一種治療仔豬腹瀉的藥物及其制法與檢測方法及用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及中藥領(lǐng)域，具體涉及一種蘭香草與檜葉的活性藥物及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 仔豬腹瀉長期困擾著養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展，是制約養(yǎng)豬業(yè)發(fā)展的重要因素之一。該病因 流行面廣，且常年發(fā)病，在養(yǎng)豬生產(chǎn)過程中，仔豬腹瀉病死率高，耐過仔豬生長發(fā)育緩慢，飼 料利用率低，給養(yǎng)殖企業(yè)造成重大經(jīng)濟(jì)損失。目前在治療仔豬腹瀉藥物選擇方面，最常用的 還是使用抗生素或者合成抗菌制劑，由于這些藥物長期使用容易造成耐藥菌株的產(chǎn)生，不 利于仔豬腹瀉疾病的防治，因此，選用中草藥添加劑來防治仔豬腹瀉的研究越來越多。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種治療仔豬腹瀉的藥物。
[0004] 本發(fā)明的另一目的是提供該藥物的制備方法。
[0005] 本發(fā)明還提供了該藥物的質(zhì)量檢測方法。
[0006] 本發(fā)明還提供了該藥物的制藥用途。
[0007] 本發(fā)明藥物是經(jīng)發(fā)明人多年來精心研制，主要用于治療仔豬腹瀉。本發(fā)明藥物既 能清熱解毒、活血散瘀，又能促進(jìn)乳房血液循環(huán)疏暢，有利于炎腫的吸收消散，促進(jìn)乳汁的 分泌，對仔豬腹瀉具有較好的治療效果。
[0008] 在本發(fā)明藥物中原料藥的基源如下： 檜葉為柏科圓柏屬植物圓柏 SaWfla cA/neasis (2.」Ant cA/neasis 7 的葉。
[0009] 蘭香草為馬鞭草科蕕屬植物蘭香草(SkrTOjOteris iflcana^/TVfejOete incanaThunb.exHoutt.
[0010] 本發(fā)明的目的是由以下方式實(shí)現(xiàn)的： 一種藥物是由以下重量份的原料制成的：檜葉1~2重量份，蘭香草1~2重量份。
[0011] 該藥物優(yōu)選是由以下重量份的原料制成的：檜葉1重量份，蘭香草2重量份。
[0012] 該藥物優(yōu)選是由以下重量份的原料制成的：檜葉2重量份，蘭香草1重量份。
[0013] 該藥物優(yōu)選是由以下重量份的原料制成的：檜葉1重量份，蘭香草1重量份。
[0014] 所述的藥物中可以制備成散劑、顆粒劑。
[0015] 所述的藥物采用如下方法制備：取檜葉、蘭香草，混合，加入3~15倍量的水浸泡 0. 5~2小時(shí)，煎煮0. 5~2小時(shí)，煎煮2~4次，每次0. 5~2小時(shí)，提取液合并，濾過，濾 液濃縮，干燥，粉碎成細(xì)粉，加入輔料，混勻，制成散劑，即得。
[0016] 所述的藥物采用如下方法制備：取干燥的檜葉、蘭香草，第一次加11倍量水浸泡1 小時(shí)，煎煮1小時(shí)，第二次加4倍量水煎煮1小時(shí)，合并水煎液，濾過，濾液濃縮，干燥，粉碎 成細(xì)粉，過篩，混勻，制成散劑，即得。
[0017]所述的藥物采用如下方法檢測：采用高效液相色譜法進(jìn)行香草酸的含量測定： (1) 色譜條件：采用HypersilDs色譜柱；流動相：比例為20~40 :60~80的乙 腈-0? 05mol/L磷酸二氫鈉溶液；檢測波長：190~210nm ;柱溫：15~25°C ;流速：0? 5~ 1. 5mL ? min S進(jìn)樣量：5 ~20 y L ; (2) 對照品溶液制備：精密稱取干燥至恒重的香草酸對照品適量，加甲醇溶解制成對照 品溶液； (3) 供試品溶液的制備：精密稱取本發(fā)明藥物，加甲醇，加熱回流，提取液回流溶劑并濃 縮至干，殘?jiān)铀芙?，用水飽和的正丁醇振搖提取，合并正丁醇提取液，用氨試液洗滌，正 丁醇提取液回收溶劑至干，殘?jiān)蛹状既芙?，搖勻，濾過，取濾液，即得供試品溶液； (4) 測定：分別精密量取上述供試品溶液、對照品溶液各5~20 y L，注入高效液相色譜 儀，進(jìn)行檢測。
[0018]所述的藥物優(yōu)選采用如下方法檢測：采用高效液相色譜法進(jìn)行香草酸的含量測 定： (1) 色譜條件：采用HypersilDs色譜柱；流動相：比例為30 :70的乙腈-0? 05mol/L磷 酸二氫鈉溶液；檢測波長：200nm ;柱溫：20°C ;流速：1. OmL ? min %進(jìn)樣量：10 y L ; (2) 對照品溶液制備：精密稱取80°C干燥至恒重的香草酸對照品適量，加甲醇溶解制 成每lmL含0. 2mg的對照品溶液； (3) 供試品溶液的制備：精密稱取本發(fā)明藥物10g，加甲醇40mL，加熱回流4h，提取液回 流溶劑并濃縮至干，殘?jiān)铀?0mL溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取5次，每次20mL，合并 正丁醇提取液，用氨試液洗滌3次，每次15mL，正丁醇提取液回收溶劑至干，殘?jiān)蛹状既?解并轉(zhuǎn)移至l〇mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取濾液，即得供試品溶液； (4) 測定：分別精密量取上述供試品溶液、對照品溶液各10 y L，注入高效液相色譜儀， 進(jìn)行檢測。
[0019]所述的藥物可用于制備治療仔豬腹瀉、豬藍(lán)耳病的藥物。
[0020] 實(shí)驗(yàn)一：本發(fā)明藥物治療仔豬腹瀉效果的試驗(yàn)研究 1試驗(yàn)材料 1.1試驗(yàn)仔豬選擇與分組 選擇年齡胎次相近健康母豬生產(chǎn)的日期相近仔豬60頭，分為4組，分別為組1、組2、組 3、組4,每組15頭，免疫消毒程序按豬場常規(guī)方法進(jìn)行，在飼養(yǎng)管理水平相同條件下，對斷 奶前后臨床表現(xiàn)腹瀉，糞便稀軟，排便次數(shù)增多，精神不佳發(fā)生腹瀉的子豬進(jìn)行灌服給藥， 同時(shí)分別對對照組注射乙酰甲喹注射液和環(huán)丙沙星注射液進(jìn)行對比試驗(yàn)。
[0021] 1.2受試藥物與分組 本發(fā)明藥物：處方：檜葉50g，蘭香草50g;制備方法：取干燥的檜葉50g、蘭香草50g第 一次加llOOmL水浸泡1小時(shí)，煎煮1小時(shí)，第二次加400mL，煎煮1小時(shí)，合并水煎液，濾過， 濾液濃縮，干燥，得本發(fā)明藥物。
[0022] 對比藥物A :處方：檜葉100g ;制備方法：取干燥的檜葉100g，第一次加llOOmL水 浸泡1小時(shí)，煎煮1小時(shí)，第二次加400mL，煎煮1小時(shí)，合并水煎液，濾過，濾液濃縮，干燥， 得對比藥物A。
[0023] 對比藥物B:處方：蘭香草100g;制備方法：取干燥的蘭香草100g，第一次加 llOOmL水浸泡1小時(shí)，煎煮1小時(shí)，第二次加400mL，煎煮1小時(shí)，合并水煎液，濾過，濾液濃 縮，干燥，得對比藥物B。
[0024] 組1給予本發(fā)明藥物，組2給予對比藥物A，組3給予對比藥物B，組4注射環(huán)丙沙星注 射液。
[0025] 2試驗(yàn)方法 第1組用本發(fā)明藥物對仔豬經(jīng)口灌服給藥5g，Id 1次；第2組用對比藥物A對仔豬經(jīng) 口灌服給藥5g，ld 1次；第3組用對比藥物B對仔豬經(jīng)口灌服給藥5g，ld 1次；第4組用環(huán) 丙沙星注射液注射給藥lmg/kg。均連續(xù)用藥5d，每天觀察子豬腹瀉變化情況。
[0026] 用藥效果觀察判定：給藥后觀察仔豬食欲、糞便情況變?yōu)檎＃橹斡?；仔豬精 神狀態(tài)逐漸好轉(zhuǎn)，糞便形態(tài)改善定為有效，有效率根據(jù)治愈數(shù)和癥狀緩解數(shù)之和計(jì)算；糞便 仍為水樣和血便定為無效，無效率根據(jù)死亡數(shù)和無效數(shù)之和與總數(shù)比值計(jì)算。
[0027] 3試驗(yàn)結(jié)果 由表1試驗(yàn)結(jié)果可見，仔豬用藥后在治愈率方面本發(fā)明藥物1組最高，達(dá)到86. 7%，其余 依次為第4組73. 3%、第2組67. 7%，第3組60%。
[0028] 在有效率方面，最高的是1組的86. 7%，其余為第4組73. 3%、第2組67. 7%，第3組 60% 〇
[0029] 在無效率方面，最高的為3組的40%，其次為第2組33. 3%、第4組26. 7%，最低的為 1組的13. 3%，有明顯的差異。
[0030] 本次試驗(yàn)說明，本發(fā)明藥物在治療斷奶前后子豬腹瀉方面效果顯著。
[0031] 表1不同藥物對仔豬腹瀉治療效果統(tǒng)計(jì)表單位：數(shù)(頭)，率（％)
4結(jié)果與討論 試驗(yàn)結(jié)果表明，試驗(yàn)組的四種藥物均具有明顯治療仔豬腹瀉的效果，其中以仔豬用藥 試驗(yàn)組1的治愈率、有效率最高，達(dá)到86. 7%，高出對照組3組達(dá)26. 7%，有效率高出對照組 2組19% ;死亡率方面，1組最低6. 7%，2組和3組均為20%，4組為13. 3% ;無效率最高的為3 組的40%，其次為2組33. 3%和4組的26. 7%，最低的為1組的13. 3%，也表明1組的治療效 果也好于其他各組。這充分證明本發(fā)明藥物的治療效果優(yōu)于對比藥物A和對比藥物B。說 明本發(fā)明藥物中兩種藥味之間的配伍精良，缺一不可，兩種藥味之間的組合產(chǎn)生了明顯的 協(xié)同增效作用，產(chǎn)生了一加一大于二的技術(shù)效果。在試驗(yàn)中，4組環(huán)丙沙星注射液的治療效 果差，可能與飼養(yǎng)中，藥物長期使用，產(chǎn)生耐藥性有一定關(guān)系。
[0032] 實(shí)驗(yàn)二：本發(fā)明藥物的質(zhì)量檢測方法研究 1儀器與試藥 1. 1儀器 高效液相色譜儀（AgilentllO高效液相色譜儀及工作站，G1311Aquat栗，G1314紫外檢 測器)。
[0033] 1. 2試藥 香草酸（vanillicacid)對照品（中國藥品生物制品檢定研究院);本發(fā)明中藥組合物； 中藥材(康濟(jì)連鎖藥店提供）；甲醇(色譜醇，上海生化工助劑廠）；其他試劑為分析純。
[0034] 2方法與結(jié)果 2. 1處方 檜葉500g，蘭香草500g。
[0035] 2. 2制備 取干燥的檜葉500g，蘭香草500g，第一次加llOOOmL水浸泡1小時(shí)，煎煮1小時(shí)，第二 次加4000mL，煎煮1小時(shí)，合并水煎液，濾過，濾液濃縮，干燥，即得。
[0036] 2. 3香草酸（vanillicacid)的含量測定 2. 3. 1HPLC色譜條件 采用HypersilDs (4. OmmX 125mm，5 y m)色譜柱；流動相：比例為30 :70的乙 腈-0? 05mol/L磷酸二氫鈉溶液；檢測波長：200nm ;柱溫：20°C;流速：1. OmL ％進(jìn)樣量： 10 y L ;在該色譜條件下，對照品及樣品色譜峰良好，無蘭香草陰性對照對測定無干擾。
[0037] 2. 3. 2對照品溶液的制備 精密稱取80°C干燥至恒重的香草酸對照品適量，加甲醇制成每lmL含0. 2mg的溶液。
[0038] 2. 3. 3供試品溶液與陰性對照液的制備 精密稱取本發(fā)明藥物l〇g，加甲醇40mL，加熱回流4h，提取液回流溶劑并濃縮至干，殘 渣加水10mL溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取5次，每次20mL，合并正丁醇提取液，用氨試 液洗滌3次，每次15mL，正丁醇提取液回收溶劑至干，殘?jiān)蛹状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至10mL容量瓶 中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取濾液即得；另按處方比例制備不含蘭香草的陰性對照品， 同法制成陰性對照液。
[0039] 2. 3. 4標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 精密稱取80°C干燥至恒重的香草酸對照品適量，用甲醇制成10. 4, 20. 8,41. 6,83. 2， 166. 4 y gmL 1系列濃度的溶液，分別精密量取上述5種濃度溶液各10 y L，注入高效液相色 譜儀進(jìn)行測定。
[0040]以峰面積比值與濃度進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為：A=21.2763C-0. 1391， r=0. 9999。表明香草酸在10. 4~166. 4 ygmL 1濃度范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。
[0041] 2. 3. 5穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取供試品溶液10 y L，分別于0,1，2,4,8h進(jìn)樣，并計(jì)算香草酸含量。結(jié)果8h內(nèi) RSD為0.