人類x染色體20個短串聯(lián)重復(fù)序列復(fù)合擴(kuò)增體系及應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，涉及人類X染色體20個短串聯(lián)重復(fù)序列復(fù)合擴(kuò)增體 系，具體涉及利用X染色體上具有多態(tài)性的遺傳標(biāo)記、通過聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)進(jìn)行復(fù)合擴(kuò)增 的熒光檢測試劑盒，該體系可以應(yīng)用于與X染色體相關(guān)的日常親權(quán)鑒定、個體識別以及X染 色體伴性遺傳疾病的輔助檢測。
【背景技術(shù)】
[0002] 人類基因組STR(短串聯(lián)重復(fù)序列）是以少數(shù)幾個堿基為核心單位，串聯(lián)重復(fù)形成 的DNA遺傳標(biāo)記。不同種族、不同人群甚至不同個體之間的區(qū)分是通過核心單位序列和重 復(fù)數(shù)的差異，這也構(gòu)成了 STR的遺傳多態(tài)性。在基因組中，平均每15~20kb就有一個 STR位點，占基因組的10%，多存在于非編碼區(qū)及內(nèi)含子中，重復(fù)單位為2~6bp，重復(fù) 次數(shù)10~60次，片段大小在70~500bp，并按孟德爾規(guī)律呈共顯性遺傳。因此STR復(fù)合 擴(kuò)增檢測技術(shù)可以廣泛應(yīng)用于法醫(yī)個體識別、親子鑒定等領(lǐng)域。
[0003] 在人類的23對染色體中，其中一對為性別染色體即為X染色體和Y染色體。女性 的一對X染色體在卵細(xì)胞生成的過程中可以像常染體一樣發(fā)生重組，但是在男性的精子細(xì) 胞生成的過程中，X染色體和Y染色體不能隨意重組。父親的X染色體只遺傳給女兒，母親 的X染色體可以遺傳給女兒，也可以遺傳給兒子。所以X染色體這種獨特的遺傳方式使得 其在親權(quán)鑒定中具有特殊的應(yīng)用價值。比如雙親缺失的姐妹認(rèn)親、同父異母姐妹關(guān)系鑒定、 祖母-孫女關(guān)系鑒定、亂倫關(guān)系鑒定、強(qiáng)奸案件的鑒定以及與X染色體相關(guān)的遺傳疾病的鑒 定等。
[0004] 與現(xiàn)在市面上常染色體STR試劑盒的數(shù)量相比，X-STR試劑盒的數(shù)量僅有幾家可 供選擇，另外X染色體相關(guān)的專利數(shù)量也比較少。
[0005] 現(xiàn)有X-STR試劑盒和X染色體相關(guān)的專利其針對的STR位點數(shù)量較少，且在遺傳 多態(tài)性、個體識別力和檢測的準(zhǔn)確性上有一定欠缺，因此有必要開發(fā)一種位點數(shù)量多、遺傳 多態(tài)性高、個體識別力強(qiáng)的X-STR試劑盒。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 為了克服上述缺陷，本發(fā)明的目的在于提供一種一次能檢測19個X-STR基因座及 Amelogenin基因座的人類X染色體20個短串聯(lián)重復(fù)序列復(fù)合擴(kuò)增體系，適用于使用常染體 STR試劑盒難以排除親權(quán)關(guān)系案例的檢測，并且本發(fā)明熒光標(biāo)記復(fù)合擴(kuò)增體系檢測快速、準(zhǔn) 確。
[0007] 本發(fā)明的又一個目的是提供人類X染色體短串聯(lián)重復(fù)序列復(fù)合擴(kuò)增體系在X染色 體相關(guān)的親權(quán)鑒定、個體識別中的應(yīng)用。
[0008] 為了實現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明所采取的技術(shù)方案：人類X染色體短串聯(lián)重復(fù)序 列復(fù)合擴(kuò)增體系，其特征在于，該復(fù)合擴(kuò)增體系包括19對引物，可同時擴(kuò)增19個STR位點： DXS6795、DXS6803、DXS6807、DXS9907、DXS7423、GATA172D05、DXSlOl、DXS9902、DXS7133、 DXS6810、GATA31E08、DXS6800、DXS981、DXS10162、DXS6809、GATA165B12、DXS10079、 DXS10135、HPRTB ;
[0009] 所述擴(kuò)增DXS6795的上游引物序列如SEQ ID NOl所示；
[0010] 所述擴(kuò)增DXS6795的下游引物序列如SEQ ID N02所示；
[0011] 所述擴(kuò)增DXS6803的上游引物序列如SEQ ID N03所示；
[0012] 所述擴(kuò)增DXS6803的下游引物序列如SEQ ID N04所示；
[0013] 所述擴(kuò)增DXS6807的上游引物序列如SEQ ID N05所示；
[0014] 所述擴(kuò)增DXS6807的下游引物序列如SEQ ID N06所示；
[0015] 所述擴(kuò)增DXS9907的上游引物序列如SEQ ID N07所示；
[0016] 所述擴(kuò)增DXS9907的下游引物序列如SEQ ID N08所示；
[0017] 所述擴(kuò)增DXS7423的上游引物序列如SEQ ID N09所示；
[0018] 所述擴(kuò)增DXS7423的下游引物序列如SEQ ID NOlO所示；
[0019] 所述擴(kuò)增GATA172D05的上游引物序列如SEQ ID N013所示；
[0020] 所述擴(kuò)增GATA172D05的下游引物序列如SEQ ID N014所示；
[0021] 所述擴(kuò)增DXSlOl的上游引物序列如SEQ ID N015所示；
[0022] 所述擴(kuò)增DXSlOl的下游引物序列如SEQ ID N016所示；
[0023] 所述擴(kuò)增DXS9902的上游引物序列如SEQ ID N017所示；
[0024] 所述擴(kuò)增DXS9902的下游引物序列如SEQ ID N018所示；
[0025] 所述擴(kuò)增DXS7133的上游引物序列如SEQ ID N019所示；
[0026] 所述擴(kuò)增DXS7133的下游引物序列如SEQ ID N020所示；
[0027] 所述擴(kuò)增DXS6810的上游引物序列如SEQ ID N021所示；
[0028] 所述擴(kuò)增DXS6810的下游引物序列如SEQ ID N022所示；
[0029] 所述擴(kuò)增GATA31E08的上游引物序列如SEQ ID N023所示；
[0030] 所述擴(kuò)增GATA31E08的下游引物序列如SEQ ID N024所示；
[0031] 所述擴(kuò)增DXS6800的上游引物序列如SEQ ID N025所示；
[0032] 所述擴(kuò)增DXS6800的下游引物序列如SEQ ID N026所示；
[0033] 所述擴(kuò)增DXS981的上游引物序列如SEQ ID N027所示；
[0034] 所述擴(kuò)增DXS981的下游引物序列如SEQ ID N028所示；
[0035] 所述擴(kuò)增DXS10162的上游引物序列如SEQ ID N029所示；
[0036] 所述擴(kuò)增DXS10162的下游引物序列如SEQ ID N030所示；
[0037] 所述擴(kuò)增DXS6809的上游引物序列如SEQ ID N031所示；
[0038] 所述擴(kuò)增DXS6809的下游引物序列如SEQ ID N032所示；
[0039] 所述擴(kuò)增GATA165B12的上游引物序列如SEQ ID N033所示；
[0040] 所述擴(kuò)增GATA165B12的下游引物序列如SEQ ID N034所示；
[0041] 所述擴(kuò)增DXS10079的上游引物序列如SEQ ID N035所示；
[0042] 所述擴(kuò)增DXS10079的下游引物序列如SEQ ID N036所示；
[0043] 所述擴(kuò)增DXS10135的上游引物序列如SEQ ID N037所示；
[0044] 所述擴(kuò)增DXS10135的下游引物序列如SEQ ID N038所示；
[0045] 所述擴(kuò)增HPRTB的上游引物序列如SEQ ID N039所示；
[0046] 所述擴(kuò)增HPRTB的下游引物序列如SEQ ID N040所示。
[0047] 進(jìn)一步地，人類X染色體短串聯(lián)重復(fù)序列復(fù)合擴(kuò)增體系還包括一對能擴(kuò)增 Amelogenin的一對引物，分別為：
[0048] 擴(kuò)增Amelogenin的上游引物序列如SEQ ID NOll所示；
[0049] 擴(kuò)增Amelogenin的下游引物序列如SEQ ID N012所示。
[0050] 前述的人類X染色體短串聯(lián)重復(fù)序列復(fù)合擴(kuò)增體系，其引物濃度比例是： DXS6795SEQ ID N01-2,0. 179 μmol/L^DXS6803SEQ ID N03-4,0. 126 μmol/L^DXS6807SE-Q ID N05-6,0.245 ymol/L、DXS9907SEQ ID N07-8,0.150 ymol/L、DXS7423SEQ ID Ν09-10， 0. 162 μmol/L^Amelogenin SEQ ID N011-12,0. 060 μmol/L^GATA172D05SEQ ID N013-14, 0. 192ymol/L^ DXS101SEQ ID N015-16,0. 190 μmol/L^ DXS9902SEQ ID N017-18, 0. 169 ymol/L^ DXS7133SEQ ID