專利名稱：疫苗的制作方法
疫苗本申請(qǐng)為申請(qǐng)?zhí)?00680015245. 5的分案申請(qǐng)，要求2005年3月3日的的優(yōu)先權(quán)。本發(fā)明涉及能誘導(dǎo)針對(duì)水痘帶狀皰疹病毒的免疫應(yīng)答的組合物。水痘帶狀皰疹病毒(VZV)是人皰疹病毒，它是水痘和帶狀皰疹的病原體。初期感染或原發(fā)感染導(dǎo)致水痘，通常在幼年時(shí)感染上，此時(shí)是相對(duì)良性的。然而，對(duì)于幼年時(shí)未接觸過水痘的成人，以及有時(shí)在免疫受損的個(gè)體中VZV可以是致命的。同樣地，VZV感染對(duì)于新生兒可以是致命的，因?yàn)樵摬《灸艽┰教ケP。人們知道，水痘是極易通過直接接觸而傳播的傳染性疾病。與大多數(shù)皰疹病毒一樣，VZV趨向于感染某些病毒發(fā)育在其中受到抑制的細(xì)胞。在一段不同的潛伏期之后，水痘帶狀皰疹(VZ)病毒可被釋放，開始感染其他細(xì)胞。這種VZ病毒的重激活每年大約引起5百萬例帶狀皰疹(Plotkin等，Postgrad Med J 61:155-63(1985))。帶狀皰疹的特征是大腦神經(jīng)節(jié)和外周神經(jīng)炎癥并伴有劇痛。
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現(xiàn)已表明，用VZV減毒株接種的人由VZV感染獲得了保護(hù)性免疫(Arbeter等，J. Pediatr 100886-93(1982)和 Brunell 等，Lancet ii 1069-72 (1982)) 特別是 VZV 的OKA毒株已用于預(yù)防帶狀皰疹和帶狀皰疹后神經(jīng)痛的試驗(yàn)。該OKA毒株還已用于制備水痘疫苗多年且得到了充分的描述——例如參見EP651789及其中參考文獻(xiàn)。The New England Journal of Medicine 2005, number 22, Volume352 2271-2284 (M. N. Oxman等)已公布了 OKA毒株用于帶狀皰疹適應(yīng)癥的大量臨床試驗(yàn)。仍然需要改良的抗帶狀皰疹以及諸如帶狀皰疹后神經(jīng)痛(PHN)的相關(guān)病癥的疫苗。

發(fā)明內(nèi)容
第一方面在第一方面，本發(fā)明提供了一種包含與減毒活VZV或全滅活VZV組合的VZV抗原或其免疫原性衍生物的免疫原性組合物。本發(fā)明進(jìn)一步涉及一種包含與減毒活VZV或全滅活VZV組合的VZV抗原或其免疫原性衍生物的疫苗組合物。本發(fā)明進(jìn)一步涉及一種預(yù)防帶狀皰疹和/或帶狀皰疹后神經(jīng)痛(PHN)和/或減少其嚴(yán)重程度的方法，包括遞送給個(gè)體包含與減毒活VZV或全滅活VZV組合的VZV抗原或其免疫原性衍生物的免疫原性組合物。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及一種預(yù)防帶狀皰疹和/或帶狀皰疹后神經(jīng)痛和/或減少其嚴(yán)重程度的方法，該方法包括連續(xù)或同時(shí)遞送給個(gè)體VZV抗原或其免疫原性衍生物和減毒活VZV或全滅活VZV。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及一種包含減毒活VZV或全滅活VZV以及與之分離的VZV抗原或其免疫原性衍生物的試劑盒，所述組分適于連續(xù)或同時(shí)遞送，或適于在遞送前混合為單一組合物。本發(fā)明還涉及一種制造免疫原性組合物的方法，該方法包括將減毒活VZV或全滅活VZV與VZV抗原或其免疫原性衍生物組合。本發(fā)明進(jìn)一步涉及減毒活VZV毒株或全滅活VZV以及VZV抗原或其免疫原性衍生物在制備用于預(yù)防帶狀皰疹和/或帶狀皰疹后神經(jīng)痛和/或減少其嚴(yán)重程度的免疫原性組合物中的應(yīng)用。第二方面本發(fā)明涉及一種包含與THl-佐劑組合的gE或其免疫原性衍生物或免疫原性片段的免疫原性組合物和/或疫苗。本發(fā)明還涉及包含與THl-佐劑組合的gE或其免疫原性衍生物或免疫原性片段的組合物在制備用于預(yù)防或改善帶狀皰疹重激活和/或帶狀皰疹后神經(jīng)痛的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明也涉及一種預(yù)防或改善帶狀皰疹重激活和/或帶狀皰疹后神經(jīng)痛的方法，該方法包括遞送給有需要的個(gè)體包含與THl-佐劑組合的gE或其免疫原性衍生物或免疫原性片段的免疫原性組合物或疫苗。附1顯示了截短的VZV gE的序列。圖2-4顯示了在使用本發(fā)明組合物的人臨床試驗(yàn)中獲得的體液應(yīng)答。圖5和6顯示了在使用本發(fā)明組合物的人臨床試驗(yàn)中獲得的細(xì)胞介導(dǎo)的免疫。詳述在其最主要方面中 ，本發(fā)明涉及本文所述用于激發(fā)對(duì)VZV的免疫應(yīng)答的組合物和方案。在一方面，當(dāng)與沒有經(jīng)歷暴露于本發(fā)明組合物的個(gè)體所獲得的免疫應(yīng)答相比時(shí)，暴露于上述組合物所產(chǎn)生的免疫應(yīng)答適宜地可重現(xiàn)地更高并且是統(tǒng)計(jì)顯著的?？赏ㄟ^使用任何一種概述如下的技術(shù)分析CMI應(yīng)答和/或抗體應(yīng)答的任何一個(gè)或多個(gè)方面，從而評(píng)估該免疫應(yīng)答。在另一方面，本發(fā)明涉及預(yù)防和/或減少帶狀皰疹和/或帶狀皰疹后神經(jīng)痛(PHN)嚴(yán)重程度的方法。為避免產(chǎn)生疑問，在一方面本發(fā)明涉及在預(yù)防帶狀皰疹發(fā)病率中的應(yīng)用。在帶狀皰疹不發(fā)生的情況下，與未接種疫苗的對(duì)照相比帶狀皰疹重激活的嚴(yán)重程度適宜地減少(帶狀皰疹改善)。在另一方面，在帶狀皰疹發(fā)生的情況下，本發(fā)明涉及在預(yù)防PHN發(fā)病率中的應(yīng)用。在另一方面，在PHN發(fā)生的情況下，與未接種疫苗的對(duì)照相比PHN的嚴(yán)重程度適宜地減少(PHN改善)?？赏ㄟ^由帶狀皰疹或PHN所引起的疼痛減少適宜地評(píng)估嚴(yán)重程度的減少，例如使用已知的疼痛負(fù)荷測量法(如Coplan等J Pain 2004 ;5 (6) 344-56)。還可通過其他標(biāo)準(zhǔn)例如帶狀皰疹或PHN持續(xù)時(shí)間、受帶狀皰疹或PHN影響的身體區(qū)域的比例；或帶狀皰疹/PHN的部位評(píng)估嚴(yán)重程度的減少。以上陳述涉及本發(fā)明的所有方面。在本發(fā)明第一方面中，在使用減毒活毒株情況下，在一方面，該減毒活VZV毒株為
OKA毒株-一種本領(lǐng)域眾所周知的毒株，例如在Arbeter等(Journal of Pediatrics,
voI 100，No 6，p886ff)、W09402596及其中的參考文獻(xiàn)例如US 3985615中所披露的毒株，所有都在此并入作為參考。任何其他適合的減毒活毒株也可用于本發(fā)明。例如，Varilrix 和Varivax 毒株都是合適的并且有市售的，可用于本發(fā)明。全滅活VZV毒株例如滅活的VZV OKA也適合用于本發(fā)明。用于本發(fā)明的VZV抗原可以是任何適合的VZV抗原或其免疫原性衍生物，適宜地是純化的VZV抗原。在一方面，所述抗原或衍生物是一種當(dāng)與減毒活VZV毒株或全滅活VZV組合同時(shí)或連續(xù)遞送時(shí)能引發(fā)免疫應(yīng)答的抗原或衍生物，所述免疫應(yīng)答與單獨(dú)使用減毒活毒株/全滅活毒株或VZV抗原所引發(fā)的免疫相比是改善的。這樣的應(yīng)答可以是，例如，在免疫應(yīng)答量級(jí)、免疫應(yīng)答持續(xù)時(shí)間、應(yīng)答者數(shù)量或％或應(yīng)答幅度(如所檢測到的抗體或T細(xì)胞應(yīng)答范圍)的一個(gè)或多個(gè)方面的改善，或可提供在發(fā)病率臨床水平上的改善，疼痛或癥狀的緩解。利用本領(lǐng)域標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)可通過例如抗體水平或細(xì)胞介導(dǎo)免疫(CMI)活性評(píng)估免疫應(yīng)答的改善；利用已知臨床標(biāo)準(zhǔn)還可評(píng)估在臨床水平上的改善。特別是，在一方面本發(fā)明組合物或疫苗所引發(fā)的免疫應(yīng)答顯示了以下一種或多種 當(dāng)與單獨(dú)使用VZV抗原或減毒活毒株/全滅活毒株相比時(shí)，與接種疫苗前水平相比，統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著增加的CMI和/或抗體應(yīng)答； 當(dāng)與單獨(dú)使用VZV抗原或減毒活毒株/全滅活毒株相比時(shí)，與接種疫苗前水平相比，改善的多價(jià)CMI應(yīng)答。多價(jià)CMI應(yīng)答考慮到了一系列CM標(biāo)記，例如(但不限于)IFNY、IL2、TNF α和⑶40L,并且當(dāng)與單獨(dú)使用VZV抗原或減毒活毒株/全滅活毒株相比時(shí)，在大范圍的這樣的標(biāo)記中改善的多價(jià)應(yīng)答誘導(dǎo)了 CMI應(yīng)答或在一個(gè)或多個(gè)標(biāo)記中誘導(dǎo)了更聞的應(yīng)答； 當(dāng)與單獨(dú)使用VZV抗原或減毒活毒株/全滅活毒株相比時(shí)，與接種疫苗前水平相比，更持久的CMI或抗體應(yīng)答。在一方面，在I個(gè)月、2個(gè)月、3個(gè)月、4個(gè)月、5個(gè)月、6個(gè)月、12個(gè)月、24個(gè)月、36個(gè)月或48個(gè)月之后測得有持久的應(yīng)答。在一方面，在老年人群中評(píng)估免疫應(yīng)答的改善，適宜地在超過50歲的人群中進(jìn)行評(píng)估，因?yàn)橄鄬?duì)于50歲以下人群他們患帶狀皰疹或PHN的風(fēng)險(xiǎn)是增加的。還可在免疫受損的人群中研究改善的免疫應(yīng)答。在一方面，對(duì)于本發(fā)明的任何一個(gè)實(shí)施方案，這樣的人群是目標(biāo)人群。在一方面，人群為超過50歲的人群，適宜地為超過60歲、超過70歲、或甚至超過80歲及以上的人群。在一方面，人群為50-70歲的人群。因此，在一方面，本發(fā)明涉及本發(fā)明的組合物和方法在超過50歲的人中預(yù)防和/或減少帶狀皰疹或PHN嚴(yán)重程度的應(yīng)用。在一方面，本發(fā)明涉及本發(fā)明的組合物和方法在免疫受損的個(gè)體中預(yù)防帶狀皰疹或PHN和/或減少其嚴(yán)重程度的應(yīng)用，所述免疫受損的個(gè)體例如移植患者或HIV陽性的人。術(shù)語‘免疫原性衍生物’包括任何在施用于人之后保留誘導(dǎo)對(duì)VZV免疫應(yīng)答能力的分子。本文中免疫原性化合物能適宜地在免疫測定(例如ELISA或T-細(xì)胞刺激測定)中與VZV患者的抗血清和/或T-細(xì)胞起可檢測的反應(yīng)?？衫帽绢I(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知的技術(shù)進(jìn)行免疫原活性篩選。例如，可利用諸如Harlow和Lane, Antibodies ALaboratoryManual, Cold Spring Harbor Laboratory, 1988中描述的那些方法進(jìn)行這樣的篩選。適合于產(chǎn)生衍生物的方法是本領(lǐng)域眾所周知的，包括在例如Sambrook等[Molecular Cloning A Laboratory Manual, third edition,2000, Cold Spring HarborLaboratory Press]中披露的標(biāo)準(zhǔn)分子生物學(xué)技術(shù)，例如用于添加、缺失、取代或重排氨基酸或?qū)ζ浠瘜W(xué)修飾的技術(shù)。在一方面，衍生物包括，例如截短形式或其他片段。
在一方面，在本發(fā)明上下文中衍生物是包含表位，即實(shí)質(zhì)上負(fù)責(zé)多肽免疫原性并能引發(fā)免疫應(yīng)答的抗原決定簇的氨基酸序列，在一方面是T細(xì)胞表位。在一方面，免疫原性衍生物的免疫原活性的水平為衍生其的肽的免疫原性的至少約50%，在一方面為至少約70%以及在一方面為至少或大于約90%，適宜地通過上述免疫測定技術(shù)進(jìn)行評(píng)估。在本發(fā)明的某些方面中，免疫原性部分可確認(rèn)為具有大于相應(yīng)的全長多肽的免疫原活性水平，如具有大于約100%或150%或更多的免疫原活性。在一方面，VZV抗原為糖蛋白，在一方面,為gE抗原(也稱為gpl)或其免疫原性衍生物。該gE抗原、其無錨定(anchorless)衍生物(也是免疫原性衍生物)及其制備描述于EP0405867及其中的參考文獻(xiàn)[也參見Vafai A. Antibodybinding sites on truncatedforms of varicalla-zoster virus gpl(gE)glycoprotein 疫苗 199412:1265-9]。EP192902也披露了 gE及其制備。所有引用文件的公開內(nèi)容在此都并入作為參考。在一方面,gE是具有本文

圖1序列的截短的gE,并披露于Virusresearch,vol 40,1996 pl99 ff，在此全文并入作為參考。除非上下文另有明示，在下文中所涉及的gE包括截短的gE。其他適合的抗原包括，例如gB、gH、gC、gl、IE63 (如參見Huang等J. Virol. 1992,66 2664, Sharp 等 J.1nf. Dis. 1992，165 852, Debrus, JVirol. 1995May ；69(5) 3240-5及其中的參考文獻(xiàn))、IE62(如參見 Arvin 等 J.1mmunol. 1991146 257, Sabella JVirol. 1993Dec ；67 (12) :7673_6 及其中的參考文獻(xiàn))、0RF4 或 ORF 10 (Arvin 等 ViralImmunol. 200215507.)。在此本發(fā)明還預(yù)期抗原組合可與減毒活VZV或滅活VZV —起使用，以及在一方面gE可包括在任何這樣的組合內(nèi)。在一方面，本發(fā)明涉及例如gE與IE63以及gE與IE62的組合?？赏ㄟ^在本發(fā)明實(shí)施例中所述的模型體系中使用或通過人臨床試驗(yàn)，測試VZV抗原及其衍生物的適合的免疫原活性。一種或多種下列活性指標(biāo)適合于在免疫原活性評(píng)估中考慮 增加的對(duì)VZV或抗原衍生物的⑶4或⑶8T細(xì)胞應(yīng)答?！?VZV或抗原衍生物特異性抗體的增加。 增加的諸如干擾素Y或IL-2或TNF α的細(xì)胞因子的產(chǎn)生。 增加的⑶4和⑶8Τ細(xì)胞上⑶40L的表達(dá)。 降低的帶狀皰疹發(fā)病率，低于同樣處于危險(xiǎn)中的一般人群的發(fā)病率，以及同樣地減少的疾病嚴(yán)重程度和/或相關(guān)的疼痛，低于同樣處于危險(xiǎn)中的一般人群發(fā)病率。如上所述的增加或減少相對(duì)于諸如同齡不接種疫苗組的適當(dāng)對(duì)照適宜地為統(tǒng)計(jì)顯著。在一方面，減毒活VZV或滅活VZV和VZV抗原或抗原衍生物并不明顯地互相干擾，使得當(dāng)組合使用時(shí)這2種組分仍能提供對(duì)VZV的免疫原應(yīng)答。在一方面，無論這2種組分是作為組合物使用還是連續(xù)給藥或同時(shí)給藥，該應(yīng)答是保護(hù)性免疫原應(yīng)答。然而，應(yīng)當(dāng)理解某些干擾是能容忍的，只要與單獨(dú)使用原有組分相比，總的保護(hù)性免疫應(yīng)答在某些方面(例如量值增加、增加的％應(yīng)答者或擴(kuò)大的抗原應(yīng)答)得到改善即可。
在一方面，本發(fā)明涉及gE抗原和OKA毒株的組合用于同時(shí)或以任何順序連續(xù)給藥。在同時(shí)遞送的情況下，例如在同一天時(shí)將這2種組分遞送入不同的注射部位。在一方面，不同的遞送途徑用于這2種組分，特別是對(duì)于諸如OKA的病毒株通過皮下遞送，而對(duì)于諸如gE的抗原則通過肌內(nèi)遞送。在所述的所有實(shí)施方案中，本發(fā)明還覆蓋了 VZV抗原或衍生物與減毒活VZV毒株或滅活的VZV的組合的應(yīng)用。在一方面,適合的抗原組合包括gE或其免疫原性衍生物。 組合的組合物、或單種組分或兩種組分可額外地包含佐劑或免疫刺激劑，例如但不限于任何來源的去毒脂質(zhì)A和脂質(zhì)A的非毒性衍生物、皂苷類和其他能適當(dāng)?shù)卮碳Hl型應(yīng)答的試劑。在一方面，組合物包含能刺激THl型應(yīng)答的佐劑。高水平的Thl-型細(xì)胞因子趨向于促成誘導(dǎo)對(duì)給定抗原的細(xì)胞介導(dǎo)免疫應(yīng)答，而高水平的Th2-型細(xì)胞因子則趨向于促成誘導(dǎo)對(duì)抗原的體液免疫應(yīng)答。Thl和Th2_型免疫應(yīng)答的差別并不是絕對(duì)的。事實(shí)上，個(gè)體會(huì)維持一種稱為Thl占優(yōu)勢(shì)或Th2占優(yōu)勢(shì)的免疫應(yīng)答。然而,依照Mosmann和Coffman (Mosmann, T. R.和Coffman,R. L. (1989)THl and TH2 cells !different patterns of lymphokine secretion leadto different functionalproperties. Annual Review of Immunology, 7,pl45-173)在鼠⑶4+ve T細(xì)胞克隆中所述，通常便于判斷細(xì)胞因子家族。傳統(tǒng)上，Thl-型應(yīng)答與T-淋巴細(xì)胞的INF-γ和IL-2細(xì)胞因子產(chǎn)生有關(guān)。其他通常與Thl-型免疫應(yīng)答誘導(dǎo)直接有關(guān)的細(xì)胞因子不是T-細(xì)胞產(chǎn)生，例如IL-12。與此相反，Th2-型應(yīng)答與IL-4、IL_5、IL_6、IL-1O的分泌有關(guān)。促進(jìn)Thl占優(yōu)勢(shì)的應(yīng)答的適合的佐劑體系包括單磷酰脂質(zhì)A或其衍生物，特別是3-脫-O-?；瘑瘟柞Ｖ|(zhì)A。盡管腸細(xì)菌脂多糖(LPS)在佐劑中的應(yīng)用因其毒性效應(yīng)而無法實(shí)現(xiàn)，但很久以前就已知道其是一種有效的免疫系統(tǒng)刺激物。Ribi等(1986, Immunologyandlmmunopharmacology of bacterial endotoxins, Plenum Pub1.Corp. , NY, p407_419)已描述了通過除去中心碳水化合物基團(tuán)以及從還原端葡萄糖胺除去磷酸酯所產(chǎn)生的一種無毒的LPS衍生物——單磷酰脂質(zhì)A(MPL)，并具有以下結(jié)構(gòu)
權(quán)利要求
1.包含截短以除去羧基末端錨定區(qū)的VZVgE抗原以及TH-1佐劑的免疫原性組合物在制備用于預(yù)防或改善帶狀皰疹和/或帶狀皰疹后神經(jīng)痛的藥物中的應(yīng)用，其中所述gE不是融合蛋白的形式，所述佐劑包含QS21、3D-MPL和含有膽固醇的脂質(zhì)體。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的應(yīng)用,其中3D-MPL包含于脂質(zhì)體中。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的應(yīng)用，其中所述VZVgE抗原由SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列組成。
4.根據(jù)權(quán)利要求1的應(yīng)用，用于大于50歲的個(gè)體的人群。
5.根據(jù)權(quán)利要求1的應(yīng)用，用于免疫受損個(gè)體的人群。
6.一種免疫原性組合物或疫苗，包含以下物質(zhì)與包含QS21、3DMPL以及含有膽固醇的脂質(zhì)體的佐劑組合的、截短以除去羧基末端錨定區(qū)的VZV gE抗原，其中所述gE截短物不是融合蛋白的形式，并且由SEQ ID NO 1的氨基酸序列組成。
全文摘要
本發(fā)明涉及疫苗，包含VZV gE或其免疫原性片段以及TH-1佐劑的免疫原性組合物在制備用于預(yù)防或改善帶狀皰疹和/或帶狀皰疹后神經(jīng)痛的藥物中的應(yīng)用。還要求保護(hù)包含截短的VZV gE抗原以及含有QS21、膽固醇和3D MPL的佐劑的組合物。
文檔編號(hào)A61K39/00GK103028113SQ20121055276
公開日2013年4月10日 申請(qǐng)日期2006年3月1日 優(yōu)先權(quán)日2005年3月3日
發(fā)明者E.J.哈農(nóng), J.斯蒂芬尼 申請(qǐng)人:葛蘭素史密絲克萊恩生物有限公司