個前臂描繪二個部位。使用指套，施用空白對照劑或抗氧化劑洗液(100mg)到前臂上的描繪的部位。要小心以確保在整個施用區(qū)域內均勻地施用產(chǎn)品。施用后，使部位風干30分鐘，在此期間，指示對象不能使任何衣服接觸試驗區(qū)域。在洗液干燥30分鐘后，使用4.0英寸的BrandNo.800PrescriptionLabel帶片(1.5英寸寬)對每個部位進行帶剝離。將帶的一端折疊提供不會粘著到皮膚上的邊緣以方便取下。將帶片定位在部位上，然后使用手指輕輕按壓帶到皮膚上以便良好接觸。然后從對象手臂上快速取下帶。取下后，將所有帶存放在黑暗位置如抽屜中直到它們被UV輻照或用異丙醇提取(即非輻照對照)。使用1000WXe弧太陽模擬器(WG320過濾)用10焦/cm2的劑量照射每個對象的皮膚的所選帶剝離物。使用OptronicsOL-754分光輻射度計調節(jié)太陽模擬器的輸出以輸送恒定劑量的UVR。輻照后，將帶修剪至三英寸的長度并放在20ml玻璃閃爍瓶中。然后向每個瓶中加入4ml異丙醇，然后蓋上蓋子。然后再次強烈振蕩瓶并放在-20℃冷凍機中提取過夜。在取出等分試樣用于脂質氫過氧化物(LOOH)分析前振蕩第二天的樣品。按照生產(chǎn)商的指示使用LipidHydroperoxideAssayKit(KamiyaBiomedicalCompany，ThousandOaks，CA)分析每個帶提取物的總LOOH含量。然后通過使用分光光度計在675nm下測量亞甲基藍形成來對脂質氫過氧化物進行定量。使用氫過氧化枯烯制備標準曲線，標準曲線在這些實驗中檢測的LOOH的范圍內是線性的。分析每種提取物三次，本文提供的結果代表這些分析的平均值。標準偏差一般小于10％。通過將每個志愿者上四個施用部位測定的LOOH值代入到下面的公式中計算抗氧化劑(Aox)或空白對照劑洗液抑制UVR引起的脂質氫過氧化物(LOOH)形成的程度：“LOOH形成％”的計算能使每個對象成為他個人的內部對照并使與用于剝離皮膚的帶(3英寸)的面積相關的數(shù)據(jù)標準化。按照這種方式，可比較不同人身上的部位之間的LOOH形成％的值。使用配對t-檢驗分析數(shù)據(jù)以確定抗氧化劑或空白對照劑處理是否產(chǎn)生顯著不同的結果。.05的α水平和80％的功效用于所有統(tǒng)計檢驗。所選抗氧化劑(表1中的*)保護脂質不受UVR引起的ROS形成的結果顯示在圖1中，其揭示了幾個顯著特征。水和油溶性物質都能保護脂質免受UVR引起的過氧化；但是，原料必須能分成有保護性的脂質雙層。維生素E以劑量無關的方式(黃柱)保護皮膚脂質。四氫姜黃素(THC)與維生素E一樣有效。維生素E聯(lián)合Emblica、GT或THC(橙色柱)也能與單獨維生素E(黃柱)大約一樣好地保護。令人驚奇地，一些物質(紅柱)增加而不是降低脂質氫過氧化物(LOOH)水平，用作助氧化劑而不是抗氧化劑。維生素E的加入能降低抗氧化劑的助氧化劑性質(藍條)，但不能達到與單獨維生素E觀察到的一樣的程度。這些結果說明，單獨的DPPH自由基測試不能預測Aox在皮膚上有效用于保護脂質不受來自UV引起的ROS形成的過氧化的能力。角質層的雙光子熒光顯微鏡成像使用前面描述的過程(HansonKM，CleggRM.PhotochemistryandPhotobiology，2002，76(1)：57-63)在人胸部皮膚切片(～0.5cm×0.5cm)上體外進行雙光子熒光強度成像以檢測并對UV引起的角質層中活性氧(ROS)的水平進行定量。使用玻璃棒頂端將試驗制劑以2mg/cm2施用到皮膚樣品的表面上。在輻照前，在磷酸鹽緩沖的鹽水-乙醇中的100微摩爾二氫若丹明(DHR)中培育皮膚樣品。DHR分配到組織內，它在那里與UV引起的ROS反應產(chǎn)生強熒光若丹明-123，其隨后被成像和量化作為UV引起的ROS形成的度量。從每個皮膚樣品和至少每個深度處成像至少二個唯一區(qū)域。使用沒有防曬活性劑或抗氧化劑的基礎制劑作為對照。圖2中顯示的圖像說明了在施用每種制劑到完整的人皮膚片并輻照后在角質層整個厚度內產(chǎn)生的UV引起的ROS形成的程度。圖像清楚表明，暴露于4MED全光譜UV輻照產(chǎn)生充足的ROS形成。在輻照前施用SPF30寬光譜防曬制劑利用其在與皮膚相互作用產(chǎn)生ROS前吸收UV的能力而相對于對照制劑減少ROS形成39％。但是，施用SPF30制劑加抗氧化劑(0.5％維生素E，0.1％Emblica)相對于對照制劑減少ROS形成總計73％，這表示與只包含防曬活性劑的制劑相比有34％的額外ROS減少。因此，這些結果有說服力地說明，適宜類型和水平的抗氧化劑的加入能作為輔助策略幫助防曬劑保護皮膚免受UV引起的ROS形成的有害影響。暴露皮膚到UVR可產(chǎn)生充足的ROS，即使通過寬光譜SPF30防曬劑的保護層。利用中和ROS的能力，抗氧化劑(Aox)能提供可測量和有意義的對ROS破壞效應的保護水平，按照這種方式，顯著增大了所提供的防曬劑的保護力，但是，條件是適當選擇用在防曬劑中的Aox?？寡趸瘎┙M合對基底層的保護A.脂質過氧化抑制維生素E在中和表皮外層、角質層中的UV引起的ROS方面非常有效。制備空白對照劑和實驗制劑以比較制劑抑制脂質過氧化的能力。使用的制劑顯示在表2中。表2帶剝離研究中使用的空白對照劑和抗氧化劑洗液通過添加十六/十八烷基硫酸鈉到A部分的水中并混合，然后添加SimulgelNS或Sepigel305并充分混合來制備制劑。然后，在攪拌下加入B部分成分，然后是C部分中的GermabenII。在加入所有成分后，充分混合乳液。使用上面描述的體外帶剝離方法，發(fā)現(xiàn)單獨包含維生素E或包含維生素E與Emblica的組合物在保護皮膚外表面脂質不受ROS介導的UV引起的氧化方面非常有效(表3)。表3B.雙光子熒光顯微檢測然后對包含維生素E和Emblica的制劑進行雙光子熒光顯微分析以確定抑制ROS形成的能力。使用的方法類似于上面描述的那些，使用共焦顯微鏡觀察整個皮膚切片內不同深度處的細胞，然后使用熒光對ROS形成的程度進行定量。但是，在本實驗中，不是使用人胸部皮膚，使用的皮膚為EpiDermTMSkinModel(MatTekCorporation，Mass，USA)，其由正常的人得到的表皮角質化細胞組成，這些角質化細胞已被培養(yǎng)形成人表皮的多層高度分化型模型。在超微結構上，EpiDermTMSkinModel與人皮膚高度相似，因此提供研究抗氧化劑中和暴露于UVR向下直到基底層期間形成的ROS的能力的體外模型。在UVR暴露前，用二氫若丹明處理EpiDermTM皮膚切片，二氫若丹明分配到組織的整個含水和脂質區(qū)域內。當暴露于UVR時，組織中的二氫若丹明與在任何地方形成的ROS起化學反應產(chǎn)生高度熒光分子。隨后檢測熒光并進行定量以提供在皮膚較深層中形成的UV引起ROS的水平的指示。通過在輻照射前局部施用抗氧化劑，可測量ROS形成并與在將沒有抗氧化劑的空白對照劑洗液施用到皮膚后形成的ROS比較。按照這種方式，可測量抗氧化劑中和皮膚較深層內的ROS的效力并確定它們的相對效率。使用這種方法，測試包含維生素E和Emblica的實驗制劑以確定其在表皮暴露于4MED后中和表皮基底層和底層內ROS的能力。這個實驗中使用的實驗制劑和空白對照劑洗液制備如下。表4-空白對照劑洗液表5-抗氧化劑洗液通過添加丙烯酸酯/C10-30烷基丙烯酸酯交聯(lián)聚合物到A部分的水中同時攪拌和混合直到透明和無塊來形成水相。在攪拌的同時，向A部分的水相混合物中加入丙二醇和EDTA二鈉并充分混合10分鐘。然后向水相混合物中加入B部分的三乙醇胺并繼續(xù)充分混合。另外通過混合C部分的成分到一起并在充分攪拌的同時加熱到140-145°F形成油相。然后將油相加入到水相中并繼續(xù)混合形成乳液。將乳液冷卻到室溫然后向冷乳液中加入D部分的芐醇并充分混合。加入足夠重量的補充的水。空白對照劑和實驗制劑之間的差異是往油相中添加抗氧化劑。如圖3中所示，盡管在表皮外層中非常有效，但0.5％維生素E和0.1％Emblica的組合減少表皮基底層中的ROS形成僅僅約5％。接下來我們評價了化妝品工業(yè)使用的各種成分所聲稱的抗氧化劑能力，并令人驚奇地發(fā)現(xiàn)它們中的許多在暴露于UVR皮膚上的基底層處表現(xiàn)為像助氧化劑。如圖4中所證明，不是降低ROS水平，這些成分在表皮基底層內相對于沒有任何抗氧化劑的空白對照劑增加ROS水平達到250％。表現(xiàn)為像助氧化劑的這些成分中的許多種代表來自茴香籽、玫瑰和白葡萄的天然植物提取物。這些結果共同說明，在有意識的日光暴露時，需要審慎選擇防曬產(chǎn)品中使用的抗氧化劑。此外，試驗說明，本發(fā)明的方法揭示了不是所有被確定為“抗氧化劑”的成分都能在UVR暴露現(xiàn)實使用中提供實際的抗氧化劑性能。接下來我們測試了包含抗氧化劑維生素E和亞丁香基丙二酸二乙基己酯(ST，MerckKGaA，德國)組合的實驗制劑以確定該組合能否有效防護整個表皮內UV引起的ROS形成。通過類似于上面描述的方法，制備空白對照劑和實驗制劑。表6-空白對照劑洗液表7-抗氧化劑洗液通過添加丙烯酸酯/C10-30烷基丙烯酸酯交聯(lián)聚合物到A部分的水中同時攪拌和混合直到透明和無塊來形成水相。在攪拌的同時，向A部分的水相混合物中加入丙二醇和EDTA二鈉并充分混合10分鐘。然后向水相混合物中加入B部分的三乙醇胺并繼續(xù)充分混合。另外通過混合C部分的成分到一起并在充分攪拌的同時加熱到140-145°F形成油相。然后將油相加入到水相中并繼續(xù)混合形成乳液。將乳液冷卻到室溫然后向冷乳液中加入D部分的芐醇并充分混合。加入足夠重量的補充的水。空白對照劑和實驗制劑之間的差異是該油相中添加抗氧化劑。如表8和圖5和6中所示，體外ROS結果說明，同時包含維生素E和ST的洗液提供了比利用維生素E和Emblica高得多的對UV引起ROS形成的防護。表8抗氧化劑基底層中中和的ROS％1MED暴露后0.5％維生素E+0.1％EmblicaND0.5％維生素E+0.9％OxynexST474MED暴露后0.5％維生素E+0.1％Emblica50.5％維生素E+0.9％OxynexST33ND＝未確定。添加ST到包含維生素E的洗液中在暴露于4MED的UVR后中和了基底層內33％ROS，在暴露于1MED的UVR后中和了47％ROS。這些結果明顯好于僅包含維生素E和Emblica的洗液的5％ROS中和。還在上面描述的脂質過氧化試驗中測試了包含0.5％維生素E和0.9％ST組合的組合物，并表明阻止UV引起的脂質過氧化75％。這與0.5％維生素E加0.1％Emblica得到的結果類似。但是，盡管組合物在抑制脂質過氧化的能力上類似，但通過組合維生素E和ST，我們觀察到在表皮整個厚度上防護ROS形成這一點出乎意料地增加。這些結果還確認，ST在皮膚暴露于UVR時在皮膚內保持了其抗氧化劑能力，而不是變成助氧化劑。綜合考慮，這些結果表明了組合維生素E和ST用于防護表皮整個厚度內UV引起的ROS形成的出乎意料的益處。高SPF抗氧化劑配方的化妝品臨床效力評價按照本發(fā)明的方法生產(chǎn)包含防曬劑和抗氧化劑(antioxidantloads)的二種典型抗氧化劑防曬劑配方：成分SPF70SPF30防曬劑胡莫柳酯15％15％氰雙苯丙烯酸辛酯(Octocrylene)10％2％阿伏苯宗3％2％羥苯甲酮6％5％奧替柳酯(Octisalate)5％5％抗氧化劑亞丁香基丙二酸二乙基己酯0.9％-維生素E0.5％0.5％Emblica-0.01％所有百分比都為w/w。在按照U.S.F.D.A.批準的試驗規(guī)程進行的體內SPF試驗中，確定第一制劑被評定為至少SPF70，第二制劑為至少SPF30。為了方便，它們在本文中將被稱為SPF70和SPF30。SPF的體外和體內測量方法描述在例如美國專利申請公開No.20070160549和20080081024中。進行臨床效力評價以確定按上文所述生產(chǎn)的高SPF抗氧化劑制劑對皮膚健康指標包括皮膚干燥性(水份)、皮膚肌理(粗糙度、光滑度)、彈性(即結實性或張弛性)、皮膚色調和透明度、色素沉著均勻性、細皺紋和皺褶、紅斑、光損傷和暗傷(潛在性色素沉著)的影響。研究為單盲、平行、隨機、受控、十二(12)周使用試驗，具有七(7)天的附加起始平衡期。注冊一百零九個(109)對象，一百零五個(105)繼續(xù)研究。四個(4)對象由于不能做出全部定期計劃的觀察而退出。沒有報告不利的試驗。由于使用測試產(chǎn)品12周，下面的結果說明了相對于皮膚起始狀態(tài)的顯著改善。將合格的對象分成二(2)個產(chǎn)品組和一個未處理的對照組。專業(yè)臨床評估者在每次觀察時將每個對象的臉分級以評價造成過早老化的視覺和觸覺性質的獨立參數(shù)，以及提供可見光損傷程度的總體全面評價。使用在起始(baseline)時的臨床分級得分確認對象存在輕度至中度光損傷，并因此被準予參加。使用生物檢儀器量好具體的性質(specificattribute)，使用具有圖像分析的硅橡膠樹脂復制品測量細皺紋和皺褶，用NovaMeter測定水份含量，用Dermalab抽吸設備測量皮膚彈性。受過專門訓練的攝影師在起始、第2、4、8和12周時使用固定角標準和交叉偏振光Canfield臨床相機裝置為每個對象拍照以記錄臉側面(包括魚尾紋區(qū)域)上具體部位的外觀。攝影師在起始和在第12周觀察時或直到產(chǎn)品被洗掉且沒有較長熒光(無論哪個較晚)時取全臉部UV反射照片。專業(yè)臨床評估師將在起始和在第12周(至洗掉的±天數(shù))時獲取的UV照片分級以評估存在的潛在性“暗”傷的程度，然后全面評價與起始相比的變化量。對試驗組合物加外包裝以隱藏生產(chǎn)商標識，并用合適的試驗件代碼和使用指示標記。大約一半研究產(chǎn)品在研究開始前被交付，另一半產(chǎn)品在研究中期前被交付。在處理期開始前7到10天，對象經(jīng)歷起始平衡期，在此期間他們中斷所有面部防曬劑、皮膚處理產(chǎn)品、他們正用的面部清潔皂或膏和任何面部保濕化妝品產(chǎn)品的使用；每天使用Camay皂，每個早晨進行任何臉部清潔，并根據(jù)需要全天使用；并且在研究持續(xù)期間禁止使用日光浴床。在平衡期后，通過查看足夠的干燥性和外在皮膚老化征兆來定性對象。在定性后，對象被隨機分配到二個試驗組中的一個或未處理的對照組。在研究持續(xù)期間，被分配到處理和非處理組的對象只用提供的Camay皂洗臉。在兩個處理組中的對象每天一次(每個早晨)施用指定的試驗制品到他們的臉上(和頸上，如果需要)，然后按照需要重復施用。對象在每次觀察時都在研究中心提供的日記薄上記錄每天的施用時間。非處理組中的對象記錄他們在研究期間清洗和施用他們常用的保濕劑、防曬劑和彩妝產(chǎn)品的次數(shù)。按與處理組中所列相同的方式收集和再分配日記。所有對象在2、4、8和12周后都有臨床皮膚評價、NovaMeter、Dermalab、硅橡膠樹脂復制品和標準燈光照片。對象僅僅在起始和第12周(至洗掉的±天數(shù))時由專業(yè)臨床評估者獲取UV照片，這些專業(yè)臨床評估者不知道產(chǎn)品分配、哪個對象在處理組以及哪個對象在非處理組。在每次觀察中都對下面列出的光損傷的幾個指標進行評價。在每一個分類中列出等級水平。A.光損傷程度的總體評價按0-10的等級將對象分級，0代表沒有光損傷，10代表嚴重光損傷。結果如下：表9*明顯不同于起始值(baselinevalue)，p≤0.050TTrendwise明顯不同于起始值，p-0.150-0.051B.臉部干燥度為對象給予如下的0-4的等級：0正常皮膚；沒有干燥跡象1輕度干燥；輕微但明確的干燥，存在的細微起皮可具有粉狀或灰狀外觀2中度干燥；稍微粗糙的起皮，一些裂紋明顯成為升起的皮屑3顯著干燥；顯著的粗糙起皮，裂紋明顯成為升起的皮屑4嚴重干燥；非常顯著；非常粗糙的起皮；裂紋向開裂發(fā)展；可能存在紅斑結果如下：表10C.肌理(粗糙度/光滑度)用表示光滑均勻表面的0分到表示粗糙、粗劣、不均勻表面的10分將對象分級。結果如下：表11*明顯不同于起始值，p≤0.050D.彈性/結實性/張弛性用表示堅實、有彈性、繃緊皮膚的0分到表示松垮、不結實、不飽滿皮膚的10分將對象分級。結果如下：表12*明顯不同于起始值，p≤0.050E.皺紋/皺褶用表示沒有皺紋或皺褶的0分到表示包含大量皺褶的粗糙皮膚的10分將對象分級。結果如下：表13*明顯不同于起始值，p≤0.050TTrendwise明顯不同于起始值，p-0.150-0.051F.皮膚色調/透明度用表示明亮、容光煥發(fā)、半透明皮膚的0分到表示灰黃、無光澤和/或具有不均勻皮膚色調的皮膚的10分將對象分級。結果如下：表14*明顯不同于起始值，p≤0.050G.色素沉著均勻性用表示一致、均勻色素沉著的0分到表示不均勻、有斑點或有雜色皮膚的10分將對象分級。結果如下：表15*明顯不同于起始值，p≤0.050TTrendwise明顯不同于起始值，p-0.150-0.051H.紅斑用表示沒有紅斑或正常色調的0分到表示顯著的極紅的10分將對象分級。結果如下：表16*明顯不同于起始值，p≤0.050TTrendwise明顯不同于起始值，p-0.150-0.051使用Dermalab、Novameter和復制圖像分析在起始和第2、4、8和12周時按如下在所有對象上測量面部皮膚狀態(tài)。使用Dermalab(CortexTechnology，Denmark)在所有對象上在臉的一側(每次觀察時在相同位置)測量彈性，Dermalab施用負壓到皮膚表面并計算皮膚可被拉起的高度和它恢復到平衡的速度，借此提供彈性測量值。在圖像分析復制時，在臉的相對側上進行Dermalab測量。在臉的一側(每次觀察時在相同位置)上測量保濕性以記錄皮膚表面的水合水平。使用DermalPhaseMeter9003(NOVAmeter)評價皮膚水合的相對程度。通過使用一對間距小的電極施用交流電壓到皮膚并測量阻抗進行測量。水含量的變化改變了電容電路的阻抗。記錄在10％內的頭兩個連續(xù)讀數(shù)。在每一次觀察時測量臉的相同側。在每組讀數(shù)期間記錄測試室溫度和濕度。輪廓(表面構造)分析提供量化皮膚增大即化妝品減少皺紋和皺褶的作用的方法。對于這種過程，使用圖像分析對魚尾紋區(qū)域制成的皮膚復制品分析其輪廓和表面肌理。使用硅橡膠樹脂壓印材料(Cuderm)制備魚尾紋區(qū)域的皮膚復制品。硅橡膠樹脂是使用在施用和去除后保持完整的1cm直徑復制環(huán)施用的快速固化液體。在起始和第2、4、8和12周時使用標準和交叉偏振光照相記錄所有對象的面部皮膚狀態(tài)。根據(jù)在起始和第12周時獲取的UV照片，由專業(yè)分類者評價皮膚表面下面積聚的暗傷。在全部觀察中獲取所有對象的使用可見和交叉偏振光的數(shù)字照片。對象的臉被定位在Canfield立體定位重定位裝置中并使用CanfieldClinicalSystems照相機和閃光系統(tǒng)照相。使用的照相機為尼康D80SLR35mm型，具有60mm微距Nikkor鏡頭和改進的SB-23閃光燈頭。照相機被設置成在f16處光圈優(yōu)先自動。對于每個對象，在每個時間間隔時，以1∶6放大率對板(slate)拍照，識別對象和時間間隔。使用標準照明和重復使用交叉偏振光以1∶6放大率獲取正面照片和以1∶4和1∶3放大率獲取臉每一側的二個側面45°角照片。對象將他們的頭放在Canfield立體定位重定位裝置中并使用CanfieldClinicalSystems照相機系統(tǒng)照相。使用的相機為尼康6006SLR35mm型。對于每個對象，在每個時間間隔時，以1∶6放大率對板(slate)拍照，識別對象和時間間隔。以1∶6放大率獲取正面照片和以1∶6放大率獲取臉每一側的一個側面45°角照片。隨后，使用在鏡頭上的柯達18A濾鏡、SunpakMS4000Monolight和T-Max400黑白印片用膠片以1∶6放大率獲取二個正面UV光(UV反射)照片。在f8和1/250秒快門速度下進行曝光。專業(yè)評估者將全部臉部照片針對每個時間點(起始和第12周)的色素沉著均勻性獨立分級，按0(一致/均勻)至10(不均勻，到處有斑點)等級進行分級。專業(yè)評估者還對每個個體對象的12周照片對起始照片進行對比評價。分級尺度為如下的-4到+4：實施例制劑利用下面的成分按照本文描述的方法制備實施例防曬劑制劑：表17成分量，％w/w純凈水45.0-90.0胡莫柳酯5.0-15.0氰雙苯丙烯酸辛酯2.0-10羥苯甲酮0.5-6.0奧替柳酯5.0阿伏苯宗1.0-3.0Prolipid1412.0-7.0丁二醇2.0-7.0微晶纖維素/羧甲基纖維素0.2-5.0芐醇0.5-2.0維生素E0.01-3.0亞丁香基丙二酸二乙基己酯0.01-6.0余甘子果提取物0.01-1.0綠茶提取物0.01-1.0月桂亞氨基二丙酸生育酚磷酸二鈉鹽0.3-3.0氯苯甘油醚.10-0.20丁基化PVP.05-.50EDTA二鈉0.01-.20磷酸抗壞血酸鈉.01-1.0棕櫚酸維生素A.01-1.0