一種用于放流統(tǒng)計的牙鲆生態(tài)標記方法
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種放流牙鲆的評估方法，具體涉及一種用于放流統(tǒng)計的牙鲆生態(tài)標 記方法。
【背景技術】
[0002] 牙鮮(Paralichthys olivaceus)主要分布于我國渤海、黃海、東海、南海和朝鮮、 日本海域。生活環(huán)境多為靠近沿岸水深20-50m潮流暢通的海域。其棲息底質(zhì)多為砂泥、砂石 或巖礁地帶。牙鲆是名貴的暖溫性、底棲海產(chǎn)經(jīng)濟魚類，也是我國北方沿海重要的海水經(jīng)濟 魚類之一。
[0003] 由于之前的過度拖網(wǎng)捕撈，導致我國的牙鲆野生資源曾衰退嚴重，為此，各級政府 高度重視，每年動用大量人力、物力在不同海域開展牙鲆增殖放流活動。通過這些年牙鲆增 殖放流活動的開展，野生牙鲆資源量有了一定程度的增加。
[0004] 近些年我國十分重視牙鲆種質(zhì)資源的恢復，1998年至2003年我國農(nóng)業(yè)部漁業(yè)局和 日本國水產(chǎn)廳，分別委派全國水產(chǎn)技術推廣總站(本申請人)和日本栽培漁業(yè)協(xié)會在全國水 產(chǎn)技術推廣總站日照海水良種示范基地開展為期5年的"中日水產(chǎn)增殖技術合作項目"，專 門從事牙鲆魚的苗種培育和種質(zhì)資源恢復工作。在合作項目的帶動下，全國沿海省開始了 牙鲆的增殖放流。以山東省為例，2005年之前放流規(guī)模較小，不足20萬尾，到2007年放流數(shù) 量已近每年1000萬尾。
[0005] 然而，這些年，我們只片面的追求了牙鲆魚苗培育數(shù)量和放流規(guī)模，卻輕視了增殖 放流的后期評估，即到底增加了多少?放流牙鲆的成活率又如何?多少體長的牙鲆魚苗最適 宜于放流等問題卻一直沒有讓人信服的答案。究其原因，主要是因為沒有找到合適的牙鲆 放流標記方法。即使進行放流效果評估，也因選擇的標記方法的諸多缺陷，很難推廣應用， 不同標記方法的優(yōu)缺點詳見表1所示。
[0006] 表1.增殖放流中不同標記技術的優(yōu)缺點
[0008] 現(xiàn)行最常用的是"τ"型標記法，由上表可知，放流魚苗個體太小就不能用，還易造 成繼發(fā)感染，也不易于大規(guī)模放流使用;切除標記雖能大規(guī)模使用，但切的少了只能作為短 期標記，切得多了又影響放流魚苗的運動和捕食;分子標記、熒光染色標記等"高、大、上"方 法，不僅費用昂貴，而且不易于后期回捕辨識。
[0009] 針對以上諸多問題，本發(fā)明申請人全國水產(chǎn)技術推廣總站，發(fā)明人李剛等認真總 結(jié)多年牙鲆魚苗培育和增殖放流經(jīng)驗。于2007年，提出了牙鲆生態(tài)標記的理念，得到了黃渤 海區(qū)漁政局有關領導的認可，并在隨后的幾年中一直從事生態(tài)標記的研究，開展了牙鲆生 態(tài)標記放流試驗，旨在通過對牙鲆魚苗變態(tài)前后的攝入營養(yǎng)進行人為干預，使放流牙鲆魚 苗在無眼側(cè)出現(xiàn)黑色素沉積斑以此和野生牙鲆無眼純白形成鮮明對比，達到標記的目的。 并且這種標記方法不增加死亡率，不影響生長，保持時間長，不易脫標，技術成本低、易于量 化操作且回捕易辨識，具有廣闊的推廣和應用前景。2012年開始，本申請的申請人分別與多 家企業(yè)及個體老板合作進行了生態(tài)標記牙鲆的培育試驗，試驗成果得到了日照市海洋與漁 業(yè)局漁業(yè)分管局長的高度肯定。
[0010]所謂牙鲆生態(tài)標記就是在人工養(yǎng)殖過程中通過人為干預使放流牙鲆魚苗無眼側(cè) 出現(xiàn)黑色素沉積斑，以此與野生牙鲆無眼側(cè)純白進行區(qū)別達到標記目的牙鲆增殖放流標記 方法。本申請人研究發(fā)現(xiàn)，牙鲆孵出后3天，眼色素加深，視覺系統(tǒng)的形態(tài)結(jié)構(gòu)形成，呈正趨 光性，開始主動攝食。隨著視覺器官的進一步發(fā)育，視網(wǎng)膜通過視紫紅質(zhì)將視覺傳遞到中樞 神經(jīng)系統(tǒng)，中樞神經(jīng)再通過酪氨酸酶先將酪氨酸氧化成二羥苯丙氨酸(DOPA);二羥苯丙氨 酸生成多巴奎寧；多巴奎寧在酪氨酸酶的作用下聚合成黑色素。
[0011]正常情況下牙鲆幼魚變態(tài)前，成色素細胞分布在身體兩側(cè)，二羥苯丙氨酸(DOPA) 陽性細胞均勻分布。一開始變態(tài)，有眼側(cè)的黑色素細胞具有許多液胞，內(nèi)含酪氨酸酶，逐步 移向皮膚的表面，迅速擴散;變態(tài)后數(shù)量增加;而無眼側(cè)的成色素細胞則逐漸溶解，數(shù)量減 少，因此形成的牙鲆魚苗有眼側(cè)呈褐色或棕褐色，無眼側(cè)因缺少黑色素細胞而呈白色。然 而，通過大量實驗發(fā)現(xiàn)某些營養(yǎng)元素、營養(yǎng)元素的量以及攝入的時間，能夠達到抑制其無眼 側(cè)成色素細胞的減少，進而形成褐色或棕褐色的斑塊，達到生態(tài)標記的目的。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0012] 本發(fā)明的目的是提供一種用于放流統(tǒng)計的牙鲆生態(tài)標記方法，解決了現(xiàn)有技術中 提到的不足。本發(fā)明的目的是通過以下技術方案來實現(xiàn)：
[0013] -種用于放流統(tǒng)計的牙鲆生態(tài)標記方法，所述用于放流統(tǒng)計的牙鲆生態(tài)標記方法 包括以下步驟：
[0014] Sl:在消毒處理后的培養(yǎng)池中加水，在15 °C下，布牙鲆魚卵，其養(yǎng)殖密度為0.2~2 萬尾/m3;
[0015] S2:仔魚3日齡時，仔魚開口，開始投喂營養(yǎng)強化后的輪蟲，投喂至仔魚26~30日齡 為止；
[0016] 輪蟲中營養(yǎng)強化劑的添加量為:3日齡~11日齡，每1億輪蟲用13~18g的營養(yǎng)強化 劑強化營養(yǎng)；12日齡-20日齡每1億輪蟲用20~30g的營養(yǎng)強化劑強化營養(yǎng);20日齡以后為1 億輪蟲13~18g營養(yǎng)強化劑的用量；
[0017] S3:仔魚12日齡時，開始投喂營養(yǎng)強化后的鹵蟲，投喂至仔魚35~50日齡為止； [0018]步驟S2和S3中進行營養(yǎng)強化的營養(yǎng)強化劑的成份包括DHA、EPA、維生素和氨基酸； [0019] S4:仔魚15~19日齡時，開始投喂配合飼料，用量為仔魚體重的3~10% ;
[0020]由此，得到生態(tài)標記型牙鲆，該牙鲆無眼側(cè)出現(xiàn)形態(tài)、特征穩(wěn)定的黑色素沉積斑， 其用于放流牙鲆統(tǒng)計研究。
[0021 ]進一步地，輪蟲中營養(yǎng)強化劑的添加量為：3日齡~11日齡，每1億輪蟲用15g的營 養(yǎng)強化劑強化營養(yǎng)；12日齡-20日齡每1億輪蟲用25g的營養(yǎng)強化劑強化營養(yǎng);20日齡以后又 恢復至1億輪蟲15g營養(yǎng)強化劑的用量。
[0022]進一步地，鹵蟲中營養(yǎng)強化劑的添加量為：12日齡-15日齡，每1億鹵蟲用50g的營 養(yǎng)強化劑強化營養(yǎng)；15日齡以后為每1億齒蟲用100g的營養(yǎng)強化劑強化營養(yǎng)，直至35~50日 齡，優(yōu)選40~46日齡。
[0023] 進一步地，步驟S2中，營養(yǎng)強化后的輪蟲的投喂量為:仔魚3~4日齡，每日的投喂 量為0.4~0.6億個/50m3，再由5日齡每日1.2~1.8億個/50m 3 (本發(fā)明中提到的50m3均指 50m3的培養(yǎng)池)逐漸增加至21日齡或22日齡或23日齡的18~19億個/50m 3，此后，再由18~19 億個/50m3遞減至投喂結(jié)束時的6~7億個/50m3。
[0024] 進一步地，5~6日齡每日1.5或1.6億個/50m3培養(yǎng)池，7~8日齡每日2.8~3.1億 個/50m 3，9~13日齡每日4 · 8~5 · 2億個/50m3，14~15日齡每日8 · 0~8 · 2億個/50m3，16~17 日齡每日11.8~12.0億個/50m3,18~19日齡每日15.0~15.5億個/50m 3，20~21日齡每日 17.0~17.5億個/50m3,22日齡每日18.0~18.4億個/50m 3,23~25日齡每日17.0~17.9億 個/50m3，26~28日齡每日6 · 5~7 · 0億個/50m3。
[0025] 進一步地，5~6日齡每日1 · 5億個/50m3，7~8日齡每日3 · 0億個/50m3，9~13日齡每 日5 · 0或5 · 1億個/50m3，14~15日齡每日8 · 1或8 · 2億個/50m3，16~17日齡每日11 · 8或11 · 9或 12 ·0億個/50m3,18~19日齡每日15.2或15.3或15.4或15.5億個/50m3，20~21日齡每日17.0 或17 · 1或17 · 2或17 · 3億個/50m3，22日齡每日18 · 2億個/50m3，23日齡每日17 · 9億個/50m3，24 日齡每日17 · 7億個/50m3，25日齡每日17 · 4億個/50m3; 26~28日齡每日6 · 6~7 · 0億個/50m3。 [0026]進一步地，步驟S3中，營養(yǎng)強化后的鹵蟲的投喂量為：由12日齡每日0.7~0.8億 個/50m 3培養(yǎng)池逐漸增加至20~31日齡的2.9~3.1億個/50m3培養(yǎng)池，此后，再由2.9~3.1億 個/50m 3培養(yǎng)池遞減至投喂結(jié)束時的1.3~1.5億個/50m3培養(yǎng)池。
[0027] 進一步地，從仔魚3日齡開始投喂小球藻，投喂量為：1億個/50m3,投喂至14~16日 齡，此后，其投喂量增加至:3億個/50m3，投喂至26~30日齡。
[0028]進一步地，所述營養(yǎng)強化劑中DHA的質(zhì)量百分比為:24~25 %，所述EPA的質(zhì)量百分 比分別為：17~19%，所述維生素的含量為：IU/lOOg 450~530，所述氨基酸的含量為:5000 ~6000mg/100g。優(yōu)選地，所述營養(yǎng)強化劑中DHA的質(zhì)量百分比分別為:24.6%，EPA的質(zhì)量百 分比為：18.05%，維生素的含量為：IU/lOOg 460~500，氨基酸的含量為：5600~5900mg/ 100g0
[0029] 進一步地，維生素包括VA、VD和VE，其含量為:VA: IU/100g< 100，VD: IU/lOOg 377， VE: IU/100g<0.5;所述氨基酸的成份包括丙氨酸750mg/100g;天門冬氨酸1260mg/100g;甘 氨酸640mg/100g;組氨酸240mg/100g;異亮氨酸400mg/100g;亮氨酸700mg/100g;賴氨酸 530mg/100g;苯丙氨酸420mg/100g;脯氨酸400mg/100g;絲氨酸460mg/100g。
[0030] 進一步地，步驟S5中，所述配合飼料的用量為仔魚體重呈反比例關系，3~5日齡按 體重的8~10%投喂，5日齡以后逐漸遞減，到30日齡以后按3~5%投喂，