篩整粒，加入10g交聯(lián)聚維酮及3g 硬脂酸鎂混勻后，制成1000片。
[0030] 以實施例2制備得到的黑老虎提取液來制備黑老虎保肝片，制備方法同上。
[0031] 以實施例3制備得到的黑老虎提取液來制備黑老虎保肝膠囊，制備方法為：稱取 250g實施例3的黑老虎提取物，加入250g硫酸鈣、10g交聯(lián)聚維酮混勻。以適量80%乙醇 作潤濕劑制成軟材，以14目篩制粒，于60°C溫度下干燥后過12目篩整粒，填入空膠囊中，即 得。
[0032] 實施例5 研究實施例4制備的黑老虎保肝膠囊對大鼠非酒精性脂肪肝的治療作用，具體步驟如 下： 高脂高糖乳劑的制備：取豬油25g，加熱溶解，加入膽固醇10g，攪拌至完全溶解；再加 入丙硫氧啼啶lg和7mL聚山梨酯-80,充分攪勾。在另一燒杯中加入鹿糖20g于適量的蒸 餾水中溶解，再加入脫氧膽酸鈉2g，適當(dāng)加熱并充分攪拌直至溶解。將兩種溶液充分混勻， 最后加水稀釋至100mL即制成尚脂尚糖乳劑。
[0033] 分組、造模、給藥：SD大鼠60只（SD大鼠，SPF級，體質(zhì)量180~200g)，實驗開 始前禁食不禁水12,將大鼠隨機分成6組，每組10只：對照組、模型組、辛伐他汀陽性對照 組(給藥量4mg/kg)、HLH高劑量組(生藥給藥6.Og/kg)、HLH中劑量組(生藥給藥3. 0g/ kg)、HLH低劑量組(生藥給藥1. 5g/kg)。除對照組給予普通飼料外，其他組灌胃高脂高糖乳 劑(大鼠非酒精性脂肪肝模型）且自由飲水，造模同時4個給藥組灌胃給予相應(yīng)藥物(劑量 10mL/kg)，對照組及模型組給予等量生理鹽水，連續(xù)8周。
[0034] 標本采集：在實驗結(jié)束時即第8周末，大鼠用3. 3%水合氯醛lmL/kg麻醉，剖開腹 部，分離腹主動脈，取血約5mL，離心分離血清，-20°C保存?zhèn)溆?。大鼠脫頸椎處死，立即摘取 肝臟，生理鹽水滌洗，濾紙吸干，稱質(zhì)量，取肝左外側(cè)葉部位的肝組織多塊，每塊約0. 5g，精 密稱定，分別置于1. 5mL的EP管中，于-20°C冰箱保存?zhèn)溆谩?br>[0035] 指標檢測：用相應(yīng)試劑盒檢測血清！'(：、了6、1101-(：、？?4、431'、41^水平，〇^-(：水平 根據(jù)Friedwald公式（LDL-C=TC-HDL-C-TG/ 2. 2)計算。取肝組織，計算肝指數(shù)。
[0036] 另取0.5g肝左外側(cè)葉部位組織用氯仿-甲醇提取液(二者的體積比為1 : 1)制 成勾衆(zhòng)，提取液定容至5mL，混勾。經(jīng)24h震蕩抽提，3000r/min離心5min得上清液，分別采 用氧化酶法、磷酸甘油酶法測定肝臟中TC、TG。用生理鹽水制成10%的肝組織勻漿以測定 S0D、MDA〇
[0037] 統(tǒng)計學(xué)方法：采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行分析，數(shù)據(jù)均用x±s表示， 各組均數(shù)間比較采用方差分析。
[0038] 試驗結(jié)果： 對非酒精性脂肪肝大鼠血脂水平和FFA的影響：與對照組比較，模型組大鼠血清TC、LDL-C、FFA顯著升高（P<0. 01)，HDL-C顯著降低（P<0. 01)，表明造模成功。給藥8周 后，辛伐他汀、HLH均能顯著降低血清TC、LDL-C、FFA水平（P< 0. 05、0. 01)，顯著升高HDL-C 水平（P< 0. 05、0. 01)，而TG與模型組比較無顯著差異（P> 0. 05)。結(jié)果見表1。
[0039] 表1 .HLH對非酒精性脂肪肝大鼠血脂和FFA水平的影響n=\Q)
注明：與對照組比較〈〇? 〇5TT尸〈0? 01 ;與模型組比較：*尸〈0? 05**尸〈0? 01 ;下表同。
[0040] 對非酒精性脂肪肝大鼠肝指數(shù)及肝脂質(zhì)水平的影響：與對照組比較，模型組肝指 數(shù)及肝臟中TC、TG水平均明顯升高（P< 0. 01)。與模型組比較，辛伐他汀、HLH高劑量和中 劑量均能顯著降低肝指數(shù)（P< 0. 05);辛伐他汀和HLH各劑量還能顯著降低肝臟TC、TG水 平（P< 0. 01)，表明HLH能夠顯著減少脂質(zhì)在肝臟中的積聚，從而減輕肝脂質(zhì)變化程度。結(jié) 果見表2。
[0041] 表2.HLH對非酒精性脂肪肝大鼠肝指數(shù)及肝脂質(zhì)水平的影響(imn=m
對非酒精性脂肪肝大鼠血清中肝功能指標的影響：與對照組比較，模型組大鼠血清AST、ALT水平均明顯升高（P< 0. 01)。與模型組比較，辛伐他汀、HLH各劑量均能顯著降低 AST、ALT水平（P< 0. 05、0. 01)，表明HLH對非酒精性脂肪肝大鼠具有明顯的保肝作用。結(jié) 果見表3。
[0042] 表3.HLH對非酒精性脂肪肝大鼠肝功能的影響(系/?=10)
對非酒精性脂肪肝大鼠肝MDA和SOD的影響：與對照組比較，模型組SOD活性顯著下 降、MDA的量明顯增加（P< 0. 01)。與模型組比較，辛伐他汀組和HLH高、中劑量組S0D活 性顯著增強（P< 0. 05、0. 01)，MDA的量明顯下降（P< 0. 01);而HLH低劑量組的S0D活性 和MDA的量與模型組無顯著差異。結(jié)果表明HLH具有增強S0D活力、抗脂質(zhì)過氧化的作用。 結(jié)果見表4。
[0043] 表4.HLH對非酒精性脂肪肝大鼠肝中MDA和S0D的影響(il，/?=1〇)
【主權(quán)項】
1. 一種黑老虎提取物的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：51. 黑老虎粉碎后，用6~12倍體積50~95%乙醇溶液提取1~3次，每次提取1~ 3h，放冷后過濾，合并濾液，濃縮得稠膏；52. 取稠膏懸浮于1~5倍體積的水中，用1~3倍體積石油醚-乙酸乙酯混合溶劑反 復(fù)萃取1~3次，合并有機溶劑萃取層，回收溶劑，干燥，粉碎得黑老虎提取物。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，50~95%乙醇溶液每次提取的時間 為2h。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述石油醚-乙酸乙酯混合溶劑中乙 酸乙酯的體積百分比含量為30~100%。4. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于，用8倍體積70%乙醇溶液提取2次。5. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，用2倍體積石油醚-乙酸乙酯混合溶 劑反復(fù)萃取2次。6. 黑老虎提取物在制備治療或預(yù)防非酒精性脂肪肝藥物中的應(yīng)用。7. 權(quán)利要求1制備得到的黑老虎提取物在制備治療或預(yù)防非酒精性脂肪肝藥物中的 應(yīng)用。8. 根據(jù)權(quán)利要求6或7所述的應(yīng)用，其特征在于，非酒精性脂肪肝是指由于高脂飲食導(dǎo) 致的脂肪肝。
【專利摘要】本發(fā)明屬于中草藥提取技術(shù)領(lǐng)域，具體公開了一種黑老虎提取物的制備方法及在治療非酒精性脂肪肝中的應(yīng)用。所述制備方法的具體步驟為：S1.黑老虎粉碎后，用6～12倍體積50～95%乙醇溶液提取1～3次，每次提取1～3h，放冷后過濾，合并濾液，濃縮得稠膏；S2.取稠膏懸浮于1～5倍體積的水中，用1～3倍體積石油醚-乙酸乙酯混合溶劑反復(fù)萃取1～3次，合并有機溶劑萃取層，回收溶劑，干燥，粉碎得黑老虎提取物。本發(fā)明制備得到的黑老虎提取物中聯(lián)苯環(huán)辛二烯型木脂素類成分總含量在50～100%之間。而且，本發(fā)明首次發(fā)現(xiàn)黑老虎提取物可用于治療非酒精性脂肪肝，治療效果顯著。
【IPC分類】A61K36/57, A61K36/79, A61P1/16
【公開號】CN105168520
【申請?zhí)枴?br>【發(fā)明人】王來友, 韓亮, 王鳳云, 何琳
【申請人】廣東藥學(xué)院
【公開日】2015年12月23日
【申請日】2015年9月24日