信號(hào)經(jīng)過(guò)數(shù)抗干擾模塊傳輸，配合所述光強(qiáng)傳感器自身 的A/D轉(zhuǎn)換，轉(zhuǎn)換的數(shù)字信號(hào)進(jìn)入到所述單片機(jī)信號(hào)處理模塊，進(jìn)行數(shù)據(jù)的函數(shù)映射、算數(shù)、 邏輯部分處理，由單片機(jī)將處理輸出的結(jié)果通過(guò)所述液晶顯示模塊實(shí)時(shí)顯示出待測(cè)病菌的 菌類濃度，進(jìn)一步地，本發(fā)明設(shè)有專門的RS232接口，可與32位上位機(jī)相連，通過(guò)遠(yuǎn)程通信技 術(shù)，能夠遠(yuǎn)程實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)結(jié)果，并作終端數(shù)據(jù)分析。
[0027]本發(fā)明采用比色皿4盛放經(jīng)過(guò)上轉(zhuǎn)換熒光材料標(biāo)記的檢測(cè)試液，本發(fā)明只需制備 好上轉(zhuǎn)換熒光探針、磁性探針，通過(guò)待測(cè)病菌懸液、上轉(zhuǎn)換熒光探針、磁性探針三者進(jìn)行混 合及常溫孵育，形成三明治夾心復(fù)合物，通過(guò)與未結(jié)合的上轉(zhuǎn)換熒光探針進(jìn)行磁分離，倒掉 上清液，用沉淀用BB(10mMTris-HCl，pH7.4，100mMKC1和ImMMgCl2)緩沖液重懸后，將重 懸后的所述三明治夾心復(fù)合物試液置于比色皿4中，通過(guò)紅外光源激發(fā)紅外光對(duì)比色皿4照 明，對(duì)所述三明治夾心復(fù)合物試液進(jìn)行熒光強(qiáng)度測(cè)定，從而繪制待測(cè)病菌的熒光強(qiáng)度一一 濃度標(biāo)準(zhǔn)回歸曲線，設(shè)置該標(biāo)準(zhǔn)回歸曲線于本發(fā)明所述檢測(cè)系統(tǒng)中，既能夠進(jìn)行未知濃度 的樣品的目標(biāo)菌濃度測(cè)定，并同時(shí)與經(jīng)典平板菌落計(jì)數(shù)法檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行檢測(cè)驗(yàn)證。相較于 現(xiàn)有的采用免疫層析試紙條的檢測(cè)系統(tǒng)，本發(fā)明采用比色皿盛放檢測(cè)試液，通過(guò)比色皿來(lái) 實(shí)現(xiàn)液相色譜檢測(cè)，一方面，由于比色皿為透明的，且比色皿不存在免疫層析試紙的多個(gè)功 能帶需要照明的要求，相較于傳統(tǒng)非透明試紙條的檢測(cè)系統(tǒng)中激光光路與接收光路特定夾 角的限制條件，本發(fā)明中紅外光激發(fā)光路與熒光接收光路二者之間不再受到光學(xué)檢測(cè)上的 限制，根據(jù)比色皿的方形常用形狀，本發(fā)明所述檢測(cè)系統(tǒng)中，所述激發(fā)光路與接收光路采用 180°直線設(shè)置或者直角設(shè)置，圖1中所述檢測(cè)系統(tǒng)為激發(fā)光路與接收光路成180°設(shè)置，圖2 中所述檢測(cè)系統(tǒng)為激發(fā)光路與接收光路成直角設(shè)置，優(yōu)選180°直線設(shè)置，使得整個(gè)檢測(cè)系 統(tǒng)中的紅外激發(fā)光源、比色皿、熒光接收模塊三者的設(shè)置更為簡(jiǎn)便;第二，現(xiàn)有的免疫層析 試紙檢測(cè)系統(tǒng)需要設(shè)計(jì)特定結(jié)構(gòu)的試紙條，試紙條包括多個(gè)功能帶，需要對(duì)多個(gè)功能帶采 集信號(hào)進(jìn)行處理，試紙條結(jié)構(gòu)復(fù)雜，制備繁瑣，且UCP結(jié)合物與被檢物通過(guò)免疫反應(yīng)固定于 固相載體的表面，需要設(shè)置專門的固相載體，本發(fā)明采用比色皿省卻了結(jié)構(gòu)復(fù)雜、制作繁瑣 的免疫層析試紙，整個(gè)檢測(cè)系統(tǒng)結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，制作更為簡(jiǎn)便;第三，傳統(tǒng)免疫層析試紙條為一 次性使用產(chǎn)品，重復(fù)檢測(cè)需要不斷更換及安裝新的試紙條，而本發(fā)明使用比色皿，對(duì)比色皿 清洗之后，即可進(jìn)行重復(fù)使用。
[0028]本發(fā)明所述紅外激發(fā)光源采用980nm近紅外激發(fā)光，其光化學(xué)穩(wěn)定，環(huán)境適應(yīng)性 強(qiáng)，穿透力強(qiáng)且無(wú)傷害，成本相對(duì)低廉。
[0029] 具體地，所述檢測(cè)試液由上轉(zhuǎn)換熒光探針與病菌特異性適配體結(jié)合物、磁性探針 與病菌特異性適配體結(jié)合物、待測(cè)病菌組成。所述上轉(zhuǎn)換熒光探針由上轉(zhuǎn)換熒光材料經(jīng)過(guò) 氨基化和親和素化制得，所述上轉(zhuǎn)換熒光材料為NaYo. 78F4:Ybo. 2，Ero.Q2納米顆粒;所述磁性 探針為親和素化的磁珠，所述磁珠以六水合氯化高鐵為鐵源、1，6-己二胺作為氨基功能化 試劑通過(guò)水熱一一溶劑熱方法合成。以下對(duì)所述上轉(zhuǎn)換熒光探針和所述磁性探針的具體制 備進(jìn)行說(shuō)明。
[0030]所述上轉(zhuǎn)換熒光探針的制備過(guò)程如下：
[0031 ]第一步，采用水熱--溶劑熱方法合成NaYo.78F4:Ybo. 2，Ero.Q2上轉(zhuǎn)換納米顆粒（以 下簡(jiǎn)稱為UCNPs):取Y2〇3、Yb2〇3、Er2〇3(Ln=Y:Yb:Er= 78:0.2:0.02)，將三者混合物加入適 量硝酸中加熱溶解，并揮發(fā)掉多余硝酸，得到稀土元素的硝酸鹽粉末;將稀土元素的硝酸鹽 粉末溶解在8mL去離子水中，再加入2.1273gEDTA(乙二胺四乙酸，其與RE3+的摩爾比為1:1) 并調(diào)節(jié)pH至弱堿性，形成澄清透明的EDTA-Ln3+溶液;取25mL乙二醇，加入0.4gCTAB(十六烷 基三甲基溴化銨)和前述所得的EDTA-Ln3+溶液，快速攪拌下逐滴加入HF(氫氟酸）約3mL，得 到白色乳狀膠體;最后，在前述所得的白色乳狀膠體中加入5.5mL濃硝酸，攪拌均勻后，轉(zhuǎn)移 至lj50mL帶聚四氟乙烯內(nèi)襯的反應(yīng)釜中，195°C反應(yīng)24小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后，讓其在空氣中自然 冷卻至室溫，棄上層液體，釜底的固體用熱水沖洗到燒杯中，超聲10分鐘，然后靜置數(shù)分鐘， 待固體沉淀至燒杯底部后，棄上層液體，再加熱水超聲，重復(fù)操作3次后，在燒杯中加入乙醇 超聲分散，最后離心所得的固體置于70°C烘箱干燥10小時(shí)，得到NaYQ.78F4:YbQ.2，Er().()2上轉(zhuǎn) 換納米顆粒(UCNPs)固體粉末并儲(chǔ)存?zhèn)溆茫?br>[0032] 第二步，氨基化：取20mgUCNPs溶解于60mL異丙醇中，超聲40分鐘，然后加入2.5mL氨水和20mL水，在35°C下充分?jǐn)嚢?，然后一個(gè)小時(shí)內(nèi)逐滴滴入溶有50uLTE0S(正硅酸乙酯） 的20mL異丙醇，反應(yīng)3個(gè)小時(shí)形成懸浮液，再將溶有200uLAPTES(3-氨丙基三乙氧基硅烷） 的30mL異丙醇逐滴加入前述所得懸浮液中，反應(yīng)一個(gè)小時(shí)；反應(yīng)結(jié)束后在室溫下熟化2小 時(shí)，通過(guò)離心分離得到沉淀固體，對(duì)沉淀所得固體用乙醇洗三次，并在60°C下干燥12小時(shí)， 則最終得到氨基化的上轉(zhuǎn)換納米材料；
[0033]第三步，親和素化:根據(jù)戊二醛法，使第二步所得的氨基化的上轉(zhuǎn)換納米材料與親 和素相連，形成親和素化的上轉(zhuǎn)換納米材料；
[0034]第四步，將第三步所得的親和素化的上轉(zhuǎn)換納米材料，與相應(yīng)病菌特異性適配體 結(jié)合得到上轉(zhuǎn)換熒光探針；
[0035]將第四步所得上轉(zhuǎn)換熒光探針溶于5mlPBS(磷酸鹽緩沖液)溶液，靜置6小時(shí)，在4 °C下保存待用。
[0036]所述磁性探針的制備過(guò)程如下：
[0037]第一步，采用水熱--溶劑熱方法合成磁珠：以六水合氯化高鐵為鐵源，以1，6- 己二胺作為氨基功能化試劑，稱取1，6 -己二胺6.5g，無(wú)水醋酸鈉2.0g、FeC13 · 6H20l.Og 溶于30mL乙二醇，加入lOOmL圓底燒瓶中，50°C劇烈攪拌0.5小時(shí)左右至溶液較為透明，將溶 液轉(zhuǎn)移至帶聚四氟乙烯內(nèi)襯的高壓反應(yīng)釜中，放置在198°C高溫反應(yīng)6小時(shí)，反應(yīng)結(jié)束后取 出自然冷卻至室溫，將反應(yīng)釜中液體倒在燒杯中，用無(wú)水乙醇和純水交替清洗三次，將反應(yīng) 釜底部的黑色固體在50°C條件下干燥過(guò)夜，得到氨基化的磁性納米粒子，即氨基化的磁珠；
[0038]第二步，親和素化:根據(jù)戊二醛法，使第二步所得的氨基化的磁珠與親和素相連， 形成親和素化的磁珠；
[0039]第三步，將第三步所得的親和素化的磁珠，與相應(yīng)病菌特異性適配體結(jié)合得到磁 性探針；
[0040]將第三步所得磁性探針溶于10mL0.01m〇l/L的PBS(磷酸鹽緩沖液，PH7.4)溶液 中，4°C保存?zhèn)溆谩?br>[0041]實(shí)施例一沙門氏菌的檢測(cè)
[0042]沙門氏菌經(jīng)富集培養(yǎng)后，離心去除培養(yǎng)基，用平板法測(cè)定其濃度后，將其梯度稀釋 成不同標(biāo)準(zhǔn)濃度(cfu/ml)的菌懸液;分別取5yL沙門氏菌適配體，加入lmL濃度均為lmg/mL 的親和素化的磁珠和親和素化的上轉(zhuǎn)換納米材料，搖床反應(yīng)12小時(shí)，最后加入2%BSA(牛血 清白蛋白）封閉液，得到磁性探針和上轉(zhuǎn)換熒光探針;等體積的梯度沙門氏菌標(biāo)準(zhǔn)濃度菌懸 液分別加入200μ1上轉(zhuǎn)換