熒光探針和80μ1磁性探針，37°C孵育40分鐘后，形成三明治夾心復 合物，通過與未結合的上轉換熒光探針進行磁分離，倒掉上清液，用沉淀用BB緩沖液重懸 后，將重懸后的所述三明治夾心復合物試液置于比色皿4中，通過紅外光源激發(fā)紅外光對比 色皿4照明，對所述三明治夾心復合物試液進行熒光強度測定，從而繪制被測試液中沙門氏 菌的熒光強度--濃度標準回歸曲線見圖3,圖3中，橫軸表示沙門氏菌菌懸液的濃度，數(shù)軸 表示比色皿中所述三明治夾心復合物檢測試液的熒光強度，從該回歸曲線可見，比色皿中 檢測試液的熒光強度與沙門氏菌的濃度呈一定線性函數(shù)關系，且經(jīng)統(tǒng)計擬合的熒光強 度--濃度標準回歸曲線的表達式為:Y= 169.66X-35.2，擬合系數(shù)的平方為0.9964，檢出 限為5cfu/ml;另一方面，通過該統(tǒng)計擬合的函數(shù)關系式，即能夠使用本發(fā)明所述檢測系統(tǒng) 對未知濃度樣品中的沙門氏菌濃度進行測定，并同時與經(jīng)典平板法檢測結果進行檢測驗 證。其中，沙門氏菌適配體采用生工生物工程(上海)股份有限公司合成的沙門氏菌適配體： 5'-biotin-C6-TATGGCGGCGTCACCCGACGGGGACTTATGGACATTACAG-3'。
[0043]對湖水、河水、小溝水分別取樣，分別通過傳統(tǒng)的平板菌落計數(shù)法和本發(fā)明所述檢 測系統(tǒng)檢測其中沙門氏菌的濃度，二者檢測結果比對如下表1:
[0044]表1平板菌落計數(shù)法與本發(fā)明所述檢測系統(tǒng)對沙門氏菌檢測的檢測結果對比
[0045]
[0046]根據(jù)上述表1實驗數(shù)據(jù)比對可見，本發(fā)明所述檢測系統(tǒng)與經(jīng)典平板菌落計數(shù)法的 檢測結果基本吻合。
[0047]實施例二金黃色葡萄球菌的檢測
[0048]金黃色葡萄球菌經(jīng)富集培養(yǎng)后，離心去除培養(yǎng)基，用平板法測定其濃度后，將其梯 度稀釋成不同標準濃度(cfu/ml)的菌懸液;分別取5yL金黃色葡萄球菌適配體，加入lmL濃 度均為lmg/mL的親和素化的磁珠和親和素化的上轉換納米材料，搖床反應12小時，最后加 入2%BSA(牛血清白蛋白）封閉液，得到磁性探針和上轉換熒光探針;等體積的梯度金黃色 葡萄球菌標準濃度菌懸液分別加入200μ1上轉換熒光探針和100μΙ磁性探針，37°C孵育40分 鐘后，形成三明治夾心復合物，通過與未結合的上轉換熒光探針進行磁分離，倒掉上清液， 用沉淀用BB緩沖液重懸后，將重懸后的所述三明治夾心復合物試液置于比色皿4中，通過紅 外光源激發(fā)紅外光對比色皿4照明，對所述三明治夾心復合物試液進行熒光強度測定，從而 繪制金黃色葡萄球菌的熒光強度一一濃度標準回歸曲線，繪制的金黃色葡萄球菌的熒光強 度一一濃度標準回歸曲線見圖4,圖4中，橫軸表示金黃色葡萄球菌菌懸液的濃度，數(shù)軸表示 比色皿中所述三明治夾心復合物檢測試液的熒光強度，從該回歸曲線可見，比色皿中檢測 試液的熒光強度與被測試液中金黃色葡萄球菌的濃度呈一定線性函數(shù)關系，且經(jīng)統(tǒng)計擬合 的熒光強度--濃度標準回歸曲線的表達式為：Y= 118.5X+15.6，擬合系數(shù)的平方為 0.9936,檢出限為8cfu/ml;另一方面，通過該統(tǒng)計擬合的函數(shù)關系式，即能夠使用本發(fā)明所 述檢測系統(tǒng)對未知濃度樣品中的金黃色葡萄球菌濃度進行測定，并同時與經(jīng)典平板法檢測 結果進行檢測驗證.。其中，金黃色葡萄球菌適配體采用生工生物工程(上海)股份有限公司 合成的金黃色葡萄球菌適配體：5'-biotin-C6-GCAATGGTACGGTACTTCCTCGGCACG TTCTCAGTAGCGCTCGCTGGTCATCCCACAGCTACGTCAAAAGTGCACGCTACTTTG CTAA-3，。
[0049]對湖水、河水、小溝水分別取樣，分別通過傳統(tǒng)的平板菌落計數(shù)法和本發(fā)明所述檢 測系統(tǒng)檢測其中金黃色葡萄球菌的濃度，二者檢測結果比對如下表2:
[0050]表1平板計數(shù)法與本發(fā)明所述檢測系統(tǒng)對金黃色葡萄球菌檢測結果對比
[0051]
[0052]
[0053]根據(jù)上述表2實驗數(shù)據(jù)比對可見，本發(fā)明所述檢測系統(tǒng)與經(jīng)典平板菌落計數(shù)法的 檢測結果基本吻合。
[0054]以上描述是對本發(fā)明的解釋，不是對發(fā)明的限定，本發(fā)明所限定的范圍參見權利 要求，在本發(fā)明的保護范圍之內，可以作任何形式的修改。
【主權項】
1. 熒光生物檢測系統(tǒng)，包括發(fā)光模塊（1)、熒光接收模塊(2)和數(shù)據(jù)處理模塊(3)，其特 征在于:在發(fā)光模塊（1)與熒光接收模塊(2)之間設有比色皿(4)，比色皿(4)內盛放有上轉 換熒光材料標記的檢測試液;所述發(fā)光模塊(1)包括紅外激發(fā)光源，所述紅外激發(fā)光源發(fā)出 的激發(fā)光束通過激發(fā)光路照射于盛放有檢測試液的比色皿(4)上，所述檢測試液發(fā)出的熒 光通過接收光路由熒光接收模塊(2)接收，所述激發(fā)光路與所述接收光路成直線或者直角 設置;熒光接收模塊(2)為光強傳感器，所述光強傳感器的輸出端連接數(shù)據(jù)處理模塊(3)。2. 按權利要求1所述的熒光生物檢測系統(tǒng)，其特征在于:所述檢測試液由上轉換熒光探 針與病菌特異性適配體結合物、磁性探針與病菌特異性適配體結合物、待測病菌組成。3. 按權利要求2所述的熒光生物檢測系統(tǒng)，其特征在于:所述上轉換熒光探針由上轉換 熒光材料經(jīng)過氨基化和親和素化制得，所述上轉換熒光材料為NaYo. 78F4:Ybo. 2，Ero. 〇2納米顆 粒。4. 按權利要求2所述的熒光生物檢測系統(tǒng)，其特征在于:所述磁性探針為親和素化的磁 珠，所述磁珠以六水合氯化高鐵為鐵源、1，6-己二胺作為氨基功能化試劑通過水熱一一溶 劑熱方法合成。5. 按權利要求1所述的熒光生物檢測系統(tǒng)，其特征在于:所述數(shù)據(jù)處理模塊(3)包括放 大電路模塊、抗干擾模塊、單片機信號處理模塊、液晶顯示模塊，所述放大電路模塊用于放 大接收的熒光信號，抗干擾模塊用于將所述光強傳感器輸出的電壓信號轉換為電流信號傳 輸，并在線路終端又轉換為電壓信號，所述單片機信號處理模塊進行數(shù)據(jù)運算處理經(jīng)將結 果通過所述液晶顯示模塊進行實時顯示。6. 按權利要求5所述的熒光生物檢測系統(tǒng)，其特征在于:所述數(shù)據(jù)處理模塊(3)包括通 信模塊，所述通信模塊用于單片機與上位機之間的遠程通信。7. 按權利要求1所述的熒光生物檢測系統(tǒng)，其特征在于:所述紅外激發(fā)光源采用980nm 近紅外光。
【專利摘要】熒光生物檢測系統(tǒng)，包括發(fā)光模塊、熒光接收模塊和數(shù)據(jù)處理模塊，在發(fā)光模塊與熒光接收模塊之間設有比色皿，比色皿內盛放有上轉換熒光材料標記的檢測試液；所述發(fā)光模塊包括紅外激發(fā)光源，所述紅外激發(fā)光源發(fā)出的激發(fā)光束通過激發(fā)光路照射于盛放有檢測試液的比色皿上，所述檢測試液發(fā)出的熒光通過接收光路由熒光接收模塊接收，所述激發(fā)光路與所述接收光路成直線或者直角設置；熒光接收模塊為光強傳感器，所述光強傳感器的輸出端連接數(shù)據(jù)處理模塊。本發(fā)明基于上轉換熒光技術即可實現(xiàn)對多種被檢液中待檢目標菌濃度的實時定量檢測，整個檢測系統(tǒng)無需免疫層析試紙，且激發(fā)光路和接收光路的設置更為簡便。
【IPC分類】G01N33/569, G01N21/64
【公開號】CN105424662
【申請?zhí)枴緾N201510822700
【發(fā)明人】王周平, 吳世嘉, 戴邵亮, 段諾, 李琪, 夏雨, 馬小媛
【申請人】江南大學
【公開日】2016年3月23日
【申請日】2015年11月24日