專利名稱：一種復(fù)方中藥中游離脂肪酸的含量檢測(cè)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種復(fù)方中藥中有效成分的質(zhì)量檢測(cè)方法，具體地說(shuō)是復(fù)方中藥中游離脂肪酸的質(zhì)量檢測(cè)方法。
背景技術(shù)：
游離脂肪酸是現(xiàn)有許多中藥復(fù)方制劑中的重要有效成分。如心腦清軟膠囊中的油酸，百多寧注射液中的亞油酸、油酸、軟脂酸以及硬脂酸等，都是中藥制劑中的活性成分。建立復(fù)方中藥中游離脂肪酸的質(zhì)量檢測(cè)方法是保證藥品療效可靠、穩(wěn)定的重要手段之一。不過(guò)，由于游離脂肪酸熔點(diǎn)較高、具有脂溶性的較長(zhǎng)碳鏈和親水性的羥基，除紫外末端吸收夕卜，在其它紫外波長(zhǎng)下沒(méi)有吸收，因此，這給快捷、準(zhǔn)確地定量檢測(cè)游離脂肪酸含量帶來(lái)一定的困難。目前，檢測(cè)復(fù)方中藥制劑中的游離脂肪酸通常是將復(fù)方中藥制劑中的游離脂肪酸經(jīng)過(guò)甲酯等酯化衍生化處理后，然后再采用氣相色譜法(GC)、高效液相色譜法(HPLC)、氣質(zhì)聯(lián)用色譜法(GC-MS)進(jìn)行分析。但是，鑒于游離脂肪酸沸點(diǎn)高，其不適合采用氣相色譜法進(jìn)行測(cè)定。另外，酯化衍生化處理需進(jìn)行樣品前處理，而不同的樣品又需要考察衍生化反應(yīng)的諸多條件，確定衍生化反應(yīng)完全定量發(fā)生，而最終條件的確定又存在一定的不確定性。因而現(xiàn)有方法檢測(cè)周期長(zhǎng)，工作量大，工作效率低，適用范圍窄；再則，如果待檢測(cè)樣品中既含有游離脂肪酸又含有其甲酯的情況下，現(xiàn)有方法僅能測(cè)定出被檢樣品中游離脂肪酸和其甲酯的總量，而不能單獨(dú)測(cè)定游離脂肪酸的含量，因此，其定量結(jié)果精密度也比較低。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的就是要提供一種方便、高效、穩(wěn)定性好、適用方位寬的復(fù)方中藥中游離脂肪酸的質(zhì)量檢測(cè)方法。本發(fā)明的目的是通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的。本發(fā)明所提供的復(fù)方中藥制劑中游離脂肪酸的含量檢測(cè)方法，它包括以下步驟(a)對(duì)照品溶液的制備精確稱取一定量的游離脂肪酸對(duì)照品，置于容量瓶中，力口甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得；(b)供試品溶液的制備稱取一定量的待檢測(cè)復(fù)方中藥制劑樣品，置于容量瓶中，加體積比濃度為50 100%的甲醇水溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得；(c)用高效液相色譜儀測(cè)定對(duì)照品溶液和供試品溶液，并采用紫外-檢測(cè)器檢測(cè)色譜信號(hào)得色譜圖；色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)為用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，體積比50:50 90:10的乙腈水為流動(dòng)相，流速為lml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)是201_205nm ；(d)繪制對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)待檢測(cè)復(fù)方中藥制劑樣品峰面積和標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算待檢測(cè)復(fù)方中藥制劑樣品中游離脂肪酸的含量。上述步驟(a)或(b)所述的“一定量”是指對(duì)照品或供試品(即復(fù)方中藥制劑樣品)的取用量能夠滿足高效液相色譜儀測(cè)定要求即可；
本發(fā)明所述的復(fù)方中藥制劑是指其活性成分含有游離脂肪酸的復(fù)方中藥制劑，如心腦清軟膠囊、百多寧注射液、蘇子油軟膠囊。本發(fā)明所指游離脂肪酸包括亞油酸、亞麻酸、棕櫚油酸、油酸、硬脂酸或軟脂酸中的任意一種或其中兩種、兩種以上的混合物。本發(fā)明中方法中所述的待檢測(cè)復(fù)方中藥制劑優(yōu)選心腦清軟膠囊；所述的游離脂肪酸是亞油酸；所述的對(duì)照品溶液的制備為精確稱取亞油酸對(duì)照品180mg，用甲醇定容至20mL后，再取1ml，用甲醇稀釋至50mL，配制亞油酸對(duì)照品溶液；所述的供試品溶液的制備為取心腦清軟膠囊內(nèi)容物O. 1-0. 2g，用體積比濃度為50 100%的甲醇水溶液定容至25mL后，再取1ml，稀釋至25mL，配制供試品樣品溶液；所述的色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)為碳十八烷基鍵合硅膠為填充劑，體積比75:25的乙腈水為流動(dòng)相，流速為lml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為203nm。本發(fā)明中方法中所述的待檢測(cè)復(fù)方中藥制劑優(yōu)選百多寧注射液；所述的游離脂肪酸是亞油酸、油酸、軟脂酸和硬脂酸；所述的對(duì)照品溶液的制備為精確稱取亞油酸對(duì)照品 150mg、油酸對(duì)照品480mg、軟脂酸對(duì)照品90mg和硬脂酸對(duì)照品30mg，用甲醇定容至20mL后，再取1ml，用甲醇稀釋至50mL，配制混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液；所述的供試品溶液的制備為取百多寧注射液O. 3-0. 5g，用體積比濃度為50 100 %的甲醇水溶液定容至25mL，再取Iml，稀釋至20ml，配制供試品溶液；所述的色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)是十八烷基鍵合硅膠為填充劑，體積比65:35的乙腈水為流動(dòng)相，流速為lml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為203nm。本發(fā)明中方法中所述的待檢測(cè)復(fù)方中藥制劑優(yōu)選蘇子油軟膠囊，所述的游離脂肪酸是α -亞麻酸；所述的對(duì)照品溶液的制備為精確稱取α -亞麻酸對(duì)照品lOOmg、用甲醇定容至25mL后，再取1ml，用甲醇稀釋至50mL，配制α -亞麻酸對(duì)照品溶液；所述的供試品溶液的制備為取蘇子油軟膠囊內(nèi)容物IOOmg,用甲醇定容至25mL,再取Iml,稀釋至50ml,配制供試品溶液；所述的色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)是十八烷基鍵合硅膠為填充劑，體積比90 10的乙腈水為流動(dòng)相，流速為lml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為203nm。本發(fā)明方法采用高效液相色譜法，直接測(cè)定游離脂肪酸含量，并采用低波長(zhǎng)紫外吸收檢測(cè)，克服了上述游離脂肪酸檢測(cè)方法的不足，是一種高效、可靠的游離脂肪酸測(cè)定方法。本發(fā)明方法，無(wú)需對(duì)復(fù)方中藥樣品中的游離脂肪酸進(jìn)行酯化衍生化反應(yīng)，直接采用高效液相色譜法測(cè)定游離脂肪酸。這可以剔除樣品中已經(jīng)存在的脂肪酸酯對(duì)測(cè)定的干擾。另外，采用201 205nm的紫外光進(jìn)行檢測(cè)，克服了有些脂肪酸結(jié)構(gòu)中沒(méi)有共軛雙鍵，在光譜紫外中高波長(zhǎng)區(qū)域沒(méi)有吸收的困難。本發(fā)明的實(shí)驗(yàn)研究表明，本發(fā)明的質(zhì)量檢測(cè)方法在不同復(fù)方中藥的不同游離脂肪酸檢測(cè)中，具有穩(wěn)定性好、精密度高、線性范圍寬、適用范圍寬等特點(diǎn)。綜上所述，本發(fā)明的質(zhì)量檢測(cè)方法，具有檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確、信號(hào)良好、準(zhǔn)確定量的特點(diǎn)，可用于不同復(fù)方中藥品種中游離脂肪酸的含量測(cè)定、質(zhì)量控制以及藥品的質(zhì)量檢測(cè)。
具體實(shí)施例方式下述實(shí)施例用于進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明和理解本發(fā)明，該實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明而對(duì)本發(fā)明并沒(méi)有限制。
實(shí)施例1心腦清軟膠囊中亞油酸的含量檢測(cè)實(shí)驗(yàn)試劑與儀器試劑心腦清軟膠囊(成分精制紅花油、冰片、維生素E、維生素B6.)，市售，由神威藥業(yè)有限公司生產(chǎn)；亞油酸對(duì)照品購(gòu)于SIGMA公司；乙腈(色譜純，美國(guó)Fisher公司)、甲醇(色譜純，美國(guó)Fisher公司)。儀器高效液相色譜儀(美國(guó)Agilent公司，1200型，紫外-檢測(cè)器)。色譜條件色譜柱AgilentXDB ODS色譜柱(4. 6X 250mm, 5 μ m);流動(dòng)相乙腈-水(體積比75:25);檢測(cè)波長(zhǎng)203nm ;流速lml/min ;柱溫35。。?！?br> 1、對(duì)照品溶液配制稱取亞油酸對(duì)照品180mg，精密稱定，用甲醇定容至20ml，精密吸取1ml，用甲醇稀釋至50ml,制得O. 18mg/ml的亞油酸對(duì)照品溶液。2、供試品溶液配制稱取心腦清軟膠囊內(nèi)容物140mg，精密稱定，用甲醇定容至25ml，精密吸取1ml，用甲醇稀釋至25ml，制得樣品溶液。3、儀器精密度試驗(yàn)精密吸取亞油酸對(duì)照品溶液5 μ 1，進(jìn)樣分析，連續(xù)6次，計(jì)算峰面積，RSD為O. 6%。4、標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制和線件范闈精密吸取亞油酸對(duì)照品溶液O. 5、1. 0,3. 0,5. 0,7. O、10. O μ 1，進(jìn)樣分析，以亞油酸進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線為y=1732. 9x+12. 38 (r=0. 9999),亞油酸在O. 09yg 1.8yg范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好。5、方法精密度試驗(yàn)稱取心腦清軟膠囊內(nèi)容物樣品140mg，精密稱定，平行6份，按實(shí)施例1中供試品溶液配制方法制備，各吸取5μ I進(jìn)樣分析，采用標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算亞油酸含量，計(jì)算含量的RSD為1. 0%。6、亞油酸含量測(cè)定結(jié)果分別稱取10批心腦清軟膠囊樣品，精密稱定，按實(shí)施例1中供試品溶液的制備方法制備供試品溶液，各吸取5μ I進(jìn)樣分析，采用標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算亞油酸含量，結(jié)果見(jiàn)表I。表I心腦清軟膠囊中亞油酸含量測(cè)定結(jié)果
稱樣量/mg峰面積含量/%
1134.44 1700.9 906
2179. 78 2288. 7 91. 3
3138. 17 1756.2 91.0
4135.28 1733.6 91.8
5135. 10 1660.2 88.0
權(quán)利要求
1.一種復(fù)方中藥制劑中游離脂肪酸的含量檢測(cè)方法，其特征在于它包括以下步驟 (a)對(duì)照品溶液的制備精確稱取一定量的游離脂肪酸對(duì)照品，置于容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得； (b)供試品溶液的制備稱取一定量的待檢測(cè)復(fù)方中藥制劑樣品，置于容量瓶中，加體積比濃度為50 100%的甲醇水溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得； (c)用高效液相色譜儀測(cè)定對(duì)照品溶液和供試品溶液，并采用紫外-檢測(cè)器檢測(cè)色譜信號(hào)得色譜圖；色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)為用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，體積t匕50 50 90 10的乙腈水為流動(dòng)相，流速為lml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)是201— 205nm; (d)繪制對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)待檢測(cè)復(fù)方中藥制劑樣品峰面積和標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算待檢測(cè)復(fù)方中藥樣品中游離脂肪酸的含量。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的復(fù)方中藥制劑中游離脂肪酸的含量檢測(cè)方法，其特征在于所述的游離脂肪酸為亞油酸、亞麻酸、油酸、硬脂酸或軟脂酸中的任意一種或其中兩種、兩種以上的混合物。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的復(fù)方中藥制劑中游離脂肪酸的質(zhì)量檢測(cè)方法，其特征在于所述的待檢測(cè)復(fù)方中藥制劑是心腦清軟膠囊；所述的游離脂肪酸是亞油酸；所述的對(duì)照品溶液的制備為精確稱取亞油酸對(duì)照品180mg,用甲醇定容至20mL后，再取Iml,用甲醇稀釋至50mL，配制亞油酸對(duì)照品溶液；所述的供試品溶液的制備為取心腦清軟膠囊內(nèi)容物O. 1-0. 2g，用體積比濃度為50 100%的甲醇水溶液定容至25mL后，再取1ml，稀釋至25mL，配制供試品樣品溶液；所述的色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)為碳十八烷基鍵合硅膠為填充劑，體積比75 25的乙腈水為流動(dòng)相，流速為lml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)是203nm。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的復(fù)方中藥制劑中游離脂肪酸的含量檢測(cè)方法，其特征在于所述復(fù)方中藥制劑是百多寧注射液；所述的游離脂肪酸是亞油酸、油酸、軟脂酸和硬脂酸；所述的對(duì)照品溶液的制備為精確稱取亞油酸對(duì)照品150mg、油酸對(duì)照品480mg、軟脂酸對(duì)照品90mg和硬脂酸對(duì)照品30mg,用甲醇定容至20mL后，再取Iml,用甲醇稀釋至50mL,配制混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液；所述的供試品溶液的制備為取百多寧注射液O. 4g，用50 10體積比濃度為50 100%的甲醇水溶液定容至25mL，再取1ml，稀釋至20ml，配制供試品溶液；所述的色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)為十八烷基鍵合硅膠為填充劑，體積比65 35的乙腈水為流動(dòng)相，流速為lml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)是203nm。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的復(fù)方中藥制劑中游離脂肪酸的含量檢測(cè)方法，其特征在于所述復(fù)方中藥制劑是蘇子油軟膠囊；所述的游離脂肪酸是α -亞麻酸；所述的對(duì)照品溶液的制備為精確稱取α-亞麻酸對(duì)照品lOOmg、用甲醇定容至25mL后,再取Iml,用甲醇稀釋至50mL，配制α-亞麻酸對(duì)照品溶液；所述的供試品溶液的制備為取蘇子油軟膠囊內(nèi)容物IOOmg,用甲醇定容至25mL,再取Iml,稀釋至50ml,配制供試品溶液；所述的色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)是十八烷基鍵合硅膠為填充劑，體積比90 10的乙腈水為流動(dòng)相，流速為lml/min,檢測(cè)波長(zhǎng)是203nm。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種復(fù)方中藥中游離脂肪酸含量的檢測(cè)方法，該方法用高效液相色譜法測(cè)定復(fù)方中藥中游離脂肪酸含量，并采用紫外檢測(cè)器檢測(cè)色譜信號(hào)。更進(jìn)一步地，本發(fā)明涉及一種復(fù)方中藥中亞油酸、亞麻酸、棕櫚油酸、油酸、棕櫚酸、硬脂酸或軟脂酸中的任意一種或者一種以上的質(zhì)量檢測(cè)方法。本發(fā)明所述方法具有穩(wěn)定性好、精密度高、線性范圍寬、適用范圍寬等特點(diǎn)。
文檔編號(hào)G01N30/02GK103018363SQ20121051943
公開(kāi)日2013年4月3日 申請(qǐng)日期2012年12月6日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月6日
發(fā)明者劉軍鋒, 高鈞, 韓紅梅, 姜海, 胡雪嬌 申請(qǐng)人:神威藥業(yè)集團(tuán)有限公司