1.一種柑橘潰瘍病菌hfq基因無標記缺失突變體的篩選方法，其特征在于，包括如下步驟：
(1)提取柑橘潰瘍病菌基因組DNA；
(2)缺失hfq基因的重組自殺質(zhì)粒載體的構(gòu)建：
A、分別擴增柑橘潰瘍病菌hfq基因上、下游側(cè)翼序列：以柑橘潰瘍病菌基因組DNA為模板，以引物Hfq-up-F、Hfq-up-R擴增柑橘潰瘍病菌hfq基因上游側(cè)翼序列，以引物Hfq-down-F、Hfq-down-R擴增柑橘潰瘍病菌hfq基因下游側(cè)翼序列；所述引物Hfq-up-F、Hfq-up-R、Hfq-down-F、Hfq-down-R的序列為：
Hfq-up-F：TGGGATCCCGCGTGTTGAAGGTGGTATT，
Hfq-up-R：TGGGTACCCGAAAAATCCTCTTCATTATTGT，
Hfq-down-F：TGGGTACCCGGAGTAGTGCGTGTTTGATC，
Hfq-down-R：GCTCTAGAAAGCCTCTGCACCGGTCAACA；
B、分別回收步驟A得到的柑橘潰瘍病菌hfq基因上、下游側(cè)翼序列PCR擴增產(chǎn)物片段；
C、將步驟B的回收產(chǎn)物分別與載體pEASY-T1vector連接，得到上游T-載體連接產(chǎn)物和下游T-載體連接產(chǎn)物；
D、將步驟C得到的上游/下游T-載體連接產(chǎn)物分別轉(zhuǎn)化大腸桿菌；
E、提取步驟D中的陽性克隆的質(zhì)粒，分別得到上游T-載體重組質(zhì)粒和下游T-載體重組質(zhì)粒；
F、用BamHI和KpnI雙酶切上游T-載體重組質(zhì)粒，用KpnI和XbaI雙酶切下游T-載體重組質(zhì)粒，用BamHI和XbaI雙酶切質(zhì)粒pK18mobSacB；
G、將步驟F得到的上/下游T-載體重組質(zhì)粒與質(zhì)粒pK18mobSacB酶切后產(chǎn)物進行連接，將連接液轉(zhuǎn)化入DH5α大腸桿菌感受態(tài)，保存經(jīng)篩選獲得的陽性克隆即缺失hfq基因的重組自殺質(zhì)粒載體；
(3)將步驟G構(gòu)建好的缺失hfq基因的重組自殺質(zhì)粒載體轉(zhuǎn)化柑橘潰瘍病菌感受態(tài)細胞，挑取轉(zhuǎn)化后經(jīng)Kan+無糖NA篩選的單菌落；
(4)將步驟(3)挑取的單菌落用蔗糖培養(yǎng)基篩選,即得突變體。
2.如權(quán)利要求1所述的柑橘潰瘍病菌hfq基因無標記缺失突變體的篩選方法，其特征在于，所述步驟A中分別擴增柑橘潰瘍病菌hfq基因上、下游側(cè)翼序列，擴增上、下游側(cè)翼序列的PCR反應體系為：2×Taq PCR Mix 10μL、10mM的上下游引物各0.5μL、濃度為100～200ng/μL的柑橘潰瘍病菌基因組DNA 0.5μL、加ddH2O補足至20μL；
擴增上游側(cè)翼序列的PCR反應程序為：95℃預變性5min；95℃變性15s，58℃退火15s，72℃延伸30s，32個循環(huán)；72℃10min；
擴增下游側(cè)翼序列的PCR反應程序為：95℃預變性5min；95℃變性15s，58℃退火15s，72℃延伸40s，32個循環(huán)；72℃10min。
3.一種用蔗糖培養(yǎng)基篩選柑橘潰瘍病菌hfq基因無標記缺失突變體的方法，其特征在于，包括如下步驟：
(1)挑取權(quán)利要求1的步驟(3)中缺失hfq基因的重組自殺質(zhì)粒載體轉(zhuǎn)化柑橘潰瘍病菌感受態(tài)細胞后經(jīng)Kan+無糖NA篩選的單菌落，接到無蔗糖的NB培養(yǎng)基中培養(yǎng)過夜；
(2)將步驟(1)擴繁的菌液轉(zhuǎn)接到新的無糖NB培養(yǎng)基中，連續(xù)培養(yǎng)4-5代；
(3)將步驟(2)獲得的菌液，稀釋后涂布到Kan+無糖NA的篩選培養(yǎng)基上，28～30℃，放置24～36h；
(4)將步驟(3)獲得的單菌落一一劃線到含有5～10％的蔗糖的NA培養(yǎng)基，28～30℃，培養(yǎng)68～72h；
(5)將步驟(4)獲得的菌落，再一一劃線到對應的Kan+無糖NA和5～10％蔗糖NA板上，放置24～36h；
(6)將步驟(5)中抗性平板上不能生長而在無抗性平板上能生長的菌落，進行初步驗證突變；
(7)將步驟(6)獲得的疑似突變體菌落，挑到NB培養(yǎng)基中培養(yǎng)，連續(xù)傳代，將能穩(wěn)定遺傳的菌落進行驗證，得到柑橘潰瘍病菌hfq基因無標記缺失突變體。
4.如權(quán)利要求3所述的用蔗糖培養(yǎng)基篩選柑橘潰瘍病菌hfq基因無標記缺失突變體的方法，其特征在于，所述步驟(6)中驗證突變的方法為PCR驗證：提取突變體的基因組DNA，用檢測突變的引物Hfq-F/Hfq-R驗證缺失片段的大小是否與目的基因hfq的大小一致，所述引物Hfq-F/Hfq-R的序列為：Hfq-F：GCTTCAGGCGTGTAACATCC，Hfq-R：GCGAACTCCTCCAACACATC。
5.如權(quán)利要求3所述的用蔗糖培養(yǎng)基篩選柑橘潰瘍病菌hfq基因無標記缺失突變體的方法，其特征在于，所述步驟(6)中驗證突變的方法為測序驗證或者Southern blot驗證。