專利名稱：一種卷煙濾嘴中苯并[a]芘含量的測定方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于卷煙濾嘴樣本的理化檢驗(yàn)技術(shù)領(lǐng)域，主要涉及卷煙濾嘴樣本的多環(huán)芳烴類化合物測定技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及ー種采用液相色譜-光電電離-串聯(lián)質(zhì)譜儀(LC-APP1-MS/MS)測定卷煙濾嘴中苯并[a]芘含量的方法。
背景技術(shù)：
自1933年J.Cook首次從煤焦油中分離到苯并芘并誘發(fā)小鼠皮膚癌以來，苯并[a]芘作為確定的人類致癌物受到科研工作者的廣泛關(guān)注。腫瘤流行病學(xué)調(diào)查及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)苯并[a]芘具有較強(qiáng)致癌性，它與腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)，尤其與人類肺癌的發(fā)生高度相關(guān)。苯并[a]芘也存在于卷煙煙氣和抽吸過的卷煙濾嘴中,檢測抽吸過的卷煙濾嘴中的含量水平可以間接評估吸煙者感受苯并芘的量，對于吸煙危害性評價(jià)具有較為重要的意義。到目前為止，已有研究者建立了高效液相色譜-熒光檢測法(HPLC-FL)檢測卷煙濾嘴中的苯并[a]芘的方法，但方法前處理比較復(fù)雜，包括液液萃取、固相萃取，且ー個(gè)樣需要20個(gè)濾嘴。氣相色譜質(zhì)譜法(GC/MS)也被應(yīng)用于測定苯并[a]芘化合物。研究報(bào)道采用GC/MS測定了主流煙氣中痕量苯并[a]芘的方法，此方法的分離效果及色譜重現(xiàn)性好。但是，GC/MS法的前處理選用了固相萃取和濃縮過程，使得其較為復(fù)雜費(fèi)吋。近年來，液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(LC-MS/MS)被廣泛應(yīng)用于新藥的發(fā)現(xiàn)與開發(fā)。液相色譜配備三級四級桿串聯(lián)質(zhì)譜被廣泛應(yīng)用于復(fù)雜生物基質(zhì)中低含量化合物的定量檢測，并且此方法一般具有較高選擇性和較短的分析時(shí)間。由于LCMS/MS配制的離子源一般為電噴霧電離和大氣壓化學(xué)電離離子源，這些離子源對于大分子有機(jī)化合物具有較好的電離效果，而對于多環(huán)芳烴類化合物的電離效果較差，因此限制了其在此領(lǐng)域的應(yīng)用。大氣壓光電離離子源(APPI)是ー個(gè)新的電離方法，使用紫外線對樣品進(jìn)行電離，適合于低極性化合物的高靈敏度電離方法，尤其是在引入摻雜劑后可以較好的提高苯并[a]芘的檢測靈敏度。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種采用液相色譜-大氣壓光電離-串聯(lián)質(zhì)譜儀(LC-APP1-MS/MS)方法測定卷煙濾嘴中苯并[a]芘含量的方法。本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)的:卷煙濾嘴中苯并[a]芘含量的測定方法，包括以下エ藝步驟:(I)樣品的采集:收集抽吸卷煙后的濾嘴，去除煙絲殘存部分，置于棕色儲(chǔ)液瓶中低溫冷凍保存；(2)樣品的前處理:取ー個(gè)濾嘴，剝?nèi)グb紙和膠以后，放入25mL三角瓶中，カロ入200 ii L的I u g/mL的苯并[a]花_dl2,再加入9.8mLこ腈,振蕩萃取IOmin0萃取液經(jīng)
0.22 um聚醚砜有機(jī)相濾膜過濾，收集濾液待LC-MS/MS分離分析；(3)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的配制:分別稱取10.0mg苯并[a]芘和苯并[a]芘_(tái)dl2于兩個(gè)IOmL容量瓶中，用こ腈定容至刻度，搖勻，得到l.0mg/mL的苯并[a]芘和苯并[a]芘_(tái)dl2的一級儲(chǔ)備液；分別移取IOOii L的苯并[a]芘和苯并[a]芘_(tái)dl2的ー級儲(chǔ)備液于IOOmL的容量瓶，こ腈定容至刻度，得到1.0y g/mL的苯并[a]芘和苯并[a]芘_(tái)dl2的ニ級儲(chǔ)備液，放入-20° C冰箱備用。用ニ級儲(chǔ)備液配制0.5,1,2, 5，10，20和40ng/mL標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。(4) LC-MS/MS測定:吸取配制好的不同濃度的苯并[a]芘的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，注入LC-MS/MS系統(tǒng)，測得其標(biāo)準(zhǔn)品峰面積和內(nèi)標(biāo)峰面積的比值與目標(biāo)物濃度關(guān)系的一元線性回歸方程Y=0.199X+0.0079，相關(guān)系數(shù)> 0.999，其中Y代表分析物與內(nèi)標(biāo)物峰面積的比值，X表示樣品待測液中目標(biāo)分析物的濃度，接著對振蕩萃取和過濾之后的樣品待測液進(jìn)行測定，根據(jù)分析物峰面積和內(nèi)標(biāo)物峰面積的比值，代入一元線性回歸方程，求得樣品待測液中的苯并[a]芘含量。其中，LC-MS/MS測定條件如下所述:色譜條件:Dionex Acclaiml20C18色譜柱(150mmX3mm 1.d.X 3 y md.f.);流動(dòng)相A為こ腈溶液，流動(dòng)相B為超純水；柱溫40 ° C;進(jìn)樣量5 uし摻雜劑:甲苯，流速為100 u L/min ;洗脫條件:95%A和5%B等度洗脫，流速為550 u L/min ;分析時(shí)間為8min。質(zhì)譜條件:大氣壓光電離離子源(APPI)，正離子掃描，多反應(yīng)監(jiān)測；光電離電壓:700V,霧化氣壓カ:75psi,氣簾氣壓カ:15psi,輔助加熱氣壓力:50psi,溫度:600° C，射入電壓:10V,碰撞能:9eV ;去簇電壓:110V，駐留時(shí)間:50ms。內(nèi)標(biāo)苯并芘離子對:263.1-265.2，苯并芘定性離子對:251.1-253.2，定量離子對:252.1-253.2。整個(gè)分析過程由 Applied Biosystems Analyst versionl.5.1 軟件來控制。本發(fā)明方法的線性范圍和檢出限:采用こ腈稀釋標(biāo)準(zhǔn)品，得到7個(gè)不同濃度(0.5,1,2, 5，10，20和40ng/mL)的標(biāo)準(zhǔn)溶液，然后經(jīng)LC-MS/MS進(jìn)行回歸分析，標(biāo)準(zhǔn)曲線線性良好，相關(guān)系數(shù)為0.9991。利用標(biāo)準(zhǔn)溶液逐級稀釋的方法測試定量限和檢出限，目標(biāo)峰10倍信噪比對應(yīng)的濃度為定量限，3倍信噪比對應(yīng)的濃度為檢出限。濾嘴中苯并芘的定量限和檢出限分別為0.214ng/mL和0.064ng/
mLo(4)本發(fā)明方法加標(biāo)回收率和重復(fù)性:在不含苯并芘的空白卷煙濾嘴中加入不同濃度標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，然后由LC-MS/MS測定加標(biāo)回收率。選取三個(gè)添加水平，每個(gè)添加水平重復(fù)測定5次，得到的加標(biāo)回收率和重復(fù)性，結(jié)果見表I。表I苯并[a]芘的加標(biāo)回收率和重復(fù)性
權(quán)利要求
1.一種卷煙濾嘴中苯并[a]芘含量的測定方法，其特征在于:包括以下步驟: (1)樣品的采集:留取抽吸卷煙后的濾嘴，低溫(-80°C)冷凍保存； (2)樣品前處理:取ー個(gè)濾嘴，剝?nèi)グb紙和膠以后，放入三角瓶中，依次加入氘代內(nèi)標(biāo)苯并芘-dl2和こ臆，振蕩萃取，萃取液經(jīng)有機(jī)相濾膜過濾，收集濾液待測； (3)標(biāo)準(zhǔn)工作液的配制:用こ腈配制不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液； (4)液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜LC-MS/MS測定:吸取配制好的不同濃度的苯并[a]芘標(biāo)準(zhǔn)エ作溶液，注入LC-MS/MS系統(tǒng)，求得其標(biāo)準(zhǔn)品峰面積和內(nèi)標(biāo)峰面積的比值與目標(biāo)物濃度關(guān)系的一元線性回歸方程；接著對樣品待測液進(jìn)行測定，根據(jù)分析物與內(nèi)標(biāo)物峰面積的比值，求得樣品待測液中分析物的含量。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的ー種卷煙濾嘴中苯并[a]芘含量的測定方法，其特征在于:步驟(2)依次加入的氘代內(nèi)標(biāo)苯并[a]芘-dl2和こ腈的體積分別為200 y L和9.8mL，其中氘代內(nèi)標(biāo)濃度為I U g/mL。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的ー種卷煙濾嘴中苯并[a]芘含量的測定方法，其特征在于:步驟(2)中的有機(jī)相濾膜為0.22 m聚醚砜有機(jī)相濾膜。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的ー種卷煙濾嘴中苯并[a]芘含量的測定方法，其特征在于:步驟(4)選取了 Dionex Acclaiml20C18 色譜柱(150mmX 3mm 1.d.X 3 u md.f.),流動(dòng)相 A 為こ腈，流動(dòng)相B為超純水,分析時(shí)間為8min,進(jìn)樣量為し
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的ー種卷煙濾嘴中苯并[a]芘含量的測定方法，其特征在于:步驟(4)在流動(dòng)相流入質(zhì)譜前引入摻雜劑甲苯(或氯苯)；選取的洗脫條件:95%流動(dòng)相A和5%的流動(dòng)相B等度洗脫，流動(dòng)相流速為550 u L/min。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的ー種卷煙濾嘴中苯并[a]芘含量的測定方法，其特征在于:串聯(lián)質(zhì)譜檢測器的條件:大氣壓光電離離子源APPI，正離子掃描，多反應(yīng)監(jiān)測；光電離電壓為700V，霧化氣壓カ為75psi，氣簾氣壓カ為15psi，輔助加熱氣壓カ為50psi，離子源溫度為600。C，射入電壓:10V,碰撞能:9eV ;去簇電壓:110V，駐留時(shí)間:50ms。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種卷煙濾嘴中苯并[a]芘含量的測定方法，包括樣品的采集，前處理，標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的配制，液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀(LC-MS/MS)測定分析,使用大氣壓光電離離子源對樣品進(jìn)行電離，該方法能快速、準(zhǔn)確檢測卷煙濾嘴中苯并[a]芘的含量，測定結(jié)果準(zhǔn)確，干擾少。
文檔編號(hào)G01N30/88GK103091438SQ201210519498
公開日2013年5月8日 申請日期2012年12月6日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月6日
發(fā)明者侯宏衛(wèi), 胡清源, 張小濤, 熊巍, 陳歡, 劉彤, 韓書磊, 姜興益, 李中皓, 邊照陽, 張洪非, 龐永強(qiáng), 唐綱嶺 申請人:國家煙草質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心