>[0034]圖3為外周神經(jīng)修復(fù)材料45°斜切面示意圖
[0035]圖4為外周神經(jīng)修復(fù)材料成品掃描電鏡圖。(a)為整體橫切面圖；(b)為管道內(nèi)壁縱切面圖。
【具體實(shí)施方式】
[0036]實(shí)施例1制備8% (w/v)PLGA電紡絲原液
[0037]稱取0.4g PLGA (85:25)與0.lg細(xì)胞外基質(zhì)干粉，放入容器內(nèi)，加入5ml三氯甲烷溶液，配制成PLGA 8% (w/v)的電紡絲原液，磁力攪拌12小時(shí)后，封口 4°C保存?zhèn)溆谩?br>[0038]其中，細(xì)胞外基質(zhì)干粉制備:本實(shí)驗(yàn)組已有相關(guān)專利申請(qǐng)，詳情見神經(jīng)組織源性組織工程支架材料的制備及應(yīng)用。國家發(fā)明專利:ZL201010107529.8。
[0039]實(shí)施例2制備10% (w/v)PLGA電紡絲原液
[0040]稱取0.5g PLGA (85:25)與0.2g細(xì)胞外基質(zhì)干粉，放入容器內(nèi)，加入5ml三氯甲烷溶液，配制成PLGA 10% (w/v)的電紡絲原液，磁力攪拌12小時(shí)后，封口 4°C保存?zhèn)溆谩?br>[0041]實(shí)施例3制備12% (w/v)PLGA電紡絲原液
[0042]稱取0.6g PLGA (85:25)與0.3g細(xì)胞外基質(zhì)干粉，放入容器內(nèi)，加入5ml三氯甲烷溶液，配制成PLGA 12% (w/v)的電紡絲原液，磁力攪拌12小時(shí)后，封口 4°C保存?zhèn)溆谩?br>[0043]實(shí)施例4制備10% (w/v)PLA電紡絲原液
[0044]稱取0.5g PLA與0.2g細(xì)胞外基質(zhì)干粉，放入容器內(nèi)，加入5ml 二氯甲烷溶液，配制成PLA 10% (w/v)的電紡絲原液，磁力攪拌12小時(shí)后，封口 4°C保存?zhèn)溆谩?br>[0045]實(shí)施例5制備10% (w/v)PCL電紡絲原液
[0046]稱取0.5g PCL與0.lg細(xì)胞外基質(zhì)干粉，放入容器內(nèi)，加入5ml六氟異丙醇溶液，配制成PCL 10% (w/v)的電紡絲原液，磁力攪拌12小時(shí)后，封口 4°C保存?zhèn)溆谩?br>[0047]實(shí)施例6靜電紡絲
[0048]收集滾軸(直徑10cm寬5cm)定速可調(diào)速至140?2800rpm/min，6?8Kv正電壓加于針頭，-8?-12Κν電壓加于收集滾軸，噴射針頭到收集器之間的距離為14?15cm。
[0049]1.先將收集器調(diào)速至140rpm/min，7Kv正電壓加于針頭，-ΙΟΚν電壓加于收集滾軸，推注速度:20 μ L/min,噴射0.15ml實(shí)施例3制備的12% (w/v)PLGA電紡絲原液，形成無規(guī)則的底膜。
[0050]2.之后將收集滾軸上調(diào)至2800rpm/min，收集0.lml的12% (w/v)PLGA電紡絲，之后纏繞直徑130 μ m的微管模型，如圖1所示，纏繞密度為每厘米7?8根。
[0051]3.之后繼續(xù)噴射0.25ml的12% (w/v)PLGA電紡絲原液，再次捆綁一層微管道模型，如圖2所示，兩層微管道模型之間存在電紡絲薄膜。
[0052]4.繼續(xù)噴射0.25ml的12% (w/v)PLGA電紡絲原液。
[0053]實(shí)施例7制備多孔道外周神經(jīng)支架
[0054]1.干燥45?60min后，小心接下電紡絲形成的薄膜，之后在光滑的玻璃臺(tái)面上，以二操作(1)形成的無規(guī)則底膜為外側(cè)，沿垂直于管道模型方向滾動(dòng)薄膜，形成管狀結(jié)構(gòu)。
[0055]2.室溫干燥24小時(shí)，去除管道模型，形成多孔道三維結(jié)構(gòu)，成品如圖3所示。三蒸水漂洗15?30分鐘，冷凍干燥48小時(shí)，獲得最終成型的高取向、多孔道蜂窩狀外周神經(jīng)支架，真空包裝，Co60滅菌，4°C保存?zhèn)溆谩?br>[0056]掃描電鏡檢測
[0057]經(jīng)掃描電鏡得到圖4，(a)中可以看到外周神經(jīng)修復(fù)材料的橫截面存在多孔管道樣結(jié)構(gòu)。(b)為內(nèi)部管道縱切面電鏡圖，可清楚觀察到，內(nèi)部纖維的排列成高取向性，與神經(jīng)再生長軸方向一致。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種仿基底膜管結(jié)構(gòu)的神經(jīng)缺損修復(fù)材料的制備方法，包括以下步驟: 1)室溫條件下，將高分子材料與天然源性材料加入有機(jī)溶劑，配制成電紡絲原液； 2)制備微管模型； 3)將制備好的電紡絲原液分層噴涂至微管模型的底層和表層，制備具有微管結(jié)構(gòu)的薄膜，室溫干燥后，將具有微管結(jié)構(gòu)的薄膜，垂直于取向排列方向，采取滾動(dòng)卷曲方式，形成管狀結(jié)構(gòu)； 4)去除管狀結(jié)構(gòu)中的微管模型； 5)三蒸水漂洗并冷凍干燥，獲得最終成型的神經(jīng)缺損修復(fù)材料。2.如權(quán)利要求1所述的仿基底膜管結(jié)構(gòu)的神經(jīng)缺損修復(fù)材料的制備方法，其特征在于，步驟1)中配制成的電紡絲原液的質(zhì)量百分濃度為4%?16%。3.如權(quán)利要求1所述的仿基底膜管結(jié)構(gòu)的神經(jīng)缺損修復(fù)材料的制備方法，其特征在于，步驟1)中，所述高分子材料選自聚已內(nèi)酯、聚己內(nèi)酯/左旋聚乳酸、聚乳酸-羥基乙酸共聚物、左旋聚乳酸、聚乙烯醇、蠶絲蛋白/聚環(huán)氧乙烷、聚乳酸、聚內(nèi)消旋乳酸中的一種或多種，所述天然源性材料包括細(xì)胞外基質(zhì)干粉、膠原、明膠、NGF、殼聚糖、甲殼素；所述有機(jī)溶劑選自二氯甲烷、三氯甲烷、六氟異丙醇、四氟乙烯、碳酸二甲酯、丙酮、乙酸、二甲基亞砜、四氫呋喃、二甲基甲酰胺中的一種或多種。4.如權(quán)利要求1所述的仿基底膜管結(jié)構(gòu)的神經(jīng)缺損修復(fù)材料的制備方法，其特征在于，步驟2)中，所述微管模型包括可溶型微管模型和不可溶型微管模型。5.如權(quán)利要求4所述的仿基底膜管結(jié)構(gòu)的神經(jīng)缺損修復(fù)材料的制備方法，其特征在于，所述可溶型微管模型的原料包括PVA、蠶絲蛋白/聚環(huán)氧乙烷、聚乙二醇、聚內(nèi)消旋乳酸；所述不可溶型微管模型的原料包括尼龍絲、金屬絲、聚合纖維絲。6.如權(quán)利要求1所述的仿基底膜管結(jié)構(gòu)的神經(jīng)缺損修復(fù)材料的制備方法，其特征在于，步驟3)中，所述微管模型復(fù)合1?3層薄膜，所述薄膜的總厚度為0.05mm?1_。7.如權(quán)利要求1所述的仿基底膜管結(jié)構(gòu)的神經(jīng)缺損修復(fù)材料的制備方法，其特征在于，步驟3)中，采用收集滾軸或帶電金屬梳將制備好的電紡絲原液分層噴涂至微管模型的底層和表層。8.如權(quán)利要求7所述的仿基底膜管結(jié)構(gòu)的神經(jīng)缺損修復(fù)材料的制備方法，其特征在于，采用收集滾軸制備具有微管結(jié)構(gòu)的薄膜的步驟包括: 將收集滾軸調(diào)速至低轉(zhuǎn)速，調(diào)整電壓，針頭前方形成泰勒錐，使電紡絲均勻噴出，形成無規(guī)則的底膜，膜厚度0.1mm ;之后再將收集滾軸調(diào)整成高轉(zhuǎn)速，收集厚度為0.1mm的高取向薄膜；固定微管模型，再次噴涂電紡絲，厚度0.1mm，連帶招箔，小心取下；所述收集滾軸定速調(diào)速至線速度0.5?9m/min，5?15kV正電壓加于針頭，_2?-12kV電壓加于收集器，推注速度:10?40 μ L/min，噴射針頭到收集器之間的距離為5?20cm，溫度:_20?40°C，濕度:40%以下。9.如權(quán)利要求1所述的仿基底膜管結(jié)構(gòu)的神經(jīng)缺損修復(fù)材料的制備方法，其特征在于，步驟5)中，所述微管模型為可溶型微管模型時(shí)，將管狀結(jié)構(gòu)放入水中，溫和震蕩3?12小時(shí)，去除可溶于水的微管模型；所述微管模型為不可溶型微管模型時(shí)，在顯微鏡下，直接抽除微管模型。10.如權(quán)利要求1所述的仿基底膜管結(jié)構(gòu)的神經(jīng)缺損修復(fù)材料的制備方法，其特征在于，還包括:將步驟5)獲得的神經(jīng)缺損修復(fù)材料真空包裝，40?250萬拉德γ射線輻照滅菌，4°C保存。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種仿神經(jīng)基底膜管結(jié)構(gòu)的神經(jīng)缺損修復(fù)材料的制備方法，屬于組織工程技術(shù)和生物材料領(lǐng)域。本發(fā)明依照周圍神經(jīng)膠原纖維排列和神經(jīng)纖維基底膜結(jié)構(gòu)特征，選用高分子材料和天然物質(zhì)為主要原料，結(jié)合電紡絲技術(shù)和成孔技術(shù)，制備具有仿神經(jīng)纖維基底膜管結(jié)構(gòu)的周圍神經(jīng)缺損修復(fù)材料。與其它神經(jīng)導(dǎo)管不同，該材料橫截面呈多孔微小管狀結(jié)構(gòu)，管壁纖維排列高度取向，方向與微管走行方向一致。材料管壁比表面積顯著增加，微管結(jié)構(gòu)與神經(jīng)纖維基底膜管類似，能夠添加多種促神經(jīng)生長物質(zhì)，具有良好的生物相容性，便于神經(jīng)纖維沿修復(fù)材料長軸方向生長，是一種有應(yīng)用前景的組織工程外周神經(jīng)缺損修復(fù)材料。
【IPC分類】A61L27/20, A61L27/24, A61L27/22, A61L27/16, A61L27/18, A61L27/36, A61L27/56
【公開號(hào)】CN105288730
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510639623
【發(fā)明人】彭江, 全琦, 孟昊業(yè), 王玉, 袁振亞, 尹合勇, 鄭裕東, 汪愛媛, 盧世璧, 郭全義, 劉舒云, 朱昀, 萇彪, 許文靜, 趙喆, 趙慶
【申請(qǐng)人】中國人民解放軍總醫(yī)院, 北京申佑生物科技有限公司
【公開日】2016年2月3日
【申請(qǐng)日】2015年9月30日