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用于連續(xù)地培養(yǎng)細胞的裝置和方法_3

文檔序號:9893172閱讀:來源:國知局
94]S卩,如圖13中所示,在培養(yǎng)環(huán)境單元200中產(chǎn)生負(fù)壓以改變培養(yǎng)容器100的隔室101的大小,從而通過循環(huán)過濾器120將培養(yǎng)細胞11所需的氣體移出或移入培養(yǎng)環(huán)境單元200中的培養(yǎng)容器100的隔室101。
[0095]該氣體包括二氧化碳和氧氣中的一種或多種。
[0096]循環(huán)過濾器120的詳細構(gòu)成如下。
[0097]該循環(huán)過濾器120由設(shè)置在培養(yǎng)容器100的側(cè)表面上的導(dǎo)管121、設(shè)置在該導(dǎo)管121的端部的閥122、以及設(shè)置在該閥122中的過濾器123構(gòu)成。
[0098]此外,在導(dǎo)管121周圍設(shè)置夾子124以選擇性地密封和開放該導(dǎo)管121。
[0099]當(dāng)將培養(yǎng)容器100存放在培養(yǎng)環(huán)境單元200中時,使用夾子214開放導(dǎo)管121以將氣體移出或移入隔室101;以及當(dāng)將培養(yǎng)容器100移出培養(yǎng)環(huán)境單元200時,使用夾子124收緊(密封,tighten)導(dǎo)管121以對密封的培養(yǎng)容器的隔室101進行密封。
[0100]此外,由于粘附力,不容易將在培養(yǎng)容器100的隔室101的底部表面上所培養(yǎng)的細胞11脫附,并因此,在隔室101中設(shè)置了用于使細胞11脫附的刮削器130,該刮削器是單獨的工具。
[0101]S卩,在使用外部機械力、磁力或勢能使刮削器130在隔室101中旋轉(zhuǎn)或移動時該刮削器刮削細胞11,以將細胞11從隔室101的底部表面脫附下來。
[0102]特別地,如圖11中所示,在矩形培養(yǎng)容器中設(shè)置刮削器130,但是培養(yǎng)容器的形狀不受限,并可以是圓形或多邊形(諸如三角形),只要培養(yǎng)容器具有細胞能夠粘附的表面。
[0103]首先,下面將描述使用刮削器130和外部機械力來使細胞11脫附方法。
[0104]如圖10中所示,旋轉(zhuǎn)地設(shè)置中心軸133貫穿隔室101的底部表面,并暴露該中心軸以與培養(yǎng)容器100中的刮削器130互鎖,使得刮削器130在隔室101的底部表面上進行摩擦以通過刮削來使細胞11脫附,該刮削器根據(jù)中心軸133的旋轉(zhuǎn)而旋轉(zhuǎn)。
[0105]當(dāng)使用刮削器130的旋轉(zhuǎn)來使細胞11脫附時,培養(yǎng)容器100具有圓柱形狀,并且刮削器130沿著隔室101的內(nèi)部圓周(周向,circumference)圍繞中心軸133旋轉(zhuǎn)以使細胞11脫附。
[0106]此外,下面將描述使用磁力將細胞11脫附的方法。
[0107]移動單獨設(shè)置的移動部件140以靠近培養(yǎng)容器100的外部下表面,刮削器130和移動部件140使用磁力相聯(lián)接,并且刮削器130根據(jù)移動部件140的移動而在隔室101中摩擦以通過刮削使細胞11脫附。
[0108]S卩,刮削器130和移動部件140可以包括金屬體134或磁性物質(zhì)141以使用磁力相互整體地聯(lián)接。
[0109]此外,在使用勢能將細胞11脫附的方法中,以一定角度將培養(yǎng)容器100定向以允許刮削器130由于其自重而在隔室101的底部表面上滑動,從而通過刮削使細胞11脫附。
[0110]具有上述構(gòu)成的刮削器130在該刮削器的上側(cè)具有培養(yǎng)槽132,以用培養(yǎng)基12填充該培養(yǎng)槽,并在該培養(yǎng)槽中培養(yǎng)細胞11。
[0111]S卩,在根據(jù)本發(fā)明的用于連續(xù)地培養(yǎng)細胞11的裝置中,將培養(yǎng)基12注入隔室101或注入隔室1I和刮削器130中的培養(yǎng)槽132,以對培養(yǎng)基12接種細胞11。
[0112]此外,多個刀片131形成在刮削器130的與隔室101的底部表面接觸的下表面上。
[0113]在刮削器130的與隔室101的底部表面接觸的下表面上形成多個刀片131,并且刀片131被形成為具有邊緣角從而通過摩擦隔室101的底部表面而使細胞11從底部表面脫附。
[0114]可替換地,在刮削器130的、與隔室101的底部表面接觸的下表面上形成多個刀片131,并且刀片131被形成為具有連續(xù)的邊緣角從而與隔室101的底部表面接觸或不接觸。
[0115]此外,刮削器由選自以下材料制成:聚乙烯(PE)、聚丙烯(PP)、聚酰胺(PA)、聚縮醛(POM)、聚氯乙烯(PVC)、聚酯(PET),聚甲基戊烯(PMP)、離聚物(1)、乙烯乙烯醇(EVOH)、聚苯乙烯(PS)、甲基丙烯酸樹脂(P麗A)、聚碳酸酯(PC)、聚醋酸乙烯酯(PVAc)、聚乙烯醇(PVA)、酚醛樹脂(PF)、脲醛樹脂(UF)、三聚氰胺樹脂(MF)、環(huán)氧樹脂(EP)、聚氨酯(PUR)、不飽和聚酯樹脂(UP)、以及金屬。
[0116]提供了具有上述構(gòu)成的一種或多種培養(yǎng)容器100,且通過循環(huán)過濾器120彼此并聯(lián)地連續(xù)連接。
[0117]S卩,如圖13中所示,順序地布置了多個培養(yǎng)容器100,并且將培養(yǎng)容器100(其被布置為與作為基礎(chǔ)的位于一側(cè)的培養(yǎng)容器100相鄰)順序地連接至循環(huán)過濾器120以通過位于一側(cè)的培養(yǎng)容器100的循環(huán)過濾器120將氣體整體地移出或移入多個培養(yǎng)容器100。
[0118]下面將描述使用具有上述構(gòu)成的培養(yǎng)裝置連續(xù)地培養(yǎng)細胞的方法。
[0119]該方法包括:通過將培養(yǎng)基12注入密封的培養(yǎng)容器100的內(nèi)部隔室101并然后對培養(yǎng)基12接種細胞11來培養(yǎng)細胞11;當(dāng)培養(yǎng)容器100的隔室101中所培養(yǎng)的細胞11的密度為參考值或大于參考值時,使所粘附的細胞11脫附;以及收獲從保持在密封狀態(tài)中的培養(yǎng)容器100所脫附的細胞11。
[0120]首先,如圖4中所示,詳細地,細胞11的培養(yǎng)包括將培養(yǎng)基12注入隔室11、對培養(yǎng)基12接種細胞11、以及在培養(yǎng)基12中繁殖細胞11。
[0121]在培養(yǎng)基12中細胞11的繁殖期間,培養(yǎng)基12接種有細胞11并然后將培養(yǎng)容器存放在培養(yǎng)環(huán)境單元200中以培養(yǎng)細胞。
[0122]培養(yǎng)環(huán)境單元200具有O至_42°C的培養(yǎng)溫度,并且將培養(yǎng)細胞11所需的氣體供至培養(yǎng)容器。
[0123]此外,從循環(huán)過濾器移除來自夾子的壓力,以開放導(dǎo)管。
[0124]培養(yǎng)細胞11所需的氣體被供入培養(yǎng)環(huán)境單元200,并且在培養(yǎng)環(huán)境單元200中重復(fù)地產(chǎn)生負(fù)壓,以重復(fù)地將氣體移出或移入培養(yǎng)容器100。即,如圖6中所示,培養(yǎng)容器100由軟材料制成,該軟材料受外部壓力的影響,在該情況下受負(fù)壓的影響,從而改變隔室101的大小。
[0125]然后隔室101彈性地恢復(fù)至其原始形狀,以吸取培養(yǎng)環(huán)境單元200中存在的氣體,從而將氣體移出或移入隔室101。
[0126]通過給培養(yǎng)容器100所設(shè)置的循環(huán)過濾器120將氣體移出或移入隔室101。
[0127]特別地,在循環(huán)過濾器120中可以設(shè)置夾子124以在循環(huán)過濾器120周圍選擇性地收緊或放松該夾子,從而確定循環(huán)過濾器120的開啟或關(guān)閉。
[0128]在培養(yǎng)環(huán)境單元200中的培養(yǎng)容器100中繁殖細胞11之后,為了收獲該細胞11,使用夾子124將循環(huán)過濾器120密封以密封培養(yǎng)容器100。
[0129]接下來,如圖8中所示,在將培養(yǎng)容器100從培養(yǎng)環(huán)境單元200移出之后,當(dāng)具有磁力功能的刮削器130和具有磁力功能的移動部件140與培養(yǎng)容器100的下表面緊密接觸并然后被移動時,位于隔室101中的刮削器130與移動部件140聯(lián)接以通過刮削使粘附在隔室101的底部表面的細胞11脫附。
[0130]可替換地,在細胞11的脫附期間,使用機械能使設(shè)置在隔室101中的刮削器130旋轉(zhuǎn)并移動,以通過刮削使細胞11從隔室101的底部脫附下來。
[0131]S卩,刮削器130通過中心軸133與隔室101旋轉(zhuǎn)地組合(結(jié)合/聯(lián)合,combine),并且暴露中心軸133以與隔室1I中的刮削器130互鎖,并使中心軸旋轉(zhuǎn)從而通過刮削使細胞11從隔室101的底部表面脫附。
[0132]可替換地,使用勢能移動刮削器130以通過刮削使細胞11從隔室101的底部表面脫附。
[0133]S卩,以一定角度將培養(yǎng)容器100定向以允許刮削器130由于其固有重量在隔室101的底部表面上滑動,從而通過刮削使細胞11脫附。
[0134]隨后,將注射器的針頭插入除了注入有培養(yǎng)基12的密封型通道110之外的密封型通道110中的一個,以使用注射器的負(fù)壓通過針頭將所培養(yǎng)的細
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