5的上游引物序列如SEQIDNOl所示； 所述擴(kuò)增DXS6795的下游引物序列如SEQIDN02所示； 所述擴(kuò)增DXS6803的上游引物序列如SEQIDN03所示； 所述擴(kuò)增DXS6803的下游引物序列如SEQIDN04所示； 所述擴(kuò)增DXS6807的上游引物序列如SEQIDN05所示； 所述擴(kuò)增DXS6807的下游引物序列如SEQIDN06所示； 所述擴(kuò)增DXS9907的上游引物序列如SEQIDN07所示； 所述擴(kuò)增DXS9907的下游引物序列如SEQIDN08所示； 所述擴(kuò)增DXS7423的上游引物序列如SEQIDN09所示； 所述擴(kuò)增DXS7423的下游引物序列如SEQIDNOlO所示； 所述擴(kuò)增GATA172D05的上游引物序列如SEQIDN013所示； 所述擴(kuò)增GATA172D05的下游引物序列如SEQIDN014所示； 所述擴(kuò)增DXSlOl的上游引物序列如SEQIDN015所示； 所述擴(kuò)增DXSlOl的下游引物序列如SEQIDN016所示； 所述擴(kuò)增DXS9902的上游引物序列如SEQIDN017所示； 所述擴(kuò)增DXS9902的下游引物序列如SEQIDN018所示； 所述擴(kuò)增DXS7133的上游引物序列如SEQIDN019所示； 所述擴(kuò)增DXS7133的下游引物序列如SEQIDN020所示； 所述擴(kuò)增DXS6810的上游引物序列如SEQIDN021所示； 所述擴(kuò)增DXS6810的下游引物序列如SEQIDN022所示； 所述擴(kuò)增GATA31E08的上游引物序列如SEQIDN023所示； 所述擴(kuò)增GATA31E08的下游引物序列如SEQIDN024所示； 所述擴(kuò)增DXS6800的上游引物序列如SEQIDN025所示； 所述擴(kuò)增DXS6800的下游引物序列如SEQIDN026所示； 所述擴(kuò)增DXS981的上游引物序列如SEQIDN027所示； 所述擴(kuò)增DXS981的下游引物序列如SEQIDN028所示； 所述擴(kuò)增DXS10162的上游引物序列如SEQIDN029所示； 所述擴(kuò)增DXS10162的下游引物序列如SEQIDN030所示； 所述擴(kuò)增DXS6809的上游引物序列如SEQIDN031所示； 所述擴(kuò)增DXS6809的下游引物序列如SEQIDN032所示； 所述擴(kuò)增GATA165B12的上游引物序列如SEQIDN033所示； 所述擴(kuò)增GATA165B12的下游引物序列如SEQIDN034所示； 所述擴(kuò)增DXS10079的上游引物序列如SEQIDN035所示； 所述擴(kuò)增DXS10079的下游引物序列如SEQIDN036所示； 所述擴(kuò)增DXS10135的上游引物序列如SEQIDN037所示； 所述擴(kuò)增DXS10135的下游引物序列如SEQIDN038所示； 所述擴(kuò)增HPRTB的上游引物序列如SEQIDN039所示； 所述擴(kuò)增HPRTB的下游引物序列如SEQIDN040所示。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的人類X染色體短串聯(lián)重復(fù)序列復(fù)合擴(kuò)增體系，其特征在于，還 包括一對(duì)能擴(kuò)增Amelogenin位點(diǎn)的引物，分別為： 擴(kuò)增Amelogenin的上游引物序列如SEQIDNOll所示； 擴(kuò)增Amelogenin的下游引物序列如SEQIDN012所示。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的人類X染色體短串聯(lián)重復(fù)序列復(fù)合擴(kuò)增體系，其引物濃度 比例是：DXS6795SEQIDN01-2,0.179ymol/L、DXS6803SEQIDN03-4,0.126ymol/L、 DXS6807SEQIDN05-6,0.245ymol/L、DXS9907SEQIDN07-8,0.150ymol/L、DXS7423 SEQIDN09-10,0.162ymol/L、AmelogeninSEQIDN011-12，0.060ymol/L、GATA172D05 SEQIDN013-14,0.192ymol/L、DXSlOlSEQIDN015-16,0.190ymol/L、DXS9902SEQ IDN017-18,0.169ymol/L、DXS7133SEQIDN019-20,0.404ymol/L、DXS6810SEQ IDN021-22,0.412ymol/L、GATA31E08SEQIDN023-24,0. 188ymol/L、DXS6800SEQ IDN025-26,0. 278ymol/L^DXS981SEQIDN027-28,0. 130ymol/L^DXS10162SEQID N029-30,0. 250ymol/L^DXS6809SEQIDN031-32, 0. 420ymol/L^GATA165B12SEQID N033-34,0. 255ymol/L^DXS10079SEQIDN035-36,0. 276ymol/L^DXS10135SEQID N037-38,0.315ymol/L、HPRTBSEQIDN039-40,0.404ymol/L〇4. 根據(jù)權(quán)利要求I所述的人類X染色體短串聯(lián)重復(fù)序列復(fù)合擴(kuò)增體系，其特征在 于，人類X染色體STR的分組為：DXS6795、DXS6803、DXS6807、DXS9907、DXS7423 為第一 組；Amelogenin、GATA172D05、DXS101、DXS9902、DXS7133、DXS6810 為第二組；GATA31E08、 DXS6800、DXS981、DXS10162、DXS6809 為第三組；GATA165B12、DXS10079、DXS10135、HPRTB* 第四組。5. 根據(jù)權(quán)利要求1或4所述的人類X染色體短串聯(lián)重復(fù)序列復(fù)合擴(kuò)增體系，其特征在 于每一對(duì)特異性引物對(duì)中的一條引物的5'端帶有熒光素標(biāo)記，所述的熒光素標(biāo)記方式為： DXS6795、DXS6803、DXS6807、DXS9907、DXS7423 采用FAM標(biāo)記；Amelogenin、GATA172D05、 DXS101、DXS9902、DXS7133、DXS6810 采用HEX標(biāo)記；GATA31E08、DXS6800、DXS981、DXS10162、 DXS6809 采用TAMRA標(biāo)記；GATA165B12、DXS10079、DXS10135、HPRTB采用ROX標(biāo)記。6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的人類X染色體短串聯(lián)重復(fù)序列復(fù)合擴(kuò)增體系，其特征在于： 擴(kuò)增體系包括引物混合物、酶反應(yīng)緩沖液、基因組DNA，所述的酶反應(yīng)緩沖液包括熱啟動(dòng) DNA聚合酶、Brij58、dNTP、DMS0、Betaine、Tris-HCl、BSA、DIT，酶反應(yīng)緩沖液在-20°C的保 存環(huán)境中不結(jié)冰。7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的人類X染色體短串聯(lián)重復(fù)序列復(fù)合擴(kuò)增體系，其特征在于所 述的酶反應(yīng)緩沖液的配方為：KC1 0?IM;MgC12 0? 0015mMJris-HCl0? 05M;BSA0? 16mg/ ml;dNTP0.2mM;Brij58 0.001M;DTT0.02M;Betaine0.1mol/L;DMS0 0.40%，百分比為 DMSO原液占酶反應(yīng)緩沖液的體積百分?jǐn)?shù)；熱啟動(dòng)DNA聚合酶0. 25U。8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的人類X染色體短串聯(lián)重復(fù)序列復(fù)合擴(kuò)增體系，其特征在于： 所述的復(fù)合擴(kuò)增體系的擴(kuò)增程序是：第一步變性：96°C，2分鐘；熱循環(huán)：94°C30秒；60°C， 70秒，共進(jìn)行27-30個(gè)循環(huán)；終延伸60 °C，30分鐘；保溫：15 °C。
【專利摘要】本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，涉及人類X染色體20個(gè)短串聯(lián)重復(fù)序列復(fù)合擴(kuò)增體系及應(yīng)用，該復(fù)合擴(kuò)增體系包括20對(duì)引物，可同時(shí)擴(kuò)增19個(gè)STR位點(diǎn)：DXS6795、DXS6803、DXS6807、DXS9907、DXS7423、GATA172D05、DXS101、DXS9902、DXS7133、DXS6810、GATA31E08、DXS6800、DXS981、DXS10162、DXS6809、GATA165B12、DXS10079、DXS10135、HPRTB以及一個(gè)性別識(shí)別位點(diǎn)Amelogenin。本發(fā)明采用五色熒光標(biāo)記，擴(kuò)增產(chǎn)物大小在85-450bp之間，操作簡(jiǎn)單，個(gè)體識(shí)別力高。本發(fā)明所提供的復(fù)合擴(kuò)增體系提供的位點(diǎn)與目前通用的X-STR試劑盒具有很高的兼容性并且新增加了一些多態(tài)信息比較高的位點(diǎn)，可以有效的應(yīng)用于X染色體相關(guān)的親權(quán)鑒定、個(gè)體識(shí)別以及X染色體伴性遺傳疾病的輔助檢測(cè)。
【IPC分類】C12Q1/68
【公開號(hào)】CN105177125
【申請(qǐng)?zhí)枴?br>【發(fā)明人】陳初光, 于在亮, 徐梅波
【申請(qǐng)人】蘇州閱微基因技術(shù)有限公司
【公開日】2015年12月23日
【申請(qǐng)日】2015年8月21日