28]在要將作為蛋白質(zhì)200的抗CD3抗體固相化的情況下，抗CD3抗體的固相化濃度優(yōu)選設(shè)為10?300ng/cm2。這是因?yàn)椋羰箍笴D3抗體的固相化濃度為lOng/cm2以上，則能夠有效地使淋巴細(xì)胞活化，然后能夠高效地使淋巴細(xì)胞增殖。另一方面，若抗CD3抗體的固相化濃度大于300ng/cm2，則抗⑶3抗體漂浮在培養(yǎng)袋100內(nèi)的培養(yǎng)液中，有時(shí)對(duì)淋巴細(xì)胞造成過量的刺激，因此不優(yōu)選。
[0129]作為本實(shí)施方式中的溶解蛋白質(zhì)的液滴，沒有特別限定，但可以適當(dāng)?shù)厥褂昧姿峋彌_液。
[0130]另外，本實(shí)施方式中的溶解有蛋白質(zhì)的液滴的大小(液滴量)優(yōu)選設(shè)為Icc?20cc。這是因?yàn)椋?dāng)液滴在培養(yǎng)袋100的內(nèi)表面移動(dòng)時(shí)，在液滴與內(nèi)表面之間產(chǎn)生摩擦力，因此若液滴的大小過小，則無法適宜地進(jìn)行移動(dòng)。另外，若液滴過大，則液滴中的蛋白質(zhì)濃度降低，并且液滴的每單位體積的氣液界面的面積減少，因此吸附效率降低。從這樣的觀點(diǎn)出發(fā)，更優(yōu)選將液滴的大小設(shè)為Icc?1cc，進(jìn)一步優(yōu)選設(shè)為Icc?5cc，更進(jìn)一步優(yōu)選設(shè)為2cc左右。
[0131]本實(shí)施方式中，作為封入到培養(yǎng)袋100的氣體，沒有特別限定，但優(yōu)選設(shè)為不活潑氣體，可以使用空氣、氮?dú)獾?。例如可以利用氣體供給裝置經(jīng)由管130將這樣的氣體注入到培養(yǎng)容器100。
[0132]另外，封入到培養(yǎng)袋100的氣體的量更優(yōu)選設(shè)為每Icm2的培養(yǎng)袋100內(nèi)的底面積為
0.1?4ml，進(jìn)一步優(yōu)選設(shè)為I?3ml。若使所封入的氣體的量為這樣的范圍，則能夠防止培養(yǎng)袋100的內(nèi)表面中相對(duì)的容器壁發(fā)生接觸，因此能夠使溶解有蛋白質(zhì)200的液滴在培養(yǎng)袋100內(nèi)高效地移動(dòng)。
[0133]培養(yǎng)袋100例如可以如下所述地進(jìn)行制造。
[0134]首先，使用塑料擠出成形裝置將低密度聚乙烯擠出成形，形成膜。然后，使用脈沖熱封機(jī)由該膜制造培養(yǎng)袋100。如圖10所示，培養(yǎng)袋100以裝有管130的方式進(jìn)行制造。
[0135]然后，將培養(yǎng)袋100載置于裝載臺(tái)，封入規(guī)定量的氣體，并且接著封入溶解有蛋白質(zhì)200的緩沖液。然后，通過搖動(dòng)培養(yǎng)袋100等方式，使緩沖液的液滴在培養(yǎng)袋100內(nèi)的底面上移動(dòng)。由此，可以使緩沖液中含有的蛋白質(zhì)200附著到培養(yǎng)袋100內(nèi)的底面上，得到固相化有蛋白質(zhì)200的培養(yǎng)袋100。
[0136][固相化裝置]
[0137]然后，參照?qǐng)D11?圖15對(duì)能夠在本實(shí)施方式的培養(yǎng)容器的制造方法中適當(dāng)?shù)厥褂玫谋緦?shí)施方式的固相化裝置、和該固相化裝置中使用的保持構(gòu)件進(jìn)行說明。圖11示出固相化裝置的俯視圖，圖12示出其主視圖。圖13示出利用固相化裝置的固相化的樣子。圖14示出保持單元的主視圖和側(cè)視圖，圖15示出保持單元的使用形態(tài)。
[0138]圖11中，下側(cè)示出固相化裝置300的正面?zhèn)?，上?cè)示出固相化裝置300的背面?zhèn)龋髠?cè)示出固相化裝置300的左側(cè)，右側(cè)示出固相化裝置300的右側(cè)。另外，該圖中，將左右方向(后述的裝載臺(tái)的長(zhǎng)邊方向)設(shè)為X軸方向，將上下方向(同裝載臺(tái)的短邊方向)設(shè)為Y軸方向。
[0139]固相化裝置300具備X軸方向移動(dòng)用支承臺(tái)310、和Y軸方向移動(dòng)用支承臺(tái)360。培養(yǎng)袋100中封入溶解有蛋白質(zhì)的液滴和規(guī)定量的氣體后載置于Y軸方向移動(dòng)用支承臺(tái)360。這些X軸方向移動(dòng)用支承臺(tái)310與Y軸方向移動(dòng)用支承臺(tái)360—體地進(jìn)行運(yùn)動(dòng)。以下，有時(shí)將X軸方向移動(dòng)用支承臺(tái)310和Y軸方向移動(dòng)用支承臺(tái)360總稱為裝載臺(tái)。
[0140]X軸方向移動(dòng)用支承臺(tái)310通過固定于基臺(tái)400而立設(shè)的二個(gè)支承柱320在長(zhǎng)邊方向的中央在正面?zhèn)群捅趁鎮(zhèn)冗@兩側(cè)得到支承。
[0141]另外，X軸方向移動(dòng)用支承臺(tái)310經(jīng)由X軸方向移動(dòng)用齒輪箱340與X軸方向移動(dòng)用伺服電動(dòng)機(jī)330(長(zhǎng)邊方向移動(dòng)用驅(qū)動(dòng)單元)連接。
[0142]通過驅(qū)動(dòng)該X軸方向移動(dòng)用伺服電動(dòng)機(jī)330，由此X軸方向移動(dòng)用支承臺(tái)310能夠以Y軸方向?yàn)橹行妮S左轉(zhuǎn)和右轉(zhuǎn)交替地進(jìn)行旋轉(zhuǎn)運(yùn)動(dòng)。由此，X軸方向移動(dòng)用支承臺(tái)310可以左右地進(jìn)行所謂的蹺蹺板運(yùn)動(dòng)。
[0143]因此，載置于裝載臺(tái)的培養(yǎng)袋100內(nèi)的溶解有蛋白質(zhì)的液滴可以在培養(yǎng)袋100內(nèi)從左端至右端左右地進(jìn)行往復(fù)運(yùn)動(dòng)。
[0144]此時(shí)，X軸方向移動(dòng)用支承臺(tái)310的旋轉(zhuǎn)運(yùn)動(dòng)的角度相對(duì)于水平方向可以設(shè)為例如-10°?+ 10°的范圍。此外，圖11、12中，將左側(cè)變高時(shí)稱作負(fù)(_)，將右側(cè)變高時(shí)稱作正(+ )。
[0145]另外，X軸方向移動(dòng)用支承臺(tái)310的旋轉(zhuǎn)運(yùn)動(dòng)的速度可以設(shè)為如下的速度:使培養(yǎng)袋100內(nèi)的溶解有蛋白質(zhì)的液滴例如以5m/分鐘?15m/分鐘的速度在培養(yǎng)袋100內(nèi)進(jìn)行移動(dòng)的速度。
[0146]Y軸原點(diǎn)限度檢測(cè)傳感器350用于檢測(cè)Y軸的原點(diǎn)和限度。
[0147]Y軸方向移動(dòng)用支承臺(tái)360通過立設(shè)于X軸方向移動(dòng)用支承臺(tái)310的左右端部的二個(gè)支承部在短邊方向的中央在左側(cè)和右側(cè)這兩側(cè)受到支承。
[0148]另外，Y軸方向移動(dòng)用支承臺(tái)360經(jīng)由Y軸方向移動(dòng)用齒輪箱380與Y軸方向移動(dòng)用伺服電動(dòng)機(jī)370(短邊方向移動(dòng)用驅(qū)動(dòng)單元)連接。
[0149]通過驅(qū)動(dòng)該Y軸方向移動(dòng)用伺服電動(dòng)機(jī)370，由此Y軸方向移動(dòng)用支承臺(tái)360能夠與X軸方向移動(dòng)用支承臺(tái)310—起以X軸方向?yàn)橹行妮S左轉(zhuǎn)和右轉(zhuǎn)交替地進(jìn)行旋轉(zhuǎn)運(yùn)動(dòng)。由此，裝載臺(tái)可以左右地(圖11中為上下地)進(jìn)行所謂的蹺蹺板運(yùn)動(dòng)。
[0150]因此，載置于裝載臺(tái)的培養(yǎng)袋100內(nèi)的溶解有蛋白質(zhì)的液滴可以在培養(yǎng)袋100內(nèi)從下端至上端地進(jìn)行移動(dòng)。
[0151]此時(shí)，Y軸方向移動(dòng)用支承臺(tái)360的旋轉(zhuǎn)運(yùn)動(dòng)的角度相對(duì)于水平方向可以設(shè)為例如-50°?+50°的范圍。此外，圖11中，將正面?zhèn)茸兏邥r(shí)稱作負(fù)(_)，將背面?zhèn)茸兏邥r(shí)稱作正(+ )。
[0152]另外，期望液滴沿Y軸方向的移動(dòng)每次以液滴的大小以下的距離進(jìn)行。通過這樣地使液滴在Y軸方向上移動(dòng)、并且在X軸方向上在培養(yǎng)袋100內(nèi)從左端至右端地移動(dòng)，由此能夠使液滴移動(dòng)到培養(yǎng)袋100內(nèi)的整個(gè)底面，能夠使液滴中含有的蛋白質(zhì)高效地吸附到培養(yǎng)袋100。
[0153]X軸原點(diǎn)限度檢測(cè)傳感器390用于檢測(cè)X軸的原點(diǎn)和限度。
[0154]然后，對(duì)使用了本實(shí)施方式的固相化裝置300的培養(yǎng)袋100的制造方法進(jìn)行說明。
[0155]首先，將培養(yǎng)袋100載置于裝載臺(tái)后封入規(guī)定量的空氣，接著注入溶解有蛋白質(zhì)的液滴。然后，驅(qū)動(dòng)Y軸方向移動(dòng)用伺服電動(dòng)機(jī)370，如圖13所示，以X軸方向?yàn)橹行妮S使裝載臺(tái)向正面?zhèn)刃D(zhuǎn)移動(dòng)，使液滴移動(dòng)到培養(yǎng)袋100內(nèi)的正面?zhèn)榷瞬俊?br>[0156]然后，驅(qū)動(dòng)X軸方向移動(dòng)用伺服電動(dòng)機(jī)330，以Y軸方向?yàn)橹行妮S，使裝載臺(tái)左右地旋轉(zhuǎn)運(yùn)動(dòng)，從而使液滴在培養(yǎng)袋100內(nèi)在左端與右端之間左右地移動(dòng)。
[0157]然后，驅(qū)動(dòng)Y軸方向移動(dòng)用伺服電動(dòng)機(jī)370，使裝載臺(tái)向背面?zhèn)壬晕⑿D(zhuǎn)移動(dòng)，使液滴向背面?zhèn)壬陨砸苿?dòng)，然后，再次驅(qū)動(dòng)X軸方向移動(dòng)用伺服電動(dòng)機(jī)330，使裝載臺(tái)左右地旋轉(zhuǎn)運(yùn)動(dòng)，從而使液滴在培養(yǎng)袋100內(nèi)在左端與右端之間左右地移動(dòng)。重復(fù)進(jìn)行以上的動(dòng)作，直至液滴移動(dòng)到培養(yǎng)袋100內(nèi)的背面?zhèn)榷瞬浚瑥亩谧蠖伺c右端之間左右地移動(dòng)。
[0158]這樣地使用固相化裝置300使蛋白質(zhì)吸附到培養(yǎng)袋100內(nèi)，由此能夠進(jìn)一步提高蛋白質(zhì)的固相化效率。
[0159]此外，本實(shí)施方式的固相化裝置300不僅能夠適合地用于在培養(yǎng)袋100中將蛋白質(zhì)固相化的情況，也能夠適合地用于在燒瓶、其他容器中將蛋白質(zhì)固相化的情況。
[0160]然后，對(duì)本實(shí)施方式的固相化裝置中使用的保持構(gòu)件進(jìn)行說明。
[0161]保持構(gòu)件為用于以使培養(yǎng)容器的底面形成半圓筒形狀的方式保持培養(yǎng)容器的構(gòu)件，保持構(gòu)件被固定于裝載臺(tái)，或者與裝載臺(tái)一體地形成。
[0162]如圖14所示，保持構(gòu)件500具備主體部510、上蓋部520和擠壓部530。
[0163]主體部510具備用于使培養(yǎng)袋100彎曲地保持的半圓筒形狀的凹部510-1。上蓋部520覆蓋該凹部510-1地安裝于主體部510。上蓋部520向主體部510的安裝方法沒有特別限制，例如可以進(jìn)行螺絲固定。
[0164]在上蓋部520安裝有用于從外面擠壓培養(yǎng)袋100的擠壓部530。通過使該擠壓部530向下方移動(dòng)，由此對(duì)配置于主體部510的凹部510-1的培養(yǎng)袋100進(jìn)行擠壓，從而能夠使培養(yǎng)袋100的底面穩(wěn)定地呈半圓筒形狀。
[0165]關(guān)于擠壓部530向上蓋部520的安裝，只要能夠使擠壓部530向下方移動(dòng)從而擠壓培養(yǎng)袋100，則沒有特別限定，例如可以通過將上蓋部520與擠壓部530螺絲締合。
[0166]另外，擠壓部530的形狀并不限定為圖14所示的棒狀，也可以為其他形狀。例如，也優(yōu)選使擠壓部530的下方前端部分枝、或者為使下方呈曲面的半球狀，由此將培養(yǎng)袋100的底面進(jìn)一步穩(wěn)定地維持為半圓筒形狀。
[0167]另外，圖14中示出在上蓋部520安裝了3個(gè)擠壓部530的狀態(tài)，但擠壓部530的安裝個(gè)數(shù)沒有特別限制，也可以為I個(gè)、2個(gè)或4個(gè)以上。
[0168]圖15示出保持構(gòu)件500的使用形態(tài)，示出了使培養(yǎng)袋100保持于保持構(gòu)件500的樣子。
[0169]首先，在保持構(gòu)件500的主體部510的凹部510-1配置培養(yǎng)袋100。此時(shí)，以使培養(yǎng)袋100的底面沿凹部510-1成為曲面的方式進(jìn)行配置。
[0170]然后，在主體部510安裝上蓋部520，使擠壓部530向下方移動(dòng)。由此，能夠?qū)⑴囵B(yǎng)袋100的底面維持為半圓筒形狀。
[0171]保持構(gòu)件500以使凹部510-1的半圓筒形狀的中心軸的方向與裝載臺(tái)的長(zhǎng)邊方向?yàn)橄嗤较虻姆绞焦潭ㄓ诠滔嗷b置300的裝載臺(tái)后使用。另外，也可以以這樣的位置關(guān)系將保持構(gòu)件500與裝載臺(tái)一體地形成。
[0172]將培養(yǎng)袋100的底面維持為半圓筒形狀地保持于這樣的保持構(gòu)件500、并使培養(yǎng)袋100內(nèi)的液滴沿Y軸方向移動(dòng)時(shí)，液滴通常位于保持構(gòu)件500中凹部510-1的最下部，因此能夠精密地控制液滴在Y軸方向上的移動(dòng)。
[0173]如以上所說明的，根據(jù)本發(fā)明的培養(yǎng)容器的制造方法，能夠?qū)⒌鞍踪|(zhì)高效地固相化于培養(yǎng)容器內(nèi)表面，能夠縮短固相化所需要的時(shí)間，并能夠提高向培養(yǎng)容器的吸附率，能夠以少量的蛋白質(zhì)進(jìn)行必要量的固相化。因此，能夠降低未固相化而被廢棄的蛋白質(zhì)量。另夕卜，通過使用本實(shí)施方式的固相化裝置，能夠更進(jìn)一步提高蛋白質(zhì)的固相化效率。進(jìn)一步，通過使用保持構(gòu)件，能夠更精密地控制液滴的移動(dòng)，能夠更進(jìn)一步提高蛋白質(zhì)的固相化效率。
[0174]實(shí)施例
[0175]以下參照?qǐng)D6和圖7對(duì)本發(fā)明的實(shí)施方式所涉及的培養(yǎng)容器、和淋巴細(xì)胞的培養(yǎng)方法的實(shí)施例和比較例進(jìn)行說明。圖6為示出實(shí)施例和比較例的示意圖，圖7為示出實(shí)施例和比較例的實(shí)驗(yàn)結(jié)果的圖表的圖。此外，圖6為用于示出實(shí)施例和比較例的區(qū)別的圖，省略了培養(yǎng)部容積的擴(kuò)大。
[0176][實(shí)驗(yàn)1:培養(yǎng)容器的制造]
[0177](實(shí)施例1)
[0178]使用LaboPlasto Mill(株式會(huì)社東洋精機(jī)制作所制)作為塑料擠出成形裝置，將低密度聚乙烯擠出成形，成形出厚度ΙΟΟμπι的膜。然后，使用脈沖熱封機(jī)，用該膜制作IlcmX22.5cm(約225cm2)的袋，對(duì)該袋進(jìn)行γ射線滅菌后供于實(shí)驗(yàn)。
[0179]然后，在該袋中封入空氣約600ml，并且接著封入溶解有50yg的抗CD3抗體(Miltenyi B1tec株式會(huì)社制)的磷酸緩沖液(Japan Life Technologies株式會(huì)社制)10ml。此時(shí)，以使磷酸緩沖液的液滴僅與袋內(nèi)表面的一面(固相化面)接觸的方式進(jìn)行。
[0180]然后，在26°C的條件下手動(dòng)搖動(dòng)袋I分鐘，使磷酸緩沖液的液滴以1m/分鐘的速度在袋內(nèi)的底面上移動(dòng)，在袋內(nèi)形成固相化面，制造培養(yǎng)容器。
[0181]此外，制造2個(gè)該培養(yǎng)容器，一個(gè)用于固相化濃度的測(cè)定，另一個(gè)用于淋巴細(xì)胞的培養(yǎng)試驗(yàn)。其他實(shí)施例和比較例也與此相同。
[0182]以下述方式進(jìn)行固相化濃度的測(cè)定。
[0183]首先，除去培養(yǎng)容器內(nèi)的液體，使固相化面與包含I%十二烷基硫酸鈉(日本西格瑪奧德里奇合同會(huì)社制)的磷酸緩沖液(同上)500μ1接觸，靜置30分鐘后，用Present Mixer(Tietech株式會(huì)社制)施加強(qiáng)振動(dòng)，剝離所吸附的抗體。使用Micro BCATM Protein AssayKit