治療腸道病毒感染的組分和聯(lián)合用藥方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001 ]本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，具體地說，本發(fā)明涉及一種治療腸道病毒感染的組分 和聯(lián)合用藥方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 腸道病毒是帶有單股正鏈RNA的微小核糖核酸病毒科病毒，目前共發(fā)現(xiàn)上百種血 清型。多數(shù)腸道病毒感染并不引起嚴(yán)重的癥狀或僅僅引起較輕微的疾病，但在兒童和免疫 缺陷人群中通常造成嚴(yán)重后果 [1]。腸道病毒屬中的腸道病毒71型(EV71)和柯薩奇病毒A16 (CVA16)是引起亞太地區(qū)嬰幼兒手足口病的主要病原體 [2]。手足口病的癥狀通常較輕微如 發(fā)熱、咽痛、腹瀉、局部出疹等，但也有些病人會(huì)發(fā)展成中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)疾病，如無菌性 腦膜炎、致死性腦炎甚至死亡 [34]。而EV71是引起重癥手足口病的主要病原體[6]。迄今為止 尚無有效針對(duì)腸道病毒感染的藥物治療手段，現(xiàn)有的治療手段僅限于支持性護(hù)理、靜脈注 射免疫球蛋白或利巴韋林 [5'7]，因此尋找抗病毒藥物迫在眉睫。腸道病毒使用病毒自身的 RNA依賴性RNA聚合酶合成基因組，所以在RNA復(fù)制過程中，子代RNA很容易發(fā)生突變。
[0003] 因此，為了有效地預(yù)防或治療腸道病毒感染，本領(lǐng)域迫切需要開發(fā)新型的預(yù)防和/ 或治療腸道病毒感染的技術(shù)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于提供一種治療腸道病毒感染的組分和聯(lián)合用藥方法。
[0005] 本發(fā)明的第一方面，提供了一種抑制腸道病毒組合物，所述組合物包括第一活性 成分和第二活性成分，
[0006] 其中，所述第一活性成分為腸道病毒(如，EV71)的3C蛋白抑制劑；
[0007] 所述第二活性成分選自下組：
[0008] 腸道病毒(如，EV71)的3A蛋白抑制劑;和 [0009]腸道病毒(如，EV71)的3D蛋白抑制劑。
[0010] 在另一優(yōu)選例中，所述第一活性成分包括蘆平曲韋、其類似物、或其藥學(xué)上可接受 鹽；
[0011] 所述第二活性成分選自下組:伊曲康唑、其類似物、或其藥學(xué)上可接受鹽;和法匹 拉韋、其類似物、或其藥學(xué)上可接受鹽。
[0012] 在另一優(yōu)選例中，所述蘆平曲韋的類似物包括對(duì)腸道病毒的作用靶點(diǎn)與蘆平曲韋 相同的物質(zhì)（如:AG7404)。
[0013] 在另一優(yōu)選例中，所述伊曲康唑的類似物包括對(duì)腸道病毒的作用靶點(diǎn)與伊曲康唑 相同的物質(zhì)。
[0014] 在另一優(yōu)選例中，所述腸道病毒選自下組:腸道病毒71型(EV71)、柯薩奇病毒A16 (CVA16)、CVB3型、PVl型或EV68型，以及鼻病毒。
[0015] 在另一優(yōu)選例中，所述第一活性成分和第二活性成分的摩爾比約為1~20:10~ 100,優(yōu)選地為1~10:1〇~100,更更優(yōu)選地為1~5:10~100。
[0016] 在另一優(yōu)選例中，所述第一活性成分具有腸道病毒(如，EV71)的3C蛋白抑制活性。
[0017] 在另一優(yōu)選例中，所述第二活性成分具有腸道病毒(如，EV71)的3A蛋白抑制活性； 和/或3D蛋白抑制活性。在本發(fā)明中，伊曲康唑具有3A蛋白抑制活性，法匹拉韋具有3D蛋白 抑制活性。
[0018] 在另一優(yōu)選例中，所述組合物中還包括藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑。
[0019] 在另一優(yōu)選例中，所述藥物組合物的劑型包括片劑、顆粒劑、膠囊、丸劑、注射劑、 或口服液。
[0020] 在另一優(yōu)選例中，所述的組合物為單元?jiǎng)┬?，每個(gè)單元?jiǎng)┬椭兴龅谝换钚猿煞?和所述第二活性成分的含量約為日劑量的0.1至1(或0.25-1，或0.5-1)，其中所述日劑量為 20-100mg〇
[0021 ] 在另一優(yōu)選例中，所述的日劑量為25-70mg，如25mg、40mg、50mg。
[0022] 本發(fā)明的第二方面，提供了如本發(fā)明第一方面所述的抑制腸道病毒組合物的用 途，用于制備預(yù)防和/或治療腸道病毒感染的藥物。
[0023] 本發(fā)明的第三方面，提供了一種預(yù)防和/或治療腸道病毒感染的方法，所述方法包 括步驟：
[0024] 給需要的對(duì)象施用本發(fā)明第一方面所述的抑制腸道病毒組合物，從而抑制所述對(duì) 象體內(nèi)的腸道病毒。
[0025] 在另一優(yōu)選例中，所述的對(duì)象包括人和非人哺乳動(dòng)物(如嚙齒動(dòng)物）。
[0026] 在另一優(yōu)選例中，所述的施用的用量為10-100mg/kg體重，較佳地15-70mg/kg體 重，更佳地10_50mg/kg體重，以所述第一活性成分的重量計(jì)。
[0027]應(yīng)理解，在本發(fā)明范圍內(nèi)中，本發(fā)明的上述各技術(shù)特征和在下文(如實(shí)施例）中具 體描述的各技術(shù)特征之間都可以互相組合，從而構(gòu)成新的或優(yōu)選的技術(shù)方案。限于篇幅，在 此不再一一累述。
【附圖說明】
[0028]圖1.伊曲康唑、蘆平曲韋、法匹拉韋、蘇拉明和GW5074抑制EV71的感染，顯示了各 化合物對(duì)EV71的抑制效果及對(duì)細(xì)胞的毒性作用。
[0029] 圖2顯示了不同濃度的各化合物對(duì)病毒滴度的影響。
[0030] 圖3.不同藥物組合在治療EV71感染中的相互作用效果。
[0031] 圖4.伊曲康唑和蘆平曲韋聯(lián)合用藥可以協(xié)同抑制EV71效價(jià)。
【具體實(shí)施方式】
[0032] 本發(fā)明人通過廣泛而深入的研究，首次意外地發(fā)現(xiàn)了一種抑制腸道病毒組合物， 所述組合物中以蘆平曲韋為第一活性成分，以伊曲康唑和/或法匹拉韋為第二活性成分，實(shí) 驗(yàn)結(jié)果表明，此藥物組合具有顯著的協(xié)同作用，而且在被測(cè)濃度組合下均未發(fā)現(xiàn)增強(qiáng)的細(xì) 胞毒性。
[0033] 本發(fā)明公開了能夠有效抑制腸道病毒感染的聯(lián)合用藥方法。針對(duì)腸道病毒的抑制 活性，本發(fā)明人經(jīng)過大量的測(cè)試意外的發(fā)現(xiàn)蘆平曲韋和伊曲康唑、蘆平曲韋和法匹拉韋表 現(xiàn)出顯著地協(xié)同作用。而且上述藥物組合，在被測(cè)濃度組合下均未發(fā)現(xiàn)增強(qiáng)的細(xì)胞毒性。蘆 平曲韋和伊曲康唑組合能夠阻止耐藥病毒的產(chǎn)生。
[0034] 在描述本發(fā)明之前，應(yīng)當(dāng)理解本發(fā)明不限于所述的具體方法和實(shí)驗(yàn)條件，因?yàn)檫@ 類方法和條件可以變動(dòng)。還應(yīng)當(dāng)理解本文所用的術(shù)語其目的僅在于描述具體實(shí)施方案，并 且不意圖是限制性的，本發(fā)明的范圍將僅由所附的權(quán)利要求書限制。
[0035] 除非另外定義，否則本文中所用的全部技術(shù)與科學(xué)術(shù)語均具有如本發(fā)明所屬領(lǐng)域 的普通技術(shù)人員通常理解的相同含義。如本文所用，在提到具體列舉的數(shù)值中使用時(shí)，術(shù)語 "約"意指該值可以從列舉的值變動(dòng)不多于1%。例如，如本文所用，表述"約1〇〇"包括99和 101和之間的全部值(例如，99.1、99.2、99.3、99.4等）。
[0036] 雖然在本發(fā)明的實(shí)施或測(cè)試中可以使用與本發(fā)明中所述相似或等價(jià)的任何方法 和材料，本文在此處例舉優(yōu)選的方法和材料。
[0037]蘆平曲韋及其類似物
[0038]蘆平曲韋（rupintrivir)最初用于治療鼻病毒感染，研究表明它主要通過抑制 EV71的3C蛋白從而抑制病毒復(fù)制[8_9]。
[0039]在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選地實(shí)施方式中，根據(jù)本發(fā)明的蘆平曲韋的類似物AG7404具有 如下結(jié)構(gòu)：
[0040]
[0041]在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選地實(shí)施方式中，根據(jù)本發(fā)明的蘆平曲韋的類似物包括對(duì)腸道 病毒的作用靶點(diǎn)與蘆平曲韋相同的物質(zhì)(如:AG7404)。
[0042]伊曲康唑及其類似物
[0043]伊曲康唑（itraconazole)是一種口服的三唑類廣譜抗真菌劑，能夠抑制曲霉菌和 白色念珠菌[1(W1]，也能有效治療兒童的霉菌感染[12_13]，它也是一種最近被報(bào)道的腸道病毒 廣譜抑制劑，通過作用于病毒的3A蛋白和宿主的氧化固醇結(jié)合蛋白抑制病毒生命周 期[14-15]。
[0044] 在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選地實(shí)施方式中，根據(jù)本發(fā)明的伊曲康唑的類似物包括對(duì)腸道 病毒的作用靶點(diǎn)與伊曲康唑相同的物質(zhì)。
[0045] 法匹拉韋及其類似物
[0046] 法匹拉韋(favipiravir)是一種具有廣譜抗病毒活性的RdRP抑制劑[2()]。經(jīng)過深入 的研究本發(fā)明人意外地發(fā)現(xiàn)法匹拉韋能夠在體外抑制EV71復(fù)制，機(jī)制研究發(fā)現(xiàn)其作用位點(diǎn) 位于EV71的3D蛋白。
[0047]在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選地實(shí)施方式中，根據(jù)本發(fā)明的法匹拉韋的類似物包括對(duì)腸道 病毒的作用靶點(diǎn)與法匹拉韋相同的物質(zhì)。
[0048]蘇拉明及其類似物
[0049] 蘇拉明（suramin)在臨床上用于治療錐體蟲病，它能夠與EV71的衣殼蛋白作用從 而抑制病毒吸附進(jìn)入細(xì)胞[16_ 17]。
[0050] 在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選地實(shí)施方式中，根據(jù)本發(fā)明的蘇拉明的類似物選自下組：
[0051]
[0052]
[0053] 在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選地實(shí)施方式中，根據(jù)本發(fā)明的蘇拉明的類似物包括對(duì)腸道病 毒的作用靶點(diǎn)與蘇拉明相同的物質(zhì)（如:NF449、NF110、NM16)。
[0054] GW5074及其類似物
[0055] GW5074是Raf信號(hào)通路激酶抑制劑，對(duì)腸道病毒復(fù)制具有抑制作用，但并不作用于 該細(xì)胞通路，它通過作用于脊髓灰質(zhì)炎病毒的3A蛋白發(fā)揮抗病毒活性[18_19]。
[0056]本申請(qǐng)所涉及的化合物的結(jié)構(gòu)式如下：1為伊曲康唑，2為蘆平曲韋，3法匹拉韋，4 為GW5074,5為蘇拉明。
[0057:
[0058] 在聯(lián)合用藥療法中，伊曲康唑和蘆平曲韋，蘇拉明和法匹拉韋表現(xiàn)出顯著的強(qiáng)協(xié) 同作用，且在被測(cè)濃度下沒有檢測(cè)到明顯增強(qiáng)的細(xì)胞毒性;蘆平曲韋和法匹拉韋表現(xiàn)出弱 協(xié)同作用；蘆平曲韋和蘇拉明表現(xiàn)出疊加作用；而伊曲康唑和蘇拉明，伊曲康唑和法匹拉 韋，GW5074和伊曲康唑表現(xiàn)出強(qiáng)拮抗作用。
[0059] 組合物
[0060] 如本文所用，術(shù)語"組合物"包括藥物組合物。
[0061] 發(fā)明第一方面所述的組合物包含抑制腸道病毒的活性成分，和藥學(xué)上可接受的載 體。抑制腸道病毒的活性成分包括第一活性成分和第二活性成分，其中，所述第一活性成分 包括蘆平曲韋、其類似物、或其藥學(xué)上可接受鹽;而第二活性成分選自下組:伊曲康唑、其類 似物、或其藥學(xué)上可接受鹽;和法匹拉韋、其類似物、或其藥學(xué)上可接受鹽。
[0062] 本發(fā)明的藥物組合物還可以包含各種與所含化合物或組合物相適應(yīng)的藥物輔料， 并通過常規(guī)方法制備成有利于給藥的劑型，如:但不僅限于水溶液注射劑、粉針劑、丸劑、散 劑、片劑、貼劑、栓劑、乳劑、霜?jiǎng)?、凝膠劑、顆粒劑、膠囊劑、氣霧劑、噴霧劑、粉霧劑、緩釋劑 和控釋劑等。所述藥用輔料既可以是各種制劑中常規(guī)